Name: Yara Scratch Testi optimizasyonu Çözünür Sigara Duman Özü ile Hasar sonrası Fare Mezenkimal Stromal Hücre Göç Değişiklik Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-03T10:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Keşfedin fare akciğer mezenkimal stromal hücrelerinin göç kapasitesindeki değişiklikleri yara scratch testi ile nicel olarak ölçme yöntemini. Çözünür sigara duman özü hasarı sonrası hücre davranışını analiz edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

CSE hasar testinin geliştirilmesindeki teknik yardımları ve bu testin geliştirilmesi sırasındaki destek ve tavsiyeleri için laboratuvarın diğer üyelerine minnettarız. Ayrıca, Nicholas Cormier'e verdikleri destek için Holy Cross Fenwick Scholar Committee'ye ve Alexander Yeo'ya verdikleri destek için Holy Cross College Honors programına minnettarız.

Not: kullanarak uzak akciğer dokusundan Bu çalışmada, akciğer mezenkimal stromal hücreler (LR-MSC&#39;ler) için izole edilmiştir, ya da hücre yüzey markerlerinin ifadesiyle (CD45 neg, CD31 neg, Sca-1, yüksek, EpCAM negatif) 14,15 göre eksplant dışı büyüme 16, ya da enzimatik sindirimi 17 kullanarak. Yapışık LR-MSC&#39;ler, yüksek glikoz ve hiçbir glutamin,% 15 FBS, 1 x antibiyotik / antimikotik ve 2 mM glutamin (bundan böyle komple ortamı) ile DMEM içerisinde kültürlendi ve 37 ° C&#39;de,% 5 CO2 inkübe edildi. LR-MSC&#39;ler, migrasyon deneyi ile nispeten homojen bir büyüme özelliklerine sahip bir hücre popülasyonu sağlamak için 3-4 kez geçirilmiştir. 1. konfluent tek tabaka hazırlanması <ol><li> Standart 100 mm kültür kaplarından MKH&#39;lerin ayırmak için, 37 ° C önceden ısıtılmış 10 ml PBS ile yıkama hücreleri PBS aspire ve tripsin 4 ml (% 0.25) ilave edin. 37 ° C kuluçka makinesi içinde 3-5 dakika kuluçkalayın. C aspire5 dk hücreleri aşağı pelet için bir konik tüp içine arşın, 300 g tam medya ve santrifüj eşit miktarda ekleyin. Not: tripsin içinde uzun inkübasyon hücre yüzey reseptörleri değiştirebilir ve potansiyel geçiş etkileyebilir. </li><li> Medya aspire ve taze eksiksiz bir medya tekrar süspansiyon hücreleri. Hücreleri saymak tripan mavisi dışlanmasını kullanarak ölü hücreleri hariç ve 60 mm hücre kültürü çanak eksiksiz bir medya 4 ml 500.000 mezenkimal stromal hücreler plaka. Not: hücre kaynağına bağlı olarak, testler gereken hücre optimal sayısını belirlemek için gerekli olabilir. </li><li> Plakalar optimum hücre eki ve çoğalması için% 90 konfluent, MSC için genellikle 48-72 saat kadar inkübe hücreleri. Not:% 100 izdiham onların göç kapasitelerini değiştirebilir birçok ankraj bağımlı hücreleri deneyim temas inhibisyonu, çünkü, tavsiye edilmez. Görüntü analiz yazılımı boşluğu yorumlamak çünkü% 80&#39;den az izdiham ile Tabaklar kullanılamaz fotoğraflar neden olacaktırsıfırdan çevresinin bir parçası olarak hücreler arası s (Şekil 1D bakınız). </li><li> Hücreler% 90 izdiham ulaştınız sonra, uygulama için uygun olarak hücrelere zarar. Çözünür sigara dumanı ekstraktı (CSE) maruziyetten sonra hücre hasarı değerlendirmek için, 2 dakika 18 üzerinde bir Büchner şişesi içinde eksiksiz bir medya 25 ml ile 1 University of Kentucky araştırma sigara (3R4F) duman çizerek% 100 CSE üretir. </li><li> Tam ortam içinde seyreltilmiş 4 mi% 1-4 CSE 24 saat süre ile inkübe hücreleri. Kuluçkadan sonra, 4 ml yeni, tam ortam ile değiştirmeden önce, ılık steril PBS ile iki kez 4 ml yıkama hücreleri. Not: sigara dumanı özü yüksek konsantrasyonda (&gt;% 5) ile zarar görmesi hücreleri esas olarak izdiham azaltabilir. </li></ol> 2. Scratch oluşturma <ol><li> Steril bir ortamda, hasarlı MKH 60 mm plaka kapağı çıkarın ve AC (örneğin steril bir plastik cetvel için) bir cetvel yatıyorduross plakanın üst kenar. Ortamı çıkarmadan, yaklaşık 5 mm aralıklı plaka üzerinde bir ila dört paralel çizikler ve uzun 50 mm yapmak için steril düz kenar tarafından yönlendirilen bir steril 200 ul pipet ucu kullanın. Not: Bir düz kenar o mikroskop sahnede olduğunda plaka için gerekli dönme ayarlamalar miktarını en aza indirir. Bu çizikler ekranda tamamen dikey (veya yatay) görünür olması zorunludur. 60 mm plaka üzerinde birden fazla çizik oluşturma hücre göçü (veriler gösterilmemiştir) etkileyen bir şekilde mikro-değiştirmez, ancak diğer hücre tipleri için bir göz olabilir. Kuyunun kenarına yakın büyüyen hücrelerin değişkenliği daha belirgin hale gelir ve çizilmelere tekdüze nesil etkileyebilir çünkü küçük kuyuların kullanılması tavsiye edilmez. </li><li> Ortamı aspire ve yavaşça sıfırdan merkezine yapışan hücreler önlemek için önceden ısıtılmış tam ortam 2 ml plakaları yıkayın ve hücre kaldırmak içinkaşınma gevşetilmiş olan s. Taze tam ortam 4 ml ile değiştirin. </li><li> Steril kalıcı bir kalem kullanarak, çizikler görüntüleme engel olmaz yerde plakanın alt 1-4 her çizik etiket. Not: çizik genişliği varyasyon olabilir, çünkü aynı sıfırdan görüntüleri öncesi ve göç sonrası karşılaştırıldığında önemlidir. </li></ol> 3. Scratch başlangıç ​​Görüntüleri alarak Not: çizik deneyi birden plakalar üzerinde yapılırsa, bu çizikler sonraki plaka üzerinde yapılmadan önce tek bir plaka üzerinde tüm çizikler ilk görüntüleri alınması tavsiye edilir. <ol><li> Analiz için gerekli görüntüleri oluşturmak için bir kamera ile bir ters faz kontrast mikroskobu kullanın. </li><li> Mikroskop kültür plakası yerleştirin ve çizilmeye # bulmak için düşük güç hedefi (10X) kullanın 1. Kültür plaka kapağına yoğuşma net bir imag engelleyen isehücrelerin e 37 ° C&#39;ye kadar ısıtılmış bir kademeli dizi kullanılır. </li><li> Gerekirse kadar görüntüler elde tamamen yatay ve görüş alanının merkezinde sıfırdan tutulması scratch uzunluğunun% 90 kapsayacak. Görüntüler arasında hiçbir örtüşme ile sıfırdan farklı bölümlerinin görüntüleri elde edebilir. Not: kültür çanak kenarlarında ışık kırılma analiz etmek, onları imkansız hale görüntüleri overexposes. Bu nedenle, ilk görüntüleri almak ve scratch uzunluğunun% 5 sürmez. </li><li> Ayrı bir klasörde her sıfırdan görüntüleri kaydedin. </li><li> Tekrarlama çizilmelere 2, 3 3,2-3,4 ve 4. adımları. </li><li> Hemen ilk görüntüleme sonra inkübatör plakaları dönün. Hücreler 4-7 saat göç edelim. Not: CSE ile hasarlı MKH&#39;lerin değerlendirirken 7 saat uygunudur. Hücre çoğalması, hücre göçü için karıştırıcı bir değişken olarak hareket edebilir, çünkü daha büyük 7 saat boyunca inkübe (aşağıda isteğe bağlı Not 8.2) tavsiye edilmez. </li></ol><pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. İlk Scratch Görüntüleri Analiz <ol><li> (Malzeme / Ekipman Tablo bakınız) ImageJ indirin ve Yara İyileşmesi Aracı eklenti yüklemek. </li><li> ImageJ görüntü dosyasını açın, sonra Yara İyileşmesi Aracı çizik alanı (Şekil 2B) hesaplamak için sıfırdan çevreleyen hücrelerin vurgulamak için &quot;Kenarları Bul&#39;u&quot; &quot;Süreç&quot; linkine tıklayın ve. Sonra, &quot;Görüntü&quot;, &quot;ayarlama&quot; &quot;Renk Eşiği&quot; ve &quot;Eşik Renk&quot; etiketli açılır menüden değerini değiştirmek tıklayın &quot;B &amp; W.&quot; </li><li> Çizik ve hücre ön arasında optimum kontrast elde edilinceye kadar &quot;Renk Eşiği&quot; menüsü içinde, hem de parlaklık eşik sürgü ayarlayın. Görüntüdeki kontrast oluşturur sağa (tamamen siyah resim) tamamen alt kaydırıcıyı hareket ettirin ve sonra maksimum kontrast oluşturmak için üst kaydırıcıyı ayarlamak için çalışıyoruz büyük aralığı için izin vermek için. </li><li> Yavaş yavaş üst bri ayarlamakGörüntü temiz sıfırdan (Şekil 2C) konturu görüntüler kadar soldan sağa ghtness kaymak. Sıfırdan kenarları tespit edildikten sonra, çizik bölgeyi vurgulamak için, açılır menüden &quot;MRI_Wound_Healing_Tool&quot; seçeneğini seçin ve &quot;m&quot; düğmesine (o ImageJ araç çubuğunda görünecektir) basın ImageJ araç çubuğundaki &quot;Daha Araçlar&quot; tıklayın ve çıkış sonuçları pop-out pencere (Şekil 2B) bilgisayarlı alan. </li><li> Kopyala ve bir excel elektronik tabloya sonuç penceresinde (Şekil 2E) tüm sayıları yapıştırın. Bireysel çizilmelere verileri ayırmak için emin olun. </li></ol> 5. Scratch Final Görüntüleri alarak <ol><li> Hücreleri (4-7 saat) göç ettikten sonra, tekrar 3.2-3.4 yineleyin. Görüntü her tabakta hücreleri göç eşit zaman oldu, böylece çizik aynı sırayla plakalar. Not: Hücreler çoklu zaman noktalarında görüntülü olabilir, bunların sensi bağlı olarakHer iki sıcaklık ve pH değişikliklerine tivity. Alternatif olarak, canlı hücre görüntüleme onlar göç gerçek zamanlı olarak hücreleri izlemek için kullanılabilir. </li></ol> 6. Final Scratch Görüntüler incelendiğinde <ol><li> Tekrarlayın son çizik görüntüler için 4.2-4.5 adımları tekrarlayın. </li></ol> 7. Göç belirlememize Scratch Alanını Hesaplama <ol><li> İlgili çiziklerin ilk alan değerlerinin ortalaması alınarak ortalama öncesi göç alan hesaplayın. </li><li> Ortalama öncesi göç alanında (adım 7.1) den, 6. adımda hesaplanan her bir görüntü için son göç alan, çıkartılmasıyla göç toplam tutarı hesaplayın. Göç değişikliği temsil eden her sıfırdan değerlerinin bir listesini oluşturun. </li><li> (Yani hücreleri üzerinde tüm tabak ve tüm çizikler% 0 ÖAM&#39;ye maruz) aynı test grubunda birden fazla çizilmelere verileri Havuz. Deney grupları arasındaki farklılıkları analiz etmek için Varyans testi bir analizi kullanın. </li><li> Hücreler geçirmek yavaşsave (büyük 10-12 saat daha az) çizilmemesi sonra uzun bir kuluçka süresi gerektirir, hücreler göç tahlil meydana edildiği dönemde herhangi çoğalmasını geçiren olup olmadığını bir BrdU veya edu kuruluş tahlil 19 belirlemek için gerçekleştirin. Önemli hücre çoğalmasını önlemek için bir geçiş süresi tahlil seçin. </li></ol> İsteğe bağlı 8. <ol><li> Önemli hücre yaşlanması kazıma işleminin bir sonucu olarak meydana gelen olup olmadığını değerlendirmek için, 19 çizilmeye sonra önceden tespit edilmiş zamanlarda, bir test plakası üzerinde yaşlanmayla ilişkili beta-galaktosidaz deneyi yapar. </li></ol>

<ol><li>Gough, W., Hulkower, K. I., Lynch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative%2C+facile%2C+and+high-throughput+image-based+cell+migration+method+is+a+robust+alternative+to+the+scratch+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol.+Screen%22%5BJournal%5D)">A quantitative, facile, and high-throughput image-based cell migration method is a robust alternative to the scratch assay.</a> J. Biomol. Screen. 16 (2), 155-163 (2011).</li>
<li>Ridley, A. J., Schwartz, M. A., Burridge, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration%3A+integrating+signals+from+front+to+back%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302 (5651), 1704-1709 (2013).</li>
<li>Sharma, R. R., Pollock, K., Hubel, A., McKenna, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+or+stromal+cells%3A+a+review+of+clinical+applications+and+manufacturing+practices%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem or stromal cells: a review of clinical applications and manufacturing practices.</a> Transfusion. 54 (5), 1418-1437 (2014).</li>
<li>Booth-Gauthier, E. A., Du, V., Ghibaudo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome+alters+nuclear+shape+and+reduces+cell+motility+in+three+dimensional+model+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Biol.+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Hutchinson-Gilford progeria syndrome alters nuclear shape and reduces cell motility in three dimensional model substrates.</a> Integr. Biol. (Camb). 5 (3), 569-577 (2013).</li>
<li>Keese, C. R., Wegener, J., Walker, S. R., Giaever, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+wound-healing+assay+for+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Electrical wound-healing assay for cells in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (6), 1554-1559 (2004).</li>
<li>Pinco, K. A., He, W., Yang, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha4beta1+Integrin+Regulates+Lamellipodia+Protrusion+Via+a+Focal+Complex%2Ffocal+Adhesion-Independent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Alpha4beta1 Integrin Regulates Lamellipodia Protrusion Via a Focal Complex/focal Adhesion-Independent Mechanism.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (9), 3203-3217 (2002).</li>
<li>Fronza, M., Heinzmann, B., Hamburger, M., Laufer, S., Merfort, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+wound+healing+effect+of+Calendula+extracts+using+the+scratch+assay+with+3T3+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Determination of the wound healing effect of Calendula extracts using the scratch assay with 3T3 fibroblasts.</a> J. Ethnopharmacol. 126 (3), 463-467 (2009).</li>
<li>Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cell+migration+and+invasion+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro cell migration and invasion assays.</a> J. Vis. Exp. (88), (2014).</li>
<li>Walter, M. N., Wright, K. T., Fuller, H. R., MacNeil, S., Johnson, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-conditioned+medium+accelerates+skin+wound+healing%3A+an+in+vitro+study+of+fibroblast+and+keratinocyte+scratch+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing: an in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays.</a> Exp. Cell Res. 316 (7), 1271-1281 (2010).</li>
<li>Goetsch, K. P., Niesler, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+scratch+assay+for+in+vitro+skeletal+muscle+wound+healing+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Optimization of the scratch assay for in vitro skeletal muscle wound healing analysis.</a> Anal. Biochem. 411 (1), 158-160 (2011).</li>
<li>Chung, C. A., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cell+sedimentation+on+measuring+chondrocyte+population+migration+using+a+Boyden+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Theor.+Biol%22%5BJournal%5D)">The effect of cell sedimentation on measuring chondrocyte population migration using a Boyden chamber.</a> J. Theor. Biol. 261 (4), 610-625 (2009).</li>
<li>Fabbri, M., Bianchi, E., Fumagalli, L., Pardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+lymphocyte+traffic+by+adhesion+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of lymphocyte traffic by adhesion molecules.</a> Inflamm. Res. 48 (5), 239-246 (1999).</li>
<li>Saez, A., Ghibaudo, M., Buguin, A., Silberzan, P., Ladoux, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rigidity-driven+growth+and+migration+of+epithelial+cells+on+microstructured+anisotropic+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Rigidity-driven growth and migration of epithelial cells on microstructured anisotropic substrates.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (20), 8281-8286 (2007).</li>
<li>Paxson, J. A., Gruntman, A. M., Davis, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+Dependence+of+Lung+Mesenchymal+Stromal+Cell+Dynamics+Following+Pneumonectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Age Dependence of Lung Mesenchymal Stromal Cell Dynamics Following Pneumonectomy.</a> Stem Cells Dev. 22 (24), 3214-3225 (2013).</li>
<li>McQualter, J. L., Brouard, N., Williams, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+fibroblastic+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+lung+are+highly+enriched+in+the+sca-1+positive+cell+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Endogenous fibroblastic progenitor cells in the adult mouse lung are highly enriched in the sca-1 positive cell fraction.</a> Stem Cells. 27 (3), 623-633 (2009).</li>
<li>Hoffman, A. M., Paxson, J. A., Mazan, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung-Derived+Mesenchymal+Stromal+Cell+Post-Transplantation+Survival%2C+Persistence%2C+Paracrine+Expression%2C+and+Repair+of+Elastase-Injured+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Lung-Derived Mesenchymal Stromal Cell Post-Transplantation Survival, Persistence, Paracrine Expression, and Repair of Elastase-Injured Lung.</a> Stem Cells Dev. 20 (10), 1779-1792 (2011).</li>
<li>Beane, O. S., Fonseca, V. C., Cooper, L. L., Koren, G., Darling, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+aging+on+the+regenerative+properties+of+bone+marrow-%2C+muscle-%2C+and+adipose-derived+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of aging on the regenerative properties of bone marrow-, muscle-, and adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells.</a> PLoS One. 9 (12), e115963(2014).</li>
<li>Chen, L., Ge, Q., Tjin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cigarette+smoke+extract+on+human+airway+smooth+muscle+cells+in+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Effects of cigarette smoke extract on human airway smooth muscle cells in COPD.</a> Eur. Respir. J. 44 (3), 634-646 (2014).</li>
<li>Itahana, K., Campisi, J., Dimri, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+detect+biomarkers+of+cellular+senescence%3A+the+senescence-associated+beta-galactosidase+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods to detect biomarkers of cellular senescence: the senescence-associated beta-galactosidase assay.</a> Methods Mol. Biol. 371, 21-31 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Burada açıklanan protokol gerçekleştirmek ve çizilmeye deneyleri analiz etmek için kantitatif sağlam, standart bir yöntem sağlar. Basit çizik deneyleri rutin hücresel göç incelemek için çalışmanın çok farklı alanlarda kullanılmaktadır. Ancak, geleneksel karalama tahlil tekrarlanabilir 7,10 ile ilgili sorunlar yol açmıştır standart bir set-up ve miktar protokolünü yoksun kalmıştır. Modifikasyonlar ve çizik testi geliştirilmesi için optimizasyonlar birçok bireysel canlı hücre görüntüleme, standartlaştırılmış st...

Hücre göçü, doku gelişimi, onarım ve yenileme, hem de kanser metastazı ve damar sertliği 1 gibi patolojik işlemler gibi birçok fizyolojik süreçte yüksek oranda koordine ve hayati önem taşımaktadır. Hücre göçü bir anlayış hasarlı dokuları tamir ve hücre nakli teknolojileri ve yapay doku 2 aşılama dahil patolojik durumların tedavisinde kullanılan gelişmekte olan tedavilere özellikle önemlidir. , Doku tamirini 3 aracılık titizlikle, ölçülebilir uyarlanabilir ve uygun maliyetli ilgi olduğunu bir deney kullanılarak bu hücrelerin göç kapasitesinin miktarının mezenkimal stromal hücreler (MKH) rolü mevcut ilgi dikkate alındığında. Daha da önemlisi, bu tip bir analiz hücre hasarı sonrası göç kapasitesi nispeten küçük değişiklikleri tespit etmek için yeterince hassas olması gerekir. Çizik deneyleri, trans-kuyu göç deneyleri, hücre göçü miktarının da dahil olmak üzere mevcut metodlar (Boyden chamberleri), micropillar diziler ve hücre yasak bölge tahlilleri tekrarlanabilirlik, customizability, ölçümü ve maliyet etkinliği 1,4,5 sınırlamaları bir dizi sahiptir. Burada anlatılan optimize karalama tahlil sonuçlarını sağlam, ölçülebilir ve görüntü tabanlı analiz yetenekleri, maliyet-etkililik ve diğer uygulamalara uyum gösterir. Kazı deneyleri, farklı deney koşulları altında 5 hücresi yayılmasını ve çoğalmasını değerlendirmek için çok sayıda kapasitelerde kullanılmıştır. Deney veya yakınındaki izdiham tamamlamak için onlara büyüyen belirlenmiş tohum hücreleri ve steril bir iğne veya bir pipet ucu 6 ile elde edilen tek tabakalı çizilmeye gerektirir. Analiz en çok rastgele seçilmiş yerle 7-9 birden fazla zaman noktası boyunca sıfırdan genişliğini karşılaştırılmasıyla gerçekleştirilir. Onun belirgin kullanılmasına rağmen, çizilmeye tahlil tekrarlanabilirlik ve ölçümü ile ilgili sorunlar ile şaşırmış. Değişkenliğisıfırdan nesil değil, sadece hücrelerin mikro değiştirir, ama aynı zamanda plaka yüzeyi ve altında yatan hücre dışı matriks-5 zarar vererek hücre göçü engelleyebilir. Deneyler genellikle, ancak daha yavaş göç ve daha uzun deney süreleri gösteren hücre hatları için, 12 saat ila 7 üzerinden yürütülmektedir, proliferasyon, bir karıştırıcı bir değişken 7,10 olur. Son olarak, kaşıma işlemi tarafından oluşturulan yaşlanmış hücreler tek tabakalı 1 açığını kapatmak için gerekli dışı sinyalizasyon müdahale faktörleri serbest bırakabilirsiniz. Karalama tahlil Optimize tahlil süresi uzunluğu en aza indirerek, ve manipülasyon sırasında istenmeyen hücre ölümünü engelleyen, yüzey özelliklerine müdahale etmeyen tutarlı bir boşluk yaratılmasını gerektirir. Durdurucu bazlı analiz, bir hücre yasak bölge testinin bir optimizasyon olduğunu. Bu deney, hücre büyümesinin hariç oyuk ortasına yerleştirilen bir stoper kullanılmaktadır ancak bu hücreler, merkezi hariç bırakma bölgesi çevresindeki kaplama sağlar.Göç değerlendirmek için, durdurucu çıkarılmaktadır ve elde edilen dışlama alanı geçiş meydana gelmesi için bir yüzey sağlar. Bununla birlikte, bu deney, özelleştirmek veya 10 adapte zordur ve bazı uygulamalar için, bu teknik, aynı zamanda engelleyici mal olabilir. Sıfırdan deneyleri ve bunların türevleri, trans-çukurlu göç deneyleri (veya Boyden oda tahlilleri) aksine kemotaktik maddeler 8,11 ihtiva eden bir hazneye, mikro-gözenekli bir filtre zarı içinden bir odacıktan hareket hücre sayısının ölçülmesi ile göç değerlendirmek 12. Gözenekli zarından göç sonrasında, hücreler kemotaktik ajanlara maruz membran tarafına yapışır ve doğru ölçmek için zor olabilir, çünkü bu teknik, MSC gibi yapışık hücreler için programı sınırlıdır. Tahlil bazı üç boyutlu göç yollarını incelemek mümkün olsa da, kısıtlı hücre tipleri hangi için doğru hücre göçü limitini kendi yarar ölçmek mümkün 10. Karalama deneyleri için başka bir alternatif deforme ve bir vekil olarak diziye göç hücrelerinin yeteneği kullanarak üç boyutlu bir uzayda hücresel motilitesini ölçen bir mikro-ayağı dizisi kullanır. Polydimethlysiloxane (PDMS) elastomerler kesin bir kalıp üzerine tedavi ve ozon ile tedavi ve fibronektin homojen olmayan parçalanabilir mikro üretir. Dizi 4 girmek için hücrelerinin yeteneği ölçmek için gerektiği gibi mikro-kolonu boşluk da değişebilir. Kalıp, yüksek boy oranı dizisinin 13 negatif bir sürümünü oluşturmak için silikon gofret derin reaktif iyon aşındırma yoluyla oluşturulur. Tahlil onun customizability tarafından güçlendirilmiştir edilirken, yetenek göç hücrelerinin doğrudan görselleştirme yoluyla üç boyutlu göç ve analiz modeli, mikro-ayağı diziler yaratmada güçlük ekonomik yaygın kullanımını engellemektedir. Bu protokol açıklanan optimize karalama tahlil verimli, cos sağlarserbestçe kullanılabilir yazılımı kullanılarak analiz edilebilir ve tutarlı bir şekilde çiziklerin üretilmesi için T-etkili bir yöntemdir. Bunun yerine önce ve hücre göçü sonrasında sıfırdan genelinde yapılan basit genişlik ölçümleri, yazılım öncesi ve sonrası toplam çizilmeye göç alanlarını belirlemek için kullanıcı sağlar. Bu gelişme nerede genişlik ölçümleri alınmalıdır çizik belirlemeye çalışıyor konusunu sınırlayan ve sıfırdan genişliği olsun o uzunluğu boyunca üniform olduğunu. Buna ek olarak, hücre sayıları, hücre izdiham tipi ve hücrelere verilen hasarı derecesi dikkatli optimizasyonu daha deneyi optimize etmek için ele alınmıştır.

<table><tbody><tr><td>DMEM (yüksek glikoz, glutamin ilavesi yok)</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>31053-036</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, Thermo Scientific HyClone</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3091002</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik/antimikotik, Thermo Scientific HyClone&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>SV3007901</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin, 200 mM, Thermo Scientific HyClone</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3003401</td><td></td></tr><tr><td>TypeLE hücre ayrışma reaktifi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>12563-01</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin, Thermo Scientific HyClone&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3002802</td><td></td></tr><tr><td>Falcon standart 60 mm doku kültürü kapları</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772B</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Steril 200 & mu; l pipet uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-502</td><td></td></tr><tr><td>Kamera bağlantılı ters ışık mikroskobu</td><td>Değişken</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı&nbsp;</td><td>http://imagej.nih.gov/ij/</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MRI_Wound_Healing plugin</td><td><a href="http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool">http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Wound_Healing_Tool</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İstatistiksel analiz yazılımı</td><td>Microsoft Excel</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

yara scratch testi optimizasyonu Çözünür sigara duman Özü ile hasar sonrası fare mezenkimal stromal hücre göç değişiklik algılama

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Hücre göçü, doku gelişimi, onarımı ve rejenerasyonu, kanser metastazı ve inflamatuar yanıtlar dahil olmak üzere birçok fizyolojik ve patolojik süreç için hayati öneme sahiptir. Mezenkimal stromal hücrelerin doku onarımına aracılık etmedeki rolüne olan mevcut ilgi göz önüne alındığında, bu hücrelerin göç kapasitesini ölçmek ve hasardan sonra göç kapasitesinin nasıl değiştirilebileceğini anlamakla ilgileniyoruz. Hem özelleştirilmesi kolay hem de uygun maliyetli olan titiz bir kantitatif migrasyon testinin optimizasyonu, çeşitli uyaranlara yanıt olarak hücre göçündeki değişikliklerle ilgili soruları yanıtlamanın anahtarıdır. Çizik tahlilleri, trans-kuyu migrasyon tahlilleri (Boyden odaları), mikropillar diziler ve hücre dışlama bölgesi tahlilleri dahil olmak üzere hücre göçünü ölçmek için mevcut yöntemler, tekrarlanabilirlik, özelleştirilebilirlik, miktar tayini ve maliyet etkinliği açısından bir dizi sınırlamaya sahiptir. Belirgin kullanımına rağmen, çizik testi, hücre mikro çevresinin hasarı, hücre göçünün önündeki engeller, komşu yaşlanan hücrelerin etkisi ve hücre çoğalmasının yanı sıra titiz nicelik eksikliği ile ilgili tekrarlanabilirlik sorunları ile karıştırılır. Burada açıklanan optimize edilmiş çizik testi, sağlam sonuçlar, ölçülebilir ve görüntü tabanlı analiz yetenekleri, maliyet etkinliği ve diğer uygulamalara uyarlanabilirlik gösterir.

Burada sunulan karalama deneyleri fare akciğer ikamet mezenkimal stromal hücreleri (LR-MKH&#39;lerin) kullanılarak gerçekleştirilmiştir ve protokol notları başvurulan olarak izole edilmiştir. LR-erişkin 60 mm doku kültürü çanağı içinde 500.000 hücre yoğunluğunda tohumlanır ve 48 saat% 90 konflüansa büyütülmüştür. Hasar oluşturmak için,% 4 CSE (yukarıda tarif edilmiştir), ilk tohumlama dönemin ardından 24 saat süre ile, ancak sıfırdan analizden önce hücreler ile inkübe edildi. Her bir deney için, sıfırdan 200 ul bir pipe...

Göç etme kapasitesi, mezenkimal stromal hücreler (MSC'ler) dahil olmak üzere birçok farklı hücre tipinin temel bir işlevidir. Bununla birlikte, hasardan sonra göç kapasitesindeki değişiklikleri ölçmek zordur. Bu protokol, hasardan sonra MSC göç kapasitesindeki değişiklikleri ölçmek için titiz istatistikler kullanan, kolayca uyarlanabilir bir geçiş testini açıklar.

Yara Scratch Testi optimizasyonu Çözünür Sigara Duman Özü ile Hasar sonrası Fare Mezenkimal Stromal Hücre Göç Değişiklik Algılama

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Bu deneyin genel amacı, çözünür sigara dumanı ekstraktı ile hasar verilen akciğer mezenkimal stromal hücrelerinin migrasyon kapasitesindeki değişiklikleri tespit etmektir. Bu yöntem, akciğer öncül hücrelerinin migrasyon kapasitesinin akciğer onarımına yardımcı olmak için nasıl artırılabileceği de dahil olmak üzere, akciğer rejeneratif biyolojisi alanındaki temel soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, yürütülmesi ekonomik ve özelleştirilmesi kolay kalırken, hücre migrasyonu için daha iyi kantitatif ölçümler sağlayacak şekilde optimize edilmiş olmasıdır.Bu gösterimde, fare akciğer mezenkimal stromal hücrelerinin (MSC'ler) göç kapasitesini nicelleştirmek için çizik deneyi (scratch assay) kullanılacaktır. Çözünür sigara dumanı ekstraktına maruz bırakıldıktan sonra, MSC'ler 60 milimetrelik plaklarda tam besiyerinde büyütülür ve protokol metninde açıklandığı şekilde hasara uğratılır. Çizik deneyi için uygun bir konfluens düzeyi önemlidir, çünkü bu durum görüntüleme yazılımının çizik sınırlarını doğru bir şekilde tanımlayabilmesini sağlar.Bu örnek, steril bir ortamda çizilmeye uygun, %95 konfluense ulaşmış MSC'leri göstermektedir. Hasar verilmiş MSC'lerin bulunduğu plağın kapağını çıkarın ve sterilize edilmiş plastik bir cetvel gibi düz bir kenarı plağın üst kenarına yerleştirin. Düz bir kenar kullanmak, plak daha sonra görüntüleme için mikroskop tablasına yerleştirildiğinde gereken rotasyonel ayarlamaların miktarını en aza indirir.Besiyerini çıkarmadan, steril bir düz kenar yardımıyla yönlendirilen steril 200 µL pipet ucu kullanarak plaka boyunca, aralarında yaklaşık 5 mm mesafe olan ve 50 mm uzunluğunda dört paralel çizik oluşturun. 60 mm'lik bir plakada birden fazla çizik oluşturmak, MSC'ler için hücre migrasyonunu etkileyecek şekilde mikroçevreyi değiştirmez, ancak diğer hücre tipleri için bu durum bir değerlendirme kriteri olabilir. Besiyerini aspire edin ve plakayı 2 mL önceden ısıtılmış tam besiyeri ile nazikçe yıkayın.Bu işlem, hücrelerin çizik merkezine yapışmasını önler ve çizilme sonucu gevşeyen hücreleri uzaklaştırır. Steril bir kalıcı marker kullanarak, her bir çiziği plakanın alt kısmında görüntülemeye engel olmayacak konumlarda birden dörde kadar numaralandırın ve ortamı 4 mL taze komple medya ile değiştirin. Çizik genişliğinde farklılıklar olabileceği için, aynı çiziğin migrasyon öncesi ve sonrası görüntüleri karşılaştırılmalıdır; bu nedenle her bir çiziğin başlangıç görüntüleri alınmalıdır.Çizik analizi birden fazla plakada gerçekleştirilecekse, bir sonraki plakada çizikler oluşturulmadan önce tek bir plakadaki tüm çiziklerin başlangıç görüntülerinin alınması önerilir. Analiz için gerekli görüntüleri elde etmek amacıyla kameralı bir ters faz kontrast mikroskobu kullanın. Kültür plağını mikroskobun üzerine yerleştirin ve çiziği bulmak için düşük büyütmeli objektifi kullanın.Bir numara. Çiziğin ekranda tamamen yatay görünmesi zorunludur; çiziği tamamen yatay tutarak ve görüş alanının merkezinde seyrederek, çiziğin uzunluğunun %90'ını kapsayacak şekilde gerekli sayıda görüntü elde edin. Görüntüleri, aralarında örtüşme olmayacak şekilde çiziğin farklı bölümlerinden alın.Kültür kabının kenarlarındaki ışık kırılması görüntülerin aşırı pozlanmasına neden olarak analiz edilmelerini imkansız hale getirdiğinden, çizik uzunluğunun ilk ve son %5'lik kısımlarından görüntü almayın. Bir numaralı çizik olan görüntüleri bir klasöre kaydedin. İki, üç ve dört numaralı çizikler için de aynı şekilde görüntüler elde edin ve her bir çiziğe ait görüntüleri ayrı bir klasöre kaydedin.Bu ilk görüntülemeden hemen sonra plakları inkübatöre geri yerleştirin. Bu deneye başlamadan önce hücrelerin dört ila yedi saat boyunca migrasyon yapmasına izin verin. Image J yazılımını indirin ve yara iyileşmesi (wound healing) aracı eklentisini kurun.Görüntü dosyasını ImageJ'de açın, ardından yara iyileşme aracı için çiziği çevreleyen hücreleri vurgulamak amacıyla process ve find edges seçeneklerine tıklayın. Çizik alanını hesaplamak için image adjust ve color threshold seçeneklerine tıklayın ve color threshold menüsü içindeki threshold color adlı açılır menüden değeri BNW olarak değiştirin. Görüntüyü tamamen siyah yapmak için alt sürgüyü tamamen sağa çekin ve ardından çizik ile hücre önü arasında maksimum kontrast oluşturmak için üst sürgüyü ayarlayın.Görüntü, çiziğin konturunu net bir şekilde gösterene kadar üstteki parlaklık sürgüsünü yavaşça soldan sağa doğru ayarlayın. Çiziğin kenarları belirlendikten sonra, daha fazla araç (more tools) seçeneğine tıklayın. image J araç çubuğundaki açılır menüden MRI wound healing tool'u seçin ve çizik alanını vurgulayıp hesaplanan alanı çıktı olarak almak için M düğmesine basın.Bir sonuç açılır penceresinde, sonuç penceresindeki tüm sayıları bir Excel hesap tablosuna kopyalayıp yapıştırın. Verileri her bir çizikten ayrı tuttuğunuzdan emin olun. Hücreler dört ila yedi saat boyunca göç ettikten sonra, çizikler için görüntüleme prosedürünü tekrarlayın; her plakadaki hücrelerin eşit süre boyunca göç etmesini sağlamak için plakaları çizildikleri sırayla görüntüleyin.Hücreler, hem sıcaklık hem de pH değişimlerine olan duyarlılıklarına bağlı olarak birden fazla zaman noktasında görüntülenebilir. Ardından, final çizik görüntüleri, başlangıç çizik görüntüleri için gösterildiği ile aynı şekilde Image J kullanılarak analiz edilir. Migrasyonu nicelleştirmek için çizik alanları da hesaplanabilir, doğru.Konfluens, çizme deneyinin başarısı için kritik öneme sahiptir. %95 konfluensteki fare akciğer MSC'lerinin başarılı bir çizme işlemi burada gösterilmiştir. Buna karşılık, %70 konfluens başarılı bir çizme işlemi için çok düşüktür ve yanlış sınırlar oluşturabilir.Bunlar, görüntüleme yazılımı tarafından tanımlanan ilgili çizik alanı sınırları ile birlikte temsilci migrasyon öncesi ve migrasyon sonrası orijinal görüntülerdir. Bu grafikler, %95 konfluense ulaşmış fare akciğer MSC'lerinden oluşan bir plakada oluşturulan dört çiziğin her biri için, %0 veya %4 sigara dumanı ekstraktına maruziyet sonrası veya öncesindeki migrasyon için piksel cinsinden hesaplanan ortalama çizik alanlarını göstermektedir. Hesaplanan ortalama çizik alanı değişiminin karşılaştırılması, %4 sigara dumanı ekstraktına maruz kalan fare akciğer MSC'lerinde daha az migrasyon olduğunu ortaya koymuştur.Bu prosedürü uygularken, çalıştığımız özel hücre tipi için hücre konfluensini optimize etmenin ve dikkatle izlemenin önemli olduğunu hatırlamak ve çiziklerin mümkün olduğunca tekdüze olduğundan emin olmak için çizme işlemini pratik etmek gerekir. Bu prosedürün ardından, hücre migrasyonunu etkileyebilecek değişimler ve protein ekspresyonu hakkındaki ek soruları yanıtlamak için immünohistokimya gibi diğer teknikler uygulanabilir.

optimization-wound-scratch-assay-to-detect-changes-murine-mesenchymal

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Erken endotel hücre (EEC) göçünün araştırılması, bazı hastalıkların patofizyolojisini anlamak ve terapötik müdahale için potansiyel olarak yeni stratejiler belirlemek için önemlidir. Aşağıdaki protokol, EEC'nin araştırılması için uyarlanmış hücre göçünü değerlendirmek için teknikleri açıklamaktadır.

Toksik Kimyasalların Maruz sonra Endotel Hücre Göç Değerlendirilmesi

Bu çalışmada cep işgali ve geçiş analizi için iki farklı yöntem raporları: Boyden odası tahlil ve vitro video mikroskobu tabanlı yara iyileşmesi tahlil. Bu iki deney protokollerde açıklanmış ve kendi yararları ve dezavantajları karşılaştırılır.

Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara

Bu el yazması kültürlü epitel hücre monolayers üzerinde yapılan nasıl kesi benzeri lezyonlar elverişli bir konuma sahip modeli şifa vitrogörüntüleme için tarafından confocal sağlayan, yarası. açıklar veya lazer tarama mikroskobu ve yüksek kaliteli sağlayabilir nicel ve nitel veri hücre davranış ve mekanizmaları geçişinde dahil çalışmak için.

Mikroskopi Vitro yara iyileşmesi sırasında epitel hücre göç değerlendirilmesi için yöntemleri temel

Burada, peptidler etkisi bronş epitel hücrelerinin geçiş değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntemi Nicel veri hücre göç ve yara kapatma hızı üzerinde hızlı ve son derece tekrarlanabilir elde olanak sağlar.

Roman Vitro hücre göç değerlendirmek için şifa tahlil yara

Burada bir otomatik optik kamera mikroskopla hücre göç vitro test etmek için bir yordam açıklanmaktadır. Kazı-kazan tahlil nerede çizik kapatılması için bir süre takip yaygın olarak kullanılmış. Optik mikroskop hücre göç güvenilir ve ucuz tespiti sağlar.

Kazı-kazan tahlil Vitro hücre göç bir otomatik optik kamera ile test etmek için en iyi duruma getirilmiş

Bu çalışmada bir vitro modeli (arsenik etkisi hücresel geçiş gibi nasıl çevre kirletici maddeleri belirlemek için yara iyileşme sıfırdan testin) bir mekanizma olarak odaklanır. Bu içinde vitro tahlil değişiklikleri için in vivo deneyler önce hücresel göç hızlı ve erken belirtileri sağlar sonuçlar gösterilmektedir.

Vitro Cilt hücre göç arsenik etkilerini göstermek için tahlil kaşı

Burada, primer fibroblastlar kullanarak in vitro çizik testve farelerde in vivo deri yara iyileşmesi test için bir protokol salıyoruz. Her iki tahliller in vitro ve in vivo yara iyileşmesini değerlendirmek için basit yöntemlerdir.

In Vitro ve In Vivo In Vivo Analizi Yara İyileşmesi için Scratch Migration Tahlil ve Dorsal Skinfold Odası

Ekipman yoğun yöntemler kullanılmadan hücre göçünün belirlenmesinde yeni bir yaklaşım sağlayan sıfırdan geçiş testini uygun maliyetli bir yöntem savuruyoruz. Bu protokolde fibroblastlar kullanılırken, ek hücre tipleri ve hücre göçü üzerindeki etkileri incelemek için uyarlanabilir ve kullanılabilir.

Maliyet Etkin ve Uyarlanabilir Çizilme Göçü Tsası

Etkileşim deneyimi tasarımı ve kullanıcı gereksinimleri analizinin dahil edilmesiyle, tekrarlanabilirlik, güvenilirlik, pratiklik, hücresel bütünlük ve kullanıcı deneyimi açısından hücresel yara iyileşme testlerini geliştiren yenilikçi bir hücre kazıyıcı sunuyoruz.

Hücre yara iyileşme testinin güvenilirliğini artırmak için otomatik olarak stabil ve tekrarlanabilir hücresiz boşluklar oluşturan bir araç

Bu çalışma, iki boyutlu (2D) çizik yara migrasyon testini ve üç boyutlu (3D) küresel filizlenme testini, RNA ekstraksiyonu ve immünositokimya dahil olmak üzere ilgili aşağı akış analiz yöntemleriyle birlikte, in vitro anjiyogenezi incelemek için uygun testler olarak sunmaktadır.

Çizik Yara Migrasyon Testi ve Sferoid Filizlenme Testinden Yararlanarak Anjiyogenezin Fonksiyonel ve Moleküler Düzeyde İncelenmesi

Burada, murin hava yolu epitel hücrelerini izole etmek ve farklılaştırmak için, kronik sigara dumanı ekstraktına (CSE) alışmalarına odaklanan bir in vitro model açıklıyoruz. Model, CSE'nin multi-omik etkisini kapsamlı bir şekilde karakterize etmek için kullanılabilir, bu da muhtemelen kronik duman maruziyeti altındaki hücresel tepkiler hakkında bilgi sağlar.

Sigara Dumanı Ekstraktı ile Uyarılan Murin Hava Yolu Epitel Hücrelerinde Multi-Omiklerin Farklılaşması ve Değişikliklerinin İncelenmesi için İn Vitro Model

Keşfedin fare akciğer mezenkimal stromal hücrelerinin göç kapasitesindeki değişiklikleri yara scratch testi ile nicel olarak ölçme yöntemini. Çözünür sigara duman özü hasarı sonrası hücre davranışını analiz edin.

Yara Scratch Testi optimizasyonu Çözünür Sigara Duman Özü ile Hasar sonrası Fare Mezenkimal Stromal Hücre Göç Değişiklik Algılama (Video) | JoVE Journal

Yara Scratch Testi optimizasyonu Çözünür Sigara Duman Özü ile Hasar sonrası Fare Mezenkimal Stromal Hücre Göç Değişiklik Algılama

Daha fazla video keşfet