Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem

Bu numune hazırlama yönteminin genel amacı, su numunelerindeki küçük, organik kirleticileri kullanıcı dostu, uygun maliyetli ve otomatik bir şekilde önceden konsantre etmektir. Bu yöntem, kuyu plakası immünolojik testleri veya biyosensörler gibi immünodetection yöntemleri kullanılarak su numunelerinin kontaminasyonunu incelerken standart SPE proseslerinin yerini alabilir. Bu tekniğin temel avantajları, SPE prosedürünün otomatik olması ve aletlerin ayak izinin ve maliyetinin geleneksel yaklaşımlara kıyasla düşük olmasıdır.

Ek olarak, zenginleştirme işleminin performansları, hem düşük çözücü içeriği hem de ön konsantrasyon verimliliği açısından immünolojik testlerin analiz gereksinimini karşılar. İlk olarak, 100 milimetre su örneğini sıfır nokta iki mikrometre dökme boyutu filtre ile filtreleyin. Filtrelenmiş numuneyi GL 45 dişli bir cam şişeye yerleştirin.

Metanolü deiyonize suda seyrelterek, sıkı bir tüpte yüzde 50 hacme kadar 300 mikrolitre eluent hazırlayın. Daha sonra, 1.600 mikrolitre metanol ve ardından 400 mikrolitre deiyonize su ile 40 miligram ters faz sorbent ekleyerek mililitre başına 20 miligram oktadesil silika sorbent parçacıkları süspansiyonu hazırlayın. Kapağı sıkıca kapatın ve bir girdap karıştırıcı ile çalkalayın.

Gözenek boyutu 11 mikrometre olan bir naylon membranı çift katmanlı toz önleyici doku üzerine yerleştirin. Üç milimetre çapında bir zımba ile zarda iki küçük parça kesin. Ardından, düz uçlu filtre forsepsli küçük zarlardan tutun ve sütunun bir tarafına yerleştirin.

Bunu takiben, düz tabanlı konektörü tüp ile vidalayın ve sıkın. Ardından, sütunun gövdesine, zarın yerleştirildiği uca doğru işaret eden bir ok çizin. Bu noktada, ok alta doğru bakacak şekilde sütunu tutucuya sabitleyin.

Alt kilit konektörlerini kullanarak kolonun tüpünün ucuna boş bir 10 mililitrelik tek kullanımlık şırınga takın. Sorbent süspansiyonunu girdap karıştırıcı ile çalkalayın ve kolonun ortasına 100 mikrolitreyi hızla pipetleyin. Enjekte ederken, diğer elinizle şırıngayı kullanarak pipetlenmiş solüsyonu zardan nazikçe aspire edin.

SPE kolon hazırlığı çok önemlidir. Kolondaki partikül süspansiyonunu enjekte ederken şırıngayı kullanarak çözeltiyi zardan uygun şekilde aspire ettiğinizden emin olmalısınız. Aksi takdirde, parçacıklar yoğun bir şekilde paketlenmeyecektir.

Çözelti içindeki partiküllerin homojen bir şekilde asılmasını sağlamak için, tüm pipetleme adımları arasında stok süspansiyonunu çalkalayarak önceki işlemi iki kez daha tekrarlayın. Tüm süspansiyon yüklendikten ve bir şırınga ile aspire edilerek kurutulduktan sonra, şırıngayı yerinde tutun ve diğer elinizle forseps kullanarak ikinci naylon zarı üstüne yerleştirin. Ardından, ikinci konektörü bir tüp ile vidalayın ve şırıngayı atın.

Bu noktada, alt kilit konektörlerini kullanarak SPE cihazındaki sütunu sıkın. S'yi içeren şişeyi, üzerine verilen GL 45 güvenlik kapağını vidalayarak cihaza bağlayın. Eluent rezervuarına 200 mikrolitre eluent yükleyin.

Ardından, seyreltme haznesine 800 mikrolitre deiyonize su yükleyin. Daha fazla hareket mümkün olmayana kadar saat yönünde ters çevirerek basınç regülatörünün kapalı konumda olduğunu doğrulayın. Prototipi açtıktan sonra, pset için 580 ve delta pset için 30 değerlerini girin.

Basınç regülatörünü ayarlamak için pompayı çalıştırın. Ardından, preg için okunan değer daha düşük ancak 320 milibar'a yakın olana kadar basınç regülatörünü manuel olarak çevirin. Pompayı durdurduktan sonra, otomatik mod köşesinde başlat düğmesine basarak SPE prosedürünü başlatın.

SPE prosedürü tamamlandıktan sonra, küçük numune yığınını kapatın ve ELISA analizine kadar karanlıkta dört ila beş santigrat derecede saklayın. Sistemi temizlemek için, GL 45 iplikli bir cam şişede hacimce yüzde 70 metanol içeren 10 mililitrelik bir çözelti hazırlayın. SPE sütununu çıkarın ve boruyu konektörlerle takın.

Otomatik modda, Temizleme dosyasını seçin ve daha önce pset, delta pset ve preg için kullanılan aynı basınç ayarlarıyla başlatın. Sorbent ambalajının tekrarlanabilirliği, pipetlenmiş sorbentin cam vileslerde kurutulması ve tartılmasıyla değerlendirildi. Enjeksiyon zamanının tekrarlanabilirliği 100 mililitrelik numuneler için test edildi.

İlk ve önceden konsantre çivili numunelerin konsantrasyonları, 17 beta-estradiolden oluşan ticari bir ELISA kiti kullanılarak belirlendi. Kalibrasyon eğrilerinden, zenginleştirilmiş numuneden elde edilen metanol oranının immünolojik testin hassasiyetini etkilemediği açıktır. Deiyonize su ve yapay deniz suyu için sırasıyla 128, artı veya eksi yüzde 22 ve 107 artı veya eksi yüzde altı geri kazanım hesaplandı.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bir SPE kolonunun hazırlanması, uygun şekilde gerçekleştirilirse beş dakikadan daha kısa sürede yapılabilir. Tüm SPE prosedürü bir saatten daha kısa sürede tamamlanabilir. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, çevre bilimi alanındaki araştırmacıların, küçük organik kirleticilerin izlenmesi için immünotespit yöntemlerinin geliştirilmesini keşfetmelerinin yolunu açtı.

Bu videoyu izledikten sonra, immünolojik tahlillerle kirleticilerin analizi için uygun maliyetli, otomatik cihazımızı kullanarak su numunelerinin nasıl hazırlanacağını iyi anlamış olmalısınız. Organik kirleticiler ve çözücülerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman uygun eldiven ve koruyucu gözlük takmak gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.