Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem

Bu numune hazırlama yönteminin genel amacı, su numunelerindeki küçük, organik kirleticileri kullanıcı dostu, maliyet etkin ve otomatik bir şekilde ön konsantre etmektir. Bu yöntem, kuyucuk plakası immünassayleri veya biyosensörler gibi immünodetection yöntemleri kullanılarak su numunelerinin kontaminasyonu incelendiğinde, standart SPE süreçlerinin yerini alabilir. Bu tekniğin temel avantajı, geleneksel yaklaşımlara kıyasla cihazların kapladığı alanın ve maliyetinin düşük olmasıyla birlikte SPE prosedürünün otomatikleştirilmiş olmasıdır.

Ek olarak, zenginleştirme işleminin performansları, hem düşük çözücü içeriği hem de ön konsantrasyon verimliliği açısından immünolojik analizlerin gereksinimlerini karşılamaktadır. Öncelikle, 100 mililitre su örneüğünü 0,2 mikrometre gözenek boyutuna sahip bir filtreden geçirin. Filtrelenmiş örneği GL 45 dişli bir cam şişeye yerleştirin.

Sıkı kapaklı bir tüp içerisinde, metanolü deiyonize su ile hacimce yüzde 50 olacak şekilde seyrelterek 300 µL elüent hazırlayın. Ardından, cam bir flakon içerisindeki 40 mg ters faz sorbentine 1.600 µL metanol ve ardından 400 µL deiyonize su ekleyerek 20 mg/mL konsantrasyonunda oktadesil silika sorbent partikül süspansiyonu hazırlayın. Kapağı sıkıca kapatın ve vorteks karıştırıcı ile ajite edin.

Gözenek boyutu 11 µm olan bir naylon membranı çift katmanlı toz önleyici kağıt üzerine yerleştirin. Bir üç milimetrelik delgeç yardımıyla membrandan iki küçük parça kesin. Ardından, küçük membranlardan birini düz uçlu filtre pensiyle tutun ve kolonun bir tarafına yerleştirin.

Bunu takiben, düz taban konnektörü tüple birlikte vidalayın ve sıkıştırın. Ardından, kolon gövdesine, membranın yerleştirildiği uca doğru yönelmiş bir ok çizin. Bu noktada, oku aşağıya bakacak şekilde kolonu tutucuya sabitleyin.

Alt kilit konektörlerini kullanarak kolon tüpünün ucuna boş 10 mililitrelik tek kullanımlık bir şırınga takın. Sorbent süspansiyonunu vorteks karıştırıcı ile çalkalayın ve 100 mikrolitre hacmindeki solüsyonu hızla kolonun merkezine pipetleyin. Enjeksiyon yaparken, diğer elinizdeki şırıngayı kullanarak pipetlenen solüsyonu membran üzerinden nazikçe aspire edin.

SPE kolon hazırlığı oldukça önemlidir. Partikül süspansiyonunu kolona enjekte ederken, şırıngayı kullanarak çözeltiyi membrandan uygun şekilde aspire ettiğinizden emin olmalısınız. Aksi takdirde, partiküller yoğun bir şekilde paketlenmeyecektir.

Partiküllerin çözelti içinde homojen bir süspansiyon oluşturmasını sağlamak için, tüm pipetleme adımlarının arasında stok süspansiyonu çalkalayarak önceki işlemi iki kez daha tekrarlayın. Tüm süspansiyon yüklendikten ve bir şırınga ile aspire edilerek kurutulduktan sonra, şırıngayı konumunda tutun ve diğer elinizle pens kullanarak ikinci naylon membranı üste yerleştirin. Ardından, ikinci konnektörü bir tüp ile sıkıştırın ve şırıngayı atın.

Bu noktada, alt kilit konnektörlerini kullanarak SPE cihazındaki kolonu sıkın. Örnek içeren şişeyi, beraberinde verilen GL 45 güvenlik kapağını vidalayarak cihaza bağlayın. Elüent rezervuarına 200 µL elüent yükleyin.

Ardından, seyreltme rezervuarına 800 µL deiyonize su doldurun. Basınç regülatörünü, daha fazla hareket mümkün olmayana kadar saat yönünün tersine çevirerek kapalı konumda olduğunu doğrulayın. Prototipi açtıktan sonra, pset için 580 ve delta pset için 30 değerlerini girin.

Basınç regülatörünü ayarlamak için pompayı çalıştırın. Ardından, preg için okunan değer 320 millibar'ın altında ancak bu değere yakın olana kadar basınç regülatörünü manuel olarak çevirin. Pompayı durdurduktan sonra, otomatik mod köşesindeki başlat düğmesine basarak SPE prosedürünü başlatın.

SPE prosedürü tamamlandığında, numunenin bulunduğu küçük şişeyi kapatın ve ELISA analizine kadar dört ila beş derece Celsius'ta, karanlıkta saklayın. Sistemi temizlemek için, GL 45 dişli cam bir şişede hacimce yüzde 70 metanol içeren 10 mililitrelik bir çözelti hazırlayın. SPE kolonunu sökün ve tüpleri konnektörlerle kapatın.

Otomatik modda, Temizleme dosyasını seçin ve pset, delta pset ve preg için önceden kullanılan basınç ayarlarının aynısıyla başlatın. Sorbent paketleme tekrarlanabilirliği, pipetle alınan sorbentin cam şişelerde kurutulması ve tartılmasıyla değerlendirilmiştir. Enjeksiyon süresi tekrarlanabilirliği, 100 mililitrelik örnekler için test edilmiştir.

Başlangıç ve ön konsantre edilmiş katkılı numunelerin konsantrasyonları, ticari bir 17 beta-estradiol ELISA kiti kullanılarak belirlenmiştir. Kalibrasyon eğrilerinden, zenginleştirilmiş numunedeki metanol oranının immunassay hassasiyetini etkilemediği açıkça görülmektedir. Deiyonize su ve yapay deniz suyu için sırasıyla %128 ± 22 ve %107 ± 6 geri kazanım oranları hesaplanmıştır.

Doğru şekilde gerçekleştirildiğinde, SPE kolonunun hazırlanması, yöntem kavrandıktan sonra beş dakikadan kısa sürede tamamlanabilir. Tüm SPE prosedürü bir saatten kısa sürede bitirilebilir. Bu teknik geliştirildikten sonra, çevre bilimleri alanındaki araştırmacıların küçük organik kirleticilerin izlenmesine yönelik immünodeteksiyon yöntemlerinin geliştirilmesini araştırmalarının önünü açmıştır.

Bu videoyu izledikten sonra, immünoyasalara dayalı kirletici analizi için kullandığımız maliyet etkin, otomatik cihazımızla su örneklerinin nasıl hazırlanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Organik kirleticiler ve çözücülerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu işlem gerçekleştirilirken uygun eldivenler ile koruyucu gözlüklerin takılması gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.