Name: Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Keşfedin su örneklerinden küçük organik kirleticilerin otomatik katı faz ekstraksiyonu ile ön konsantrasyon yöntemini. Bu kullanıcı dostu ve düşük maliyetli teknik, immünoassay analizleri için geleneksel SPE süreçlerine verimli bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Avrupa Birliği Yedinci Çerçeve Programı FP7/2007-2013 tarafından 265721 no'lu hibe sözleşmesi kapsamında finanse edilmiştir. Yazarlar, bu projedeki destekleri için RIKILT Gıda Güvenliği Enstitüsü'ne (NL) teşekkür eder.

Not: Aşağıdaki protokol SPE% 50 h / h metanol ile C18 sorbent ve elüsyon ile 100 ml su numunesi üzerinde gerçekleştirilmiştir açıklanmaktadır. Zenginleştirilmiş örneği (ELISA) kiti linked immunosorbent bir enzim ile analizden önce,% 10 hac / hac metanol ulaşmak için seyreltilmiştir. 1. Reaktifleri hazırlanması <ol><li> Su örnekleri hazırlayın <ol><li> Önceki herhangi bir başka aşamasına, 0.2 um gözenek boyutlu filtreler ile, her 100 ml su örneği filtre. </li><li> Bir su hacmi içine bir referans çözeltisi uygun hacimde seyreltilerek istenen konsantrasyona sahip örnek başak. Örneğin, 300 mg / L&#39;lik bir konsantrasyonda E2 referans çözeltisinin 3,3 ul seyreltilmesiyle E2 100 ng / L su numunesi 100 ml hazırlanır. Bir örnek 10 ng / L E2 ile çivili almak için bu çözüme on kez sulandırmak. 1 ng / L E2 ile 100 ml &#39;lik bir numune elde etmek için bu ikinci bir on kat seyreltilir. </li><li> G, bir cam şişe içinde (modifiye edilmemiş veya kirpi), süzüldü örnek yerleştirinL45 konu. Aynı gün numune kullanılır. Küçük bir bölümünü alın başlangıçtaki konsantrasyon tahmin etmek ELISA ile analiz edilecek. </li></ol></li><li> Sıkı bir tüp içinde 50% v / v deiyonize (di) su içinde metanol ile elüsyon seyreltilerek 300 ul hazırlayın. </li></ol> SPE Column 2. Hazırlık <ol><li> İlk metanol 1600 ul ve ardından ters fazlı sorbent 40 mg di-su 400 ul ekleyerek oktadesil- silis sorbent partikülleri bir 20 mg / ml süspansiyon hazırlayın. Sıkıca kapağını kapatın ve bir girdap ile çalkalayın. </li><li> Sütununda taban zarı takılması <ol><li> Gözenek büyüklüğü 11 mikron ile tek Naylon membran seçin ve anti-toz dokusunun çift kat üzerine yerleştirin. 3 mm çaplı zımba ile, zarın iki küçük parça kesin. </li><li> Düz uç filtre forseps küçük membran tut ve kolonun bir tarafına yerleştirin. </li><li> Tüp düz taban konnektörü Vida ve sıkın. Membran nakış ve yerinde güvenli bir şekilde sorbent eklenebilir. Membran yerleştirildi nerede sonlarına doğru sütun işaret gövdesi üzerinde bir ok çizin. </li></ol></li><li> Paketlenmiş sorbent sütun hazırlanması <ol><li> Dibe doğru okun tutucuya sütun sabitleyin. Sütun dikey olarak mümkün olduğu ayarlanmalıdır. </li><li> Luer-Lock bağlayıcıları kullanarak sütun borusunun ucuna boş 10 ml tek kullanımlık şırınga takın. </li><li> Bir 20-200 ul ucu ile bir mikro-pipet hazırlayın 100 ul seviyesini ayarlamak. Bu pipet ucu biçimi hazırlanacak emici sütunun büyüklüğüne uyarlanır. Prosedür böyle 1 ml pipetler ile kullanılan olanlar gibi büyük pipet uçları ile daha zor olacaktır. </li><li> Bir girdap ile sorbent süspansiyon ajite ve hızla sütun üzerinde merkezde 100 ul pipetlemeyin. Enjekte ederken, aspire nazikçe tüm Pipetlenen çözüm Öte yandan şırıngayı kullanarak zarı yalak. Bu st atyaş, şırınga doldurma çözeltisi parçacıkların açık olmalıdır ve parçacık yatağı sonunda sütununda görülmektedir. </li><li> Çözeltide parçacıkların homojen süspansiyon sağlamak için bütün pipetleme adımları arasındaki stok süspansiyon çalkalayarak bu işlemi 2 kez daha tekrarlayın. Ortaya çıkan kolon sorbent 6 mg içerir. </li><li> Süspansiyon 300 ul yüklendi ve şırınga ile aspire kurutuldu edildiğinde, pozisyonda şırınga tutmak ve diğer elle forseps kullanılarak üstüne ikinci naylon membran yerleştirin. </li><li> Tüp ile ikinci konektörü aşağı Vida ve şırınga atmayın. SPE sütunu kullanıma hazırdır. </li></ol></li></ol> 3. Hazırlama Sistemi <ol><li> Luer-Lock konnektörleri kullanarak cihaz üzerinde SPE sütunu sıkın. Ok cihaz üzerinde gösterilen biri olarak aynı yöne işaret olmalıdır. </li><li> Vidalama cihaza örneğini içeren şişeyi bağlayınBunun üzerine GL45 emniyet kapağını sağladı. </li><li> &#39;Yıkama sıvısı&#39; rezervuar içinde eluent 200 ul yükleyin. </li><li> Yük &#39;Sulandırma&#39; rezervuar di-su 800 ul. </li><li> Ekstraksiyon aşamasında işlenmiş suyu toplamak için atık çıkışında bir şişe yerleştirin. Biçimi önemli değildir, ancak birim numune hacmi ile ilgili olarak yeterince büyük olması gerekir. </li><li> 1,5 ml minimum hacim kapasiteli algılayıcı çıkışın küçük bir şişe yerleştirin. Zenginleştirilmiş yıkama sıvısı ve seyreltme tamponu toplarken baloncuklar bu çıkışında oluşturacak şekilde 1 ml maksimum hacmi çok küçük olacaktır. </li><li> Basınç regülatörü elle döndürerek kapalı konumda olduğunu kontrol edin, ters saat yönünde daha fazla hareket etmesi mümkün değildir kadar. </li></ol> Prototip 4. SPE <ol><li> Arkasındaki düğmeye basarak prototip açın. </li><li> Kullanıcı arayüzü hazırlama ve programı seçerek <ol><li> Kullanıcı arabirimini açın. SeçinBilgisayarın iletişim portu hangi cihaz listeden bağlı ve düğme &#39;İleri&#39; tıklayın olduğu. </li><li> Değerleri pset 580 ve dpset 30 girin. Pompa çalışırken 580 ± 30 mbar&#39;da basınçlı sistem ve rezervuarlarda basıncı korumak için ayarlayacaktır. </li><li> Otomatik modu seçin. </li><li> Otomatik mod köşesinde, kutu &#39;yapılandırma dosyası yolu&#39; program dosyası yüklenemedi. </li></ol></li><li> Basınç regülatörü ayarlanması <ol><li> Pompayı başlatın. </li><li> Süleyman Demirel için okunan değer aşağı ama 320 mbar yakın kadar elle basınç regülatörü çevirin. </li><li> Pompayı durdurun. </li></ol></li><li> SPE işlemi başlatılıyor <ol><li> Otomatik mod köşesinde Basın &#39;başlangıç&#39;. Pompa açılacaktır ve çıkarma, ayrıştırma ve seyreltme adımlar otomatik olarak birbirini takip edecektir. 100 ml&#39;lik bir örnek için bütün işlem 50 dakika içinde gerçekleştirilir. </li><li>Süleyman Demirel değerini doğrulayın. Uygun bir akış oranını sağlanması için ekstraksiyon aşaması esnasında 350 mbar - Bu aralık 320 olmalıdır. </li><li> Analize kadar karanlıkta 4-5 ° C&#39;de küçük şişe ve mağaza kapatın. Analitin bozulmasını önlemek için aşağıdaki 30 saat içinde analiz gerçekleştirin. </li><li> İşlenmiş su imha ediniz. </li></ol></li><li> Sisteminin temizlenmesi Not: Sistem gereken her ekstraksiyon işlemi çapraz bulaşmayı önlemek için temizlenmesi sonra. <ol><li> GL 45 bir cam şişeye, metanol 70% v / v, 10 ml çözelti hazırlayın. </li><li> SPE sütunu çekin ve konnektörleri ile tüp takın. </li><li> Otomatik modda, &#39;temizlik&#39; dosyasını seçin ve aynı basınç ayarları ile başlatın. </li></ol></li></ol> ELISA ile Estradiol Konsantrasyon 5. Algılama <ol><li> Kullanılan ELISA kit ile birlikte verilen protokol içerisinde belirtilen konsantrasyonlarda kalibrasyon numuneleri hazırlayın. Tek Calibra hazırlayınmetanol,% 10 v / v ayarlanır, aynı örnek olarak matris ve bir kalibrasyon ile ayarlanır tion. </li><li> Üreticinin talimatlarına uygun olarak, levha üzerindeki kuyu numunenin gerekli miktarda koyun. Kalibrasyon numuneleri, filtre edildi, ancak metanol 10% v örnekleri SPE ile işlenir ve zenginleştirilmiş değil, değişikliğe uğratılmamış ve kirpi su numuneleri kullanarak / h. Tahlil ile ilişkili hatayı azaltmak için numune başına 3 kuyu kullanın. </li><li> Enzim ile reaktiflerin eklenmesi için kit, inkübasyon süresi, yıkama ve başka reaksiyon ile sağlanan protokol endikasyonları izleyin. </li><li> Bir plaka okuyucusu aletle kit üreticisinin talimatlarına göre her kuyuda optik sinyalin okuma ve verileri toplar. </li><li> Metanol,% 10 v zenginleştirilmiş örnekleri kalibrasyon eğrileri uygun aynı matrisin ile ilk numunedeki E2 konsantrasyonunu belirlemek, ve plaka okuyucusu aletin yazılımını kullanarak / h. </li></ol>

<ol><li>Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+methods+of+identification%2C+analysis+and+removal+of+endocrine+disrupting+compounds+%28EDCs%29+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hazard.+Matter%22%5BJournal%5D)">The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water.</a> J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).</li>
<li>Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+solid-phase+extraction+and+gas+chromatography-mass+spectrometry+determination+of+pharmaceuticals+and+hormones+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Continuous solid-phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry determination of pharmaceuticals and hormones in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 2956-2963 (2010).</li>
<li>Tomsikova, H., Aufartova, J., Solich, P., Novakova, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+sensitivity+analysis+of+female-steroid+hormones+in+environ-mental+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">High sensitivity analysis of female-steroid hormones in environ-mental samples.</a> Trends Anal. Chem. 34, 35-58 (2012).</li>
<li>Ciofi, L., Fibbi, D., Chiuminatto, U., Coppini, E., Checchini, L., Del Bubba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+on-line+solid+phase+extraction+coupled+to+high-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometric+analysis+at+sub-ng%2FL+levels+of+selected+estrogens+in+surface+water+and+wastewater%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Fully automated on-line solid phase extraction coupled to high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis at sub-ng/L levels of selected estrogens in surface water and wastewater.</a> J. Chromatogr. A. 1283, 53-61 (2013).</li>
<li>Robles-Molina, J., Lara-Ortega, F. J., Gilbert-Lopez, B., Garcia-Reyes, J. F., Molina-Diaz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-residue+method+for+the+determination+of+over+400+priority+and+emerging+pollutants+in+water+and+wastewater+by+solid-phase+extraction+and+liquid+chromatography-time-of-flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Multi-residue method for the determination of over 400 priority and emerging pollutants in water and wastewater by solid-phase extraction and liquid chromatography-time-of-flight mass spectrometry.</a> J. Chromatogr. A. 1350, 30-43 (2014).</li>
<li>Huang, C. H., Sedlak, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+estrogenic+hormones+in+municipal+waste+water+effluent+and+surface+water+using+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+gas+chromatography%2Ftandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of estrogenic hormones in municipal waste water effluent and surface water using enzyme-linked immunosorbent assay and gas chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Environ. Toxicol. Chem. 20, 133-139 (2001).</li>
<li>Hintemann, T., Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+study+using+two+immunoassays+for+the+determination+of+estradiol+and+ethinylestradiol+in+the+aquatic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Field study using two immunoassays for the determination of estradiol and ethinylestradiol in the aquatic environment.</a> Water Res. 40, 2287-2294 (2006).</li>
<li>Farré, M., Kuster, M., Brix, R., Rubio, F., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+an+estradiol+enzyme-linked+immunosorbent+assay+kit%2C+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%2C+and+ultra-performance+liquid+chromatography-quadrupole+time+of+flight+mass+spectrometry+for+part-per-trillion+analysis+of+estrogens+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative study of an estradiol enzyme-linked immunosorbent assay kit, liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry for part-per-trillion analysis of estrogens in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1160, 166-175 (2007).</li>
<li>Pu, C., Wu, Y. F., Yang, H., Deng, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+analysis+of+contraceptive+drug+levonorgestrel+in+waste+water+samples+by+a+newly+developed+indirect+competitive+enzyme-linked+immunosorbent+assay+%28ELISA%29+coupled+with+solid+phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Trace analysis of contraceptive drug levonorgestrel in waste water samples by a newly developed indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) coupled with solid phase extraction.</a> Anal. Chim. Acta. 628, 73-79 (2008).</li>
<li>Van Emon, J. M., Gerlach, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+status+report+on+field-portable+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">A status report on field-portable immunoassay.</a> Environ. Sci. Technol. 29 (7), 312A-317A (1995).</li>
<li>Farré, M., Brix, R., Barcelò, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+water+for+pollutants+using+biological+techniques+under+European+Union+funding+during+the+last+10+years%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Screening water for pollutants using biological techniques under European Union funding during the last 10 years.</a> Trends Anal. Chem. 24 (6), 532-545 (2005).</li>
<li>Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+ethinylestradiol+using+a+long-chain+biotinylated+EE2+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22Steroids%22%5BJournal%5D)">A novel enzyme-linked immunosorbent assay for ethinylestradiol using a long-chain biotinylated EE2 derivative.</a> Steroids. 69, 245-253 (2004).</li>
<li>Heub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+and+portable+solid+phase+extraction+platform+for+immuno-detection+of+17%CE%B2-estradiol+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chrom.+A%22%5BJournal%5D)">Automated and portable solid phase extraction platform for immuno-detection of 17β-estradiol in water.</a> J. Chrom. A. 1381, 22-28 (2015).</li>
<li>Petrovic, M., Eljarrat, E., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+disrupting+compounds+and+other+merging+contaminants+in+the+environment%3A+a+new+survey+on+new+monitoring+strategies+and+occurrence+data%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Endocrine disrupting compounds and other merging contaminants in the environment: a new survey on new monitoring strategies and occurrence data.</a> Anal. Bioanal. Chem. 378, 549-562 (2004).</li>
<li>Richardson, S. D., Ternes, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+analysis%3A+Emerging+contaminants+and+current+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Water analysis: Emerging contaminants and current issues.</a> Anal. Chem. 86, 2813-2848 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Immünolojik test kullanılarak analiz ve ardından su örneklerinin hazırlanması için yeni bir yöntem önerilmiştir. Enstrüman otomatik ve kullanıcı dostu bir şekilde katı faz ekstraksiyon gerçekleştirmenizi sağlar. Sistem üflenmeden önce su numunesi filtrasyon kritiktir. Çözelti içinde hala mevcut herhangi bir parçacık potansiyel olarak akışkan ağ tıkar ve SPE sütunu engelleyebilir. Diğer önemli bir adım SPE kolonundan hazırlanmasıdır. Sütununda parçacıkların miktarı mümkün olan en iyi performa...

Numune hazırlama herhangi bir analitik sürecinde önemli bir adımdır. Özel olarak, matriks etkileri, etkileşimleri azalmasını ve analit zenginleştirilmesi kaldırılması kesin sonuçlar elde edilir ve algılama düşük sınırları ulaşmak için gereklidir. Endokrin bozucu bileşikler (EDCs) nedeniyle canlı organizmalar üzerindeki etkisine özellikle kaygı olduğunda bile çevrede bulunan çok düşük seviyeleri. Doğal hormon 17β-östradiol Avrupa Su Çerçeve Direktifi kapsamında düzenlenen öncelikli maddeler listesine eklenecek AB su kirliliği İzleme Listesi mevcut ve eğilimli. Katı faz ekstraksiyonu (SPE), genel olarak, her iki kimyasal 1-5 (kromatografısi, kütle spektrometrisi) ile immünolojik 6-9 tespit yöntemleri ile, su içinde, küçük kirletici analizi için tatbik edilir. İkincisi immünoanalizler, formatlarda çok çeşitli mevcuttur ta özgü olarak, çevresel izleme alanındaki ilgisini kazanmıştıranalit rYer ve algılama düşük sınırlara ulaşır. 6, 7, 10, 11 Çeşitli enzim bağlı immünosorbent deneyleri (ELISA) ticari olarak temin edilebilir ve çok oyuklu bir plaka üzerinde aynı anda birden fazla numune analiz için olanak sağlar. İşlem birkaç saat sürebilir ardışık reaksiyon adımlarla oluşur. Reaksiyonun Nihai ürün kalibrasyon eğrisine göre hedef molekülün konsantrasyonunu belirlemek için, optik olarak tespit edilebilir. Klasik SPE prosedürler eluent buharlaştırma ile sorbent ön kurutma, örnek ekstraksiyon, yıkama, elüsyon ve konsantrasyonu içerir. Bu ekstrenin seyreltme için kullanılan çözücü, algılama yöntemine bağlı olarak seçilir. Immünolojik yöntemler için, güçlü organik çözücü etkilere yöntemin duyarlılığı miktarı. 12 Kurtarma ve ön konsantrasyonu performansları ek olarak, yöntem, aynı zamanda, basit olabilir ve maliyet etkin gerekmektedir. Prosedüründe otomasyonue insan ile ilgili hataları azaltmaya yardımcı olur. Daha önceki çalışmalarında 13 biz otomatik SPE için prototip tanıttı ve bizim yöntem deniz suyu örneklerinde doğal hormon 17β-östradiol analizi uygulanmıştır. Mevcut videoda biz SPE ve bağışıklık reaksiyonları ile algılama ile kendi özel uyumluluk geleneksel off-line ve on-line karşılaştırıldığında bizim yöntemin teknik avantajları vurgulamak istiyorum. Bu 17β-estradiyol tespiti için su numuneye uygulanan protokol açıklar. SPE oktadesil-silis (C18) sorbent faz ve elüsyon seyreltilmiş metanol ile yerine getirilmiştir gerçekleştirilir.

<table><tbody><tr><td>Filtre membranı 0.2 &mu; m gözenek boyutu</td><td>Merck Millipore</td><td>GNWP04700</td><td>Numune filtrasyonu için</td></tr><tr><td>Naylon membran 11 & mu; m gözenek boyutu</td><td>Merck Millipore</td><td>NY1104700</td><td>SPE sütunu için</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık biyopsi yumruğu 5 mm</td><td>Tıbbi Bütçe</td><td>39302439</td><td></td></tr><tr><td>Nucleodur C18 ec&nbsp;</td><td>Macherey Nagel</td><td>713550.01</td><td>50 &mu; m parçacık çapı</td></tr><tr><td>Sentetik deniz suyu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SSWS500-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17beta-estradiol standardı</td><td>Enzo Life Science</td><td></td><td>300 ng/ml</td></tr><tr><td>17beta-estradiol ELISA kiti</td><td>Enzo Life Science</td><td>ADI-900-008</td><td>96 kuyu, aralık 30 - 3.000 ng/L</td></tr></tbody></table>

küçük kirleticilerin İmmünolojik analizi su Örneklerinin otomatik katı faz ekstraksiyon basit bir yöntem

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

Çevre su numunelerinin katı faz ekstraksiyonu (SPE) için yeni bir yöntem önerilmiştir. Geliştirilen prototip maliyet-etkin ve kullanıcı dostu ve hızlı otomatik ve basit SPE gerçekleştirmenizi sağlar. Önceden konsantre edilmiş çözelti, düşük bir organik çözücü içeriğine sahip immunodeney ile analiz ile uyumludur. Bir yöntem olup 100 mL su örneklerinde doğal hormon 17β-estradiol ekstraksiyonu ve konsantrasyonu için önceden tarif edilmiştir. Ters faz SPE oktadesil- silis sorbent ile gerçekleştirilir ve elüsyon metanol 50% v / v, 200 ul ile yapılır. Elüent metanol miktarı azaltmak için, di-su eklenerek seyreltilmiştir. El SPE sütunu hazırladıktan sonra, genel işlem 1 saat içinde otomatik olarak gerçekleştirilir. İşlemin sonunda, östradiol konsantrasyonu, ticari bir enzim-bağlantılı bağışıklık-sorbent deneyi (ELISA) kullanılarak ölçülmüştür. 100-kat ön konsantrasyonu elde edilir ve yalnızca 10% v / v metanol içeriği. Molekülün tam geri kazanım1 ng ile elde edilir / L-de iyonize ve sentetik deniz suyu örnekleri çivili.

Sorbent ambalaj tekrarlanabilirliği kurutma ile değerlendirildi ve cam viyaller içinde pipetlendi sorbentin ağırlık ve ilk ve pre Şekil 2. Konsantrasyon gösterildiği gibi sonuç, 100 mi örnekler için test edildi enjeksiyonu sırasında Şekil 1. Tekrarlanabilirliği de gösterilmiştir edildi Konsantre örnekleri 17β-estradiol için ticari bir ELISA kiti kullanılarak tespit edilmiş ve Şekil 3&#39;te gösterilmektedir çivili. <p class="jove_con...

Otomatik ve minyatür bir sistem kullanılarak su örneklerinden östradiolün ekstraksiyonu ve ön konsantrasyonu için bir protokol sunulmuştur.

Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Bu numune hazırlama yönteminin genel amacı, su numunelerindeki küçük, organik kirleticileri kullanıcı dostu, maliyet etkin ve otomatik bir şekilde ön konsantre etmektir. Bu yöntem, kuyucuk plakası immünassayleri veya biyosensörler gibi immünodetection yöntemleri kullanılarak su numunelerinin kontaminasyonu incelendiğinde, standart SPE süreçlerinin yerini alabilir. Bu tekniğin temel avantajı, geleneksel yaklaşımlara kıyasla cihazların kapladığı alanın ve maliyetinin düşük olmasıyla birlikte SPE prosedürünün otomatikleştirilmiş olmasıdır.Ek olarak, zenginleştirme işleminin performansları, hem düşük çözücü içeriği hem de ön konsantrasyon verimliliği açısından immünolojik analizlerin gereksinimlerini karşılamaktadır. Öncelikle, 100 mililitre su örneüğünü 0,2 mikrometre gözenek boyutuna sahip bir filtreden geçirin. Filtrelenmiş örneği GL 45 dişli bir cam şişeye yerleştirin.Sıkı kapaklı bir tüp içerisinde, metanolü deiyonize su ile hacimce yüzde 50 olacak şekilde seyrelterek 300 µL elüent hazırlayın. Ardından, cam bir flakon içerisindeki 40 mg ters faz sorbentine 1.600 µL metanol ve ardından 400 µL deiyonize su ekleyerek 20 mg/mL konsantrasyonunda oktadesil silika sorbent partikül süspansiyonu hazırlayın. Kapağı sıkıca kapatın ve vorteks karıştırıcı ile ajite edin.Gözenek boyutu 11 µm olan bir naylon membranı çift katmanlı toz önleyici kağıt üzerine yerleştirin. Bir üç milimetrelik delgeç yardımıyla membrandan iki küçük parça kesin. Ardından, küçük membranlardan birini düz uçlu filtre pensiyle tutun ve kolonun bir tarafına yerleştirin.Bunu takiben, düz taban konnektörü tüple birlikte vidalayın ve sıkıştırın. Ardından, kolon gövdesine, membranın yerleştirildiği uca doğru yönelmiş bir ok çizin. Bu noktada, oku aşağıya bakacak şekilde kolonu tutucuya sabitleyin.Alt kilit konektörlerini kullanarak kolon tüpünün ucuna boş 10 mililitrelik tek kullanımlık bir şırınga takın. Sorbent süspansiyonunu vorteks karıştırıcı ile çalkalayın ve 100 mikrolitre hacmindeki solüsyonu hızla kolonun merkezine pipetleyin. Enjeksiyon yaparken, diğer elinizdeki şırıngayı kullanarak pipetlenen solüsyonu membran üzerinden nazikçe aspire edin.SPE kolon hazırlığı oldukça önemlidir. Partikül süspansiyonunu kolona enjekte ederken, şırıngayı kullanarak çözeltiyi membrandan uygun şekilde aspire ettiğinizden emin olmalısınız. Aksi takdirde, partiküller yoğun bir şekilde paketlenmeyecektir.Partiküllerin çözelti içinde homojen bir süspansiyon oluşturmasını sağlamak için, tüm pipetleme adımlarının arasında stok süspansiyonu çalkalayarak önceki işlemi iki kez daha tekrarlayın. Tüm süspansiyon yüklendikten ve bir şırınga ile aspire edilerek kurutulduktan sonra, şırıngayı konumunda tutun ve diğer elinizle pens kullanarak ikinci naylon membranı üste yerleştirin. Ardından, ikinci konnektörü bir tüp ile sıkıştırın ve şırıngayı atın.Bu noktada, alt kilit konnektörlerini kullanarak SPE cihazındaki kolonu sıkın. Örnek içeren şişeyi, beraberinde verilen GL 45 güvenlik kapağını vidalayarak cihaza bağlayın. Elüent rezervuarına 200 µL elüent yükleyin.Ardından, seyreltme rezervuarına 800 µL deiyonize su doldurun. Basınç regülatörünü, daha fazla hareket mümkün olmayana kadar saat yönünün tersine çevirerek kapalı konumda olduğunu doğrulayın. Prototipi açtıktan sonra, pset için 580 ve delta pset için 30 değerlerini girin.Basınç regülatörünü ayarlamak için pompayı çalıştırın. Ardından, preg için okunan değer 320 millibar'ın altında ancak bu değere yakın olana kadar basınç regülatörünü manuel olarak çevirin. Pompayı durdurduktan sonra, otomatik mod köşesindeki başlat düğmesine basarak SPE prosedürünü başlatın.SPE prosedürü tamamlandığında, numunenin bulunduğu küçük şişeyi kapatın ve ELISA analizine kadar dört ila beş derece Celsius'ta, karanlıkta saklayın. Sistemi temizlemek için, GL 45 dişli cam bir şişede hacimce yüzde 70 metanol içeren 10 mililitrelik bir çözelti hazırlayın. SPE kolonunu sökün ve tüpleri konnektörlerle kapatın.Otomatik modda, Temizleme dosyasını seçin ve pset, delta pset ve preg için önceden kullanılan basınç ayarlarının aynısıyla başlatın. Sorbent paketleme tekrarlanabilirliği, pipetle alınan sorbentin cam şişelerde kurutulması ve tartılmasıyla değerlendirilmiştir. Enjeksiyon süresi tekrarlanabilirliği, 100 mililitrelik örnekler için test edilmiştir.Başlangıç ve ön konsantre edilmiş katkılı numunelerin konsantrasyonları, ticari bir 17 beta-estradiol ELISA kiti kullanılarak belirlenmiştir. Kalibrasyon eğrilerinden, zenginleştirilmiş numunedeki metanol oranının immunassay hassasiyetini etkilemediği açıkça görülmektedir. Deiyonize su ve yapay deniz suyu için sırasıyla %128 ± 22 ve %107 ± 6 geri kazanım oranları hesaplanmıştır.Doğru şekilde gerçekleştirildiğinde, SPE kolonunun hazırlanması, yöntem kavrandıktan sonra beş dakikadan kısa sürede tamamlanabilir. Tüm SPE prosedürü bir saatten kısa sürede bitirilebilir. Bu teknik geliştirildikten sonra, çevre bilimleri alanındaki araştırmacıların küçük organik kirleticilerin izlenmesine yönelik immünodeteksiyon yöntemlerinin geliştirilmesini araştırmalarının önünü açmıştır.Bu videoyu izledikten sonra, immünoyasalara dayalı kirletici analizi için kullandığımız maliyet etkin, otomatik cihazımızla su örneklerinin nasıl hazırlanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Organik kirleticiler ve çözücülerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu işlem gerçekleştirilirken uygun eldivenler ile koruyucu gözlüklerin takılması gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

a-simple-method-for-automated-solid-phase-extraction-water-samples

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu protokol, su bazlı tespiti için alternatif adımlar olarak teğet akış boş elyaf ultrafiltrasyon numune konsantrasyonu sisteminin kullanımı ve ısı ayrışma...

Su bazlı Algılamak için Teğet Akış Hollow-fiber Ultrafiltrasyon ve Isı Disosiyasyon Adımlar kullanır A Modifiye EPA Method 1623<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; Ve<em&gt; Giardia spp.</em

Bu videoda, önceden hasat edilmiş bir donör böbrekten metabolitlerin SPME probu tabanlı ekstraksiyonunu gösteriyoruz. Ekstrakte edilen metabolitler, transplantasyon için organ kalitesini değerlendirmek amacıyla metabolomik ve lipidomik analiz yapmak için kullanılabilir.

Katı Faz Mikroekstraksiyon Örneklemesi: Greft Dokularından Örnek Ekstraksiyonu için Prob Tabanlı Bir Teknik

Bu el yazması, yeni nesil dizileme için DNA parçalarını saflaştırmak için otomatik bir jel boyutu seçim yaklaşımını açıklamaktadır. Ranger Teknolojisi, agaroz jel yükleme, elektroforetik analiz ve hedeflenen DNA parçalarının geri kazanılması sürecinin tamamının tam otomasyonunu sağlayarak yüksek verimli ve yüksek kaliteli yeni nesil dizileme kitaplıklarına olanak tanır.

Otomatik Jel Boyut Seçimi Çevre Su Örneklerinden hazırlanmıştır nesil Sıralama Kütüphaneler Kalitesi Geliştirmek için

Eser metal analizi için dipol destekli katı faz ekstraksiyon mikroçipinin üretim protokolü sunulmuştur.

Su Örneklerinde Eser Metal Analizi için Dipol destekli Katı Faz Ekstraksiyon Microchip Fabrikasyon

Beş farklı pasif örnekleme cihazının karakterizasyonu ve uygulaması hakkında bir protokol sunulmuştur.

Suda Pestisitlerin İzleme Karakterizasyonu ve Pasif Numune Uygulama

Sucul ortamlarda eser metal çalışmaları için su örneklerinin uygun şekilde toplanması ve işlenmesi için "temiz tekniklerin" kullanılmasına özel dikkat gösterilmesi gerekmektedir. Ayrıntılı eser metal çalışmaları için güvenilir çevresel izleme verileri ve yüksek hassasiyete sahip sonuçlar elde etmek amacıyla numune alma, işleme ve analitik prosedürler için bir protokol sunulmaktadır.

Temiz Örnekleme ve Eser Metal Çalışmaları Nehri ve haliç Waters Analizi

Suyun temiz ve doğru noktadan örneklenmesi için basit, müdahaleci olmayan ve güvenilir bir yöntem olan VacuSIP'i tanıtıyoruz. Sistem, partikül ve çözünmüş bileşiklerin uzaklaştırılmasını ve atılımını temiz bir şekilde ölçmek için bentik süspansiyon besleyiciler tarafından solunan ve solunan suyun yerinde eşzamanlı olarak toplanması için geliştirilmiş ve değerlendirilmiştir.

VacuSIP, bir Geliştirilmiş INEX Yöntemi için<em&gt; In Situ</em&gt; Partikül Ölçümü ve Çözünmüş bileşikler Aktif Süspansiyon besleme üniteleri İşlenmiş

Bir örnek kullanarak biyolojik dokulardan lipidlerin, metabolitlerin ve proteinlerin kapsamlı şekilde ekstraksiyonu için bir protokol sunulmuştur.

Tek Bir Numuneden Metabolitlerin, Lipidlerin ve Proteinlerin Kapsamlı Analizi için Basit Fraksiyonlu Ekstraksiyon Metodu

Burada, kütle spektrometresi tarafından bir protokol sıralı hedeflenen miktar ve sigara hedefli çözümleme fluor bileşikleri su mevcut. Bu metodoloji bilinen fluorochemical bileşikler nicel düzeyleri sağlar ve onların bereket yarı kantitatif tahminler ile ilgili örnekleri bilinmeyen kimyasallar tanımlar.

Ücret belirlenmesi- ve Polyfluorinated kimyasal türler ile kombine hedef ve hedef tarama olmayan yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi iş akışı

Bu protokol, su ve lipit açısından zengin balık dokularından geosmin ve 2-metilizoborneolün ekstraksiyonu için tam otomatik bir iş akışı sunar. Yöntem, bu moleküllerin koku eşiklerine ulaşmadan önce erken tespit edilmesini sağlar. Bir su ürünleri yetiştiriciliği ortamından temsili veriler sağlanır.

Yüksek Kapasiteli Sorptif Ekstraksiyon Probları ve GC-MS Kullanılarak Su ve Balıklarda Geosmin ve 2-Metilizoborneolün Ekstraksiyonu ve Tespiti

Keşfedin su örneklerinden küçük organik kirleticilerin otomatik katı faz ekstraksiyonu ile ön konsantrasyon yöntemini. Bu kullanıcı dostu ve düşük maliyetli teknik, immünoassay analizleri için geleneksel SPE süreçlerine verimli bir alternatif sunar.

Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet