22 Aralık 2015
Otolog ve allojenik kemik greft implantasyonu önemli kraniofasial kemik kaybını tedavi yaklaşımları kabul teşkil. Oysa neovaskülarizasyon, hücre farklılaşması ve kemik oluşumu arasındaki etkileşime greft bileşiminin etkisi belirsizdir. Biz greft yakınlık anjiyogenez-osteogenesis bağımlılığın aydınlatmak için amaçlandığı multimodal görüntüleme protokol mevcut.
Bu prosedürün genel amacı, multimodal görüntüleme yaklaşımları kullanılarak kranial kemik greftlerinin kemik rejenerasyonu ve neovaskülarizasyon açısından entegrasyonunu izlemektir. Bu yöntem, osteogenez anjiyogenez eşleşmesi gibi rejeneratif tıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, vasküler üçlünün yüksek çözünürlüklü bir 3D tayinini sağlaması ve prosedürü gösteren tüm organın çalışmasına izin vermesidir. Yedi ila sekiz haftalık Bab deniz faresini ötenazi yaptıktan sonra laboratuvarımda doktora öğrencisi olan Doron Vic olacaktır.
Metin protokolüne göre, balvarial bölgeyi saç büyüme yönüne karşı tıraş etmek için bir saç kesme makinesi kullanın. Karkas% 70 izopropanol uygulayın, dezenfekte etmek için gidin. Daha sonra kafa derisi derisini kesmek için 11 numara neşter kullanın ve bir diş matkabı ve 4,5 milimetre iç çaplı bir diş kullanarak periosteuumu çıkarın.
Dairesel bir kalvarial kemik parçasını ayırın. Kemik parçasını steril salin içeren 100 milimetrelik plastik bir kaba aktarın. Bu noktada, kavisli cımbızla kemik parçasına yapışan kan ve yumuşak dokuyu gözlemleyin.
Her seferinde bir kemik parçası tutun ve iyice temizlemek için pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. Herhangi bir beyin dokusunu, yumuşak dokuyu ve kanı çıkarmak. Greftin mükemmel bir yuvarlak şekle sahip olması için grefte bağlı kalan kemik parçacıklarını nazikçe kesmek için ince makas kullanın.
Etanolü yıkamak için her grefti bir kez% 70 etanol içeren 15 mililitrelik bir tüpe ve iki kez PBS içeren 15 mililitrelik tüplere batırın. Allogrefti dondurulduktan sonra en az bir hafta boyunca kriyo tüplerinde eksi 80 santigrat derece dondurucuda dondurun. Osteokalsin promotörün kontrolü altında lusiferaz eksprese eden alıcı transgenik farelerle çalışarak allogreftin şeffaf göründüğünden emin olun.
Yedi ila sekiz haftalık bir dişi fareyi enjekte ettikten sonra, enjekte edilebilir anestezikler kullanarak ve sedasyonu doğruladıktan sonra. Buzağı bölgesini tıraş etmek için tüylerin büyüme yönünün tersine bir saç kesme makinesi kullanın. Kürk kalıntılarını gidermek için bir tüy dökücü uygulayın ve iki dakikadan fazla olmamak üzere silmek için kuru gazlı bez kullanın.
Ardından alanı silmek için tuzlu suya batırılmış gazlı bez kullanın. Deri altına %5 klorheksidin uygulayarak kafa derisini dezenfekte edin. 200 mikrolitre salin içinde seyreltilmiş kilogram carprofen başına beş miligram enjekte edin.
Kuruluğu önlemek için göz merhemi sürün ve hayvanı her zaman termal bir ped üzerinde tutun. Ardından hayvanı çalıştırma dürbününün altına yerleştirin. Daha sonra, ince makas ve cımbız kullanarak, cımbızla kafa derisinde bir santimetre uzunluğunda oval bir kesim yapın.
Periosteumu tutun ve bir diş matkabı ve beş milimetre dış çaplı bir tr ile kesmek için ince makas kullanın, dura materin penetrasyonunu önlemek için lambdoid sütürün iki milimetre önündeki kalvarial defekti delin. Yolun dörtte üçünü kemiğe delin ve kemik parçasını ayırmak için bir spatula kullanın. Protokoldeki kritik bir adım, kusur yerinin sonlandırılmasıdır.
Labo sütürün yaralanması büyük kanamaya neden olacaktır. Bu nedenle alttaki durometrenin ve süperior sagitalin bozulmamasına özen gösterilmelidir. Bir oto greft implante etmek için.
Kemik parçasını yıkamak için 10 milimetrelik plastik bir plakada 10 mililitre steril salin kullanın. Bir allogreft implante etmek için yumuşak dokuyu çıkarmadan kan pıhtılarını çıkarın, önceden çözün ve numuneyi oda sıcaklığına normalleştirin. Sonra kemik parçasını kavisli cımbızla yıkayın.
Kemik greftini, defekt kenarlarına temas etmeyecek şekilde defektin içine yerleştirin. Daha sonra fibrin jeli kullanarak grefti konakçı kemiğe yapıştırın. Cildi dört oh Vicryl sütür ile dikin ve cerrahi kesiye povidon iyot uygulayın.
Fare kulağını işaretleyin ve kilogram anti sedan başına 0.25 miligram enjekte edin. Meato'nun anestezik etkisini tersine çevirmek için. Ameliyat sonrası bakımı metin protokolüne göre gerçekleştirin.
2000 ünite sodyum heparini tartarak ve 50 mililitrelik bir tüpe aktararak heparinize salin hazırlayın. Tüpe 20 mililitre steril salin ekleyin ve çalkalayın. 20 mililitrelik bir yem kilit şırıngasını 15 mililitre ısıtılmış heparinize salin ile doldurun ve şırıngayı 23 gauge kafa derisi damar setine bağlayın.
Şırıngayı bir şırınga pompasına takın ve pompayı dakikada bir mililitre olarak 10 mililitreye ayarlayın. Bir fareyi metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, sedasyonu bir ayak parmağı kıstırmasıyla onaylayın ve fareyi sabitleyin. Emici bir yüzey astarı ile sarılmış bir sabitleme tahtasına geri döner.
Sonra, cildi karından boyuna kadar kesin. Karın duvarını ksifoid sürecine kadar kesin. Daha sonra göğüs kafesini yan yönü boyunca kesin, kalbin tamamen açıkta kaldığından ve kalp ve akciğerlerin hasar görmediğinden emin olun.
Sternumu geri çekmek için bir hemostat kullanın. Kelebek iğneyi sol ventriküle üç milimetre sokun. Daha sonra üç saniyelik yapıştırıcı ile iğneyi kalbe ve göğüs duvarına yapıştırın Kelebek iğnenin sol ventriküle sokulması hassas bir işlemdir.
Sağ ventriküle veya sol ventriküle çok derine girmekten kaçının çünkü arka kalp duvarına nüfuz edecektir. Ardından, hemen pompayı etkinleştirin. Bir dakika sonra, vaskülatür basıncını azaltmak için inferior vena cva'yı inceleyin.
Kartı, sıvılar kafadan akacak şekilde eğin. Başarılı perfüzyon, karaciğer ve kan damarlarının temizlenmesine neden olacaktır. Şimdi 10 mililitre% 4 formaldehit perfüze.
Hava kabarcıklarının damar sistemine girmesinden kaçınmak. Kuyruğun sertleşmesiyle belirtildiği gibi perfüzyon tamamlandığında, formaldehiti temizlemek için 10 mililitre heparinize salin kullanın. Radyo opak kontrast maddesini üreticinin talimatlarına göre hazırlayın.
Bileşik seyreltici ve sertleştirici maddeyi plastik bir tüp içinde karıştırarak, hayvanı kontrast madde ile dakikada bir mililitre oranında perfüze edin. Perfüzyon tamamlandığında koroner bağırsak ve hepatik arterler sararmalıdır. Boruyu kelebek iğnesine kesin ve çözeltinin calvarial bölgeye sızmasını önlemek için karkası kağıda sarın.
Ertesi gün polimerizasyona izin vermek için hayvanı gece boyunca dört santigrat dereceye yerleştirin. Kalvarial bölgeyi incelemek için, cildi mümkün olduğunca lateral kesmek için bir neşter kullanın ve ilgilenilen kraniyal bölgeye zarar vermekten kaçının. Kemik greftini bulun ve ardından kraniyal kemiği greftten 10 milimetre uzakta kesmek için ince makas kullanın.
Bir mikro CT tarayıcı kullanarak. Görüş alanını 20,5 milimetreye, x-ışını enerjisini 55 KVP'ye, yoğunluğu 145 mikroampere, 360 derecede bin projeksiyona ve 200 milisaniye entegrasyon süresine ayarlayın. İzole edilmiş kalvarial kemik örneğini tarayın.
Mikro CT yazılımı tarafından oluşturulan 2D yeniden yapılandırılmış dilimleri gözlemleyin. İlgilendiğiniz bölgeyi düzgün bir şekilde taradığınızdan ve ardından kalvarial kusuru bulduğunuzdan emin olun. Perfüze edilmiş kaplar kolayca tanımlanabilirse, çift damıtılmış suda seyreltilmiş %6 trikloroasetik asit kullanın.
Numuneyi kireçten arındırmak için, az önce açıklanan parametrelerin aynısını kullanarak numuneyi yeniden tarayın. Yeniden yapılandırılmış 2D dilimlerde lambdoid sütürün yerini belirleyin. İki milimetre yüksekliğinde ve dikişe teğet olan sekiz milimetre çapında silindirik bir ilgilenilen hacmi veya VOI'yi tanımlayın.
Bu, defektin anatomik bölgesidir. Kemiği yumuşak dokudan ayırmak için yanında. Alt eşiği 130'a ayarlayın ve ses düzeyindeki paraziti kısmen bastırmak için kısıtlanmış bir 3D Gauss Filtresi uygulayın.
Bir 3B rekonstrüksiyon oluşturun. VOI'nin IPL yazılımı ve DT nesnesi kullanılarak doğru şekilde konumlandırıldığından emin olun. Peram işlevi bir kalınlık haritası oluşturur.
Bu fonksiyon, her bir damar çapı için damar hacmini tanımlar, görüntüleme ve mikro bilgisayarlı tomografi gerçekleştirir. Metin protokolüne göre, burada gösterildiği gibi, ameliyattan yedi gün sonra, BT taraması, damarların dışarıdan nüfuz ediyor gibi göründüğü allogreft alan farelerin aksine, imza alan farelerde tüm greft alanını besleyen önemli ölçüde daha yüksek hacimli küçük ve orta çaplı kan damarları gösterdi. Ek olarak, floresan görüntüleme, imza ile tedavi edilen hayvanlarda önemli ölçüde daha yüksek kan perfüzyonu gösterdi.
14. günde, allogreftteki vasküler ağaç greftlerin tümüne yakın hale gelir. Yine de gemi hacmi Autographt grubuna kıyasla önemli ölçüde daha düşüktü. Bu fark, ameliyattan 28 gün sonra burada görüldüğü gibi 0.08 ila 0.1 milimetre çapındaki damarlar karşılaştırıldığında en belirgindi, vaskülatür hacmi ameliyattan yedi gün sonra taban çizgisine döndü.
Otogreft grubu, hidroksiapatit yönlendirilmiş bir prob kullanılarak floresan görüntüleme ile görüldüğü gibi önemli ölçüde daha fazla kemik mineralizasyonu gösterdi. Bu grupta greft yakınlığı boyunca oluşan kemik, ameliyattan 56 gün sonra allogreft grubunda halka şekli ile işaretlendiği gibi sadece defekt sınırlarında oluşurken, imza alan hayvanlarda allogreftlere kıyasla kemik hacmi önemli ölçüde daha yüksekti ve greft kalınlığı önemli ölçüde daha fazlaydı Bir kez ustalaştıktan sonra, bu cerrahi teknik yaklaşık 25 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü takiben, örneğin osteoklast aktiviteleri ve immün yanıtın katılımı gibi ek soruları yanıtlamak için diğer problar kullanılarak floresan görüntüleme yapılabilir.
Bu videoyu izledikten sonra, altta yatan anjiyogenezde kemik rejenerasyonunun nasıl görüntüleneceğini iyi anlamış olmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu çalışma, kranial kemik grefti entegrasyonunu araştırmak için bir multimodal görüntüleme protokolü sunar, neovaskülarizasyon ve kemik yenilenmesi arasındaki ilişkiye odaklanır. Teknik, kraniyal kemik kaybı tedavilerinde osteojenik ve anjiyojenik çiftleşmeyi açıklamayı amaçlamaktadır.
This multimodal imaging approach enables quantitative assessment of osteogenesis-angiogenesis coupling, a critical factor in bone graft integration and regenerative medicine outcomes. By providing high-resolution 3D vascular and bone formation data, the method supports target validation and mechanistic de-risking in preclinical bone healing studies. It offers predictive value for evaluating graft efficacy and informing go/no-go decisions in osteoinductive therapeutic development.
The method integrates across the discovery continuum, supporting hypothesis testing in early discovery, assay standardization in screening, and mechanistic validation in preclinical stages.