Name: Akış Sütun Perde: Verimliliği ve Duyarlılık Optimizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Öğrenin, perde akış kolonlarını optimize ederek HPLC'de ayrım verimliliğini ve analiz duyarlılığını nasıl artıracağınızı. Bu yöntem çevre bilimleri ve adli tıpta iz örnek analizi için güvenilir bir çözüm sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlardan biri (DK) Avustralya Yüksek Lisans Ödülü'nün alındığını kabul ediyor.

Dikkat: (metanol, yani MSDS) kullanmadan önce tüm malzeme ve reaktifler için malzeme güvenlik veri sayfaları (MSDS) bakınız. çözücüler ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) yıkayıcı işlerken tüm uygun güvenlik uygulamalarının kullanımını sağlamak. HPLC, analitik terazi ve dedektör enstrümantasyon mühendislik kontrollerinin uygun kullanımını sağlamak ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, eldiven, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon ve kapalı parmak ayakkabı) kullanımını sağlamak. Not: Bu protokol UV-Vis detektörü ile birleştiğinde bir HPLC sistemi üzerinde bir CF sütunu nasıl kullanılacağına ilişkin talimatlar yer almaktadır. protokol okuyucu varsayarak kromatografi temel bilgi ve deneyime sahiptir yazılmıştır. HPLC Enstrüman 1. Kur Not: çözücülerin seçimi, dedektör dalga boyu, Bu bölümde yani analistlerin ihtiyaçlarını karşılamak için değiştirilebilir ve akış hızı oİlgili örnek uygundur. <ol><li> Mobil faz olarak B hattı hat A için% 100 saf su ile HPLC aleti (örneğin, Milli-Q su) ve% 100 metanol hazırlamak ve üretici şartının pompaları temizleyin. </li><li> 254 nm UV-Vis detektörü ayarlayın. </li><li> set-up öncesi bir enjeksiyon akış bölme modunu, ya da bir çift pompa akış set-up birini seçin. Bölünmüş akış modu için Adım 3&#39;e geçin çift pompası modu için, 2. Adıma geçin. </li></ol> 2. Split-akış Sistem Kurulumu <ol><li> Otomatik numune enjektör vanasından pompa hattını ayırın. </li><li> Pompa hattına T-parça takın. </li><li> T parçasının her porta 0.13 mm ID tüp 15 cm parça eklemek. </li><li> Otomatik numune vana enjektör T-parça bir tüp bağlayın. </li><li> 1.0 ml dk pompayı -1. </li><li> % 40 KF sütunun girişine, ayarlamak için akış segmentasyon oranını pompa hatları bağlamadan önce: 6<html> % 0 (merkez hattı: periferik çizgi) olarak adım 2.7 izler. </li><li> Bölünmüş akış sistemi üzerinde CF giriş oranının Tuning <ol><li> bir analitik terazi kullanılarak iki boş toplama gemilerin kitle ölçün ve bir toplama merkezi damar ve (periferik bağlantı noktasına T-parça hattı için bağlantı noktası ve bir merkezi otomatik numune hat için bir tane) periferik diğerini etiket . </li><li> 1.0 dakika boyunca, olan kütle 2.7.1 ölçülmüştür toplama kabı içine (kolon bağlanacak noktasında) enjektör gelen hat çıkan mobil faz toplanır. </li><li> Analitik ölçekte toplama kabı yeniden tartın ve toplanan mobil faz kütlesini belirler. </li><li> Tekrarlayın periferik bağlantı noktasına bağlı olan T-parçasından hattı çıkan eluent için 2.7.3 için 2.7.2 adımları. </li><li> Akış oranını belirlemek (mi dak-1), aşağıdaki denklemlere göre akış her bir çizginin: 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 53471 / 53471eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li> % 40 akış oranını ayarlayın:% 60 (±% 2) (merkez noktasına enjektörden hattı: periferal noktasına T-parça çizgi). Merkezi bağlantı noktası akış oranına enjektörden hattı% 40 üzerinde ise, boru iç çapı azaltarak veya bunun uzunluğunu arttırarak basınç düşüşünü artırır. Merkezi bağlantı noktası akış oranına enjektörden hattı 40% altında ise, boru iç çapı artırmak veya borunun uzunluğunu azaltır. </li><li> Akış oranları ayarlanmış sonra pompa kapalı akış açın. </li><li> Kolon girişinin merkez liman ve kolon girişinin periferal portuna T-parça hattına enjektörden hattı bağlayın. </li><li> Yavaş yavaş 1.0 ml dak akış hızı -1% 100 hat B&#39;de rampa </li><li> izin vererek kolon (4.6 mm id x 100 mm uzunluk) dengelenmesi100% metanol (hat B) Hareketli faz, 1.0 ml dk sütun aracılığıyla akan akış -1 10 dakika karıştırıldı. Bu sefer kullanıcı istihdam diğer sütunların boyutlarına göre tartılır. </li><li> CF çıkış ayarı için 4. &#39;CF çıkış akımının Tuning&#39; Adım gidin. </li></ol></li></ol> 3. İkili Pompa Sistem Kurulumu <ol><li> enjektöre HPLC sistemi pompası bağlayın ve sonra sütunun merkezi giriş portuna enjektörden hattı bağlayın. </li><li> Sütunun giriş periferik bağlantı noktasına doğrudan ek pompası bağlayın. bu ikinci pompa enjektör by-pass edip unutmayın. </li><li> 0.4 ml dk -1% 100 Metanol (hat B) (1.0 ml dk -1 toplam debi% 40 temsilcisi) merkezi bağlantı noktasına bağlı sistem pompanın debisini rampa. </li><li> Aşama 3.3 ile aynı zamanda, toplam akış bölgesinin% 60 0.6 ml dak-1 (temsilcisine periferal pompa akış hızını rampa1.0 ml dk -1) 100% Metanol (hat B). </li><li> 1.0 ml dk sütun aracılığıyla akan akış -1, 10 dakika boyunca% 100 metanol (hat B) Hareketli faz vererek kolonu (4.6 mm iç çap x 100 mm uzunluk) dengelenmesi. Bu sefer kullanıcı istihdam diğer sütunların boyutlarına göre tartılır. </li><li> CF çıkış ayarı için 4. &#39;CF çıkış akımının Tuning&#39; Adım gidin. </li></ol> CF Outlet Akış 4. Tuning <ol><li> 0.13 mm ID tüp 15 cm parça kullanılarak UV-Vis detektörü merkezi çıkış portunu bağlayın. </li><li> CF sütunun periferal çıkış ağzına 0.13 mm ID tüp 15 cm parça bağlayın. </li><li> analitik terazi iki boş toplama gemilerin kitle tartılır ve bir gemi santral ve diğer çevresel etiket. </li><li> 1.0 dakika boyunca, kütle 4.2 olarak ölçüldü merkezi toplama kabı etiket, içine UV-Vis detektörü (merkezi akış) çıkan mobil faz toplamak. </li><li> Analitik ölçekte Toplanan geçen madde ihtiva eden toplama kabı yeniden tartın ve toplanan mobil faz kütlesini belirler. </li><li> Tekrarlayın 4.4 çevresel çıkış noktasından hattı çıkan eluent 4.5 için yineleyin. </li><li> Aşağıdaki denklemlere göre akışının her hattından akışı yüzdesini belirlemek: <img alt="denklem 2" src="/files/ftp_upload/53471/53471eq2.jpg" /></li><li> UV-Vis merkez akış yüzdesi% 21 üzerinde ise, basınç düşüşünü artırır.:% 79 (±% 2) (hattından periferik çıkış akımını UV-Vis merkez çıkış akışı:)% 21 akış oranını ayarlayın UV-Vis detektörü çıkış bağlanmış boru iç çapı azaltarak veya bunun uzunluğunu arttırır. UV-Vis gelen orta akış oranı% 21 altında ise, UV-Vis detektörü çıkış bağlanmış boru iç çapı artan, veya borunun uzunluğunu azaltır. boru uzunluğu değişmiştir her zaman, tekrar4.7 4.3 adımları tekrarlayın. Not: &quot;sanal&quot; 2.1 mm İD modunda CF kolon analiz için hazır hale gelir. </li></ol>

<ol><li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+parallel+segmented+outlet+flow+columns+for+enhanced+mass+spectral+sensitivity+at+high+chromatographic+flow+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Commun.+Mass+Sp%22%5BJournal%5D)">The use of parallel segmented outlet flow columns for enhanced mass spectral sensitivity at high chromatographic flow rates.</a> Rapid Commun. Mass Sp. 26 (8), 943-949 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology%3A+Parallel+segmented+outlet+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr. A. 1232 (0), 47-51 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology%3A+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr. A. 1270 (0), 204-211 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111 (0), 3-7 (2013).</li>
<li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803 (0), 154-159 (2013).</li>
<li>Kocic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+through-put+and+highly+sensitive+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+separations+of+essential+amino+acids+using+active+flow+technology+chromatography+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">High through-put and highly sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry separations of essential amino acids using active flow technology chromatography columns.</a> J. Chromatogr. A. 1305 (0), 102-108 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography%3A+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr. A. 1335 (0), 122-135 (2014).</li>
<li>Shellie, R., Haddad, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+two-dimensional+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Comprehensive two-dimensional liquid chromatography.</a> Anal. Bioanal. Chem. 386 (3), 405-415 (2006).</li>
<li>Abia, J. A., Mriziq, K. S., Guiochon, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radial+heterogeneity+of+some+analytical+columns+used+in+high-performance+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Radial heterogeneity of some analytical columns used in high-performance liquid chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1216 (15), 3185-3191 (2009).</li>
<li>Knox, J. H., Laird, G. R., Raven, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+radial+and+axial+dispersion+in+liquid+chromatography+in+relation+to+the+%26%2334%3Binfinite+diameter+effect%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Interaction of radial and axial dispersion in liquid chromatography in relation to the &#34;infinite diameter effect&#34.</a> J. Chromatogr. A. 122 (0), 129-145 (1976).</li>
<li>Miyabe, K., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+column+radial+heterogeneity+from+an+analysis+of+the+characteristics+of+tailing+peaks+in+linear+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Estimation of the column radial heterogeneity from an analysis of the characteristics of tailing peaks in linear chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 830 (1), 29-39 (1999).</li>
<li>Shalliker, R. A., Scott Broyles, B., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axial+and+radial+diffusion+coefficients+in+a+liquid+chromatography+column+and+bed+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Axial and radial diffusion coefficients in a liquid chromatography column and bed heterogeneity.</a> J. Chromatogr. A. 994 (1-2), 1-12 (2003).</li>
<li>Gritti, F., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+thermal+heterogeneity+of+the+column+on+chromatographic+results%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Effects of the thermal heterogeneity of the column on chromatographic results.</a> J. Chromatogr. A. 1131 (1-2), 151-165 (2006).</li>
<li>Shalliker, R. A., Wong, V., Broyles, B. S., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+bed+compression+in+an+axial+compression+liquid+chromatography+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Visualization of bed compression in an axial compression liquid chromatography column.</a> J. Chromatogr. A. 977 (2), 213-223 (2002).</li>
<li>Tallarek, U., Albert, K., Bayer, E., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+transverse+and+axial+apparent+dispersion+coefficients+in+packed+beds%5BTitle%5D)+AND+%22AICHE+J%22%5BJournal%5D)">Measurement of transverse and axial apparent dispersion coefficients in packed beds.</a> AICHE J. 42 (11), 3041-3054 (1996).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations%3A+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Sep.+Sci%22%5BJournal%5D)">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> J. Sep. Sci. 35 (3), 410-415 (2012).</li>
<li>Shalliker, R. A., Broyles, B. S., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+evidence+of+two+wall+effects+in+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Physical evidence of two wall effects in liquid chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 888 (1-2), 1-12 (2000).</li>
<li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns%3A+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+%27virtual%27+narrow+bore+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr. A. 1262 (0), 64-69 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+a+new+concept+chromatography+column%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li>
<li>Foley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+and+Reliability%3A+an+Intercontinental+Study+of+Curtain+Flow+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Thermo+Scientific%22%5BJournal%5D)">Precision and Reliability: an Intercontinental Study of Curtain Flow Chromatography.</a> Thermo Scientific. , (2013).</li>
<li>Pravadali-Cekic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multidimensional+Approaches+for+the+Analysis+of+Complex+Samples+using+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22University+of+Western+Sydney%22%5BJournal%5D)">Multidimensional Approaches for the Analysis of Complex Samples using HPLC.</a> University of Western Sydney. , PhD thesis (2014).</li>
<li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116 (0), 230-234 (2014).</li>
<li>Foley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curtain+flow+chromatography+%28%27the+infinite+diameter+column%27%29+with+automated+injection+and+high+sample+through-put%3A+The+results+of+an+inter-laboratory+study%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Curtain flow chromatography ('the infinite diameter column') with automated injection and high sample through-put: The results of an inter-laboratory study.</a> Microchem. J. 110 (0), 127-132 (2013).</li>
</ol>

Bu çalışma UWS ve ThermoFisher Scientific tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışma verimliliği ve duyarlılık açısından analitik performansını test etmek için CF kromatografi kolonlarının laboratuvarlar arası analizini içeriyordu. 3 &#39;kısmında tarif edildiği gibi CF kolonu ikili pompa sistemi ile oluşturulmuştur. (: Periferik merkezi) CF sütunun girişine çift pompa sistemi 40:60 akış oranını elde etmek için &#39;kurdu. 40:60 (merkez: Periferik) akış oranı, sırasıyla,% 40 ve toplam akış hızının% 60 temsil değeri her bir pompanın akış oranının ayarlanması ile elde edildi. CF kolon çıkış &#3...

Son yıllarda Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) için kolon teknolojisi çok gelişmiş olan; zirve kapasiteleri büyük ölçüde küçük parçacık boyutlarının kullanılması ve daha verimli çekirdek kabuk parçacıklarına ölçüde sayesinde artmıştır. Ayrılmalar genellikle daha verimli olduğundan zirveleri artık daha keskin ve 1-8 dolayısıyla uzun boylu, çünkü bir akış üzerindeki etkisi duyarlılığında bir artış olmuştur. Bununla birlikte, radyal yatak heterojenlik tüm sütunlara performansında bir sınırlayıcı faktör hala, ama bu chromatographers yıllardır bu bilinen beri yeni bir hikaye değil. Sütun yatak radyal yönde 9-12 hem heterojen olup, 10,12-15 eksen sütun boyunca. Duvar etkisi özellikle ayırım performansı 7,16-18 kaybı önemli bir katkıda bulunuyor. Shalliker ve Ritchie 7 geçenlerde sütun yatak heterojenite yönlerini gözden geçirilmiş ve dolayısıyla bu Tartışılan olması gerekmezd burada daha. Kâfi demek olsa da, sütun yatak ambalaj yoğunluğu değişim ve duvar etkileri bantları kısmen çorba dolu andı- fişleri sütun aracılığıyla Zehir şekilde çözünen fişin bir bozulma, neden bu oldukça olan ince düz katı diskler 7 den çanaklar genellikle temel öğretim metinlerinde tasvir. Deneyler yatağı boyunca çözünen göç görüntülenmiştir ki böyle yapılmıştır zaman sütun içinde fiş profilleri kısmen boş ve bandın atık bölümü büyük ölçüde örnek fiş duvar bileşenidir. Sonuçta bu diskler, katı ve 12,14,17 düz olsaydı gerekli olandan bu &#39;kısmen boş&#39; fişleri ayırmak için çok daha fazla tabak almasıdır. Duvar etkileri ve radyal ambalaj yoğunluğu varyasyon ile ilişkili sorunların genişleten grup üstesinden gelmek için, Aktif Akış Teknolojisi (AFT) olarak bilinen kolon teknolojisinin yeni bir form 7,19 tasarlanmıştır. Bu tasarımın amacı neydisütunun 19 radyal merkezi bölgesinde akıtılarak mobil fazın böyle olduğunu, duvar bölge boyunca çözücü salgılayan fiziksel ayırma yoluyla duvar etkilerini ortadan kaldırmak için. AFT sütunların iki ana türü vardır; Paralel Segment Akış (PSF) sütunlar ve Perde Akışı (CF) kolonlar 7. Bu protokol CF kolonların kullanımı ve optimizasyon amaçlı olduğundan, PSF sütunları daha ayrıntılı olarak ele alınmayacaktır. Perde Akış (CF) Perde Akış (CF) sütun biçimleri giriş ve sütunun çıkışında hem de AFT son parçaları kullanmaktadır. AFT sonu ekleri bir çok portlu montaj içinde bulunan bir dairesel frit oluşur. Frit üç kısımdan oluşur: bağlantı ucunun orta noktasına, uç teçhizat çevresel bağlantı (lar) ile aynı hizada olan bir gözenekli dış kısmı ve su geçirmez bir halka ile hizalı olan bir gözenekli, radyal merkezi kısım olduğu herhangi bir çapraz engelleyen iki gözenekli kısımları ayıran. frit 19 radyal merkezi ve dış bölgeleri arasındaki akışı ile 1 AFT frit tasarımını göstermektedir ve Şekil 2 CF sütun biçiminde göstermektedir. ek mobil faz, radyal merkezi bölgesi ile eriyiklerin göçü &#39;perde&#39; girişine çevresel bağlantı noktası üzerinden sokulur iken bu operasyon modu (CF), numune, Ek giriş radyal merkezi bağlantı noktasına enjekte edilir sütun. Bu nedenle örnek, yalnızca geçtiği mobil faza sahip kolonun dış bölge sütunun radyal orta bölgesinde bir yatak girer. (: Periferik bağlantı noktası merkez) 4.6 mm iç çapı (id) kolonu uç parçası girişi için uygun 6,7,16 olan çalışmalar yaklaşık 40:60 bir hacimsel akış hızı oranı göstermiştir. CF sütun kıç çıkışı göreceli kısmına merkezi ve çevresel akışın ayarına izin verir ve hemen hemen arzu edilen herhangi bir Rati için değişik olabilirbasınç yönetimi o. Bir CF sütunun optimizasyonu önemli ölçüde bu tür ayırma verimliliği veya algılama hassasiyeti gibi kolon teknolojisinin çeşitli fonksiyonel yönlerini artırabilir. Bu şekilde, bir &quot;duvara az&quot;, &quot;sonsuz çapı&quot; ya da &quot;sanal&quot; sütunu 6,10,18,20 kurulur. CF sütun amacı aktif duvar bölgesine ulaşma numunenin önlemek için kolon boyunca numunenin taşıma yönetmektir. Böylece, dedektöre çıkış üzerine çözünen konsantrasyonu Ultraviyole (UV) algılama 16 kullanırken ve hatta kitle spektral algılama 6 kullanarak daha zaman geleneksel kolon biçiminden daha yaklaşık 2,5 kat daha fazladır duyarlılığını artırarak, maksimize edilir. algılama hassasiyeti artar beri CF sütunlar ideal düşük konsantrasyon numuneler için uygundur. Bu kütle spektrometresi (MS), 6 olarak hızlı sınırlı dedektörler, akış eşlendiğinde Dahası, idealdir. bir AÖrneğin bir 4.6 mm kimliği biçiminde FT kolon,% 21 orta akışını çıkan ayarlayarak, aynı doğrusal hızlarda çalıştırıldığında, standart 2.1 mm id biçimi sütunu olarak bir dedektörün çözücünün aynı hacimde teslim ayarlanmış olabilir. Aynı şekilde AFT sütun da% 43&#39;e merkezi akışını çıkan ayarlayarak, bir 3.0 mm id sütunu olarak bir dedektörün aynı hacim yükü teslim ayarlı olabilir. Aslında, herhangi &quot;sanal&quot; sütun biçimi analitik gereksinimi 6,18,22 göre üretilebilir. Girişte bu özel olarak tasarlanmış son parçaları kullanarak ve çıkış gerçek bir duvar daha az sütun kurulmuş olmasını sağlar. Girişin santral ve periferik limanlarına solvent dağıtım sistemi kurmak için iki yol vardır:. Split akış sistemi 6 ve iki pompa sistemi 6,7 3 bu CF sistemi set up her göstermektedir Şekil. Split-akış sistemi benna bölünmüş akış sistemi (Şekil 3A) enjektör giden pompa akışı mobil faz bir akış akışı daha sonra bağlanır enjektörüne bağlı bir sıfır ölü hacim T-parçası ile bölünmüş ön enjektörün sütunun giriş sonu montaj merkezi bağlantı noktası. Mobil fazın ikinci akış akışı enjektör by-pass ve sütun girişine çevresel bağlantı noktasına bağlıdır. Merkezi ve periferik için pompa enjektörden, çizgiler kolonuna bağlanmadan önce, yani: akış bölme sırasında, akım akışı oranı 40:60 (çevresel merkezi) ayarlanır. İki pompa sistemi CF sütun sütun giriş sonu uydurma iki akış akışı gerektirir. Ayarlamak HPLC aleti, bölünmüş akış otomatik örnekleyici / enjektör türüne bağlı olarak mümkün olmayabilir ve bu nedenle KF sonra 2 pompa (Şekil 3B 21) ile elde edilebilir. Her pompa ayrılan ve merkezi ya da periferal bağlantı ve akış hızı, merkezi bağlantı noktası için akış% 40 ve periferik bağlantı noktası için% 60 temsil etmek üzere ayarlanır, ya bağlanır. Toplam akış oranı 1.0 ml dk-1 ise, örneğin, merkezi bir pompa akış hızı, 0.4 ml min ayarlanır -1 ve periferik pompası 0.6 ml dk -1 ayarlanır. çalışma modu seçimi HPLC enstrümantasyon ve operasyon kromatografik modunda büyük ölçüde bağlıdır. Örnek yük konumu ve numune arasındaki basınç değişikliği pozisyon bölünmüş akış oranını bozan oluşabilir ve böylece bu durumda kurmak çift pompa optimum CF performans için önerilen olacağını enjekte bazı otomatik numune alma cihazı Örneğin. Ne olursa olsun CF sütunun girişi için seçilen kurmak solvent dağıtım sistemi, CF çıkış optimizasyonu aynı kalır. CF sütunun çıkış merkezi liman Smal ile Ultraviyole-Görünür (UV-Vis) dedektör bağlı olduğuHortumun olası hacmi diye post-kolon ölü hacim etkilerini en aza indirmek için. CF sütunlar dar delik sütunlar taklit beri, kolon çıkışına ve dedektör arasındaki ölü hacim CF sütunun ayırma performansı için zararlıdır. Merkez liman ve böyle verimlilik ve hassasiyet band genişletilmesi, kayıp olarak ölü hacim etkilerini en aza indirmek için UV-Vis dedektör arasındaki boru hacminin küçük miktarda sağlamak için kritik öneme sahiptir. Dolayısıyla, dar delik boru (0.1 mm id) kullanımı kolay uygunsuz ölü hacim eklemeden basınç ayarlamaları izin tavsiye edilir. Boru, aynı zamanda periferal noktasına bağlanır ve atık yöneliktir. CF sütunun çıkışma üzerine bölütleme oranı analisti amaca uygun herhangi bir orana ayarlanabilir. 4.6 mm id CF kullanıldığında, örneğin, ya 43:57 ya 21:79 (merkezi: periferik) olarak oranını ayarlamak için sık sık uygun bir &#39;sanal&#39; 3,0 mm id sütunu veya 2.1 mm id sütunu taklit,saygıyla. Bu şekilde ayırma performansı kolayca tezgah işaretlenmiş olduğunu. segmentasyon oranı merkez bağlantı noktasına bağlı ve bir dönem zamanla çevresel port çıkan akış olduğunu dedektör çıkan akış miktarını tartılması ile ölçülür. Her bir bağlantı noktası üzerinden yüzde akışı daha sonra tespit edilebilir ve oranlar tüpüne eklenmiş uzunluğunu değiştirerek ya da başka bir iç çapa (id) sahip olan boru sistemi kullanılarak ayarlanabilir. Bu video protokolü gelişmiş kromatografik performans için CF kolonun çalışma ve optimizasyon prosedürleri ayrıntıları.

<table><tbody><tr><td>HPLC cihazı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ek Pompa</td><td></td><td></td><td>2 pompa CF sistemi kurulumu kullanılacaksa gereklidir.</td></tr><tr><td>Perde Akışı HPLC sütunu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Tanımlanmadı</td><td>Yakında ticarileştirilecek</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>HPLC Sınıfı</td></tr><tr><td>PEEK boru</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>Çeşitli uzunluklar ve kimlik & nbsp;</td></tr><tr><td>PEEK tüp kesici</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analitik Terazi Terazisi</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kronometre</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eluent toplama kapları</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>1-2 ml numune şişeleri eluent toplama kapları olarak kullanılabilir</td></tr><tr><td>T-parça</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

akış sütun perde: verimliliği ve duyarlılık optimizasyonu

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

Aktif Akış Teknolojisi (AFT), özel olarak tasarlanmış çok bağlantı noktalı uç bağlantı parça(lar)ı kullanarak bir HPLC sütununun ayırma performansını artıran bir sütun teknolojisi biçimidir. Perde Akışı (CF) kolonları, AFT kolon takımına aittir, özellikle CF kolonu, numunenin yatağın radyal merkezi bölgesine enjekte edilmesi ve çözünen maddenin enjeksiyonunu çevreleyen mobil fazın bir perde akışı, numunenin duvara radyal dağılımını önleyecek şekilde tasarlanmıştır. Sütun, 'sonsuz çaplı' bir sütun olarak işlev görür. Tasarımın amacı, kolon yatağının radyal heterojenliğinin üstesinden gelmek ve aynı zamanda numune yükünü kolon yatağının radyal merkezi bölgesine maksimize etmektir, bu da algılama hassasiyetini artırmaya hizmet eder. Burada açıklanan protokol, sistem ve CF sütunu kurulumunu ve optimize edilmiş sonsuz çaplı bir 'sanal' sütun için ayarlama sürecini ana hatlarıyla belirtir.

AFT sütunlar sütun yatak heterojenitesini üstesinden gelmek ve ayırma performansını artırmak için birden çok sütun son parçaları uzmanlaşmış bir frit tasarımı (Şekil 1) kullanılarak geliştirilmiştir. CF kromatografi sütunları (Şekil 2) ayrılması performansına arası laboratuar çalışması bu protokol 23 3. bölümünde açıklandığı gibi (Şekil 3B) kurmak çift pompa sistemi ile gerçekleştirilmiştir. Üç bileşenli test karışımı CF sütun...

Burada, gelişmiş ayırma performansı için Perde akışı (CF) modunda Aktif Akış Teknolojisi (AFT) sütununun çalışması ve optimizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Akış Sütun Perde: Verimliliği ve Duyarlılık Optimizasyonu

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

Bu yöntemin genel amacı, bir perde akış kolonunun optimizasyonu yoluyla bir ayırmanın verimliliğini ve hassasiyetini artırmaktır. Bu yöntem; çevre bilimleri, adli tıp ve verimli ve yüksek hassasiyetli bir ayırma tekniğinin gerekli olduğu eser örnek analizinin gerektiği alanlarda temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, geleneksel HPLC ayırma yöntemlerine kıyasla bir ayırmanın verimliliğini ve analizin hassasiyetini artırmasıdır.Bu yöntem, ayırma gücünü ve dolayısıyla hız kapasitesini ekonomik ve zaman açısından verimli bir şekilde artırmanın bir yolunu sağlayabilir. Perde akış kolonu, HPLC uygulayıcıları için yeni bir kavramdır; ancak kullanımı karmaşık değildir. Yöntem, basitçe uygun akış oranlarının optimizasyonunu gerektirir.İlk olarak, HPLC cihazının A ve B mobil fazları için %100 ultra saf su ve %100 metanol şişelerini hazırlayın. Pompalara üretici gereksinimlerine göre purge işlemi uygulayın. Purge işleminden sonra, pompa hattını otomatik örnekleyici enjektör valfinden ayırın.Bağlantısı kesilmiş hatta bir T parçası takın. T parçasının her bir portuna 0,13 mm iç çapında ve 15 cm uzunluğunda borular takın. T parçasından gelen borulardan birini otomatik örnekleyici enjektör valfine bağlayın.Son olarak, pompayı dakikada bir mililitre akış hızına ayarlayın. İki boş toplama kabını daralın ve bunları merkezi ve periferik olarak etiketleyin. Enjektörden gelen hattan çıkan mobil fazı toplamak için 60 saniye boyunca merkezi olarak etiketlenmiş kabı kullanın.Merkezi kabı yeniden tartın ve toplanan mobil fazın kütlesini belirleyin. Bu işlemi, periferik porttan gelen akışı periferik olarak etiketlenmiş kapla toplayarak tekrarlayın. Belirtilen denklemleri kullanarak her bir hattan gelen akış yüzdesini veya dakika başına mililitreyi belirleyin.Merkezi port yaklaşık yüzde 40, periferik port ise yaklaşık yüzde 60 olmalıdır. Değerler yüzde ikiden fazla farklılık gösteriyorsa, akış oranını ayarlamak için tüp uzunluğunu veya çapını değiştirin. Ardından toplama ve hesaplama adımlarını tekrarlayın.Ardından, pompa akışını kapatın ve enjektör hattını kolon girişinin merkezi portuna bağlayın. Ayrıca, T parçasından gelen hattı kolon girişinin periferik portuna bağlayın. Akış hızını, %100 mobil faz B ile yavaşça dakikada 1 ml değerine çıkarın. Sistemi optimize etmeyi tamamlamak için, kolonu dengelemek amacıyla 10 dakika boyunca dakikada 1 ml hızında %100 metanol akıtın.Başlamak için, merkezi çıkış portunu UV-Vis dedektörüne bağlamak için boru kullanın. CF kolonunun periferik çıkış portuna aynı tip ve uzunlukta bir boru bağlayın. Ardından, pompayı dakikada bir mililitre akış hızına ayarlayın.İki boş toplama kabını daralayın ve bunları yeniden, birini merkezi toplama diğeri ise periferik toplama için etiketleyin. UV-Vis dedektörden çıkan mobil fazı toplamak için merkezi olarak etiketlenmiş kabı 60 saniye boyunca kullanın. Elüye olan çözeltinin kütlesini belirlemek için toplama kabını yeniden tartın.Bu işlemi çevre çıkış portu ve etiketli toplama kabı ile tekrarlayın. Şimdi, daha önce giriş akışıyla yapıldığı gibi, her hattan gelen akış yüzdesini belirleyin. UV-Vis hattı yüzde 21, çevre çıkış akışı ise yüzde 79 olmalıdır.Akış oranı önemli ölçüde saparsa, merkezi akış yüzdesini değiştirmek için UV-Vis detektörünün çıkışına takılı olan borunun boyutunu ayarlayın. Perde akış kolonunun optimal performansını sağlamak için kolonun giriş ve çıkışındaki merkezi ve çevresel akış oranlarının bu protokole uyması önemlidir. Aktif akış teknolojili kolonlar, kolon yatağı heterojenliğini gidermek ve ayırma performansını artırmak amacıyla, çok portlu kolon uç bağlantılarında özel bir frit tasarımı kullanılarak geliştirilmiştir.Fenetol, bütilbenzen ve pentilbenzen içeren bir test karışımı; geleneksel 4,6 ve 2,1 milimetre iç çaplı kolonlar ile 4,6 milimetre iç çaplı bir perde akış (curtain flow) kolonunda analiz edilmiştir. Karışımın ayrımı, perde akış kolonunun standart kolonlara kıyasla verimlilik ve hassasiyet açısından gelişmiş performansını göstermektedir. Perde akış kolonu kullanımı, azalmış pik hacmine rağmen bütilbenzen için sinyali artırmıştır.Bu teknik bir kez öğrenildiğinde, düzgün bir şekilde uygulandığı takdirde yarım saatten kısa sürede kurulabilir. Perde akış kolonu düzeneği tekrar tekrar kullanılabilir, ancak akış oranları rutin olarak kontrol edilmelidir. Bu prosedür uygulanırken, belirtilen akış oranlarına mümkün olduğunca yakın kalmaya özen göstermek önemlidir.Perde akış kolonu, HPLC alanındaki araştırmacıların, ayırma performansından ödün vermeden daha hızlı numune analizi elde etmek amacıyla kolonların ve UPLC cihazlarının sınırlarını zoralamasının önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, geleneksel HPLC kolonlarına göre daha iyi ayırma sağlayabilen perde akış kolonlarının önemini kavramış olmalısınız.

curtain-flow-column-optimization-of-efficiency-and-sensitivity

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Proteinin saflaştırılması işleminde kullanılmak üzere uygun hidrofobik etkileşim kromatografısi (HIC) ortam tanımlanması için otomatik bir yöntem sunulmaktadır. Otomatik bir yöntem tampon karışım, dinamik bir örnek enjeksiyon döngüsü, ardışık sütun seçimi, çoklu dalga boyu analizi, ve iki fraksiyon eluat toplama dahil olmak üzere, orta basınçlı sıvı kromatografisi sistemi kullanır.

Protein Saflaştırma Kullanım için Otomatik Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi Sütun Seçimi

Steril bir sürekli akış devresi, laminer akış kayma gerilmesi tabi yapışık hücrelere için bir yöntem tarif. Hücrelerin yapışma, morfoloji, şeffaf oda ile devre metaboliti analizi ve gelecek deneyler ya da kültür için kayma maruz kaldıktan sonra hasat hücreleri için alınan numuneler incelenmiştir olabilir.

Laminer Akış Kesme Stres altında endotel progenitör hücrelerin değerlendirin Paralel plakalı Akış Odası ve Sürekli Akış Devre

Burada, çoğullanmış algılamayı sağlamak için paralel segmentli akış kromatografisi kolonlarının çalıştırılması ve ayarlanması için bir protokol sunuyoruz.

Paralel Segment Akış Sütun Tuning ve Multipleks Algılama etkinleştirme

Post kolon türevlendirmesi (PCD) kullanan yöntemler için reaksiyon akışlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi kolonlarının kullanımına yönelik bir protokol sunulmuştur.

Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

Termal sınırlar organizmaların tolere ettiği ortamları tahmin edebilir, ki bu da hızlı iklim değişikliği karşısında değerli bilgilerdir. Burada açıklanan böceklerde kritik termal minima ve ısı nakavt süresini değerlendirmek için yüksek iş gücü protokolleri vardır. Her iki protokol de iş hacmini en üst düzeye çıkarır ve tahlillerin maliyetini en aza indirir.

Böceklerde Kritik Termal Limitlerin Yüksek İş Gücü Tahlilleri

Burada optimize edilmiş FlashPack kılcal sütun paketleme prosedürü için bir protokol sunuyoruz. Optimize edilmiş bir protokolün ortak bir 100 bar basınçlı bomba kurulumuna uygulanması, uzun ultra yüksek performanslı kılcal sütunların 10 kat daha hızlı paketlenerek üretilmesini sağlar.

FlashPack Yaklaşımı ile Basit Şirket İçi Ultra Yüksek Performanslı Kılcal Sütun Üretimi

Burada, hava akış modelini düzenleyerek taze gıdaların havalandırmalı bir kutuda uzun süre saklanabilmesini sağlamak için ortogonal bir deneysel tasarım tarafından üretilen numune noktalarını optimize etmek için aralık analizi yöntemini sunuyoruz.

Yüksek Performanslı Havalandırmalı Bir Kutunun Tasarım ve Optimizasyon Stratejileri

Burada, tozlu partikül madde kaplı bir pil ısı yönetim sistemine karşılık gelen yaklaşık bir ikinci dereceden tepki yüzey modelini (QRSM) optimize etmek ve sistem girişlerinin hava akış hızları kombinasyonunu ayarlayarak sıcaklık düşüşlerini geri almak için uyarlanabilir simüle edilmiş tavlama yöntemini (ASAM) sunuyoruz.

Tozlu Partikül Madde Kaplı Lityum-İyon Pil Paketleri için Hava Bazlı Isı Yönetim Sisteminin Optimizasyonu

Kinesinler mikrotübüllerle nükleotid-bağımlı etkileşimi ile karakterize edilir: mikrotübül bir etkileşim döngüsü birleştiğinde ATP ciro bir döngü. Burada, floresanla işaretlenmiş nükleotidlerin ve durdurmalı akış floresan kullanılarak kinesin ATP çevirme süresi bireysel nükleotid geçişler kinetiği analiz protokolleri açıklar.

Floresan-Akış durdu ve Etiketli Nükleotidlerinin Kullanım kinesinlerin ATP Ciro Döngüsü Analiz için

Bir nanoparçacığın yüzey özellikleri, çevresindeki ortamla etkileşimleri için önemlidir. Bu nedenle, karbon nanotüplerin yüzey modifikasyonu, gözenekli ortamlar boyunca taşınmaları ve tutulmaları için kritik olabilir. Burada, bu nanopartiküllerin olası taşınmasını ve tutulmasını anlamak için laboratuvar ölçeğinde kolon deneyleri kullanılmaktadır.

Bir Toprak Kolonundaki Yüzey modifiye Karbon Nanotüpler taşınması

Öğrenin, perde akış kolonlarını optimize ederek HPLC'de ayrım verimliliğini ve analiz duyarlılığını nasıl artıracağınızı. Bu yöntem çevre bilimleri ve adli tıpta iz örnek analizi için güvenilir bir çözüm sunar.

Akış Sütun Perde: Verimliliği ve Duyarlılık Optimizasyonu

Daha fazla video keşfet