Kılcal Tüpler ve Creamatocrit Süt Yağ İçeriğinin Tahmin kullanarak Rat Süt Toplama

Bu prosedürün genel amacı, süt bileşiminin laboratuvar analizi için emziren bir sıçandan sütün manuel olarak nasıl toplanacağını açıklamaktır. Bu yöntem, anne diyetinin süt bileşimini nasıl etkileyebileceği gibi anne ve çocuk sağlığı alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olmak için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, herhangi bir özel vakum veya emme ekipmanı olmadan tek bir araştırmacı tarafından gerçekleştirilebilmesidir.

No.To başlayın, sağımdan en az beş dakika önce barajı yavrularından ayırın. Ardından, sağım prosedürü için gerekli olan tüm malzemeleri burada gösterildiği gibi toplayın. Daha sonra ısıtılmış bir ameliyat masasına emici bir tezgah pedi yerleştirin veya sağım işlemi sırasında barajdan ısı kaybını önlemek için ayrı bir ısı yastığı kullanın.

Ardından, işlemden önce sistemin yeterli oksijen ve izo flor içerdiğinden emin olmak için anestezik sistemi kontrol edin. Daha sonra ilk anestezi indüksiyonu için kullanılacak maskeyi makineye takın ve bakım maskesini yakına yerleştirin. Oksijen tankını açın ve akışı dakikada bir litreye ayarlayın.

Ardından flor izmasının akışını açın ve akışını% 5'e ayarlayınAnestezi uygulandıktan sonra barajı bakım maskesine geçirin. Pedal refleksinin olup olmadığını kontrol ederek yeterli düzeyde anestezi olduğunu onaylayın. Ardından barajı emici tezgah pedi üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin.

Flor izakını %2 ila %3'e kadar azaltın Prosedür boyunca barajı sürekli olarak izleyin ve ağrı ve solunum depresyonunu önlemek için flor izakını gerektiği gibi ayarlayın. Daha sonra, 25 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik bir şırınga kullanarak bir oksitosin şişesini dezenfekte etmek için steril bir alkollü mendil veya temizleme pedi kullanın, 0.1 mililitre oksitosin çekin. Daha sonra iğneyi, yaklaşık 0,5 santimetre derinliğinde, 15 ila 30 derecelik bir açıyla başa doğru bakacak şekilde barajın karnının sağ alt çeyreğine yerleştirin.

Enjeksiyondan önce negatif basıncı sağlamak için pistonu geri çekin. Sıvı aspire edilmezse, oksitosini enjekte edin ve iğneyi ve şırıngayı hemen biyolojik tehlike kabına atın. Oksitosinin sütü uyarması için yaklaşık beş ila 15 dakika bekleyin.

Bu süre zarfında hayal kırıklığına uğratın, sütün toplanacağı tetleri seçin. Kürk numune toplamada zorluğa neden olabileceğinden, seçilen tetlerin etrafındaki kürkü nazikçe çıkarmak için düzelticiler kullanın. Ardından tetleri ılık suyla temizleyin.

Süt toplama için birden fazla bölge gerekebileceğinden en az iki bölge hazırlayın. Süt düştükten sonra, sütü manuel olarak dışarı atmak için Tet'in tabanını hafifçe sıkın. Toplama için süt damlacıklarını 50 mikrolitrelik bir kılcal tüpe toplayın.

Dolduktan sonra, sütü emziğinden mikro santrifüj tüpünün yan tarafına çekmek için kullanılan tüpün ucuna dokunarak sütü kılcal tüpten steril bir mikro santrifüj tüpüne dağıtın. Ardından, tüpe çekilmemiş sütü üflemek için bir mililitrelik şırıngaya bağlı 18 gauge bir iğne kullanın. Süt toplama işlemini tekrarlayın ve yeterli süt toplanana kadar mikro santrifüj tüpüne aktarın.

Seçilen analiz için, barajın anestezi altında olduğu toplam süreyi bir saatten daha az bir süre ile sınırlamaya çalışın. Sağım tamamlandığında, flor ve oksijen akışını kapatın ve maskeyi barajdan çıkarın. Sternal yaslanmış tutmak için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar barajı izlemeye devam edin.

Daha fazla analiz gerekmiyorsa, sütü eksi 80 derecede esintiyle ısıtın. CCR ölçümüne hazırlanmak için, 15 ila 20 mikrolitre sütü doğrudan Tet'ten bir mikro hematokrit tüpüne yükleyin. Ardından tüpün ucunu bir kil dolgu macunu ile kapatın.

Kılcal boruyu, conta çukuru dışarıya bakacak şekilde hematokrit döndürücüye yerleştirin ve santrifüjün dengelendiğinden emin olun. Daha sonra numuneyi iki dakika boyunca 13.700 kez G'de döndürün. Numune dönmeyi bitirdiğinde, tüpü santrifüjden çıkarın.

Numunenin bir krem tabakası ve şeffaf bir tabaka olarak ayrıldığını gözlemleyin. Bir cetvel veya kaliperler kullanarak tüpteki toplam sıvı uzunluğunu ve yağ veya krema tabakasının uzunluğunu ölçün ve kaydedin. Hamilelik ve emzirme dönemindeki diyetin süt bileşimini nasıl etkilediğini belirlemek için ekteki metin protokolünde açıklandığı gibi CCR'yi hesaplamak için bu bilgileri kullanın.

Süt örnekleri, yüksek protein, yüksek prebiyotik lif veya kontrollü bir diyetle beslenen Worcester barajlarından sütten kesme sırasında toplandı. Yüksek prebiyotik lif diyeti ile barajlardan toplanan süt, sayısal olarak en yüksek C hematokrit, kötü konsantrasyon ve enerji değerine sahipti. Bununla birlikte, protein söz konusu olduğunda bu farklılıklar istatistiksel olarak anlamlı değildi.

Bununla birlikte, yüksek proteinli diyette barajlardan toplanan süt, en yüksek protein konsantrasyonuna sahipti. Yine de, bu fark istatistiksel olarak anlamlı değildi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, doğru yapılırsa barajın ilk anestezi noktasından itibaren bir saatten daha kısa sürede gerçekleştirilebilir.

Bu prosedürü denerken, bu prosedürü takiben anestezi altındayken solunum depresyonunun meydana gelmemesini sağlamak için barajı sürekli olarak izlemeyi unutmamak önemlidir. Kütle spektrometresi gibi diğer yöntemler, sütün oligosakkarit bileşiminin belirlenmesi gibi ek soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, emziren bir sıçandan manuel olarak süt toplamanın nasıl yapıldığını iyi anlamalısınız.