Name: Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 31 s
Description: Öğrenin, yenidoğan farelerde omurilik sıkıştırma yaralanması modeli oluşturmayı. Bu yöntem, adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek ve omurilik yaralanması tedavileri için önemli bilgiler sağlamak amacıyla kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Güneydoğu Norveç Bölgesel Sağlık Otoritesi (JLB, 2014119; JCG, proje numaraları 2015045 ve 2012065), Norveç Araştırma Konseyi (JCG, proje numarası 23 00 00) ve Oslo Üniversitesi tarafından.

Bu deneysel protokol Ulusal Hayvan Araştırmaları Norveç&#39;te Kurum tarafından onaylanan (Forsøksdyrutvalget, yerel deneysel onay numarası 12,4591) Avrupa Birliği hayvan bakım yönetmeliklerine uygun (Federasyon Avrupa Laboratuar Hayvan Bilimi Derneği). Çabalar kullanılan hayvanların ve onların acıları sayısını en aza indirmek için yapılmıştır. Bu yazıda, doğum sonrası (P) Gün 1 vahşi tür ICR (Basma kontrol bölgesi) farelerden (The Jackson, ABD) kullanılan prosedür açıklanmıştır, ancak, aynı yaklaşım, daha sonraki aşamada kullanılabilir. 1. Yenidoğan Farelerde için gaz Anestezi Sistemi Oluşturma (Şekil 1) <ol><li> Bir şırınga ucundan bir burun maskesi oluşturun. Plastik boru (- kırmızı boru ve Şekil 2A1 Şekil 1) ile 3-yollu bu bağlayın. </li><li> burun maskesi tarafında küçük bir delik delin ve gaz taşması kaldırmak için plastik boru için bu bağlantımaske. Boru ya hafif bir negatif basınç için ayarlanabilir bir vakum pompası ya da bir davlumbaz (- parlak yeşil boru Şekil 1) sona. </li><li> 150 mm x 25 mm plastik Petri kabı (Şekil 2A2) bir anestezi bölmesi sağlayın. <ol><li> Bir tarafta, fare baş ve burun maskesi karşılamak için yeterince büyük bir delik açın. </li><li> Karşı tarafta, ve burun maskesi plastik tüpler eklenebilir hangi aracılığıyla iki küçük delik (- sırasıyla kırmızı ve parlak yeşil boru, Şekil 1). </li><li> Kapağın üzerine üçüncü bir delik açın ve bu vakum pompası (Şekil 1 - koyu yeşil boru) biter üçüncü plastik tüp takın. Bu üçüncü tüp amacı burun maskesi çıkışına tarafından yakalanan olmamıştır herhangi bir aşırı gaz söktürücü olduğundan emin olmaktır. </li></ol></li><li> C kadar büyük olduğu laboratuar çanak herhangi bir alt bir delik ile, bir uyku odası oluşturmakFare ontain ve pürüzsüz ve hatta kenarı vardır (yemeğin açılış gazının sızmasını önlemek için tablo ile aynı hizada yalan gerekir). Plastik boru (- kahverengi boru Şekil 1) ile 3-yollu odanın delik bağlayın. davlumbaz altında uyku odasına yerleştirin. </li><li> Buharlaştırıcı (- sarı boru ve Şekil 2A3 Şekil 1) den çıkış tüpüne bir 3-yollu stopcock takın. </li><li> Oksijen kaynağı (- mavi boru Şekil 1) buharlaştırıcı girişini bağlayın. </li></ol> Sıkıştırma Aracı oluşturma Bir Yaşargil Geçici Anevrizma Mini klibin 2. modifikasyonu (Şekil 2 ve Tablo 1) <ol><li> bir kelepçe ile bir stand sıkıca klibi yapıştırın. Bir bileme taş kullanılarak yaklaşık 150 um&#39;lik bir son kalınlık kazanmaları için, her klip kanadının ucuna dış yüzeyinden aşağı dosya görsel kontrol için binoküler büyüteç kullanılarak bir matkap (Şekil 2B ve C) üzerine monte edilir. </li&gt; <li> Bir mikro-bıçak (Tablo 1) kullanarak bir stereomikroskop altında polietilen kılcal boru (Tablo 1) kısa bir esneme keserek klibi için bir stoper yapın ve bıçaklar biri bu koyun (Şekil 2A4 ve 2B ve C Rakamlar). Bu klibin tam kapanmasını önler ve standart sıkıştırma boyutlarını oluşturur. klip kapatıldığında interblade mesafe yaklaşık 230 mm. interblade alanı değiştirecek kullanım sırasında sıkıştırmak olabilir polietilen malzemeden, her bir deney için yeni bir stoper yapın. Not: Klibin yay gerginliği zamanla azalır yaklaşık 80 kompresyon sonra klip artık stoper tam kapanır ve değiştirilmesi gerektiğini böyle. </li></ol> Cerrahi 3. Hazırlık önce <ol><li> (Şekil 2A5 uyku odasının (Şekil 1) fare yerleştirin ve% 4 izofluran ile anestezi başlatmak </strong&gt;), Bir buharlaştırıcı (Şekil 2A3 ve Tablo 1) kullanarak, saf oksijen buharlaşmış. </li><li> yavaşça ince plastik forseps ile ayak parmakları arasında cilt web sıkıştırarak fare çekilme refleksi test edin. yeni doğan farelerin kolayca yaralı olarak dikkatli bir şekilde yapın. Hemen morarma çok zor sonuçlara kısma. sedasyon başında bu testi gerçekleştirme refleksini tetikler ve gerekli kuvvet miktarının iyi bir gösterge sağlar. </li><li> Refleks kaldırılmıştır sonra, uyku odasından fareyi kaldırmak ve saf oksijen (Şekil 1) karışık% 4 izofluran sürekli kaynağı sağlar burun maskesi takılı burnu ile ameliyat masasına yüzükoyun pozisyonda yerleştirin. ısınma pad ölümcül olabilir ameliyat sırasında hipotermi olarak 37-38 ° C&#39;ye açık ve ayarlanmış olduğundan emin olun. </li><li> Tam analjezi elde edilmesi için, (deri altından lokal anestezik Bupivakain 50 ul enjekte 2.5 mg / ml, <strong&gt; cerrahi yerinde Şekil 2A6) 9-T11) (Burada bildirilen deneylerde, bu torasik seviyede (T altındadır). Enjeksiyon yapmak için (300 ul, 30 g, Şekil 2A7 ve Tablo 1) bir insülin şırınga kullanın. </li><li> % 1-2 burun maskesi teslim izofluran konsantrasyonunu azaltmak. </li></ol> 4. Dorsal laminektomi <ol><li> mikroskopik kontrol altında ameliyat. </li><li> En az 30 saniye süreyle klorheksidin glukonat (Tablo 1 # 19) ile cerrahi bölgeyi temizledikten sonra, bir microknife (Şekil 2A8) ile T9-T11 de 1-2 mm enine cilt kesi yapmak. Not: ICR yenidoğan farelerde mide rostral parçası, o sütü içeren görünür olduğunda, omurga seviyeleri T12-T13 (Şekil 3) karşı karşıya. Başka bir dönüm noktası T8-9 hakkında biter göğüs cilt altı yağ dokusu agrega rostral parçasıdır. Bu dönüm noktası cilt insizyonu sonra görülür. </li><li&gt; forseps (Şekil 2A9 A10) (pürüzsüz ve düz bir yara oluşturmak, deri kolay yırtılan) yavaşça rostral ve kaudal cilt çekerek 8-9 mm enine bir doğrultuda cilt açıklığından genişletmek için. Bu omuriliğe yeterli yanal erişim sağlar. </li><li> Hemostatik jelatin sünger steril parçalarını kesi (Şekil 2A11 ve Tablo 1) deri altından rostral ve kaudal takarak yatan yapılardan cilt kesisi kenarlarını geri çekin. Bu açılış büyütür ve geri çekilmeden ve ameliyat sırasında bölgeyi obscuring cildi önler. hemostatik jelatin sünger kullanımdan önce serum fizyolojik batırılmış gerek yoktur. </li><li> Omurga ortaya çıkarmak için, ince makas (Şekil 2A12 ve Tablo 1) kullanılarak paravertebral kasları teşrih. Vertebral kolon kasların ekleri kesin ve lamina (Şekil 4A) maruz kalmaktadır. değile de bu aşamada spinal süreç az gelişmiştir. </li><li> Orta hattı belirlemek ve ince makas (Şekil 4B) ile (bu aşamada kıkırdaklı olan) iki lamina arasındaki enine kesti. Dikkatle lamina ve dura (Şekil 4C) arasında ince bir forseps bir bıçak yerleştirin forseps ile lamina kavramak ve bir parça sağlam dura (Şekil 4D) bırakarak, uzak kırar kadar dikkatlice kaldırın. 1-2 segmenti uzun laminektomi elde etmek için bu 2-3 kez tekrarlayın. </li><li> rongeurs ince forseps kullanarak, vertebral kanal içinde klibi yerleştirmek için yeterli alan kazanmak için bilateral faset eklemlerin parçalarını kaldırmak. Cerrahi alanını temizlemek ve hemostatik jelatin sünger küçük parçalar ile kanama kontrol eder. </li></ol> 5. Omurilik Sıkıştırma Yaralanması <ol><li> Klip tutucu değiştirilmiş anevrizma mini klip açın (Şekil 2A13 ve Şekil 2B) ve yer incifaset katılır arasındaki boşluklar ve kordon omuriliğin iki tarafında e bıçaklar. Bıçaklar omuriliğin ventral bölümünü etkileyecek yeterince derin takılı olduğundan emin olun. Bu mümkün değilse, faset eklemlerin daha fazla çıkarın. </li><li> kaymasını önlemek için klip tutucu ile yerde tutarak, hızla mini klip bırakın. 15 sn sıkıştırma koruyun. </li><li> Hızla mini klip açın ve çıkarın. önce (ikinci 15 sn sıkıştırma ters yönde klibi yeniden konumlandırmak, mini klip yönünü tersine, bir kılavuz olarak birinci sıkıştırma hemorajik ödem tarafından yapılan kolayca görülebilir işareti kullanarak, bir simetrik sıkıştırma elde etmek için tek kompresyon değil 1 yapmak ise deney), bu simetrik histolojik ve fizyolojik açıkları üretir olduğunu göstermiştir. Dura sıkıştırma zarar olmamalıdır. </li><li> bölgeyi temizleyin ve hemostatik jelatin sünger parçaları ile hemostaz sürdürmek.</li><li> Ameliyat başlangıcında cilt kesi kenarlarında altına alınmıştır hemostatik jelatin sünger parçaları çıkarın ve steril 6.0 sütür ve bir iğne tutucu (Şekil 2A14 ve 15) ile cilt kesisi kapatın. </li><li> deri altından enjekte 0.75 mg / kg vücut ağırlığı buprenorfin bir insülin şırıngası (300 ul, 30 g) kullanılarak, steril PBS içinde seyreltilmiş (Şekil 2A16). </li></ol> 6. Ameliyat Sonrası Bakım <ol><li> burun maskesi fareyi çıkarın ve anestezi kapalı giyer ve fare (1-3 saat tipik yeterlidir) uyarı hale gelinceye kadar 30 ° C&#39;de sıcaklık kontrollü bir odacık sette yerleştirin. </li><li> Intraperitonal anne (8 g / kg vücut ağırlığı) Diazepam (Şekil 2B17) enjekte edilir. Bu, bu riski en yüksek olduğu, ilk gece boyunca yamyamlık riskini ortadan kaldırır bir hissizlik yaratıyor. </li><li> çöp opere fare dönün. </li><li> çöp l isearge (&gt; 12 yavru), süt için rekabeti azaltmak için ameliyat edilmemiş yavruların bazı boyut olarak farklı ise tercihen daha büyük hayvanlar, kaldırın. çöp boyutu yaklaşık 9 yavrular ise ameliyat yavruların anne bakımı ICR doğrultusunda en iyisidir. </li><li> ağrı tedavisi için, bir insülin şırınga (300 ul, 30 G) kullanılarak, postoperatif ilk günlerinde Buprenorfin (0.75 mg / kg vücut ağırlığı) subkütan günde bir kez uygulayın. deri altına enjeksiyon için uygun bir birim 30-50 ml. Yenidoğan fareler ses çıkarma ve ajitasyon ağrı iyi göstergeleridir. </li><li> beslenme, vücut ağırlığı, dehidratasyon, ağrı, yara iyileşmesi, idrar tutma ve enfeksiyon durumunu değerlendirmek için bir puan sayfasını kullanarak yaralı farelerin günlük muayene gerçekleştirin. Elde edilen skora göre, anormal beslenme halinde steril pediyatrik beslenme solüsyonu (Tablo 1 # 18) enjeksiyonu gibi, özel bir dikkat sağlar. Ayrıca skor levha0; insani uç nokta kriterlerini tanımlar. yaralı yavrular reddetmek değil bir anne iyi bakıcı olduğunu. </li><li> fonksiyonu sağlanana kadar mesane disfonksiyonu olağandışı bir durumda, günde iki kez mesane masaj uygulayın. Bu, bir yandan bir yatar pozisyonda fare yerleştirerek ve parmak kullanarak postero-kaudal yönde hafifçe alt karın masaj yapılır. </li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu yazıda P1 farelerde bir klip oluşturulan SCC yaralanma prosedürleri tarif edilmektedir. Aynı prosedürler, daha sonraki aşamalarda gerçekleştirilebilir. Sıkıştırma yaralanması P5, P7, P9 ve P12 (Züchner, et al., Hazırlama yazısı) başarılı bir şekilde gerçekleştirilmiştir. Tüm doğum sonrası aşamalarında, genel anestezi saf oksijen buharlaşmış izofluran ile elde edilir, ancak anestezi sonuç yaş büyük ölçüde bağlıdır. Lokal anestezi protokolü girmiştir önce P1-P4 başlangıç ​​girişimleri, yetersiz sedasyon ve aşırı doz arasındaki dar doz-etki penceresine derin ve uzun süreli sedasyon elde etmek zordu. Buna ek olarak, yeni doğmuş hayvanlarda izofluran bir nörotoksik etkisi ile ilgili endişeler 27-30 ortaya atılmıştır. izofluran bir arada ve daha derin ve daha istikrarlı anestezi lokal anestezik Bupivakain sonuçları 2-3 faktöründe bir izofluran doz azaltılması izin verirken. anestezi Farklı türlerisia 31,32 cryoanesthesia dahil olmak üzere, yeni doğan kemirgenler için tarif edilmiştir, ama cryoanesthesia potansiyel bir rahatsızlık etkili ve yeniden üretilebilir bir yaralanma nesil karmaşık hale getirebilir (33,34 tarafından incelenmiştir) kendi nöro-koruyucu bir etkisi vardır. Barbiturat bazlı anestezi sayesinde yetişkin 35,36 göre serum albümin ve vücut yağının düşük seviyelere neonatal farelerde daha düşük verim sahip olduğu kabul edilir. Oldukça invaziv ve travmatik olsa prosedür ameliyat sırasında ölüm oranını kurulduktan sonra, düşüktür. Ancak, ameliyat farelerin kurtarma ve hayatta kalma geliştirmek için özellikle dikkat gerektiren işlem sırasında kritik adımlar vardır. Bir önemli konu ameliyatı hayatta kalmak için en iyi şansına sahip olacak yavrular seçmektir. çöp büyük olduğunda bireysel yavruların beslenme durumu değişir. Ameliyat sırasında meydana kaçınılmaz kanama ek olarak, ameliyat yavrular saat harcamakuzak anneden s ve genellikle ertesi sabah önce süt içmeyin. Nedenle daha önce, mide süt belirli bir miktarda yavrular seçmek için bir avantajdır. Bu P0 dan P7 karın deri yoluyla kolayca görülebilir. ilk gece boyunca çalışan yavru anne tarafından cannibalized olma büyük bir risk altındadır. daha ameliyat farelerin yarısından bu modelin ilk gelişimi sırasında kafes içinde kan açık işaretleri ile, ertesi sabah eksik. Kemirgenlerde Necrophagy, yamyamlık ve infanticide yıllardır 37-40 için çalışılmıştır. Bu çalışmada, yamyamlık sadece bir kez tanık oldu, ama kafes iade edildi yavrular gece boyunca doğal nedenlerle ölüm imkansız gibi görünen böyle iyi durumda genellikle çünkü necrophagy daha muhtemel bir açıklama olarak kabul edildi. Bu kaygı ve saldırganlık i azaltmak için böyle Diazepam gibi geri dönüşümlü farmakolojik ajan kullanma fikrini istenirn (41 tarafından gözden) annesi. Diazepam intraperitoneal ölçüde daha az% 20 fazla% 60 ilk gece boyunca mortalite bırakarak, durumu düzeldi. Ameliyat sonrası geri dönüş aşağıdaki itlaf ve mümkün olduğunca çöp kadar az bozarak çöp boyutunu küçültme ameliyat hayvanlar yararlanabilir ek unsurlardır. Ancak, anne ile sadece çalışan yavrular bırakarak yararlı değildir. / Çalıştırılan ameliyat edilmemiş yavruların en iyi denge hattına göre değişir, ama 3-4 ameliyat edilmemiş yavrular ile birlikte 4-5 çalıştırılan yavrular (yaralanma veya sahte) bırakarak ICR ve SCID-ICR farelerinde için en iyi sonuçları verdi olabilir. Genel anlamda, bu yenidoğan SCI modelinin ana sınırlama yenidoğan omurilik yetişkin SCI modellerden elde edilen karşılaştırılabilir deney sonuçlarını temin edemeyebilir ve böylece yetişkin omurilikten birçok açıdan farklıdır ve olmasıdır. Bu farklılıklar genel boyutunu içerir veomurilik hacmi, hücre sayısı, az temsil gibi oligodendrositler olgunlaşmamış bağışıklık tepkilerinin ve olgun olmayan nöronal devreler gibi özel hücre tiplerinin. Bu modelde deneylerden elde edilen sonuçları dikkatlice düşünülmelidir. Öte yandan, model, pediyatrik MSY nispeten daha az araştırılmıştır senaryo için de geçerlidir. Ayrıca, yetişkin SCI modellerle ilgili belirgin zayıflığı yeniden eğer yetişkin omurilik minimal kaybolmamış olsa, terapötik alt tabakayı temsil edebilecek, plastisite mekanizmalarının aydınlatılmasını izin verebileceği potansiyel gücü de. Yenidoğan ya da embriyonik koşullarının eski haline az gelişmiş hücre veya doku implantasyon yoluyla veya daha önceki gelişim özellikleri erişkin doku doğurmak tepkin maddeler ile muamele ile uygulanabilir olduğu düşünülebilir. Perinöronal ağları ortadan kaldırmak için enzimler kullanarak ikinci bir yaklaşım 42,43 örneğidir. alınmıştır, örneğin, transseksiyon, hemiseksiyona, Kırıcılar, cihazları etkileyen açısından vs balon sıkıştırma, forseps ezmek, statik ağırlık sıkıştırma, bu yönde çabalar SCI modellerinde sonuçlandı önemli bir yönüdür (44 tarafından gözden) hız, kuvvet ve süre gibi darbe birden fazla parametre manipüle edilebilir yetişkin kemirgenler. Başka bir yaklaşım, daha az ekipman içeren, Kerr-Lougheed anevrizma klibi 45,46 bir değişiklik kullanır. çarpma klip taklit eşzamanlı iskemi bazı derecesine sahip bir sıkıştırma yaralanma oysa bir kafa travması taklit Bunlar 2 yaklaşımlar tamamlayıcı niteliktedir. Çünkü önemli boyutu kısıtlamaları ve yenidoğan farelerin daha açığına, yüksek mortalite uzun ameliyatlar yanı sıra devel maliyetleri ile ilişkilidaha küçük ölçekli ekipman oping, bir çarpma oluşturulan çürük yaklaşımı yerine bir klip oluşturulan sıkıştırma geliştirmek için seçildi. Bu yenidoğan farelerin 1 vertebral kolonun boyutuna uyması için piyasada mevcut olan anevrizma mini klip uyarlayarak gerçekleştirildi. Bir stoper ekleme standart sıkıştırma genişliği sağlar ve sürece klibin gerginlik stoper sınırına kadar sıkıştırır olarak, asgari genişliği statik aşamasında sıkıştırma kuvveti biraz farklı olmalıdır. Bu kullanım ömrü boyunca klip Gerilim değişimleri değişir çünkü ne standart değil, dinamik aşamasında sıkıştırma hızıdır. sıkıştırma statik faz dinamik faz daha uzun sürer ve omurilik dokusu mini klip bıçağa karşı bir karşı çok uygular önermek için orada küçük olduğu için yaralanmanın şiddeti en fazla bağımlı olması muhtemeldir statik faz. Bununla birlikte, bu test edilmesi gerekmektedir. hasarşiddeti statik sıkıştırma kuvveti ve süresi, sıkıştırma ve dekompresyon hızı, mini klip pozisyon ve aynı sitede yapılan kompresyon sayısı dahil olmak üzere birçok faktöre bağlıdır muhtemeldir. Bu nedenle, bu parametreleri kombinasyon varyasyonu zayıftan ciddi yaralanma şiddeti bir spektrum oluşumu gerçekleşebilir. Değişkenliği potansiyeline rağmen, bizim daha önce yayınlanmış bir çalışmada 1 biz histolojik, fizyolojik ve davranışsal düzeyde tutarlı sonuçlar elde yüzden kabul edilebilir standardizasyon elde etmek zor olduğunu önermek az şey vardır. Biz çalışmamızda Şekil 5&#39;te gösterildiği gibi hava-adımlama gibi davranışsal testler de dahil olmak üzere, her düzeyde doğrulama birden fazla yöntem kullanılır unutmayın. Bu yenidoğan SCI modelinde yaralanma akson belli bir oranda yedek parça ve böylece yeniden modelin yoluyla adaptif plastisite ortaya çıkarmak için elverişli bir durum sağlarbağışladı bağlantıların g ve yeni devrelerin oluşumu. yenidoğan fare de birçok deneysel yöntemlerle soruşturma için uygundur Üstelik, davranış testleri, retrograd ve anterograd aksonal izleme, immünhistokimya, elektrofizyoloji ve yüksek olmak üzere entegre bir yaklaşımla fonksiyonel iyileşmeyi ve adaptif plastisite, incelemek için bu modeli kullanmak mümkündür -throughput optik kayıt 1. Bir örnek olarak, biz ex vivo Wholemount beyin sapı hazırlıkları ve yaralı omurilik 1 yüksek verimli kalsiyum görüntüleme kullanarak belirli inen girişlerinin seviyesinde ağ yeniden modelleme göstermek için bu bütünleştirici yaklaşımın yararlandı. Bu spinal nöronlar belirli alt popülasyonlar arasında sinaptik bağlantıların biçimlenme değerlendirmek için nöro-optogenetic ve optogenetic farmakoloji araçlarını kullanarak daha itilebilir.

Son on yılda, farklı omurilik yaralanması (SKY) modellerinden elde edilen artan kanıtlar, omurga ağlarının fonksiyonel iyileşmeye katkıda bulunmak için kendiliğinden yeniden düzenlenebileceğini göstermiştir1-9. Sonuç olarak, adaptif plastisite, SCI araştırmalarında önemli bir konu haline gelmiştir. Plastisitenin, korunmuş aksonların yeniden büyümesini, yeni akson kollaterallerinin filizlenmesini ve yeni sinaptik bağlantıların oluşumunu kapsadığı gösterilmiştir. Bu bilgilerin çoğu yetişkin hayvanlarda yapılan davranışsal veya anatomik çalışmalardan elde edilmiştir. Erişkin omurilik çalışmalarının önemli bir sınırlaması, yenidoğan hazırlıklarında daha kolay olan yüksek verimli fizyolojik değerlendirme yapmanın zorluğudur1. Önemli bir fark, yetişkin beyin sapı ve omuriliğin tam montajlı ex vivo preparatlarının düşük canlılığa sahip olmasıdır. Bir diğeri, yetişkin omurga dokusunun daha kalın ve miyelinli olduğu için ışığa karşı daha opak olmasıdır. Her ne kadar in vivo görüntülemedeki son gelişmeler (bkz. örneğin, 10-12) bu sorunların kısmen üstesinden gelebilse de, belirli bir beyin sapı-omurilik hazırlığı boyunca birden fazla bölgede istenen herhangi bir dorsoventral derinlikte yüksek verimli görüntüleme olasılığı şu anda sadece yenidoğanlarda mümkündür. Yenidoğan omuriliğindeki akson miyelinasyonunun olgunlaşmamış durumu, yüksek verimli ex vivo optik kaydı kolaylaştırır, böylece fonksiyonel sinaptik bağlantıların dinamik bir değerlendirmesineizin verir 13-17. Genetik olarak kodlanmış kalsiyum raportörleri ve optogenetik stimülasyon ve farmakoloji araçlarıyla birleştirildiğinde, optik yaklaşımlar, adaptif plastisitenin altında yatan mekanizmaların daha derin bir şekilde anlaşılmasına katkıda bulunabilir.
Tüm omurilik yaralanmalarının %1-10'unun bebekleri ve18-22 yaş arası çocukları etkilediği tahmin edilmektedir. Erişkin OY'nin aksine, pediatrik OY'de patogenez ve spontan iyileşme potansiyeli daha az çalışılmıştır. Bu nedenle, bir neonatal OYG modelinin kullanılması, pediatrik OYB hakkında daha fazla bilgi sağlayabilir ve ilgili patogenetik ve iyileşme mekanizmalarının daha iyi anlaşılmasına katkıda bulunabilir. Ayrıca, yetişkin omuriliğinde fonksiyonel iyileşmeyi destekleyen SCI sonrası plastisitenin, en azından kısmen, akson büyümesi, dallanma ve yeni sinapsların oluşumu gibi merkezi sinir sisteminin gelişimini yöneten aynı mekanizmaları içerdiğine inanılmaktadır23-26. Bu nedenle, bir neonatal SCI modelinin kullanılması, yetişkin omuriliğinde de işlevsel olan veya yetişkin omuriliğinde potansiyel olarak eski haline getirilebilecek mekanizmalar hakkında önemli bilgiler sağlayabilir (örneğin, fetal hücrelerin veya dokunun implantasyonu veya pluripotent kök hücrelerden de novo olarak oluşturulan doku) iyileşmeyi kolaylaştırmak için.
Bu nedenle, yenidoğan faresi, davranışsal, fizyolojik, anatomik, moleküler ve genetik yöntemlerin bir kombinasyonunun kolayca kullanılabileceği, omurilik yaralanmasını takiben adaptif plastisiteyi araştırmak için bütünleştirici, çok metodolojik bir yaklaşım için bir platform sağlar. Standardize neonatal yaralanma modellerinin oluşturulması, bu tür çalışmaların uygulanmasında önemli bir adımdır.

<table><tbody><tr><td>Plastik şırınga (30 veya 50&nbsp; ml)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Plastik Petri kabı (150 x 25 &nbsp; mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Fortec izofluran buharlaştırıcı</td><td>Cyprane</td><td></td><td>kullanıyoruz ve eski cihaz üretim dışı, daha yeni cihaz için bağlantıyı kontrol edin</td></tr><tr><td>Yaşargil geçici anevrizma mini</td> <td>klipsi&AElig; sculap</td><td>FE681K</td><td></td></tr><tr><td>İnce Delikli Polietilen boru ID 0.58&nbsp; mm, OD 0.96&nbsp; mm</td><td>Smiths Medical</td><td>800/100/200</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran (Forene)</td><td>Abbott GmbH & Co. KG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Marcain (Bupivacain)</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insuline seyringe 0.3&nbsp; ml 30&nbsp; G x 8&nbsp; mm</td><td>VWR</td><td>80086-442</td><td></td></tr><tr><td>Ultra İnce Mikro Bıçak 5&nbsp; mm kesme kenarı</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10315-12</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Graefe Forseps &ndash; 0.5 & nbsp; mm Tip</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>1153-10</td><td>Gerçekten gerekli değil, genellikle dişler çok büyük</td></tr><tr><td>Forseps SuperGrip Düz</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>00632-11</td><td>İki forseps gereklidir</td></tr><tr><td>Spongostan Special 70 x 50 x 1&nbsp; mm</td><td>Ferrosan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vannas Yaylı Makas &ndash; 2&nbsp; mm Bıçaklar Düz</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Vario Klips Forseps Uygulama</td><td>Aesculap</td><td>FE502T</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 6&ndash; 0 (Ethicon)</td><td>Johnson and Johnson</td><td>J105G</td><td></td></tr><tr><td>Diethrich mikro iğne tutucu</td><td></td><td>11-510-20</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic (buprenorfin)</td><td>Schering-Plough</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stesolid (diazepam)</td><td>Actavis</td><td></td><td>Valium</td></tr><tr><td>Pedamix</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klorhexidinsprit (klorheksidin glukonat)</td> olarak da bilinir <td>Fresenius Kabi</td><td>D08A C02</td><td></td></tr></tbody></table>

bir yenidoğan fare omurilik sıkıştırma yaralanması modeli

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal kord yaralanması (SKY), tipik olarak, özellikle omurilik beyinden inen liflerin zarar yoluyla, yıkıcı nörolojik defisit neden olur. Araştırmanın önemli bir akım alan SKY aşağıdaki spontan veya uyarılmış fonksiyonel iyileşmeyi altında yatan adaptif plastisite mekanizmaları üzerine odaklanmıştır. Spontan fonksiyonel iyileşme omurilik geliştikçe nasıl adaptif plastisite değişiklikleri ile ilgili ilginç sorular yükselterek, hayatta daha erken olduğu bildirilmiştir. Bu dinamiğin soruşturma kolaylaştırmak için, yenidoğan fare bir SCI modeli geliştirdik. Model çok az çalışılan pediatrik SCI için önemi vardır. Yetişkin nöral plastisite yaşamın erken 1 nöral plastisite ile aynı mekanizmaların bazıları içerir çünkü bu model potansiyel yetişkin SCI için de bazı alaka olabilir. Burada yenidoğan fare tekrarlanabilir omurilik basısı (SCC) yaralanma üretmek için tüm prosedürü tariferken doğum sonrası (P) gün olarak 1. SCC verilen omurga düzeyde bir laminektomi yapılarak elde edilir hızla sıkıştırmak ve omurilik genişletmek için bir modifiye Yaşargil anevrizma mini klip kullanarak ve sonra (burada göğüs düzeylerde 9-11 açıklanan) . Daha önce açıklandığı gibi, yaralı yenidoğan fareler davranışsal açıkları için test ya da elektrofizyolojik ve yüksek verimli optik kayıt teknikleri 1 kullanılarak sinaptik bağlantı ex vivo fizyolojik analiz için feda edilebilir. Davranışsal ve fizyolojik değerlendirme kullanarak erken ve sürekli çalışmalar 2 hafta içinde tam bir fonksiyonel iyileşme ardından hindlimb motilite dramatik, akut bozulma ve sinaptik bağlantıları 1 inerek belirlenen düzeyinde işlevsel devresi değişikliklerin ilk kanıtları ortaya koymuştur.

Omurilik yaralanması sıkıştırma ve fonksiyon kaybı Ameliyat öncesi, ameliyat ve ameliyat sonrası işlemleri iyileştirmek suretiyle, daha önce tarif edildiği gibi, yeni doğan fare tekrarlanabilir bir sıkıştırma SCI MODEL 1 elde edilebilir. Klibin (Şekil 2B ve C) bir bıçak yerleştirilen polietilen durdurucu klibin tam kapanmasını önler ve yaklaşık 230 mikron sürekli bıçak-arası mesafe tutar. Histolojik sekel ile değerlendirildiği gibi, simetrik bir yaralanma iki kompresyon sonuçları arasında klip yönünü Geri (Şekil 5A ve 1). Hemen mini klip çıkarılmasından sonra, sıkıştırılmış omurilik dokusu hemorajik kontüzyon ve ödem nedeniyle koyulaşır. Eozin ve Hematoksilen zaten bir gün için lekeli yaralı omurilik seri bölümlerinin Gözlemlezyon merkez üssü (Şekil 5A) yaklaşırken Frangoulis yaralanma dokusu yavaş yavaş bozulma ortaya koymaktadır. lezyonda İntraspinal boşlukların varlığı veya kan alışılmadık bir durum değildir. Davranış değerlendirme, ameliyat sonrası açısı olmayan koşullar ağırlığı altında birkaç saat arka bacak yörüngeleri izleyerek, örneğin, sadece laminektomi gerçekleştirildiği sham kontrol fareleri ile karşılaştırıldığında, SCC yaralanmış farelere arka bacak motilite dramatik bir bozulma gösterir (Şekil 5B ve 1) . Fare kendi ağırlığını 1 taşıyan gerektiren diğer davranışsal testler mümkün olana kadar bu test tekrarlanabilir. Ameliyat sonrası mortalite ve kurtarma İntraoperatif mortalite apne ve yeterli anesthesi elde etmek için gerekli izofluran yüksek konsantrasyonda kaynaklanan kardiyak arrest kaynaklanmaktadıra. Cerrahi protokole lokal anestezik bupivakainin Tanıtımı izofluran konsantrasyonu azalmaya izin verir ve böylece önemli ölçüde ölüm oranı azalır. 20&#39;den fazla hayvanlar da dahil olmak üzere son deneysel seride, intraoperatif ölüm nil. Buna karşılık, post-operatif yaşam ağırlıklı anneleri tarafından işletilen farelerin kabul etkilenir. Önemli bir gelişme, kaygı ve saldırganlık çöp 1 ile işletilen fareler dönmeden önce anne Diazepam (IP 8 g / kg vücut ağırlığı) tek bir enjeksiyon sağlayarak indirgenmiş de meydana gelmiştir. ameliyat farelerin kabulü ve ameliyat sonrası iyileşme midede süt varlığı ile izlenebilir. Sarhoş süt var P1-P7 fare mide karın derisi (Şekil 3) ile açıkça beyaz ve görülebilir. ameliyat, sahte kontrol ve ameliyat edilmemiş farelerde beslenme karşılaştırılması injure beslenme durumunun değerlendirilmesi için yararlıdırd fareler. Opere farelere karşı işletilen büyümesini değerlendirilmesi (Şekil 6) ilk post-operatif gün boyunca küçük bir kilo kaybına rağmen, ameliyat farelerin büyüme eğrisi hızla sonra normale olduğunu göstermektedir. mesane disfonksiyonu veya enfeksiyon ile ilişkili mortalite sürece 7 olarak hafta boyunca çalışılan farelerde bile hiç gözlenmemiş. <table border="1"><tbody><tr><td> Şekil l&#39;de sayısı. 2 </td><td> isim </td><td> İmalatçı / Sağlayıcı </td><td> Referans # </td><td colspan="3"> Bağlantı </td><td> Yorum </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Plastik şırınga (30 ya da 50 mi) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td> Plastik Petri kabı (150 x 25 mm) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td> Fortec izofluran buharlaştırıcı </td><td> Cyprane </td><td></td><td colspan="3"> http://www.mssmedical.co.uk/products/new-vaporisers/ </td><td> Biz kullanmak ve üretim dışında eski cihaz, yeni cihaz için linki kontrol </td></tr><tr><td> 4a </td><td> Yaşargil geçici anevrizma mini klip </td><td> Aesculap </td><td> FE681K </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 4b </td><td> İnce delik polietilen kılcal boru kimliği 0.58 mm OD 0.96 mm </td><td> Smiths Medical </td><td> 800/100/200 </td><td colspan="3"> http://www.smiths-medical.com/industrialproducts/8/39/ </td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td> Izofluran (Forene) </td><td> Abbott GmbH &amp; Co. </td><td></td><td colspan="3"> http://www.life-sciences-europe.com/product/forene-abbott-gmbh-wiesbaden-group-narcotic-germany-west-2001-1858.html </td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td> Marcain (Bupivakain) </td><td> AstraZeneca </td><td></td><td colspan="3"> http://www.astrazeneca.co.uk/medicines01/neuroscience/Product/marcaine </td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> Insülin şırınga 0.3 ml 30 G x 8mm </td><td> VWR </td><td> 80086-442 </td><td colspan="3"> https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4646138 </td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td> Ultra İnce Mikro Bıçağı 5 mm kesme kenarı </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 10.315-12 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat ve suchkatalog = 0019900000 ve reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td> Extra Fine Graefe Forceps - 0.5 mm İpucu </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 1153-1110 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat ve suchkatalog = 0055700000 ve reloadmenu = 1 </td><td> gerçekten gerekli değil, sık sık dişleri çok büyük </td></tr><tr> &lt;td&gt; 10 </td><td> Forseps Supergrip Düz </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 00.632-11 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat ve suchkatalog = 0053500000 ve reloadmenu = 1 </td><td> İki forseps gereklidir </td></tr><tr><td> 11 </td><td> Spongostan Özel 70 x 50 x 1 mm </td><td> Ferrosan </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 12 </td><td> Vannas Bahar Makas - 2 mm Bıçaklar Düz </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15.000-03 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat ve suchkatalog = 0012800000 ve reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 13 </td><td> Vario Klip uygulama Forseps </td><td> Aesculap </td><td> FE502T </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 14 </td><td> Vicryl 6-0 (Ethicon) </td><td> Johnson &amp; Johnson </td><td> J105G </td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 15 </td><td> Diethrich mikro iğne tutucu </td><td></td><td> 11-510-20 </td><td colspan="3"> http://trimed-ltd.com/Products/Suture-Instruments/Micro-Needle-Holders-With-Tungsten-Carbide-Inserts/Ref-11-29.html </td><td></td></tr><tr><td> 16 </td><td> Temgesic (Buprenorfin) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 17 </td><td> Stesolid (diazepam) </td><td> Actavis </td><td></td><td colspan="3"></td><td> Ayrıca Valium şekilde bilinmektedir </td></tr><tr><td> 18 </td><td> Pedamix </td><td> Fresenius Kabi </td><td></td><td colspan="3"> http://www.helsebiblioteket.no/retningslinjer/pediatri/mage-tarm-lever-ern%C3%A6ring/parenteral-ern%C3%A6ring </td><td></td></tr><tr><td> 19 </td><td> Klorhexidinsprit (klorheksidin glukonat) </td><td> Fresenius Kabi </td><td> D08A C02 </td><td colspan="3"> http://www.felleskatalogen.no/medisin/klorhexidinsprit-fresenius-kabi-klorhexidinsprit-farget-fresenius-kabi-fresenius-kabi-560639 </td><td></td></tr></tbody></table> Yenidoğan fare bir klip odaklı omurilik sıkıştırma yaralanma üretmek için alet ve ekipman Tablo 1. listesi. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig1.jpg" /> Anestezi kurulum Şekil 1. Şematik. Bu şematik ilk anestezi ve cerrahi sırasında sürekli anestezi için bir burun maskesi aygıtı için bir uyku odası ile neonatal fare için tasarlanmış anestezi kurulum, sunar. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig2.jpg" /> Şekil 2. Temel araçları ve sıkıştırma klibi. (A) işlem sırasında kullanılan araçlar. Sayılar Tablo 1&#39;de. (B ve C) manuel olarak yaklaşık 150 mikron kalınlığında aşağı kesilmiş her bıçağın ucu ile bir Yaşargil geçici anevrizma mini klip kullanılan açıklama karşılık gelmektedir. Polietilen boru (Tablo 1), bir dilim yapılmış bir durdurucu klibin tam kapanmaması için bıçakların biri üzerine yerleştirilir. Ölçek çubuğu: 2 mm. Uygulama: klip aplikatör (A # 12); St:. Tıpa <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig2large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53498/53498fig3.jpg" /> Yenidoğan ICR fare spinal seviyede preoperatif değerlendirme için Şekil 3. Landmark. (A) s beyaz süt ile P1 ICR fare Yanal görünümü<html> tomach. Midenin rostral kısmı T12-T13 spinal seviyeye gelir. (B) yüzükoyun pozisyonda anestezi altında P1 ICR fare. (A) &#39;da daha görselleştirmek için daha zor olmasına rağmen, süt dolu mide tanınabilir. Midenin rostral kısmı T12-T13 spinal seviyesini gösterir. Ölçek çubukları: 0.5 cm. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53498/53498fig4.jpg" /> Paravertebral kasların Şekil 4. dorsal laminektomi. (A) Diseksiyon. Bu yaşta omurilik süreç gelişmemiş olduğunu unutmayın. İnce makas ile lamina (B) Enine kesit. Lamina ve dura arasında ince forseps bir kanadın (C) giriş. giriş noktası ok ile gösterilir. (D) lamina çıkarılması. Ölçek çubuğu: 2 mm. dosyaları / ftp_upload / 53498 / 53498fig5.jpg &quot;/&gt; Şekil 5. histolojik ve P1 spinal kord kompresyon yaralanması sonrasında davranışsal sonuçları. (A) hasar merkezinden farklı mesafede (yaralanma sonrası 1 gün) yaralı bir fare omurilik bölümlerde Eozin ve Hematoksilen boyama. (B) ön ayakları ve hindlimb yörüngeleri Temsilcisi izleri yaralanma sonrasında veya sahte kontrol laminektomi 6 saat sonra gözlemledik. üst izleri bir hayvan yan görünümden inceledi yörüngeleri temsil etmektedir. altındaki izleri hayvanın ventral açıdan bakıldığında yörüngeleri temsil etmektedir. Ayrıca 1 Bkz. Ölçek çubuğu: 250 mikron. DH: dorsal boynuz; L, sol; R: right; SCC: omurilik basısı; VH:. Ventral boynuz <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig5large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt = &quot;Şekil 6&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 53498 / 53498fig6.jpg&quot; /&gt; Doğum sonrası güne 9 doğum sonrası gün 1 ameliyat edilmemiş ve SCC yaralı farelerin kilo alımını gösteren Şekil 6. Karşılaştırmalı büyüme eğrileri. Histogram.

Bu makalede, yenidoğan faresinde tekrarlanabilir omurilik kompresyon yaralanması (SCI) oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Model, spontan fonksiyonel iyileşmenin altında yatan adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek için avantajlı bir platform sağlar.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Bu prosedürün genel amacı, neonatal bir farede tekrarlanabilir bir omurilik sıkışma yaralanması gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle farenin derin şekilde anestezi edilmesi, ardından omuriliği açığa çıkarmak için dorsal laminektomi yapılmasıyla gerçekleştirilir.Ve son olarak, kompresyon yaralanması oluşturarak. Yakın zamanda spinal kord yaralanması için bir neonatal fare modeli oluşturduk ve neonatal farelerin şaşırtıcı derecede adaptif plastisite sergilediğini kanıtladık. İyileşmenin altında yatan bu mekanizmanın incelenmesi, spinal kord yaralanması tedavisinde kullanılabilecek önemli bilgiler sağlayabilir.Bu videoda, bir günlük farede spinal kord kompresyon yaralanmasının nasıl gerçekleştirileceğini göstereceğiz. Bu cerrahi işlem; anestezi, laminektomi ve klipsle uygulanan iki epidural kompresyonu içermektedir. Cerrahi işlem için hazırlık.Cerrahi işlem stereo mikroskop altında gerçekleştirilir. Mikroskobun altına bir ısıtma pedi yerleştirin. Cerrahi sırasında ani ölümü önlemek için yavrunun sıcak tutulması kritik önem taşır.Isıtma pedinin üzerine cerrahi bir örtü veya büyük bir temiz yumuşak laboratuvar kağıdı yerleştirin. Cerrahi öncesi analjezi için, steril PBS ile seyreltilerek final konsantrasyonu 2.5 mg/mL olacak şekilde lokal anestezik Marcaine ile doldurulmuş, 0.3 mL'lik 30 gauge bir insülin şırıngası hazırlayın. Cilt insizyonu, kasların uzaklaştırılması ve laminektomi için mikro bıçak, ince pens ve ince iridektomi makası kullanın.Burada, uçlarını diş oluşturacak şekilde büktüğümüz pensetler kullandığımıza dikkat edin. Dişlerin çok küçük olması gerektiği için bunlar, ticari olarak satılan dişli pensetlerden daha iyi sonuç vermektedir. Omurilik kompresyonu için, daha sonra açıklayacağımız, özel olarak modifiye edilmiş bir Yasargil Temporary Aneurysm Miniclip kullanın.Klibin tamamen kapanmasını önlemek için bir tıpa yapmak amacıyla kısa bir plastik kapiler tüp ve klibi yerleştirmek için bir klip aplikatörü de gereklidir. Sütürleme için bir iğne tutucu ve ipi kesmek için küçük makas kullanın. Ağrı tedavisi için Temgesic'i steril PBS ile 0.03 mg/mL olacak şekilde seyreltin.Omurilik yaralanması, bir Yasargil Geçici Anevrizma Miniclip'i kullanılarak uygulanan klips kaynaklı kompresyonu içerir. Kullanımdan önce, klipsin kanat kalınlığının bir bileme taşı kullanılarak 150 micrometers seviyesine indirilmesiyle mekanik olarak modifiye edilmesi gerekir. Cerrahi işlemden hemen önce, kısa bir plastik tüp parçası kesin ve bunu klips kanatlarından birinin üzerine yerleştirin.Tüp, klipsin tamamen kapanmasını önlemek için bir tıpa görevi görür. Anestezi ve analjezi. Gaz anestezisi için, bir oksijen tankına bağlı bir suprane vaporizer kullanıyoruz.İzofluran, saf oksijen içinde buharlaştırılan anesteziktir. İzofluran-oksijen karışımını fareye dağıtmak için yenidoğanlara uygun bir burun maskesi hazırlamanız gerekir. Yenidoğan fareler çok küçük olduğundan, maske, buharlaştırıcı çıkışına bağlanan plastik tüpler için giriş görevi gören bir şırınga ucundan yapılabilir.Maskenin yan tarafına, ucu ya toplama ünitesi olan düzenlenmiş bir vakum pompasına ya da sadece bir çeker ocaka bağlanan bir tahliye tüpünü takmak için küçük bir delik açın. 150 by 25 mililitrelik plastik bir petri kabı kullanarak bir anestezi taşma haznesi oluşturun. Bir tarafına, farenin kafasının sığabileceği büyüklükte bir delik açın.Karşı tarafa, plastik tüp çapında iki küçük delik açın. Son olarak, kabın üst kısmına diğerlerinden daha küçük bir tahliye deliği açın. 250 microliter pipet ucunun ucunu kesin ve bu son deliğe yerleştirin.Pipet ucu, hafif negatif basınç için ayarlanmış bir vakum cihazına bağlı tahliye tüpü için bir konnektör görevi görür. Plasticine kullanarak maskeyi, farenin başı için ayrılan deliğin hemen içine sabitleyin. Bant veya Plasticine kullanarak, tüplerin uygun deliklere iyi yerleştirildiğinden emin olarak plastik boruları hazne tavanına sabitleyin.Hazneyi mikroskobun altındaki cerrahi örtünün üzerine yerleştirin. Tüm sistem bu şemada gösterilmiştir. Buharlaştırıcının çıkışına üç yollu bir musluk yerleştirilir.Burada, uyku odasına giden yol açıktır, maskeye giden yol ise kapalıdır ve sedasyonu başlatmak için fare uyku odasına yerleştirilebilir. Üç yollu musluğun sağa döndürülmesi gazın maskeye akmasını sağlar ve uyku odasına giden yolu kapatır. Bu konfigürasyonda fare maskeye aktarılabilir.Gaz sızıntısı, taşma odasından vakumla uzaklaştırılır. Deriden görülebilen beyaz renk ile kanıtlandığı üzere, yakın zamanda süt emmiş bir fare yavrusu seçin. Yavruyu uyutma odasına yerleştirin ve hızlı bir sedasyon sağlamak için %4 oranında buharlaştırılmış İzofluran uygulayın.Yavruyu maskeye aktarın. Anestezik gaza yeterli düzeyde maruz kalmasını sağlamak için farenin burnunu maskenin içine dikkatlice yerleştirin. Gazı maskeye yönlendirmek için üç yollu musluğu çevirin.Cerrahinin planlanan bölgesine, 2,5 mg/mL konsantrasyonda 50 µL Marcaine deri altına enjekte edin. Kan damarlarına kolayca denk gelinebileceği ve Marcaine'in bir damara verilmesinin ölümcül olduğu unutulmamalıdır, bu nedenle çok derine enjekte etmemeye dikkat edin. Fazla Marcaine'i küçük, steril bir kompresle silerek temizleyin.Dorsal laminektomi. İzofluran konsantrasyonunu yüzde bir ile ikiye düşürün. Birkaç dakika sonra, cildi bir mikro bıçakla delin ve cildi nazikçe rostral-kaudal yönde çekerek sekiz ila dokuz milimetrelik bir transfer açıklığı oluşturun.Bir transfer açıklığı çok daha uygundur ve laminektomi işlemini gerçekleştirmek için daha iyi lateral erişim sağlar. İnsizyonun rostral ve kaudal bölgelerine subkutan olarak spongistatin parçaları yerleştirerek, deri insizyonunun kenarlarını alttaki dokudan uzaklaştırın. Omurgayı açığa çıkarmak için prevertebral kasları ince makasla kesin.Yenidoğanlarda spinal prosesin tam olarak gelişmediğine dikkat edin. Orta hattı belirleyin ve laminayı ince makasla transvers olarak kesin. Çok derin kesmemeye özen gösterin, çünkü bu durum dura matere ve hatta omuriliğe potansiyel olarak zarar verebilir.İnce bir pensetin bir ucunu dikkatlice lamina ile dura arasına yerleştirin. Penseti kapatarak laminayı kavrayın ve dura tabakasına zarar vermeden, lamina ayrılana kadar dikkatlice kaldırın. Bir ila iki segmentlik bir laminektomi elde etmek için bu adımı iki ila üç kez tekrarlayın.Küçük spongistatin parçaları kullanarak kanamayı kontrol altına alın. İnce pensleri rongeur olarak kullanarak, modifiye edilmiş anevrizma miniklibini vertebral kanal içine yerleştirmek için yeterli alan oluşturmak amacıyla faset eklemlerinin bölümlerini bilateral olarak çıkarın. Bu adım, genellikle küçük spongistatin parçalarıyla kontrol edilebilen kanamalarla sonuçlanır.Görünürlüğü artırmak için bazen 37 °C sıcaklıktaki steril PBS ile durulamak avantajlıdır. Omurilik sıkışma yaralanmasının oluşturulması. Klempi açın ve uçlarını, faset eklemler ile omurilik arasındaki boşluklarda olacak şekilde omuriliğin her iki yanına yerleştirin.Bıçakların, omuriliğin ventral kısmını kapsayacak kadar derin yerleştirildiğinden emin olun. Klibin geriye doğru kaymasını önlemek için, aplikatörü sabit tutarak klibi hızla kapatın. 15 saniye sonra, klibi hızla serbest bırakın.Yarayı spongistatin kullanarak temizleyin. Simetrik kompresyon sağlamak için bıçakların yönünü tersine çevirin ve zıt yönde 15 saniye boyunca ikinci bir kompresyon gerçekleştirin. Sütürleme. Cerrahinin başında deri altına yerleştirilen spongistatin parçalarını çıkarın ve deriyi 6.0 sütürlerle kapatın.30 gauge insülin şırıngası ile 0,03 mg/mL konsantrasyonundaki Temgesic'ten 0,05 mL'yi deri altına enjekte edin ve yavruyu birkaç saat boyunca 30 °C sıcaklık kontrollü bir ortama yerleştirin. Ameliyat sonrası ilk gece boyunca annenin operasyon geçirmiş yavruya karşı agresif davranışlarını azaltmak için, temiz PBS içinde seyreltilmiş 0,1 mg/mL Diazepam çözeltisi hazırlayarak kg başına 8 g dozunda intraperitoneal enjeksiyon uygulayın. Sonuçlar.Bu grafikte gösterildiği üzere, omurilik kompresyonundan altı saat sonra, alt torasik seviyelerde, yaralanan farelerin arka ekstremiteleri felç olmuşken ön ekstremiteleri olmamıştır. Yalnızca laminektomi yapılan sham kontrol hayvanlarında ise hem arka hem de ön ekstremiteler oldukça hareketlidir. Omurilik kesiti, yaralanma bölgesinde kalıntı kan göstermektedir.Ek olarak, doku şeffaftır ve bu durum, genellikle birkaç gün sonra bir boşluk oluşumuna yol açan doku kaybına işaret eder. Sonuç. Bu videodan sonra, neonatal bir farede omurilik sıkışma yaralanmasının nasıl oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Neonatal fareler kullanmanın avantajı, yetişkin farelerde kullanılamayan ve adaptif plastisiteyi ele alan spesifik yöntemleri kullanabilmemizdir.Ayrıca bu model, kök hücre transplantasyonu gibi terapötik yaklaşımların test edilmesi için bir platform sağlar.

a-neonatal-mouse-spinal-cord-compression-injury-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Elzat, E. Y. Y., et al., Minimal İnvaziv Tekniğe Dayalı Bir Fare Kontüzyonu Omurilik Yaralanması Modelinin Oluşturulması. J. Vis. Uzm. (2022). Bu video, bir omurilik yaralanması koaksiyel platformu kullanılarak bir fare modelinde T9 seviyesi omurilikte bir kontüzyon yaralanmasını indükleme yöntemini göstermektedir. T9 seviyesindeki omuriliğe bir ağırlık düşer ve bu da hemen doku renk değişikliğine ve şişmeye neden olan bir kontüzyon oluşturur.

Omurilik Yaralanması Koaksiyel Platform Kullanılarak Bir Fare Modelinde Omurilik Kontüzyonunun İndüklenmesi

Kaynak: Lakshman, N.,  et al. Minimal Omurilik Yaralanması Fare Modelinde Endojen Nöral Kök Hücre Aktivasyonunu Değerlendirmek İçin Bir Nörosfer Testi. J. Vis. Uzm. (2018). Bu video, bir fare omurilik yaralanması modelinde nöral kök hücrelerin (NSC'ler) aktivasyonunu ve göçünü göstermektedir. Omuriliği ortaya çıkarmak için, anestezi uygulanmış bir fareden omurganın torasik bölgesinden bir omur çıkarılır. Daha sonra omuriliğin beyaz maddesinde, merkezi kanalı koruyan bükülmüş bir iğne...

 Nöral kök hücre aktivasyonu ve göçünü incelemek için minimal bir omurilik yaralanması modeli

Kaynak: Kumar, S., et. al. Omurilik Yaralanması Sonrası Basınç Ülserlerinin Fare Modeli. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, farelerde omurilik yaralanmasının ayrıntılı bir indüksiyonunu göstermektedir. Anestezi uygulanan fare, T9-T10 omurlarını ortaya çıkarmak için diseke edilir ve dikenli süreçleri çıkarılır. Açıkta kalan omurilik daha sonra yaralanmaya neden olmak için kesilir. Cerrahi alan daha sonra kapatılır ve farenin iyileşmesine izin verilir.

Omurilik Yaralanması Olan Bir Fare Modeli Oluşturma

Omurilik yaralanması ciddi morbidite ve mortalitesi yüksek bir neden travmatik bir durumdur. Bu çalışmada detaylı olarak nöral kök hücrelerin bir nakli ardından farelerde omurilik yaralanması bir kontüzyon modelini tarif.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Omurilik yaralanması modelleri yüksek oranda tekrarlanabilir olmalıdır. Omurilik yaralanmasının kalibre edilmiş forseps kompresyon modelinin, murin omuriliğinde tekrarlanabilir yaralanmalar oluşturmak için kullanımı kolay bir cerrahi yöntem olduğunu gösterdik.

Omurilik Sıkıştırma Yaralanma Kalibre Forseps Modeli

Yetişkin farelerde tutarlı bir kontüzif omurilik yaralanması üretebilen doku yer değiştirme tabanlı kontüzyon omurilik hasarı modelini sunuyoruz.

Farelerde Doku Yerinden Olma Esaslı Taşan Spinal Kord Yaralanması Modeli

Bu protokol, fare modelinde stabil traneksiyon tipi omurilik yaralanmasıinin indüksiyonu için hassas bir laminektominin nasıl oluşturulacak larını, omurilik yaralanması araştırmaları için en az ikincil hasarın nasıl yaratılabildiğini açıklamaktadır.

Farelerde Tam Traneksiyon Tipi Spinal Kord Yaralanması İndüksiyonu

Minimal invaziv teknikler ve basit bir laboratuvar cihazı, deney hayvanlarına operatif hasarı azaltarak ve anatomik morfoloji bakımına izin vererek omurilik yaralanması modelinin tekrarlanabilirliğini arttırır. Yöntem değerlidir, çünkü güvenilir sonuçlar ve tekrarlanabilir prosedür, hastalık onarım mekanizmalarının araştırılmasını kolaylaştırır.

Minimal İnvaziv Bir Tekniğe Dayalı Bir Fare Kontüzyonu Omurilik Yaralanması Modelinin Oluşturulması

Farelerde merkezi kord sendromunu (CCS) simüle eden mevcut protokol, tekrarlanabilirliği artırmış ve deney hayvanlarında operasyon hasarını en aza indirerek anatomik yapıyı aşırı derecede bozmaktan kaçınmıştır. Bu çalışmadaki strateji, tutarlı sonuçlar üreterek yaralanma mekanizmalarının araştırılmasına izin verdiği için avantajlıdır.

C57BL/6J Farede Santral Kord Sendromu Modelinin Kurulması

Burada sunulan, fareler için değişen derecelerde omurilik yaralanması kontüzyon modellerini doğru bir şekilde üretebilen yeni bir otomatik omurilik yaralanması kontüzyon cihazıdır.

Farelerde Kontüsif Omurilik Yaralanması Modeli için Otomatik Çarpma Tertibatı

Öğrenin, yenidoğan farelerde omurilik sıkıştırma yaralanması modeli oluşturmayı. Bu yöntem, adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek ve omurilik yaralanması tedavileri için önemli bilgiler sağlamak amacıyla kullanılır.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Daha fazla video keşfet