Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

Bu prosedürün genel amacı, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun veya bir MD'nin ayırt edici özelliklerini, incelenmesi kolay bir hayvan modelinde yeniden yaratmaktır. Bu yöntem, genetik değişikliklerin veya farmasötik tedavilerin hastalığı nasıl etkileyebileceği veya hastalığın farklı görüntüleme modaliteleri altında nasıl ortaya çıkabileceği de dahil olmak üzere neovasküler A MD araştırmasının farklı yönlerini incelemek için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, bir kez ustalaştıktan sonra yeniden üretilmesinin kolay olması ve deneylerin hızlı ve verimli bir şekilde yapılmasına izin vermesidir.

Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan bireyler, başarılı olmak için gerekli ince el becerisi ve koordinasyondan yoksun oldukları için mücadele edeceklerdir ve her ikisi de pratikle gelişir. Lazer istasyonu konumunu, lazeri ve yarık lambayı kolayca erişilebilecek bir yere hazırlamak için lazeri açın ve önceden belirlenmiş parametrelere ayarlayın. Burada 75 mikrometre ayarı, spot boyutu, 100 miliwatt güç ve 100 milisaniye süre kullanılır.

Ardından, anesteziyi, hayvan ısıtıcısını, mendilleri, mendilleri ve göz damlalarını lazer operatörünün kolayca erişebileceği şekilde yerleştirin. İlk fareyi uyuşturduktan sonra, yaklaşık üç ila beş dakika boyunca hayvan ısıtıcısına yerleştirin. Tam anesteziyi sağlamak için ayak parmağınızı kıstırın.

Daha sonra sıvı yuvarlanmasının burun aspirasyonunu önlemek için haddelenmiş bir doku mendili kullanın. Her göze 30 mikrolitrelik bir damla tetrakain hidroklorür yerleştirin. Çözeltinin etkili olması için iki dakika bekleyin.

Daha sonra, göz bebeklerini genişletmek için her göze bir damla topikal tropik yardımcı uygulayın. Ve çözümün etkili olması için iki dakika bekleyin. Şimdi fareyi hızlı bir şekilde fare sahnesinin üzerine yerleştirin ve ardından sahneyi yarık lambanın çene desteğine yerleştirin.

Yarık lambayı açın ve en düşük ışık parlaklığına ayarlayın. Farenin göz bebeği genişlemesini değerlendirin. Öğrenci 2,5 ila üç milimetre genişleme elde etmediyse.

Fareyi hayvan ısıtıcısına geri koyun veya göz bebeği genişlemesini takiben ek bir damla tropik yardımcı uygulayın. Fareyi, yarık kirişe yatay olarak dik olacak şekilde platform üzerinde yönlendirin. Fareyi yaklaşık 170 derecelik bir açıda olmayacak şekilde hafifçe çevirin.

Kafa lazer operatörüne daha yakın yönlendirilmiş durumdayken, platform dengesini korurken ve operatörün ince motor manipülasyonları yapması için yeterli alan bırakırken fareyi yarık lambaya mümkün olduğunca yakın konumlandırın. Fare düzgün bir şekilde yerleştirildikten sonra, 25 milimetreye 25 milimetrelik bir cam kapak kızağına bir damla suni gözyaşı solüsyonu uygulayın. Ayrıca, dehidrasyonu önlemek için bu solüsyondan bir damla farenin hedeflenmemiş gözüne koyun.

Kapak kaymasının bir köşesini başparmak ve işaret parmağı arasında tutun ve hem hayvanı hem de operatörün elini desteklemek ve sabitlemek için kalan üç parmağınızı farenin etrafına sarın. Ardından kapağı dikkatlice bastırın. Korneayı düzleştirmek için farenin gözünün üzerine kaydırın.

Işının dağılmasını veya yansımasını önlemek için kapak kızağını lazer ışını yoluna dik olarak konumlandırın. Yarık lambadan bakarken, retina görünene kadar odağı ayarlamak için serbest elinizi kullanın. Retina açık sarı ila kırmızı görünmelidir: Farklı kırmızı kan damarları mevcutken, farenin kafasını veya kapak kaymasını optik sinir gözlenene kadar yavaşça ve dikkatli bir şekilde hareket ettirin.

Optik sinir, ondan yayılan çok sayıda kan damarı ile sarı olacaktır. Ardından lazer odaklama ışınını açın ve göz fundusunun retina pigment epiteline veya RPE'sine odaklanmak için manevra yapın. Odaklama ışını oval veya odak dışı görünüyorsa, yarık lamba odağını veya kapak kaymasını ayarlayın.

Odaklama ışını uygun şekilde ayarlandığında, lazer uygulamasını başlatmak için ayak tetiğini kullanın. Lazer uygulamasını takiben hemen bir kabarcık oluşmalıdır: Puslu sınırları olan lezyonlar veya kanamalı lezyonları olan gözler analizden çıkarılmalıdır. Kabarcık oluşumunu ve odaklanmış bir lazer yanığını gösteren net, keskin bir şekilde tanımlanmış dairesel bir alanı gözlemlediğinizden emin olun.

Kabarcık oluşturmayan lezyonlar CNV'yi uygun şekilde indüklemeyebilir. İstenilen tüm koroidal neovaskülarizasyon veya CNV pozisyonlarında ek lezyonlar oluşturun. Kullanılmadığı zaman lazeri bekleme moduna alın, her lazer uygulamasının konumunu ve sonucunu bir laboratuvar not defterine kaydedin.

Fareyi stabilize etmek için yeni bir kapak kayışı ve diğer elinizi kullanarak farenin ikinci gözü için lazer uygulamasını tekrarlayın. Tüm uygulamaları tamamladıktan sonra, lazeri ve yarık lambayı kapatın, kapak fişini atın ve fareyi hayvanın üzerine yerleştirin. Makroskopik olarak daha sıcak.

Gözde herhangi bir kornea yüzeyi veya katarakt yaralanması olup olmadığını kontrol edin. Kurtarma işleminin ardından fareyi kafesine geri koyun. CNV'ler, burada immünofloresan boyamayı takiben düz monte edilmiş koroidlerin analizi yoluyla ölçülmüştür.

Fit c dekstran etiketlemesi, hayvan safizisinden hemen önce perfüzyon yoluyla yapıldı. Bunu, Resim J.Here'da endotel hücre markörü ile postmortem immün boyamada eşikleme yoluyla alan ölçümü izledi. ISO selektin GS IB dört yapıldı, ardından konfokal mikroskopi ile görüntüleme yapıldı.

KNV lezyonunun FOSS'ta 3 boyutlu rekonstrüksiyonları ve yandan görünümü oluşturuldu. Optik koherens tomografi görüntüleme de KNV lezyonlarını in vivo olarak görüntülemek için kullanıldı. Burada, retinanın kesitsel bir görüntüsü, sarı daire içine alınmış bir CNV lezyonu ile gösterilmektedir.

Lezyonun sarı daire içine alınmış bir FOSS görüntüsü de gösterilmiştir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 10 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, hayvanın uygun şekilde uyuşturulduğundan emin olmak ve ellerinizi desteklenecek ve sabit olacak şekilde konumlandırmak önemlidir.

Bu videoyu izledikten sonra, odaklanmayı nasıl sağlayacağınızı iyi anlamış olmalısınız. Lazer, daha sonra çeşitli şekillerde incelenebilen CNV'yi indüklemek için yanar.