Name: Elektrosprey İyonizasyon kütle spektrometresi ile Dicysteinyl tetrapeptidlerle ile Merkür (II) kompleksinin Bir Çalışma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-08T13:00:01.000+00:00
Duration: 12 min 59 s
Description: Keşfedin, elektrosprey iyonizasyon kütle spektrometresi ile dicysteinyl tetrapeptidlerle merkür(II) komplekslerinin karakterizasyonunu. Bu yöntem, metal iyonu komplekslerinin minimal parçalanma ile analizini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MN-S Ulusal Bilim Vakfı desteği kabul RUI yazarları minnetle Thermo Fisher Scientific LTQ Orbitrap XL kütle spektrometresi kullanımına ilişkin Greensboro, Kuzey Carolina Üniversitesi&#39;nde Triad Kütle Spektrometre Tesisi kabul Che 1011859. verin. Yazarlar bu çalışmaları ile ilgili faydalı görüş ve önerileriniz için Greensboro, Kuzey Carolina Üniversitesi&#39;nden Daniel Todd, Vincent Sica ve Brandie Erhmann teşekkür ederiz.

Not: Kullanmadan önce ilgili tüm malzeme güvenlik bilgi formlarını (MSDS) danışın. Cıva klorür toksik bir kimyasaldır. Onu ve ilgili tüm çözümleri teslim sırasında Kişisel koruyucu ekipmanlar (eldivenler, emniyet gözlükleri ve laboratuvar önlüğü) giyilmelidir. Ağır metaller için belirlenen açıkça etiketlenmiş kimyasal atık şişelerde çözümler atınız. 1. Hazırlık 5 mM gazı alınmış Amonyum format tamponu, pH 7.5 <ol><li> HPLC dereceli su 450 ml amonyum format tamponu 0,1576 g çözündürülür. 1 M formik asit ve 7.5 1 M amonyum hidroksit ile, yukarıda çözeltinin pH ayarlayın. 500 ml&#39;lik bir ölçülü balona bu çözüm aktarın ve 5 mM amonyum format çözeltisinin yapılması için bir kalibrasyon hattına HPLC su ilave edilir. </li><li> Argon ile 10 dakika karıştırıldı ve tasfiye için bir vakum sistemi ile 5 mM amonyum format tamponu gaz çıkışına. İki kez tekrarlayın ve argon altında mağaza çözüm. Kullanılacağı gün, bir 0.2 mikron filtre befor ile tampon çözeltisi filtree kullanımı. </li></ol> Civa (II) klorür çözeltisi 2. Hazırlık <ol><li> 0,2375 g cıva (II) klorür tartılır. 0.035 M cıva (II) klorid solüsyonu elde etmek için 5 mM amonyum format tamponu, 25 ml içinde çözülür. </li><li> Bir 7.5 x 10 -4 M çözelti oluşturmak için 9,785 ml 5 mM amonyum format tampon 0.214 mi, 0.035 M cıva (II) klorür solüsyonu ekleyin. Argon gazı ile 7.5 x 10 -4 M cıva (II) çözeltisi battaniye. </li></ol> CGGC Stok Çözeltisinin Hazırlanması 3. <ol><li> HPLC dereceli asetonitril 0.118 ml dicysteinyl tetrapeptid, CGGC 2.0 mg, çözülür ve daha sonra 1,0647 ml 5 mM amonyum format, pH&#39;ı 5 mM CGGC stok çözeltisi oluşturacak şekilde argon gazı alınmış olan 7,5 tamponu ilave edin. </li><li> 5 mM amonyum oluşumu pH 1275 ul bir 7.5 x 10 -4 M CGGC çözelti vermek üzere 7.5 tampon, 5 mM CGGC stok çözeltisi 225 ul ekle. </li></ol> 4. HazırlıkCıva &#39;(II) ve CGGC çeşitli Reaksiyon Karışımlarının <ol><li> 1 Hazırlanması: civanın 0.5 oranı (II): CGGC çözeltisi <ol><li> 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 5 mM amonyum format, pH 7,5 tampon 255 ul koyun. Amonyum format tamponu ile bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7,5 x 10 -4 M cıva (II) klorür solüsyonu 30 ul ekle. </li><li> 10 saniye için çözüm karıştırın. Sonra 1.5 ml mikrosantrifüj içine 7.5 x 10 -4 M CGGC solüsyonu 15 ul ekleyin. 10 saniye için çözüm karıştırın. Çözelti kütle spektrometresi içine enjeksiyondan önce 10 dakika boyunca bekletin. </li></ol></li><li> Cıva 1 oranında, (II): 1 hazırlanması CGGC çözeltisi <ol><li> 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 5 mM amonyum format, pH 7,5 tampon 240 ul koyun. Amonyum format tamponu ile bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7,5 x 10 -4 M cıva (II) klorür solüsyonu 30 ul ekle. </li><li> 10 saniye için çözüm karıştırın. Daha sonra1,5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7.5 x 10 -4 M CGGC çözeltisi 30 ul ekle. Bölüm 4.1&#39;de tarif edildiği gibi benzer bir şekilde, tekrar edin. </li></ol></li><li> Cıva 2 oranında (II): 1 hazırlanması CGGC çözeltisi <ol><li> 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 5 mM amonyum format, pH 7,5 tampon 210 ul koyun. Amonyum format tamponu ile bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7,5 x 10 -4 M cıva (II) klorür solüsyonu 30 ul ekle. </li><li> 10 saniye için çözüm karıştırın. Daha sonra bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7.5 x 10 -4 M CGGC çözeltisi 60 ul ekle. Bölüm 4.1&#39;de tarif edildiği gibi benzer bir şekilde, tekrar edin. </li></ol></li></ol> CEEC Stok Çözeltisinin Hazırlanması 5. <ol><li> Peptidi eritmek için HPLC dereceli asetonitril 0.145 ml dicysteinyl tetrapeptid, ODAÜ 3.5 mg, eritin. Daha sonra 13,067 mi, 5 mM amonyum format ilave pH argon gazı alınmış olan 7,5 tamponu 0.5 m üretmekM CEEC çözüm. </li><li> Tüm peptid çözünene kadar çözelti vorteksleyin. Bir 7.5 x 10 5 M CEEC çözeltisi vermek üzere bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü, pH 7,5 tampon çözelti, 1.125 mi CEEC 0,5 mM ilave edin ve 0,375 mi mM 5 amonyum format. Vortex karışık kadar. </li></ol> Cıva &#39;(II) ve CEEC Çözüm çeşitli Reaksiyon karışımları 6. hazırlanması <ol><li> 1 preparasyonu: cıva (II) 0,5 oranı: CEEC Çözelti <ol><li> 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 5 mM amonyum format, pH 7,5 tampon 255 ul koyun. Amonyum format tamponu ile bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7,5 x 10 -4 M cıva (II) klorür solüsyonu 30 ul ekle. </li><li> 10 saniye için çözüm karıştırın. Daha sonra bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7.5 x 10 -4 M CEEC çözeltisi 15 ul ekle. Bölüm 4.1&#39;de tarif edildiği gibi benzer bir şekilde, tekrar edin. </li></ol></li><li> Civa (II): 1 oranında 1 hazırlanması CEEC çözeltisi <ol><li> 240 koyun81; 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 5 mM amonyum format, pH 7.5 tamponu. Amonyum format tamponu ile bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7,5 x 10 -4 M cıva (II) klorür solüsyonu 30 ul ekle. </li><li> 10 saniye için çözüm karıştırın. Daha sonra bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7.5 x 10 -4 M CEEC çözeltisi 30 ul ekle. Bölüm 4.1&#39;de tarif edildiği gibi benzer bir şekilde, tekrar edin. </li></ol></li><li> Civa (II) 2 oranı: 1 hazırlanması CEEC çözeltisi <ol><li> 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 5 mM amonyum format, pH 7,5 tampon 210 ul koyun. Amonyum format tamponu ile bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7,5 x 10 -4 M cıva (II) klorür solüsyonu 30 ul ekle. </li><li> 10 saniye için çözüm karıştırın. Daha sonra bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içine 7.5 x 10 -4 M CEEC çözeltisi 60 ul ekle. Bölüm 4.1&#39;de tarif edildiği gibi benzer bir şekilde, tekrar edin. </li></ol></li></ol> 7. AnalyOrbitrap ESI kütle spektrometresi ile cıva (II) ve CGGC Örneklerinde Reaksiyon karışımları hareketlendirmek <ol><li> ESI kütle spektrometresi 16 Hazırlanması <ol><li> 500 ul cam şırıngaya kalibrasyon standartları 100 ul çizin. </li><li> MS pompa enjektör beşiği şırınga yerleştirin tüp takmak ve kitle spektrofotometre içine enjekte edilir. </li><li> Dosya simgesini seçip dosya adını yazarak çalıştırmak için dosya adını ayarlayın. </li><li> Veri toplama modülü acquire veri düğmesini seçin ve 150 taramaları toplamak. </li><li> Yazılımın veri işleme modülü açarak kalibrasyon standartları doğrulamak için kromatogram analiz edin. Modülü açın, menü dosya gidin ve &quot;açık&quot; seçeneğini seçin ve iletişim kutusunda dosyayı seçin. Kromatogramda zirveleri standartları oranları şarj etmek için kitle ilişkili olduğunu doğrulayın. </li><li> 500 ul HPLC dereceli metanol yukarı çizerek 500 ul cam şırınga temizleyin ve sonra m dağıtmakBir beher içine etanol. </li><li> Cam şırınga içine HPLC dereceli metanol 500 ul çizin ve adım 7.1.2 başına sistemini yıkayın. </li><li> Parametreleri ayarlamak için yazılım yöntemi kurulum modülünü seçin. Tarama modu menüsünü seçin ve Ftms olarak analizörü tanımlamak ve sonra &quot;Tamam&quot; düğmesine tıklayın. Kılıf gaz akış hızı: 10, Kaynak sıcaklığı: 0, Kılcal gerilimi: 37 V, Tüp lensi: 95 V, Sprey gerilimi: 4.20 kV Sonra gerçek zamanlı görünümü spektrum sayfasında çeşitli ikonları tıklayarak, şu parametreleri ayarlayabilirsiniz Akış 10.00 ul / dk, Analyzer oranı: Ftms, taramalar sayısı: 150. </li></ol></li><li> ESI kütle spektrometresi üzerinde CGGC örnekleri çalıştırma <ol><li> 5 mM amonyum format, pH 7,5 tampon çalıştırın. <ol><li> 500 ul bir cam şırınga içine 5 mM amonyum format tamponu 500 ul koyun MS pompasının şırınga tutucuya yerleştirin ve boru ekleyin. </li><li> 1-2 dakika boyunca, boru içinden geçen tampon çalıştırın. </li><li> Çalıştırmak için dosya adını ayarlayındosya simgesini seçip dosya adını yazarak. </li><li> Modülünde acquire veri düğmesini seçin ve 150 taramaları toplamak. </li><li> 150 taramalar toplandıktan sonra toplama durdurmak için çalışma düğmesine tıklayın. </li><li> Veri tarayıcı modülü açın, daha sonra menüyü dosya gidin ve &quot;açık&quot; seçeneğini seçin ve iletişim kutusunda dosyayı seçin. 483, 683, 1.163 ve 1.363 m / z hiçbir zirveleri peptid veya civa (II) kompleksleri -peptid benzediğine mevcut olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> 0,5 cıva (II): CGGC oranı çözeltisi 1 çalıştırın. <ol><li> 0,5 cıva (II): şırınga içine örnek CGGC oranı 1 250 ul koyun. </li><li> Boru ve Başbakan aparat takın, MS pompa enjektör yuvasına şırınga yerleştirin. </li><li> Dosya simgesini seçip dosya adını yazarak çalıştırmak için bir dosya adı seçin. </li><li> Veri toplama modülü acquire veri düğmesine basın ve 150 tarama toplamak ve toplama durdurmak için çalışma düğmesini tıklatın. </li><li> Modülü açın, menü dosya gidin ve &quot;açık&quot; seçeneğini seçin ve iletişim kutusunda dosyayı seçin. Kromatogram yalnız CGGC peptid için dahil olmak üzere doruklarına içerdiğini doğrulayın. </li><li> 500 ul amonyum format tamponu ile aspire ve daha sonra bir kap içine amonyum format tamponu dağıtarak şırınga yıkayın. </li><li> MS atık düğmesini seçin ve boru 500 ul amonyum format tamponu ile üç kez yıkayın. </li><li> Bir beher içine metanol dağıtma daha sonra 500 ul metanol ile aspire edilmesiyle ve şırıngayı yıkayın. </li><li> 500 ul metanol ile tüp bir kez yıkayın. </li><li> MS Seç yük dedektör düğmesine basın. </li><li> Şırıngaya amonyum format tamponu 500 ul ekle. </li><li> Boru ve Başbakan aparat takın, MS pompa enjektör yuvasına şırınga yerleştirin. </li><li> Dosya simgesini seçip dosya adını yazarak çalıştırmak tamponu için bir dosya adı seçin. </li><li> Basınacquire veri düğmesi ve 150 tarama toplamak ve ardından stop çalıştırmak düğmesini tıklatın. </li><li> Veri tarayıcı modülü açın, menü dosya gidin ve &quot;açık&quot; seçeneğini seçin ve iletişim kutusunda dosyayı seçin. CGGC run: kromatogram önceki Hg gelen zirvelerinden geçersiz olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> 1 cıva (II): CGGC oranı çözeltisi 1 çalıştırın. <ol><li> Şırınga içine CGGC oranı örneği: 1 civa (II): 1 250 ul koyun. </li><li> 7.2.2.15 Adımları 7.2.2.2 için tarif edildiği gibi benzer bir şekilde, tekrar edin. </li></ol></li><li> 2 cıva (II): 1 başlat CGGC oranı çözümü <ol><li> Şırınga içine CGGC konsantrasyonu örneği: 2 civa (II): 1 250 ul koyun. </li><li> 7.2.2.15 Adımları 7.2.2.2 için tarif edildiği gibi benzer bir şekilde, tekrar edin. </li></ol></li></ol></li></ol> 8. Orbitrap ESI kütle spektrometresi ile Reaksiyon Merkür&#39;ün karışımlar ve CEEC Örnekleri analiz <ol><li> ESI kütle spektrometresi üzerinde CEEC örnekleri Koşu <ol><li> Tekrar analiz prosedürü (Basamak 7.1 7.2) CEEC örnekleri ve çeşitli stoikiometrik oranlarda civa (II) ve ODAÜ tepkime karışımları kullanılarak. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Clifton, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mercury+exposure+and+public+health%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Clin.+N.+Am%22%5BJournal%5D)">Mercury exposure and public health.</a> Pediatr. Clin. N. Am. 54, 237-269 (2007).</li>
<li>Andersen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+and+Recent+Developments+in+Chelation+Treatment+of+Metal+Intoxication%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Principles and Recent Developments in Chelation Treatment of Metal Intoxication.</a> Chem. Rev. 99, 2683-2710 (1999).</li>
<li>Aposhian, H. V., Maiorino, R. M., Gonzalez-Ramirez, D., Zuniga-Charles, M., Xu, Z., Hurlbut, J. M., Junco-Munoz, P., Dart, R. C., Aposhian, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mobilization+of+heavy+metals+by+newer%2C+therapeutically+useful+chelating+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Mobilization of heavy metals by newer, therapeutically useful chelating agents.</a> Toxicology. 97, 23-38 (1995).</li>
<li>Flora, S. J. S., Pachauri, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chelation+in+Metal+Intoxication%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Environ.+Res.+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Chelation in Metal Intoxication.</a> Int. J. Environ. Res. Public Health. 7, 2745-2788 (2010).</li>
<li>Campbell, J. R., Clarkson, T. W., Omar, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+use+of+2%2C3-dimercaptopropane-1-sulfonate+in+two+cases+of+inorganic+mercury+poisoning%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The therapeutic use of 2,3-dimercaptopropane-1-sulfonate in two cases of inorganic mercury poisoning.</a> JAMA. 256, 3127-3130 (1986).</li>
<li>Rooney, J. P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+thiols%2C+dithiols%2C+nutritional+factors+and+interacting+ligands+in+the+toxicology+of+mercury%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">The role of thiols, dithiols, nutritional factors and interacting ligands in the toxicology of mercury.</a> Toxicology. 234, 145-156 (2007).</li>
<li>Lin, X., Brooks, J., Bronson, M., Ngu-Schwemlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evalution+of+the+association+of+mercury+%28II%29+with+some+dicysteinyl+tripeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Chem%22%5BJournal%5D)">Evalution of the association of mercury (II) with some dicysteinyl tripeptides.</a> Bioorg. Chem. 44, 8-18 (2012).</li>
<li>Ngu-Schwemlein, M., Lin, X., Rudd, B., Bronson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+ESI+mass+spectrometric+analysis+of+the+association+of+mercury%28II%29+with+multi-cysteinyl+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inorg.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and ESI mass spectrometric analysis of the association of mercury(II) with multi-cysteinyl peptides.</a> J. Inorg. Biochem. 133, 8-23 (2014).</li>
<li>Winther, J. R., Thorpe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+thiols+and+disulfides%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et.+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Quantification of thiols and disulfides.</a> Biochimica et. Biophysica Acta. 1840, 838-846 (2014).</li>
<li>D'Agstino, A., Colton, R., Traeger, J. C., Cantry, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Electrospray+Mass+Spectrometric+Study+of+Organomercury+%28II%29+and+Mercuric+Interactions+with+Peptides+Involving+Cysteinyl+Ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">An Electrospray Mass Spectrometric Study of Organomercury (II) and Mercuric Interactions with Peptides Involving Cysteinyl Ligands.</a> Eur. Mass Spectrom. , 273-285 (1990).</li>
<li>Hofstadler, S. A., Sannes-Lowery, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+ESI-MS+in+drug+discovery%3A+interrogation+of+noncovalent+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Applications of ESI-MS in drug discovery: interrogation of noncovalent complexes.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 5, 585-595 (2006).</li>
<li>Rubino, F. M., Verduci, C., Giampiccolo, R., Pulvirenti, S., Brambilla, G., Columbi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Characterization+of+Homo-+and+Heterodimeric+Mercury+%28II%29-bis-thiolates+of+Some+Biologically+Relevant+Thiols+by+Electrospray+Ionization+and+Triple+Quadruple+Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Molecular Characterization of Homo- and Heterodimeric Mercury (II)-bis-thiolates of Some Biologically Relevant Thiols by Electrospray Ionization and Triple Quadruple Tandem Mass Spectrometry.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 15, 288-300 (2003).</li>
<li>Krupp, E. M., Milne, B. F., Mestrot, A., Meharg, A. A., Feldmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+into+mercury+bound+to+biothiols%3A+structural+identification+using+ESI-ion-trap+MS+and+introduction+of+a+method+for+their+HPLC+separation+with+simultaneous+detection+by+ICP-MS+and+and+ESI-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Investigation into mercury bound to biothiols: structural identification using ESI-ion-trap MS and introduction of a method for their HPLC separation with simultaneous detection by ICP-MS and and ESI-MS.</a> Anal. Bioanal. Chem. 390, 1753-1764 (2008).</li>
<li>Schaumlöffel, D., Tholey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+directions+of+electrospray+mass+spectrometry+for+elemental+speciation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Recent directions of electrospray mass spectrometry for elemental speciation analysis.</a> Anal. Bioanal. Chem. 400, 1645-1652 (2011).</li>
<li>Patiny, L., Borel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ChemCalc%3A+a+building+block+for+tomorrow%27s+chemical+infrastructure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Inf.+Model%22%5BJournal%5D)">ChemCalc: a building block for tomorrow's chemical infrastructure.</a> J. Chem. Inf. Model. 53, 1223-1228 (2013).</li>
<li>Thermo Scientific. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Xcaibur+Versions+2.1.0-2.3.0+Data+Acquisition+and+Processing+User+Guide.+Revision+E.+United+States%22">Xcaibur Versions 2.1.0-2.3.0 Data Acquisition and Processing User Guide. Revision E. United States</a>. , Thermo Fisher Scientific Inc. (2012).</li>
<li>Falcone, G., Foti, C., Gianguzza, A., Giuffrè, O., Napoli, A., Pettignano, A., Piazzese, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequestering+ability+of+some+chelating+agents+towards+methylmercury%28II%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Sequestering ability of some chelating agents towards methylmercury(II).</a> Anal. Bioanal. Chem. 405 (2), 881-893 (2013).</li>
<li>Mah, V., Jalilehvand, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+Complex+Formation+with+Mercury%28II%29+in+Aqueous+Solution+at+Physiological+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Glutathione Complex Formation with Mercury(II) in Aqueous Solution at Physiological pH.</a> Chem. Res. Toxicol. 23, 1815-1823 (2010).</li>
</ol>

Bildirilen çalışma için herhangi bir açıklama yapılmamıştır.

Hidrofobik dicysteinyl tetrapeptit CGGC (Cı 10H 18 N 4 O 5S 2 MW = 338) (Şekil 1), cıva kompleksler oluşturan (II), Şekil 2&#39;de gösterilen ve Tablo 1 Ayrıca, peptit dimerler ve trimerler de oluşturmasıyla ayrılır. aşamalı olarak, reaksiyon karışımı içindeki peptit miktarı arttıkça. M / z ilişkili dimerlerin değerleri [(2M + H) + = 677] ve trimerler ile gösterildiği gib...

Cıva zehirlenmesi1'in şelasyon tedavisi için reçete edilen mevcut klinik ilaçlar, cıva iyonlarının bağlanmasından ve sekestresyonundan sorumlu olan tiyol grup(lar)ını içerir2,3. Bununla birlikte, çalışmalar, bu küçük tiyol bileşiklerinin [dimerkaptosüksinik asit (DMSA) ve dimerkaptopropan-sülfonik asit (DMPS)] cıva şelasyon tedavisi4-6 için optimal olmadığını göstermiştir. Bu nedenle, cıva şelasyonu için tiyol bileşiklerinin rasyonel ilaç tasarımını geliştirmek için cıvanın tiyollerle ilişkisini ve karmaşık oluşum eğilimlerini anlamaya ihtiyaç vardır. Son zamanlarda, dithiol gruplarına sahip n-alkil ve aril disistenil tripeptitlerin, cıva(II)'nin koordinasyon bölgelerini 1:1 cıva(II):p eptid ve 1:2 cıva(II):(peptid)2 kompleksleri oluşturmak üzere barındırmak için etkili "çift çapa" görevi görebileceğini bildirdik7. Ek olarak, artan sisteinil kalıntılarının karmaşık tip oluşumlarüzerindeki etkisini inceledik 8. Bu çalışmada, cıva(II)'nin, sisteinil kalıntılarının iki amino asit kalıntısı ile ayrıldığı iki disisteinil tetrapeptit ile ilişkisini araştırıyoruz. Cıva için yardımcı bağlanma gruplarının etkisini değerlendirmek için, araya giren amino asitler ya iki glisin (ikame edilmemiş) kalıntısı ya da iki glutamik asit (gama-karboksilat) kalıntısıdır. 
Sisteinil peptidin cıva(II) ile reaksiyonu, sisteinil tiyol gruplarının disülfid bağları oluşturmak için oksidasyonunu önleyecek koşulları gerektirir9. Ayrıca, cıva(II)'nin çeşitli cıva-peptit kompleksleri oluşturmak için sisteinil peptitlerle birleşmesi, reaksiyon karışımındaki7,8 cıva(II): peptitin başlangıç oranına bağlıdır. Bu reaksiyon karışımlarında oluşan cıva-peptit komplekslerinin türleri, metal iyonları ve peptitler10-14 arasındaki tür etkileşimlerini belirlemek için hassas bir analitik araç olan yumuşak iyonizasyon kütle spektroskopisi ile analiz edilebilir. Buna göre, belirli bir elektrosprey iyonizasyon koşulu altında oluşturulan çeşitli merskürlenmiş peptit eklentilerinin bir profilini sağlayacaktır. Burada, oksidasyonu en aza indirmek için argon ile kaplanmış gazdan arındırılmış amonyum format tampon çözeltisinde sisteinil peptitlerin ve cıva(II) klorür çözeltilerinin nasıl hazırlanabileceğini göstereceğiz. Cıva(II)'nın değişen mol eşdeğerlerini disisteinil tetrapeptitlerle reaksiyona sokarak, cıva(II):p eptidin başlangıç oranının oluşan kompleks türleri üzerinde nasıl bir etkiye sahip olduğunu göstereceğiz. Ayrıca, elektrosprey iyonizasyon (ESI) kütle spektrometrisinin, oluşan komplekslerde cıvadan pepete doğru bir stokiyometri sağlamak için bir karakterizasyon aracı olarak nasıl kullanılabileceğini göstereceğiz. İlgili video protokolü, cıva komplekslerinin hazırlanması için deneysel koşulları, belirtilen elektrosprey iyonizasyon koşulları altında reaksiyon karışımlarını analiz etme prosedürünü ve cıva(II)-disisteinil tetrapeptit komplekslerinin stokiyometrilerinin karakterizasyonunu gösterecektir.. Farklı izotopik formlarda bulunan metal iyonlarının oluşturduğu çeşitli kompleksleri analiz etmek için ESI orbitrap kütle spektrometresini kullanmakla ilgilenenlere yardımcı olmayı amaçlamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Cıva(II) klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>429724</td><td>Son derece toksik</td></tr><tr><td>Amonyum format</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>516961</td><td></td></tr><tr><td>Formik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0507</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum hidroksit</td><td>Fisher</td><td>A512-P500</td><td></td></tr><tr><td>HPLC su</td><td>Fisher</td><td>W5-4</td><td></td></tr><tr><td>HPLC Asetonitril</td><td>Fisher</td><td>BP2405-1</td><td></td></tr><tr><td>HPLC Metanol</td><td>Balıkçı</td><td>A452-4</td><td></td></tr></tbody></table>

elektrosprey İyonizasyon kütle spektrometresi ile dicysteinyl tetrapeptidlerle ile merkür (ii) kompleksinin bir Çalışma

A Study of the Complexation of Mercury(II) with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Bu çalışmada, cıva(II)'nin disisteinil tetrapeptide farklı nispi oranlarında oluşan komplekslerin elektrosprey iyonizasyon orbitrap kütle spektrometresi ile karakterizasyonu için bir yöntemi değerlendirdik. Bu strateji, diğer tekniklerin yanı sıra kütle spektrometresi kullanılarak tripeptitleri içeren cıva-disisteinil komplekslerinin önceki başarılı karakterizasyonuna dayanmaktadır. Cıva(II) klorür ve bir disisteinil tetrapeptit, değişen stokiyometrik oranlarda gazı alınmış tamponlu bir ortamda inkübe edildi. Oluşan kompleksler daha sonra hibrit bir doğrusal iyon ve orbi-tuzak kütle analizöründen oluşan bir elektrosprey kütle spektrometresi üzerinde analiz edildi. Elektrosprey iyonizasyon kütle spektrometresi (ESI-MS) spektrumları pozitif modda elde edildi ve gözlemlenen zirveler daha sonra farklı cıva izotopik dağılım modelleri ve ilişkili monoizotopik tepe için analiz edildi. Bu çalışma, belirtilen elektrosprey iyonizasyon koşulları altında oluşan komplekslerde cıva ve peptitin doğru bir stokiyometrisinin, farklı cıva izotopik dağılım modellerine dayalı olarak yüksek çözünürlüklü ESI MS kullanılarak belirlenebileceğini göstermektedir.

<html> Bir çalışma ESI kütle spektrometresi ile, iki tetrapeptidlerin, CGGC ve ODAÜ (Şekil 1) için olası cıva peptit kompleksi bileşimi karakterize etmek için yapıldı. CGGC ya ODAÜ ile civa (II) kompleksleri cıva karışımları reaksiyona sokulması suretiyle araştırılmıştır (II) ve üç farklı mol oranlarında Peptid çözeltileri: 1: 0.5, 1: 1, 1: 2 ((II) civa: peptid) . Civa (II) konsantrasyonu 7.5 x 10 -6 M ve peptit konsantrasyonu buna göre de değişecektir. <p ...

Cıva(II)'nin disisteinil tetrapeptitlere farklı nispi oranlarında oluşan komplekslerin elektrosprey iyonizasyon orbitrap kütle spektrometresi ile karakterizasyonu sunulmuştur.

Elektrosprey İyonizasyon kütle spektrometresi ile Dicysteinyl tetrapeptidlerle ile Merkür (II) kompleksinin Bir Çalışma

In this study we evaluated a method for the characterization of complexes, formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptide, ...

Bu prosedürün genel amacı, farklı reaksiyon stokiyometrileri altında cıva ve dikisteinil peptit kompleksleri hazırlamak ve oluşan farklı kompleksleri elektrospray iyonizasyon ve orbitrap kütle spektrometrisi ile karakterize etmektir. Bu yöntem, cıvanın ve tiyol bileşiklerinin kompleks oluşturma eğilimlerine ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir ve bu da cıva iyonlarını hapsetmek için şelatlayıcı ajanların rasyonel tasarımını geliştirecektir. Bu tekniğin temel avantajı, metal iyon komplekslerinin analizini ihmal edilebilir düzeyde fragmantasyon ile kolaylaştırmasıdır.Diğerleri arasında belirgin cıva izotopik dağılım deseni yer alır. Tandem kütle spektrometrisi ile yük atamanın ve örtüşen piklerin analiz edilmesinin kolaylığı avantaj sağlar. Bu yöntem cıva peptit kompleksleri hakkında bilgi sunsa da, diğer komplekslere, özellikle farklı izotopik formlarda bulunan metal iyonlarına da uygulanabilir.Beş milimolar amonyum format tamponunu bir vakum sistemi altında 10 dakika boyunca gazdan arındırın ve argon ile süpürün. Bu işlemi iki kez tekrarlayın ve çözeltiyi argon altında saklayın. Kullanacağınız gün, tampon çözeltisini kullanmadan önce 0,2 mikronluk bir filtreden

a-study-complexation-mercury-ii-with-dicysteinyl-tetrapeptides

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Kütle spektrometresi büyük protein kompleksleri ve analiz etmek için değerli bir araç olduğu kanıtlanmıştır. Bu yöntem, çok-altbirim meclislerinin bileşimi, stokiyometri ve genel mimari içgörüler sağlar. Burada, tarif, adım-adım yapısal bir kütle spektrometresi analizi gerçekleştirmek ve makromoleküler yapıları karakterize etmek için nasıl.

Yapısal Kütle Spektrometresi büyük protein kompleksleri Analiz

Biz tek-molekül floresan görüntüleme için minimize hidrodinamik büyüklüğü ile kolloidal Kuantum noktalarının hazırlanması tarif. Konvansiyonel kuantum noktaları ile karşılaştırıldığında, bu nanopartiküller globüler proteinlerin boyut olarak benzer ve tek-molekül parlaklık, fotodegradasyon karşı kararlılık ve proteinleri ve hücreleri nonspesifik bağlanma direnci için optimize edilmiştir.

Tek molekül Görüntüleme için kompakt Kuantum Noktaları

Sistein içeren oligopeptidlerin gaz-fazlı asitliğe belirlenmesi açıklanmaktadır. Deneyler, bir üçlü dört kutuplu kütle spektrometresi kullanılarak gerçekleştirilir. Peptidlerin göreli asitliğe çarpışma ile indüklenen ayrışma deneyleri kullanılarak ölçülür ve kantitatif asitliğe genişletilmiş Aşçılar kinetik yöntem kullanılarak belirlenir.

Oligopeptidlerin Gaz fazlı asitliğe belirlenmesi

Membran-gömülü protein etki arasındaki etkileşimler biyofiziksel ve biyokimyasal çalışmalarda uygun çalışma malzemesi elde edilir ilki birçok teknik sorunlarla karşı karşıya. Bu makale, çözelti nükleer manyetik rezonans (NMR) ve diğer analitik uygulamalar tarafından yapısal analizi için uygun olan disülfid stabilize transmembran peptid komplekslerini üretme ve arıtma için bir protokol açıklanmaktadır.

Yapısal Çalışmaları üretimi disülfid stabilize Transmembran Peptit Kompleksi

Burada, katı tozlardaki proteinler için katı hal amid hidrojen/döteryum değişim kütle spektrometrisi (ssHDX-MS) ve katı hal fotolitik etiketleme kütle spektrometrisi (ssPL-MS) için ayrıntılı protokoller sunuyoruz. Yöntemler, formülasyon tasarımında yararlı olabilecek amorf katı haldeki protein konformasyonu ve etkileşimleri hakkında yüksek çözünürlüklü bilgiler sağlar.

Kitle Spektrometrik Liyofilize Toz Protein Yapısı ve Etkileşimler Eğitim Yaklaşımları

Uyumlu esneklik proteini fonksiyonunda önemli bir rol oynamaktadır. Burada, düzenli ve düzensiz protein işlevi sürücü hızlı yapısal değişiklikleri algılama için hidrojen döteryum değişimi bağlanmış zamana bağımlı elektrosprey iyonizasyon kütle spektrometresi kullanılmasını tarif eder.

Zaman çözülmesi elektro sprey iyonizasyon Hidrojen-döteryum Değişim Kütle Spektrometre Protein Yapısı ve Dinamikleri incelenmesi için

Iyon hareketlilik-kütle spektrometresi ve moleküler modelleme teknikleri, tasarlanmış metal bağlayıcı peptidlerin ve bakır bağlayıcı peptid metanobakinin seçici metal şelat performansını karakterize edebilir. Metal şelat peptidler yeni sınıflar geliştirilmesi metal iyon dengesizliği ile ilişkili hastalıklar için terapötik yol yardımcı olacaktır.

Metal Bağlama Oligopeptidlerinin Yapısı ve Mekanizmalarının Belirlenmesinde Iyon Hareketliliği-Kütle Spektrometresi Teknikleri ve Metal Bağlayıcı Oligopeptidlerin Redoks Aktivitesi

Nötr SO2 kümeleri düşük kinetik enerji (&lt; 0.8 eV/constituent) bir iyon kapanı kütle spektrometresi kullanılarak kütle spektrometresi ile daha fazla analiz için peptidler veya lipidler gibi karmaşık yüzey moleküllerini desorb için kullanılır. Özel bir numune hazırlama gerekli değildir ve reaksiyonların gerçek zamanlı gözlemi mümkündür.

Kümelenme Sonucu Desorpsiyon/İyonlaşma Kütle Spektrometresi Yoluyla Karmaşık Moleküllerin ve Yüzeylerdeki Reaksiyonlarının Analizi

Lanthipeptide sentezleri peptit doğal ürünlerin biyosentezi sırasında katalizör multistep reaksiyonları. Burada, lanteptid sentezlerinin konformasyonel dinamiklerini ve peptit doğal ürün biyosentezinde yer alan diğer benzer enzimleri incelemek için bunların kullanılabileceği sürekli, aşağıdan yukarıya, hidrojen-döteryum değişim kütle spektrometresi (HDX-MS) iş akışını açıklıyoruz.

Peptit Biyosintetik Enzimleri Araştırmak için Hidrojen-Döteryum Değişim Kütle Spektrometresi (HDX-MS) Platformu

Burada, yukarıdan aşağıya kütle spektrometrisi ile birlikte kılcal elektroforez bazlı hidrojen / döteryum değişimi (HDX) yaklaşımı için bir protokol sunulmaktadır. Bu yaklaşım, eşzamanlı diferansiyel HDX ve elektroforetik ayırma gerçekleştirerek, farklı durumlardaki proteinler ve farklı proteoformlar da dahil olmak üzere farklı protein türleri arasındaki yüksek dereceli yapılardaki farkı karakterize eder.

Yukarıdan Aşağıya Kütle Spektrometrisi ile Proteinlerin Konformasyonel Karakterizasyonu için Kapiler Elektroforez Bazlı Hidrojen/Döteryum Değişimi

Bu makalede, ilgili üçlü metal komplekslerinin ayrışmasının nispi termokimyasını ölçmek için elektrosprey-iyon hareketliliği-kütle spektrometrisi, yarı ampirik kuantum hesaplamaları ve enerji çözümlü eşik çarpışma kaynaklı ayrışma kullanan deneysel bir protokol açıklanmaktadır.

İyon Hareketliliği-Kütle Spektrometrisi Kullanılarak Ni(II) ve Zn(II) Üçlü Komplekslerinin Termokimyasal Çalışmaları

Keşfedin, elektrosprey iyonizasyon kütle spektrometresi ile dicysteinyl tetrapeptidlerle merkür(II) komplekslerinin karakterizasyonunu. Bu yöntem, metal iyonu komplekslerinin minimal parçalanma ile analizini sağlar.

Elektrosprey İyonizasyon kütle spektrometresi ile Dicysteinyl tetrapeptidlerle ile Merkür (II) kompleksinin Bir Çalışma

Daha fazla video keşfet