Name: Medaka Yumurta kullanma Gümüş Nanocolloids tuzluluk bağımlı zehirlilik Deneyi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Öğrenin, gümüş nanokolloidlerin Oryzias latipes embriyolarında tuzluluk bağımlı toksisitesini değerlendirmek için yüksek verimli bir yöntem. Bu teknik, farklı tuzluluk koşullarında kimyasal etkileri incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Toyo Üniversitesi Yaşam Bilimleri Enstitüsü'nden Bayan Kaori Shimizu ve Bay Masaki Takasu'ya teknik destekleri için minnettarız. Bu proje, Toyo Üniversitesi Özel Araştırma Vakfı ve Biyo-Nano Elektronik Araştırma Merkezi'nden (SK'ye) araştırma hibeleri ile desteklenmiştir; Japonya Özel Okulları için Teşvik ve Karşılıklı Yardımlaşma Kurumu'nun Bilim Araştırma Teşvik Fonu tarafından (SK'ye); Risk Değerlendirmeleri için Yeni Proje Fonu tarafından, Ekonomi, Ticaret ve Sanayi Bakanlığı'ndan (SK'ya); Zorlu Keşif Araştırmaları için Yardım Hibesi ile (SK'ye 23651028 ödül); Bilimsel Araştırma için Yardım Hibesi (B) ve (C) (SK'ye 23310026 ve 26340030 ödül); ve Japonya Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan Özel Üniversiteler için Stratejik Araştırma Üssü Projesi (SK'ye S1411016 ödül) için Yardım Hibesi ile.

Bu çalışmada kullanılan Japon Medaka sıkıntı ve rahatsızlık hafifletilmesi için göz önünde bulundurularak, insani Toyo Üniversitesi kurumsal kurallarına uygun olarak tedavi edildi. 1. Gümüş Nanocolloids (SNCS) <ol><li> Saflaştırılmış SNCS satın (20 mg / L-1,% 99.99 saflıkta, partikül damıtılmış su içinde süspansiyon haline getirilmiş 28.4 ± 8.5 nm ila ortalama çap). </li><li> Indüktif eşleşmiş plazma kütle spektrometresi ile gümüş saflık ve konsantrasyon doğrulamak (ICP-MS) kullanma kılavuzuna 8&#39;e göre analiz eder. ICP-MS için tedavi öncesi yöntemi Bölüm 7&#39;de açıklanan analizler. </li></ol> SNC Çözümleri Farklı tuzluluk ile (Gümüş Colloids ve Ag + Karışımlarının) 2. Hazırlık <ol><li> 60 g NaCl, 1.8 g KCI, 2.4 g CaCI2 · 2H 2 O ve 9.78 gr MgSO 4 · 7H 2 O Arıza sebebinin L 1 aşağıdakilerden oluşan 60 x ERM&#39;yi hazırlanmasırapure su; ultra saf su içinde NaHCO 3% 1.25 ile 7.0 arasında pH değeri ayarlanır. </li><li> gece boyunca 25 ° C&#39;de bir ERM çözeltisi karıştırılır. </li><li> seyreltilmiş ERM ile SNCS karıştırın. Her SNC-ERM karışık çözelti, 40 ml hazırlayın. Nihai konsantrasyon ERM farklı konsantrasyonlarda SNCS 10 mg / L -1 (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x veya). </li><li> Ultra saf su içinde% 0.625 ile 7.0 arasında SNC-ERM karışık çözelti NaHCO 3 pH ayarlayın. Ag + salma asidik koşullar 9 kolaylaştırılır, çünkü pH ayarlaması SNC çözeltisinin hazırlanması için çok önemlidir. </li><li> SNCS için bir referans bileşiği olarak iyodinin 3 kullanın. <ol><li> Sulandırılmış ERM ile Agno 3 karıştırın. 15.7 mg / L arasında bir iyodinin 3 konsantrasyonda iyodinin 3 -ERM karışık çözelti, 40 ml hazırlamak -1 ERM&#39;in farklı konsantrasyonlarda (10 mg / L-1 gümüş) (1 x, 5x, 10x, 15x, 20x veya 30x) . Not: AgNO 3 gümüş kolloid toksisitesini incelemek içinçözünür bir gümüş kaynağı solüsyonu, gümüş koloitler ve çözünür gümüş karışımı SNCS için bir referans bileşik olarak kullanılır. </li></ol></li></ol> 3. Medaka Kültür ve Yumurta Hasat <ol><li> Medaka (O. latipes) (turuncu-kırmızı suşu) (60 erkek ve 60 kadın) edinin. </li><li> gruplar olarak kültür Medaka (20 erkek ve bir grup olarak 20 kadın) bir Medaka akış kültür sistemi kullanılarak 3 L tanklarda 1x ERM. <ol><li> Aşağıdaki koşullarda Kültür: kültür ortamının pH aralığı 6.2 ila 6.5 Işık: karanlık döngüsü: 16: 8 saat Kültür ortamının sıcaklığı: 24 ± 0.5 ° C kültür ortamının ozmotik basınç: 257 mOsm </li></ol></li><li> (Günde beş kez) (günde bir kez) saat 10:00 &#39;Artemia salina nauplii üzerinde Medaka Yem ve 09:00, 11:00, 13:00, 15:00 ve 17:00 yapay kuru balık diyet yem. <ol><li> A. elde salina nauplii. </li> &lt;li&gt; plastik kabı içinde bir% 3.0 tuz solüsyonu 5 L hazırlayın. </li><li> beher tuz çözeltisine tuzlu su karidesi yumurta 30 g ekleyin. </li><li> Bir havalandırma pompası kullanılarak (4 L / dk-1) geçirilerek, 48 saat boyunca 25 ° C&#39;de kuluçkaya. </li><li> 48 saat sonra, köpüren durdurun. </li><li> 5 ila 10 dk yumurtadan A. ayırmak için çözüm bekletin çıkmamış yumurta ve yumurta kabuğu arasından salina nauplii (çözelti alt kısmı) (çözelti üst kısmı). </li><li> durultma yoluyla çözeltinin üst tabakayı çıkarın. </li><li> 283 um gözenekli bir elekten çözelti alt kısmının filtre ve 198 um arasında açıklıkları olan bir net geçmesine nauplii toplar. </li><li> 6 saat içerisinde Medaka için nauplii besleyin. </li></ol></li><li> kadın Medaka olurken sonra, dişilerin organları hafifçe dış yumurta kümeleri kaldırmak veya sm kullanarak akvaryum dibinden yumurta toplamakTüm ağ (net büyüklüğü 5 cm x 5 cm, delik boyutu 0.2 mm x 0.2 mm). </li><li> 5 saniye boyunca musluk suyu akan yumurta küme durulayın. </li><li> 30x ERM çözüm durulanır yumurta kümelerinin tüm ekleyin. </li><li> 1 dakika sonra çözeltiden kümeleri kaldırın ve yavaşça kuru kağıt havlu ve silindir arasındaki yumurta kümeleri yerleştirin. </li><li> 30x ERM geri yumurta koymak. </li><li> bir mikroskop altında döllenmiş yumurta seçin. </li><li> forseps kullanarak altı-iyi plastik plakalar 1x ERM 810 yumurta, seçilen yerin. </li><li> 21. gelişim aşamasına kadar bir kuluçka 25 ± 0.1 ° C&#39;de kuluçkaya (Medaka embriyoların gelişim aşamaları Iwamatsu 10 çalışmalarından tanımlanmıştır.) </li><li> bir mikroskop altında gelişme aşamasında 21 inkübe yumurta dışarı seçin. </li><li> 1x ERM ile seçilen yumurta durulayın. </li><li> Pozlama deneyleri (bölüm 4) ile durulanır yumurta Konu. </li></ol> 4. Toksisite SNCS test veya AgNO 3 </sub&gt; Farklı ERM tuzluluk de <ol><li> Medaka yumurta yıkayın (aşama 21), test çözeltisi [SNCS (10 mg / L-1) ya da iyodinin 3 ile üç kez ERM&#39;in her bir konsantrasyonu (1 x, 5x (15.7 mg / L-1, 10 mg / L-1, gümüş gibi) , 10x, pH 7&#39;de 15x, 20x, 30x veya)]. Kontroller olarak, pH 7, 30 x ERM&#39;e 1 x yumurta kullanımı. </li><li> Altı oyuklu plastik plakalar her bir test çözeltisi, 5 ml 15 durulandı yumurta ekleyin. (SNC için poz deneyler üç kez yapın veya AgNO 3 toksisite her test solüsyonu kullanarak test.) </li><li> alüminyum folyo tabak sarın. </li><li> Enkübasyon kadar ya da 14 gün boyunca karanlıkta 25 ° C &#39;de sarılmış inkübe edin. </li><li> Biyolojik değişiklikler ve ölü yumurta maruz yumurta her 24 saat gözlemlemek (Şekil 1 ve 2). </li><li> Test çözümleri her 24 saat değişimi. </li><li> aşağıdaki gibi gözlemleri gerçekleştirin. <ol><li> maruz kalma 6. günde, o (15 saniyede) kalp hızını saymakbir kronometre (Şekil 3a) ile bir mikroskop altında F Medaka embriyolar. </li><li> Maruziyet 6. günde, bir mikrometre (Şekil 3b) kullanılarak bir mikroskop altında Medaka embriyoların göz boyutu (çap) ölçün. </li><li> Kuluçka gününde, bir mikrometre (Şekil 3c) kullanarak bir mikroskop altında larva tam vücut uzunluklarının. </li><li> 14 gün (Şekil 3d) üzerinde yumurtadan maruz yumurta sayısını saymak. </li></ol></li></ol> SNC Çözüm Çözünür Gümüş ve Gümüş Analizi 5. İzolasyon <ol><li> 14,000 x bir 3 kDa&#39;lık bir zar filtre ile filtre her SNC çözeltisi (gümüş kolloidler ve çözünür gümüş bir karışımı) çözünür gümüş izole g ve 10 dakika süre ile 4 ° C. 1x ERM&#39;in agrege SNCS bildirilen ortalama çapı 67.8 mil 11, çünkü SNCS çözünür gümüş izole etmek için 3 kDa&#39;lık bir zar filtresi kullanınnd Ag + o 0.162 nm 12&#39;dir; 3 kDa&#39;lık bir membran 2 nm 13 ya da daha fazla bir çapa sahip olan parçacıklar hariç tutar. </li><li> ICP-MS yapan kılavuzu 8&#39;e göre, ICP-MS analizi (Şekil 3E) tarafından filtre edilmiş çözelti (= çözünebilen gümüş konsantrasyonu), 50 ul gümüş konsantrasyonu ölçümü. ICP-MS için tedavi öncesi yöntemi Bölüm 7&#39;de açıklanan analizler. </li></ol> Medaka Embriyolar Gümüş Biyoakümülasyon 6. Ölçüm <ol><li> Bölüm 4&#39;de anlatıldığı gibi Medaka SNCS yumurta (evre 21) ya da iyodinin 3 Açığa. </li><li> Maruziyet 6. günde, Medaka Kitap 14&#39;te tarif edilen protokole göre enzim kuluçka Medaka&#39;nın kullanılarak yumurta (yani, dechorion) koryon çıkarın. </li><li> ICP-MS işletim manuel 8 (Şekil 3f) &#39;ye göre ICP-MS analizi ile dechorioned yumurta gümüş konsantrasyonu ölçün. önICP-MS yöntemi, Bölüm 7&#39;de açıklanan analizler. </li></ol> ICP-MS Analizi ile Gümüş Konsantrasyon 7. ölçümü <ol><li> (; Bölüm 1 gümüş konsantrasyonu doğrulama için) örnekleri [gümüş çözeltisi 50 ul ekleyin; Üç dechorionated embriyolar (bölüm 5); ya da bir 50 mL teflon çanağa filtre edilmiş çözelti (bölüm 5)], 50 ul. </li><li> 50 ml&#39;lik bir cam kap, aşırı saf, nitrik asit 2.0 ml ilave edilir. </li><li> (yaklaşık 3 saat) kurur hemen öncesine kadar 110 ° C&#39;de sıcak bir plaka üzerinde karışımı ısıtın. </li><li> Tamamen organik madde çözülür 2.0 ultra saf nitrik asit ilave edildi ve beher için hidrojen peroksit, 0.5 ml ekleyin. </li><li> (yaklaşık 3 saat) kurur hemen öncesine kadar sıcak plaka üzerinde yine karışımı ısıtın. </li><li> % 1.0, aşırı saf, nitrik asit çözeltisinin 4 ml artığı içinde çözündürülür. </li><li> Transfer santrifüj tüpüne 4 ml. </li><li> (Üç kez olmak üzere toplam) iki kez 7.7 7.6 tekrarlayın. Nihai hacim 12.0;mi. </li><li> Kullanma kılavuzuna 8&#39;e göre ICP-MS analizi ile (% 1.0 ultra saf nitrik asit içinde eritilmiş) numune gümüş konsantrasyonu ölçümü. <ol><li> Bir iç ve bir dış standart solüsyonu kullanın gümüş konsantrasyonu ölçmek için (Malzeme Listesi). iç ve dış standart bir çözüm Laboratuvar Akreditasyon Amerikan Derneği (A2LA) tarafından akredite edilmiştir. Gümüş tespit limitleri 0.0018 ng / ml -1 (çözüm) ve 0.016 ng mg ağırlık -1 (embriyo gövdesini) idi. </li></ol></li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+2+Effects+on+Biotic+Systems%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2 Effects on Biotic Systems</a>. , OECD. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761">http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761</a> (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22National+Coastal+Condition+Report%22">National Coastal Condition Report</a>. , Environmental Protection Agency, Office of Water and Office of Research and Development. Washington, DC. (2001).</li>
<li>Sakaizumi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+inorganic+salts+on+mercury-compound+toxicity+to+the+embryos+of+the+Medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Fac.+Sci.+Univ.+Tokyo%22%5BJournal%5D)">Effect of inorganic salts on mercury-compound toxicity to the embryos of the Medaka, Oryzias latipes.</a> J. Fac. Sci. Univ. Tokyo. 14 (4), 369-384 (1980).</li>
<li>Sumitani, K., Kashiwada, S., Osaki, K., Yamada, M., Mohri, S., Yasumasu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medaka+%28Oryzias+latipes%29+Embryo+toxicity+of+treated+leachate+from+waste-landfill+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jpn.+Soc.+Waste+Manage.+Exp%22%5BJournal%5D)">Medaka (Oryzias latipes) Embryo toxicity of treated leachate from waste-landfill sites.</a> J. Jpn. Soc. Waste Manage. Exp. 15 (6), 472-479 (2004).</li>
<li>Kashiwada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+Nanoparticles+in+the+See-through+Medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22EHP%22%5BJournal%5D)">Distribution of Nanoparticles in the See-through Medaka (Oryzias latipes).</a> EHP. 114 (11), 1697-1702 (2006).</li>
<li>Iwamatsu, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aIwamatsu%2C+T+%22The+Integrated+Book+for+the+Biology+of+the+Medaka%22">The Integrated Book for the Biology of the Medaka</a>. , University Education Press. Japan. (2006).</li>
<li>Miyamoto, T., Machida, T., Kawashima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+environmental+salinity+on+the+development+of+chloride+cells+of+freshwater+and+brackish-water+medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Zoo.+Sci%22%5BJournal%5D)">Influence of environmental salinity on the development of chloride cells of freshwater and brackish-water medaka, Oryzias latipes.</a> Zoo. Sci. 3 (5), 859-865 (1986).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22XSERIES+2+ICP-MS+Getting+Started+Guide+Revision+B+-+121+9590%22">XSERIES 2 ICP-MS Getting Started Guide Revision B - 121 9590</a>. , Thermo Fisher Scientific Inc.. Available from:
 <a target="_blank" href="http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf">http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf</a> (2007).</li>
<li>Kashiwada, S., Ariza, M. E., Kawaguchi, T., Nakagame, Y., Jayasinghe, B. S., Gartner, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+nanocolloids+disrupt+medaka+embryogenesis+through+vital+gene+expressions%5BTitle%5D)+AND+%22ES+%26+T%22%5BJournal%5D)">Silver nanocolloids disrupt medaka embryogenesis through vital gene expressions.</a> ES & T. 46 (11), 6278-6287 (2012).</li>
<li>Iwamatsu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+normal+development+in+the+medaka+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes.</a> Mech. Dev. 121, 605-618 (2004).</li>
<li>Kataoka, C., Ariyoshi, T., Kawaguchi, H., Nagasaka, S., Kashiwada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salinity+increases+the+toxicity+of+silver+nanocolloids+to+Japanese+medaka+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.%3A+Nano%22%5BJournal%5D)">Salinity increases the toxicity of silver nanocolloids to Japanese medaka embryos.</a> Environ. Sci.: Nano. 2, 94-103 (2014).</li>
<li>Shannon, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+effective+ionic+radii+and+systematic+studies+of+interatomic+distances+in+halides+and+chalcogenides%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cryst%22%5BJournal%5D)">Revised effective ionic radii and systematic studies of interatomic distances in halides and chalcogenides.</a> Acta Cryst. 32, 751-767 (1976).</li>
<li>Pore size chart. , Spectrum Laboratories, Inc.. Available from:
 <a target="_blank" href="http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html">http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html</a> (2015).</li>
<li>Wakamatsu, Y. Medaka Book, 6.1: Preparation of hatching enzyme. , National BioResource Project (NBRP) Medaka. Available from:
 [cited 2015] <a target="_blank" href="https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme">https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme</a> (2015).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Medaka deniz suyu son derece hoşgörülü bir tatlı su balığıdır; o da bu balığın orijinal doğal yaşam Japon sahil 6 kapalı tuzlu su olduğu bilinmemektedir. Bu nedenle, Medaka balık klorid hücreleri 7 iyi gelişmiştir. Bu benzersiz özellik balık sadece tek bir tür kullanarak (tatlı su deniz suyu için) tuzluluk bir fonksiyonu olarak çevre kimyasalların toksisite test etmek için yeni bir yol ile bilim adamları sağlar. aşamada 21, Medaka yumurta elde etmek için, yumurta Genell...

1979 yılında test kimyasallar için Ekonomik İşbirliği ve Kalkınma Örgütü (OECD) test kriterlerine Teşkilatı&#39;nın kuruluşundan bu yana, 38 deney kılavuzları kurallar, Biyotik Sistemleri 1 üzerine etkileri Bölüm 2&#39;de yayınlanmıştır. tatlı su habitatlarının, yani tatlı su bitkilerden olmuştur test Sudaki organizmalar Tüm; yosun; Böyle piresi ve chironomids olarak omurgasızlar; Bu tür Medaka, Zebra balığı ve gökkuşağı alabalığı gibi balıklar. tuzlu su ortamlarına kıyasla, tatlı su ortamları daha doğrudan insan ekonomik ve endüstriyel faaliyetler etkilenir. Onlar kirlilikten daha yüksek risk altındadır, çünkü bu nedenle, tatlı su ortamları test için ön plana çıkmışlardır. Haliç dahil kıyı bölgelerde, tuzluluk acı su ve deniz suyu koşulları arasında değişir ve bu alanlar genellikle endüstriyel aktivite 2 tarafından kirletilmektedir. Kıyı alanları ve bunların ilişkili sulak h ile karakterizedirüksek ekolojik biyolojik çeşitlilik ve verimlilik. Kıyı ekosistemleri nedenle kimyasal kirlenmeye karşı korunmalıdır. Ancak, acı su ve deniz suyu ortamlarında ekotoksikolojik araştırma var sınırlı kalmıştır. Sakaizumi 3 Japon Medaka yumurta metil civa ve tuzluluk arasındaki toksik etkileşimler okudu ve test çözeltisi ozmotik basıncı artırarak metil civa toksisitesini arttırdı bulundu. . Sumitani ark 4 sızıntı suyu toksisitesini araştırmak için Medaka yumurta kullanıldı; Onlar yumurtalara sızıntı suyunun osmotik denklik embriyogenez sırasında anormallikleri uyaran anahtarı olduğunu ortaya koymuştur. Buna ek olarak, Kashiwada 5 plastik nanopartiküller (çapı 39,4 nm) kolay tuzlu koşullar altında Medaka yumurta koryon (15x embriyo yetiştirme ortamı (ERM)) üzerinden nüfuz bildirmiştir. Tipik bir küçük balık modeli, Japon Medaka (Oryzias latipes </em&gt;) Temel biyoloji ve ekotoksikolojisine 6 kullanılmaktadır. Japon Medaka deniz suyuna tatlı gelen dolayı son derece gelişmiş klorür hücrelerinin 7 arasında değişen koşullarda yaşayabilir. Bunlar tuzluluk geniş bir yelpazede olan koşullarda test etmek için yararlı olduğu umulmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Gümüş nanokolloidler</td><td>Ütopya Gümüş Takviyeleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>31319-45</td><td>ERM</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td> yapmak için<td>28513-85</td><td>ERM</td></tr><tr><td>CaCl2&middot yapmak için; 2H2O</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>06730-15</td><td>ERM</td></tr><tr><td>MgSO4&middot yapmak için; 7H2O</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>21002-85</td><td>ERM</td></tr><tr><td>NaHCO3&nbsp;</td> yapmak için<td>Nacalai Tesque, Inc.</td><td>31212-25</td><td>ERM</td></tr><tr><td>AgNO3</td><td>Nacalai Tesque, Inc.</td> yapmak için<td>31018-72</td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>HORIBA, Ltd.</td><td>F-51S</td><td></td></tr><tr><td>Denge</td><td>Mettler-Toledo Uluslararası A.Ş.</td><td>MS204S</td><td></td></tr><tr><td>medaka (Oryzias latipes) turuncu-kırmızı suş</td><td>Ulusal Çevre Araştırmaları</td><td></td><td></td>Enstitüsü</tr><tr><td>medaka akışlı kültür sistemi</td><td>Meito Suien Co.</td><td>MEITOsystem</td><td></td></tr><tr><td>Artemia salina nauplii yumurtaları</td><td>Japonya evcil hayvan tasarım Co, Ltd</td><td>4975677033759</td><td></td></tr><tr><td>havalandırma pompası</td><td>Japonya evcil hayvan tasarım Co, Ltd</td><td>gürültüsüz w300</td><td></td></tr><tr><td>Otohime larva &beta;-1</td><td>Marubeni Nissin Feed Co., Ltd</td><td>Otohime larva &beta;-1</td><td>Yapay kuru balık diyeti</td></tr><tr><td>diseksiyon mikroskobu</td><td>Leica microsystems</td><td>M165FC</td><td></td></tr><tr><td>mikrometre</td><td>Fujikogaku, Ltd.</td><td></td><td></td>10450023</tr><tr><td>kuluçka makinesi</td><td>Nksystem</td><td>TG-180-5LB</td><td></td></tr><tr><td>çalkalayıcı</td><td>ELMI Ltd.</td><td>Aizkraukles 21-136</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu plastik plakalar</td><td>Greiner CELLSTAR</td><td>M8562-100EA</td><td></td></tr><tr><td>alüminyum folyo</td><td>AS ONE Co.</td><td>6-713-02</td><td></td></tr><tr><td>kronometre</td><td>DRETEC Co., Ltd.</td><td>SW-111YE</td><td></td></tr><tr><td>3 kDa membran filtre</td><td>EMD Millipore Corporation</td><td>0,5 ml santrifüj tipi filtre</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Teflon beher</td><td>AS ONE Co.</td><td></td><td></td>33431097</tr><tr><td>Özel claritas standardı</td><td>SPEXertificate</td><td>ZSTC-538</td><td>Dahili standart için</td></tr><tr><td>Özel claritas standardı</td><td>SPEXertificate</td><td>ZSTC-622</td><td>Harici standart</td></tr><tr><td>ultra saf nitrik asit</td><td>Kanto Chemical Co.</td> için<td>28163-5B</td><td></td></tr><tr><td>hidrojen peroksit&nbsp;</td><td>Kanto Kimya A.Ş.</td><td>Atomik absorpsiyon spektrometrisi için</td> <td>18084-1B</td></tr><tr><td>ICP-MS</td><td>Thermo Scientific</td><td>Thermo Scientific X Serisi 2&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>sıcak tabak</td><td>Tiger Co.</td><td>CRC-A300</td><td></td></tr></tbody></table> Serisi

medaka yumurta kullanma gümüş nanocolloids tuzluluk bağımlı zehirlilik deneyi

Salinity-dependent Toxicity Assay of Silver Nanocolloids Using Medaka Eggs

Tuzluluk su ortamında önemli bir özelliğidir. Sudaki organizmalar için tatlı su, tuzlu su ve deniz suyunun yaşam alanları tanımlar. kimyasallar ve Sucul organizmalar için ekolojik riskler değerlendirmelerinin toksisite testleri sıklıkla tatlı yapılmaktadır, ancak Sucul organizmalar için kimyasalların toksisite pH, sıcaklık, tuzluluk ve bağlıdır. Hiçbir yöntem Sudaki organizmalar için toksisite tuzluluk bağımlılığını test etmek için, ancak var. Onlar tatlı su, tuzlu su ve deniz suyuna adapte çünkü Burada, Medaka (Oryzias latipes) kullanılır. embriyo yetiştirme ortamı (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x ve) yumurta (1x ERM ve 30x ERM Medaka gümüş nanocolloidal parçacıklar (SNCS) toksisitesini test etmek için kullanılmıştır sahip ozmotik basıncı eşdeğer farklı konsantrasyonlarda sırasıyla tatlı ve deniz suyu, için). Altı oyuklu plastik tabak olarak, üç kopya halinde 15 Medaka yumurta 10 mg / L ve en SNCS maruz bırakıldı# 8722, 1, karanlıkta, pH 7 ve 25 ° C &#39;de ERM&#39;in farklı konsantrasyonlarda. Gün 6 ve gündüz (bölüm 4) kuluçkalık üzerine larva tam vücut uzunluğu 15 sn ve göz çapı başına kalp hızını ölçmek için bir diseksiyon mikroskobu ve bir mikrometre kullanılır. embriyolar kuluçka veya gün 14 kadar gözlenmiştir; Daha sonra 14 gün (bölüm 4) her gün çıkma oranı sayıldı. embriyolarda gümüş birikimi görmek için tümevarımsal gümüş testi çözümleri konsantrasyonu (Bölüm 5) ve dechorionated embriyolar (bölüm 6) açıkça tuzluluk arttıkça artan Medaka embriyolar SNCS KAG toksisitesini ölçmek için plazma kütle spektrometresi birleştiğinde kullandık. Bu yeni yöntem bizi farklı tuzluluk kimyasalların toksisite test etmenizi sağlar.

SNC toksisite tuzluluk etkisi çok açıktı: deformite veya ölüm indüksiyon tuzluluk bağımlı (Şekil 1 ve 2). Biz (10 mg / L -1) -exposed embriyolar SNC fenotipik biyobelirteçleri (kalp atım hızı, göz boyutu, tam vücut uzunluğu ve çıkma oranı) ölçüldü. Bu fenotipik biyomarkırlar tuzluluk bağımlı SNC toksisite ortaya koydu. Kalp hızı 29.6 32.2 atım / kontrollerde 30x ERM 1x boyunca 15 sn...

Embriyonik evreler, ksenobiyotiklere en duyarlı olanlardır. Kimyasal toksisite tuzluluğa bağlı olmasına rağmen, toksisitenin suda yaşayan organizmalara tuzluluk bağımlılığını test etmek için hiçbir yöntem yoktur. Burada, toksisitenin suda yaşayan embriyolara tuzluluk bağımlılığını belirlemek için yeni ve yüksek verimli bir yöntem açıklıyoruz.

Medaka Yumurta kullanma Gümüş Nanocolloids tuzluluk bağımlı zehirlilik Deneyi

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and ...

Bu deneyin genel amacı, kimyasalların sucul organizmalar üzerindeki tuzluluğa bağlı toksisitesini test etmektir. Bu yöntem, tatlı su, acı su ve deniz suyu koşullarındaki toksisitenin değerlendirilmesi gibi Ekotoksikoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, medaka balıklarının farklı tuzluluklarda kimyasal toksisite testlerinde daha önce hiç kullanılmamış olmasıdır.Ek olarak, bu tekniğin uygulamaları diğer kimyasal toksisite tedavilerine veya tanılarına da uzanmaktadır. Çeşitli tuzluluklardaki çözeltilerde ticari gümüş nanokolloidlerin hazırlanması, metin protokolünde ele alınmıştır. Medaka yetiştiriciliği ve yumurta toplama işlemleri de aynı şekilde anlatılmıştır.Altı grup Aşama 21 medaka yumurtasının, test çözeltisiyle üç kez durulanmasıyla başlayın. Bu işlemi, her yumurta seti için farklı bir konsantrasyonda ERM'ler kullanarak gerçekleştirin. Ardından, durulanan her gruptan 15 yumurtayı, altı kuyucuklu plastik bir plakanın test çözeltisi içeren farklı kuyucuklarına aktarın.Bu deneyi, her grubu ayrı ayrı yıkayarak üç paralel şeklinde kurun. Plakaları folyo ile sarın ve karanlıkta, 25 °C'de inkübe edin. Yumurtalar çatlayana kadar veya 14 gün boyunca, hangisi daha önce gerçekleşirse o süre boyunca bekletin.İnkübasyon süresince, yumurtaları herhangi bir biyolojik değişim ve ölü yumurta olup olmadığı açısından günlük olarak gözlemleyin. Gözlemlerle birlikte test çözeltisini her gün yenileyin.Gözlemin altıncı gününde, her embriyonun kalp atış hızını 15 saniye boyunca sayın. Yine altıncı günde, her deneysel koşulda, her embriyonun göz çapını bir mikrometre kullanarak ölçün. Embriyolar larva olarak yumurtadan çıktığında, tam vücut uzunluklarını bir mikrometre kullanarak ölçün.Ayrıca, 14 gün boyunca toplam kaç yumurtanın açıldığını sayın. Gümüş biyobirikimini ölçmek için, altıncı günde, standart yöntemi kullanarak yumurtaların korionlarını toplayın. Dekorionize edilen yumurtalar, bir sonraki bölümde açıklanan SNC çözeltisinin analiz edildiği yöntemle aynı şekilde analiz edilebilir.Her bir SNC çözeltisinden çözünür gümüşü izole etmek için, önce kolloidler ve çözünür gümüş karışımını üç kilodaltonluk bir membran kullanarak süzün. Ardından, yüklü filtreyi soğutmalı bir santrifüjde 10 dakika boyunca 14, 000 Gs ile santrifüjleyerek çöktürün.Filtrattan 50 µL alarak ICP-MS analizi ile gümüş konsantrasyonunu ölçün. Alikotu 50 mL'lik bir Teflon behere aktarın ve behere iki mL ultra saf nitrik asit ekleyin. Ardından, karışımı bir ısıtıcı tabla üzerinde 110 °C'de ısıtın.Yaklaşık üç saatlik ısıtma boyunca, çözeltinin neredeyse tamamen kurumasına izin verin. Beher soğuduktan sonra, organik katıları tamamen çözün. Behere iki mililitre ultrapure nitrik asit ve 0,5 mililitre hidrojen peroksit ekleyin.Ardından, karışımı neredeyse tamamen kuruyana kadar tekrar ısıtın. Şimdi, kalan kalıntıyı, ultrapure su ile hazırlanmış yüzde bir ultrapure nitrik asidin dört mililitresi içerisinde çözün. Çözeltiyi 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.Teflon beherdeki geri kalan katıları çözme işlemini iki kez daha tekrarlayarak üç toplamı tek bir tüpte soğutun. Şimdi, ICP-MS kullanarak numunedeki gümüş konsantrasyonunu ölçün. Numuneleri analiz etmek için üreticinin önerdiği protokolü uygulayın.İç ve dış standartlar kullandığınızdan emin olun. Tuzluluğun SNC toksisitesi üzerindeki etkisi kolayca fark edilmiştir. Deformite veya ölüm indüksiyonunun tuzluluğa bağlı olduğu açıkça görülmüştür.Çeşitli fizyolojik ölçümler yapılmıştır. Tuzluluk 30 X ERM seviyesine ulaşana kadar kalp atış hızları etkilenmemiştir. 15 ve 30 X ERM tuzluluk seviyelerinde vücut uzunluğu anlamlı derecede daha kısa bulunmuştur.Vücut uzunluğu ile uyumlu olarak göz çapı da azaldı. 15 X ERM seviyesinde yumurtadan çıkma olasılığı daha düşükken, 30 X ERM seviyesinde yumurtaların yalnızca yüzde ikisinde gerçekleşti. Deneysel çözeltiler altında, tuz konsantrasyonu arttıkça suda çözünür metal kompleksleri daha kolay oluştu.Altı gün sonra embriyolardaki metal komplekslerinin incelenmesi, çözeltideki konsantrasyonları arttıkça embriyolardaki konsantrasyonlarının da arttığını göstermiştir. Bu prosedür uygulanırken, gümüş iyonu salınımı asidik koşullarla kolaylaştığı için test koşullarının pH değerini ayarlamanın önemli olduğunu unutmamak gerekir.

salinity-dependent-toxicity-assay-silver-nanocolloids-using-medaka

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Endokrin Bozucu Bileşikler (EDC) Akuatik çevre için önemli bir risk oluşturmaktadır. Belediye atıksu arıtma tesisleri yüzey sularının östrojenik etki gücüne önemli katkıda bulunmaktadır. Bu yazıda verilen metodoloji EDC kaldırılması ile ilgili etkinlik ve atıksu arıtma süreçlerinin uygunluğunun değerlendirilmesi için izin verir.

Atıksu Arıtma Süreçlerinin Etkinliğinin Değerlendirilmesi için Kimya ve Ekotoksikolojik Yöntemlerinin bir pil kullanılması östrojenik Potency çıkarmak

Küçük laboratuvar balıkları, insan kemik bozukluklarının altında yatan mekanizmalar üzerine kemik araştırmaları ve kemik modüle edici ilaçların taranması için popüler modeller haline gelmiştir. Bu yazıda, osteoporotik lezyonları olan medaka larvalarında alendronatın kemik hücreleri üzerindeki etkisini değerlendirmek için bir protokol tanımlanmıştır.

İlaç Tedavi ve<em&gt; İn Vivo</em&gt; Bir Medaka Balık Osteoporoz Modelinde Osteoblast-Osteoklast Etkileşimler Görüntüleme

Bir iletişim kuralı tarafından autometallography Ag deniz karaciğer ve böbrek dokularda yerelleştirmek için sunulmaktadır. Ayrıca, deniz histolojik Ag tahlil (CHAA) adında yeni bir tahlil bu dokuların Ag konsantrasyonlarda tahmin etmek için geliştirilmiştir.

Yerelleştirmek için Autometallography ve yarı ölçmek gümüş deniz doku kullanımı

Zebra balığı embriyoları kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Onlar harici geliştirmek ve kimyasallara duyarlı, ince phenotik değişikliklerin tespitine izin. Deney sadece doğrudan embriyo içeren plaka eklenir bileşik küçük bir miktar gerektirir, test sistemi verimli ve maliyet-etkin hale.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Led ile dikey olarak aydınlatılmış bir kurulum kullanarak zor maddeler (örneğin, renkli maddeler veya nanomalzemeler) için alg toksisite testi gösteriyoruz.

Nanomalzemeler ve Diğer Zor Maddelerin Alg Toksisitesi Testi için Küçük Ölçekli Kurulum

Bu makalede, küçük model balık medakasından (Oryzias latipes) sperm toplamak için iki hızlı ve etkili yöntemin yanı sıra, bilgisayar destekli sperm analizi (CASA) kullanarak sperm kalitesini güvenilir bir şekilde değerlendirmek için bir protokol açıklanmaktadır.

Teleost Modelinde Sperm Toplama ve Bilgisayar Destekli Sperm Analizi Japon Medakası (Oryzias latipes)

Bu çalışma, tuzlu su karides öldürücülük testi olarak da tanımlanan Artemia salina öldürücülük biyotahlil prosedürünü değerlendirmeyi ve gözden geçirmeyi amaçlamaktadır. Bu basit ve ucuz yöntem, numunelerin, yani doğal ürünlerin genel toksisitesi (ön toksisite değerlendirmesi olarak kabul edilir) hakkında bilgi verir.

Artemia salina L. Kullanarak Öldürücülük Biyotahlili

Burada, kimyasalların (örneğin, metamfetamin ve glifosat) yetişkin zebra balığı üzerindeki potansiyel nörotoksik etkilerini tek bir tank kullanarak etkili bir şekilde belirlemek için yeni tank, Shoaling ve sosyal tercih testleri dahil olmak üzere kapsamlı bir davranışsal test bataryası sunuyoruz. Bu yöntem nörotoksisite ve çevresel araştırmalarla ilgilidir.

Tek Bir Tankta Davranış Testleri Bataryası Kullanılarak Yetişkin Danio rerio'da Nörotoksisite Değerlendirmesi

Zebra balığı embriyo titreşimi ürkütücü tepkisine dayalı olarak kimyasal bileşik toksisitesini değerlendirmek için bir tarama sisteminin iş akışını ve veri analizini açıklıyoruz. Sistem, zebra balığı embriyolarının bir titreşim uyaranına maruz kaldıklarında hareketlerini kaydeder ve genel toksisite/ölümcüllük ve nöromüsküler toksisitenin entegre bir değerlendirmesine izin verir.

Zebra Balığı Titreşim İrkilme Tepkisi Tarama Sistemi Kullanılarak Kimyasalların Toksisitesinin Değerlendirilmesi

Makale, Mytilus galloprovincialis hemositlerinin motilitesine dayalı olarak kirleticilerin toksisitesinin ve ekotoksisitesinin hızlı ve hassas bir şekilde değerlendirilmesi için yeni bir in vitro yöntem önermektedir. Yöntem, daha etik ve hassas toksikolojik ve ekotoksikolojik maruziyet testlerinin geliştirilmesine katkıda bulunmayı amaçlamaktadır.

Midye (Mytilus galloprovincialis) Hemosit Motilitesine Dayalı Toksikolojik ve Ekotoksikolojik Bir Test

Öğrenin, gümüş nanokolloidlerin Oryzias latipes embriyolarında tuzluluk bağımlı toksisitesini değerlendirmek için yüksek verimli bir yöntem. Bu teknik, farklı tuzluluk koşullarında kimyasal etkileri incelemeye yardımcı olur.

Medaka Yumurta kullanma Gümüş Nanocolloids tuzluluk bağımlı zehirlilik Deneyi

Daha fazla video keşfet