Name: Fare Kulak ve Kuyruk Dokular Yaratma İlköğretim Fibroblast Kültürleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Öğrenin fare kulak ve kuyruk dokularından primer fibroblast kültürü oluşturmayı. Oda sıcaklığında 10 güne kadar saklanan dokular kullanılarak hücre biyolojisi araştırmaları yapılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, NRF hibesi HUJ-CREATE - Hücresel ve Moleküler Enflamasyon Mekanizmaları tarafından desteklenmiştir.

Fareler euthanization kadar kurumsal rehberlere (Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) kılavuzların Singapur Ulusal Üniversitesi ve Laboratuar Hayvan Araştırmaları Ulusal Danışma Komitesi (NACLAR) kurallar) ile uyumlu patojen içermeyen koşullar yerleştirildiler. 1. Fare <ol><li> Uygun genetik arka plan bir fare sipariş edin. Bu protokol, tek bir C57BL / 6 fareden alınmış dokuda dayanır. </li></ol> Tam Orta 2. Hazırlık <ol><li> % 10 fetal buzağı serumu (FCS), 50 uM 2-merkaptoetanol, 100 uM asparagin, 2 mM glutamin,% 1 penisilin-streptomisin solüsyonu: Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 ortamı aşağıdaki bileşenlerin eklenmesiyle tam orta hazırlayın. </li></ol> Enzim Çözümleri 3. Hazırlık <ol><li> 15 ml konik alt tüp içinde kollajenaz D çözeltisi hazırlayın. <ol><li> Kollajenaz D. Di 10 mg tartılır4 ml ssolve kolajenaz D komple ortam. </li></ol></li><li> 1.7 ml mikrosantrifüj tüpü içinde Pronaz çözelti hazırlayın. <ol><li> Pronaz 10 mg tartılır. </li><li> 1 M Tris tamponu (pH 8.0) 5 ul ekleyin. 0.5 M EDTA (pH 8.0) 1 ul ekleyin. </li><li> Steril su 494 ul ile doldurun. </li><li> 30 dakika için bir su banyosu içinde 37 ° C &#39;de Pronaz çözelti inkübe edin. </li></ol></li></ol> Kollajenaz D-Pronase Mix (≤2 kuyrukları) 4. hazırlanması Not: Steril bir hücre kültürü kaputu sonraki adımları gerçekleştirin. <ol><li> Kolajenaz D solüsyonu 4 ml Pronaz çözeltisi 250 ul ekle. </li><li> Steril bir 15 ml&#39;lik konik tabanlı tüp içine 0.2 mikron bir şırınga filtreden geçirilmiştir kolajenaz D-Pronaz karışımı geçirin. </li></ol> Kulak ve Kuyruk Dokular Fibroblast 5. Ekstraksiyon <ol><li> Uygun kurumsal kurallarına göre fareler Euthanize.</li><li> Hücre kültürü kaputu otoklava cerrahi aletler (makas ve forseps) yerleştirin. </li><li> Iki adet 10 cm hücre kültür tabaklarında her birine 10 ml tam orta ekleyin. </li><li> Kulakları (yaklaşık 1 cm çapında) ve makasla bir fare (kuyruk ucundan) kuyruk 5 cm kesin ve steril bir 50 ml konik bir tüp içinde 40 taban 70 ml etanol içinde% 5 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> 5 dakika boyunca kaputu açık 10 cm hücre kültürü çanak yerleştirerek hava kuru kulakları ve kuyruğu. Bir kez aşama 5,3 de tarif edildiği gibi aktarım kulak ve iki kültür tabaklarına kuyruk parçaları &quot;kulaklar&quot; ve 10 ml komple ortam içeren &quot;kuyruk&quot; etiketli, kurutulmuştur. </li><li> Kulakları ve kuyruğu kullanarak makas saç çıkarın. </li><li> Makas kullanılarak boyutu 3 mm&#39;den küçük parçalar halinde kulakları ve kuyruğu kesti. </li><li> &quot;Kulakları&quot; ve &quot;kuyruk&quot; etiketli 1.8 ml cryotube viyallere kesilmiş dokuları aktarın ve flakon 1.8 ml işaretine ulaşmak için hacim için yeterli kollajenaz D-Pronase çözüm ekleyin. </li><li> Pbir çalkalayıcı üzerinde yatay olarak cryotube şişeleri dantel ve 37 ° C &#39;de 90 dakika boyunca 200 rpm&#39;de örnekleri sallayın. </li><li> 90 dakika inkübasyondan sonra, çalkalayıcı gelen cryotube şişeleri kaldırmak ve kaputu şişeleri yerleştirin. </li><li> İki 10 cm hücre kültürü yemekleri, etiketli &quot;kulaklar&quot; ve &quot;kuyruk&quot; her birine 10 ml tam orta ekleyin ve her yemeğin içinde 70 mikron hücre süzgeç koyun. </li><li> &gt; 5 dakika boyunca 10 ml şırınga pistonu kullanarak dokuları eziyet zorla aşama 5.11 hazırlanan buna göre etiketlenmiş yemekleri 70 mikron hücre süzgecinden sindirilmiş kulak ve kuyruk dokuları yerleştirin ve. Hücre süzgecinden dışına hücreleri yıkamak için orta bazen hücre süzgeç sallayın. </li><li> &quot;Kulaklar&quot; ve &quot;kuyruk&quot; etiketli iki 15 ml konik alt tüpleri içine her yemeğin hücre süspansiyonu pipetle. Ek 10 ml tam orta çanak ve süzgeci yıkayın ve uygun 15 ml konik alt tüplerine orta ekleyin. </li><li> Hücreyi Spin~ 580 xg 7 dakika ve bir buzdolabında hücre santrifüj kullanılarak 4 ° C süspansiyon. </li><li> Süpernatantı 15 ml konik alt tüp hücre pelet 10 ml tam orta ekleyin ve hücreleri tekrar süspansiyon. </li><li> Adımı yineleyin 5.14 ve 5.15. </li></ol> Hücre Karışımı 6. Kültürleme <ol><li> Süpernatantı. Hücre topağı kesintisiz olmasını sağlamak. </li><li> 10 ml hücreleri tam orta yeniden askıya ve &quot;kulaklar&quot; ve &quot;kuyruk&quot; etiketli iki 10 cm hücre kültürü yemekleri için ilgili karışımı ekleyin. </li><li> Kültür: 10 ul amfoterisin B çözeltisi (250 mg / ml stok çözelti) eklenir. </li><li> Nemlendirilmiş bir% 5 CO2 inkübatörde 37 ° C&#39;de inkübe hücreleri. </li><li> Üçüncü gün, 10 mi taze tamamlanmış artığın ayrılması için amfoterisin B için 10 ul ihtiva eden ortam (Şekil 1 ve 2) ile orta değiştirin. </li></ol> Fibroblast 7. Alt kültür <ol><li> When kültürü yaklaşık% 70 ortak akışkanlığa (günlük kültür 3-4) orta kaldırmak ve 5 ml steril 1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile yıkama hücreleri ulaşır. </li><li> PBS çıkarın ve hücreleri 2 ml steril 1 x tripsin-EDTA çözeltisi ilave edilir. </li><li> Nemlendirilmiş bir% 5 CO2 inkübatöründe 37 ° C&#39;de 5 dakika boyunca inkübe hücreleri. </li><li> 5 dakika sonra, yavaşça kültürü çanak dokunun ve hücrelere 6 ml tam orta ekleyin. </li><li> 15 ml konik bir alt tüp hücre süspansiyonu aktarın ve soğutulmuş bir hücre santrifüj kullanılarak ~ 450 xg ve 4 ° C&#39;de 5 dakika boyunca tüp spin. </li><li> Süpernatantı ve yavaşça 5 ml tam orta hücre pelet yeniden askıya. </li><li> 10 cm hücre kültür kaplarına Tohum 2 x 10 5 hücre ve 7.6 arasındaki adımları 7.1 tekrarlamadan önce 3-4 gün boyunca nemlendirilmiş bir% 5 CO2 inkübatörde 37 ° C&#39;de inkübe hücreleri. </li></ol> Gönderi için Kulaklar 8. Hazırlık Not: t gerçekleştirO steril hücre kültürü kaputu sonraki adım. <ol><li> Uygun kurumsal kurallarına göre fareler Euthanize. </li><li> Hücre kültürü kaputu içine otoklava makas ve forseps yerleştirin. </li><li> 50 ml&#39;lik konik tabanlı tüp içine 50 mL tam orta ekleyin. </li><li> Makasla bir fare kulakları (~ 1 cm çapında) kesin. </li><li> Forseps kullanarak (aşama 3&#39;te hazırlanan gibi) 50 ml konik taban tüpü içine kulaklar aktarın. </li><li> Uygun bir kutuda oda sıcaklığında göndermeden önce parafilm 50 ml konik alt tüp Seal. </li></ol>

<ol><li>Fitzpatrick, L. E., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-derived+matrices+for+tissue+engineering+and+regenerative+medicine+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Cell-derived matrices for tissue engineering and regenerative medicine applications.</a> Biomater Sci. 3 (1), 12-24 (2015).</li>
<li>Elenbaas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+cancer+cells+generated+by+oncogenic+transformation+of+primary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Human breast cancer cells generated by oncogenic transformation of primary epithelial cells.</a> Genes Dev. 15 (1), 50-65 (2001).</li>
<li>Stansley, B., Post, J., Hensley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+review+of+cell+culture+systems+for+the+study+of+microglial+biology+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">A comparative review of cell culture systems for the study of microglial biology in Alzheimer's disease.</a> J Neuroinflammation. 9 (1), 115(2012).</li>
<li>Lim, J., Dobson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+transfection+of+HUVEC+and+MEF+cells+using+DNA+complexes+with+magnetic+nanoparticles+in+an+oscillating+field%5BTitle%5D)+AND+%22J+Genet%22%5BJournal%5D)">Improved transfection of HUVEC and MEF cells using DNA complexes with magnetic nanoparticles in an oscillating field.</a> J Genet. 91 (2), 223-227 (2012).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+transduction+of+fibroblasts+and+mesenchymal+stem+cells+by+tyrosine-mutant+AAV2+vectors+for+their+potential+use+in+cellular+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">High-efficiency transduction of fibroblasts and mesenchymal stem cells by tyrosine-mutant AAV2 vectors for their potential use in cellular therapy.</a> Hum Gene Ther. 21 (11), 1527-1543 (2010).</li>
<li>Patel, M., Yang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+reprogramming+somatic+cells+to+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Advances in reprogramming somatic cells to induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Rev. 6 (3), 367-380 (2010).</li>
<li>Newman, A. C., Nakatsu, M. N., Chou, W., Gershon, P. D., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+requirement+for+fibroblasts+in+angiogenesis%3A+fibroblast-derived+matrix+proteins+are+essential+for+endothelial+cell+luman+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">The requirement for fibroblasts in angiogenesis: fibroblast-derived matrix proteins are essential for endothelial cell luman formation.</a> Mol Biol Cell. 22 (20), 3791-3800 (2011).</li>
<li>Ohlund, D., Elyada, E., Tuveson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+heterogeneity+in+the+cancer+wound%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Fibroblast heterogeneity in the cancer wound.</a> J Exp Med. 211 (8), 1503-1523 (2014).</li>
<li>Guo, S., Dipietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Factors affecting wound healing.</a> J Dent Res. 89 (3), 219-229 (2010).</li>
<li>Werner, S., Krieg, T., Smola, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keratinocyte-fibroblast+interactions+in+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Keratinocyte-fibroblast interactions in wound healing.</a> J Invest Dermatol. 127 (5), 998-1008 (2007).</li>
<li>Shen, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-derived+cytosolic+DNA+mediates+type+I+interferon-dependent+rejection+of+B+cell+lymphoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Genome-derived cytosolic DNA mediates type I interferon-dependent rejection of B cell lymphoma cells.</a> Cell Rep. 11 (3), 460-473 (2015).</li>
<li>Seluanov, A., Vaidya, A., Gorbunova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+primary+adult+fibroblast+cultures+from+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishing primary adult fibroblast cultures from rodents.</a> J Vis Exp. (44), (2010).</li>
<li>Baglole, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+phenotypic+characterization+of+lung+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Isolation and phenotypic characterization of lung fibroblasts.</a> Methods Mol Med. 117, 115-127 (2005).</li>
<li>Alt, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblasts+share+mesenchymal+phenotypes+with+stem+cells%2C+but+lack+their+differentiation+and+colony-forming+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Fibroblasts share mesenchymal phenotypes with stem cells, but lack their differentiation and colony-forming potential.</a> Biol Cell. 103 (4), 197-208 (2011).</li>
<li>Kuilman, T., Michaloglou, C., Mooi, W. J., Peeper, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+essence+of+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The essence of senescence.</a> Genes Dev. 24 (22), 2463-2479 (2010).</li>
<li>Lander, M. R., Moll, B., Rowe, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+procedure+for+culture+of+cells+from+mouse+tail+biopsies%3A+brief+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">A procedure for culture of cells from mouse tail biopsies: brief communication.</a> J Natl Cancer Inst. 60 (2), 477-478 (1978).</li>
<li>Moore, C. B., Allen, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+ear+fibroblast+derivation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary ear fibroblast derivation from mice.</a> Methods Mol Biol. (1031), 65-70 (2013).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+stable+pluripotent+stem+cells+from+NOD+mouse+tail-tip+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Generation of stable pluripotent stem cells from NOD mouse tail-tip fibroblasts.</a> Diabetes. 60 (5), 1393-1398 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Burada kulakları ve farelerin kuyrukları primer fibroblast kültürleri kurmak için, basit, ucuz ve hızlı bir deneysel prosedür sağlar. Ekstraksiyon doku 3 gün sonra izole olan yapışık ve hızlı bölünen fibroblastlar ile sonuçlanmalıdır. Primer hücrelerin önemli bir sınırlama yaşlanması, kalıcı bir büyüme tutuklama 15&#39;dir. Fibroblastlar yaşlanmış hale gelmeden önce protokolü kullanarak, fibroblast kültürleri boyutu (3/2 katı artış) ve genişletmek için başarısızlık artış, hücrelerin yassılaşmasına ile gösteri...

Birincil hücreler, in vitro koşullarda doku ve kültüre canlı elde edilir. Genellikle birincil hücreler daha yakından fizyolojik durumu ve ölümsüzleştirilmiş veya tümör hücre çizgileri 1 den kaynaklandığı doku genetik yapısının benzer olduğu varsayılır. Bu nedenle, birincil hücreler biyolojik sorular 2,3 eğitimi için yararlı bir model oluşturmaktadır. Ancak, sonsuza kadar büyümesine kurulan hücre hatları aksine, birincil hücreler sonunda kültürdeki yaşlanmayı geçmesi ve sık sık yeniden oluşturulması gerekmektedir. Yaygın olarak kullanılan birincil hücreler, fibroblastlar, epitel hücreleri, endoteliyel hücreler, T hücreleri, B hücreleri, kemik iliği türevli makrofajlar (BMDM) ve kemik iliği türevli dendritik hücreleri (BMDC) içerir. Fibroblastlar, genellikle birincil hücre kültürü modeli olarak kullanılır. Onlar diğer birincil hücreler üzerinde önemli avantajlar sunuyoruz. Hücre kültürleri kolayca kolayca muhafaza kurulmuş ve hiçbir purifica gerektirirkültür öncesi hücrelerin tion. Onlar, hızlı başlangıç ​​çoğalması ve uzman, orta veya aktivasyon protokolleri için hiçbir şartı var. Fibroblastlar verimli biyolojik, kimyasal ve fiziksel protokolleri 4,5 ile transfekte edilebilir. Hücre kültürleri kurulmadan önce oda sıcaklığında en fazla 10 gün süreyle kulaklarını saklamak için bir olasılık var. Fibroblast kültürleri sitoplazmik süreçlerin görselleştirme için elverişli ve uyarılmış pluripotent kök (iPS) hücrelerden 6 içine yeniden programlanması için uygundur. Fibroblastlar kollajen proteinleri ve hücre dışı matriks 7 salgılayan bağ dokusunun önemli hücreleridir. Bunlar birçok dokuda 8 yapısal çerçeve sağlar ve yara iyileşmesi ve doku onarımı, 9,10 önemli bir rol oynar. Burada, biz fibroblast kulaklar kültür ve farelerin 11 kuyrukları kurmak için basit ve hızlı bir (&lt;4 saat) protokol açıklar. Protokol minimal fare gerektirirdeneyimi (diğer protokollere 12,13 aksine) dokular hasat ve 10 gün oda sıcaklığında ortamında saklanır kulak kültürleri oluşturmak için de kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>RPMI-1640</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Buzağı Serumu</td><td>HyClone</td><td>SV30160.03</td><td></td></tr><tr><td>2-merkaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Asparagin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4159</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8540</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>HyClone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Analiz için Etanol</td><td>Merck Millipore</td><td>107017</td><td>Mutlak</td></tr><tr><td>Kollajenaz D</td><td>Roche Teşhis</td><td>11088866001</td><td>Clostridium histolyticum, liyofilize, steril olmayan</td></tr><tr><td>Pronaz proteaz</td><td>Merck Millipore</td><td>53702'den</td><td>Streptomyces griseus&nbsp; </td></tr><tr><td>Tris tamponu (pH 8)</td><td>1. BASE</td><td>1415</td><td>Ultra saf sınıf</td></tr><tr><td>0.5M EDTA (pH 8)</td><td>1. BAZ</td><td>BUF-1053</td><td>Biyoteknoloji sınıfı</td></tr><tr><td>10X Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>1. BASE</td><td>BUF-2040-10X4L</td><td>Ultra saf sınıf</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA çözeltisi 10X</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>59418C-100ML</td><td>% 0.5 tripsin,% 0.2 EDTA, fenol kırmızısı olmadan SER-TAIN işlemi ile ışınlanmış tripsin gama, tuzlu</td></tr><tr><td>Amfoterisin B</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2492-20ml</td><td>250 & mu; deiyonize suda g / ml, steril filtrelenmiş</td></tr><tr><td>Makas</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>Aesculap</td><td>AE-BD312R</td><td></td></tr><tr><td>0.2 & mu; M şırınga filtresi</td><td>Sartorius Stedim</td><td>16534</td><td></td></tr><tr><td>70 & M hücre süzgeci</td><td>SPL</td><td>93070</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga pistonu</td><td>Terumo</td><td>SS + 10L</td><td></td></tr><tr><td>Kriyoviyal tüp</td><td>NUNC</td><td>368362</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml mikrosantrifüj tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>10 cm hücre kültürü kabı</td><td>Greiner</td><td>664160</td><td>Hücre kültürü ile muamele edilmiş tabak&nbsp;</td></tr><tr><td>15 ml konik tabanlı boru</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>50 ml konik tabanlı tüp</td><td>Greiner</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td>GFL</td><td>1002</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>İnkübasyon çalkalayıcı</td><td>Sartorius Stedim</td><td></td><td>Certomat-BS1</td></tr><tr><td>Zeiss Axiovert 25 ışık mikroskobu</td><td>Carl Zeiss AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare kulak ve kuyruk dokular yaratma İlköğretim fibroblast kültürleri

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Birincil hücreler doku şirketinden elde edilir yerleşmiş hücre hatlarında ve daha etkin in vivo hücre fizyolojik durumu daha iyi temsil olduğu düşünülmektedir. Bununla birlikte, birincil hücre kültürleri, genellikle sınırlı bir ömre sahiptir ve sık sık yeniden tesis edilmesi gerekir. Fibroblastlar primer hücre kolay ulaşılabilir bir kaynağıdır. Burada, kulakları ve farelerin kuyrukları primer fibroblast kültürleri kurmak için basit ve hızlı bir deneysel prosedür tartışır. Protokolü için 10 gün süreyle oda sıcaklığında depolanan kulak birincil fibroblast kültürleri oluşturmak için de kullanılabilir. Protokol dikkatle takip edildiğinde, bulaşmalar bazı durumlarda uzun süre saklanan steril olmayan doku kullanımına rağmen ortaya çıkması olası değildir. Fibroblastlar kültürde hızla çoğalırlar ve replikatif yaşlanmayı geçmeden önce önemli sayıda genişletilebilir.

Doku çöküntüsü önemli bir miktarda doku sonuçlarından fibroblast ekstraksiyonu (Şekil 1). Doku çöküntüsü aksine, fibroblastlar gün 1 ve kültür 3 arasında doku kültürü plastik yüzeylere yapışır. Fibroblast kültürlerinde orta güvenle anlamlı kültür (Şekil 2) enkaz mevcut seviyelerini azaltmak gerektiğini kültür, günü 3 değiştirilebilir. Fibroblastlar bir ince uzun morfoloji ve net bir şekilde görülebilen sitoplazma (Şekil 1 ve 2) göstermektedir. Mitotik h...

Bu kulak ve farelerin kuyrukları primer fibroblastlar üretilmesi için basit ve hızlı bir deney prosedürü tarif etmektedir. Prosedür özel hayvan eğitim gerektirmeyen ve 10 gün oda sıcaklığında saklanan kulaklardan fibroblast kültürlerin üretimi için de kullanılabilir.

Fare Kulak ve Kuyruk Dokular Yaratma İlköğretim Fibroblast Kültürleri

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Bu protokolün genel amacı, farelerin kulaklarından ve kuyruklarından primer fibroblast kültürleri oluşturmaktır. Bu yöntem, sağlıklı hücreler ile kanser hücreleri arasındaki fark gibi hücre biyolojisi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu çalışmanın temel avantajı, hücreleri izole etmeden önce oda sıcaklığında besi yerinde 10 güne kadar saklanmış kulaklardan fibroblast üretebilmemizdir.Bu yöntem fare biyolojisine dair içgörü sağlayabilse de sıçanlar ve tavşanlar gibi diğer memeli hayvan organizmalara da uygulanabilir. Dokuları toplamadan önce, 10 santimetrelik kültür kaplarına 10 mililitre tam besiyeri doldurun. Ardından, fare ötanize edildikten sonra sterilize edilmiş aletler kullanarak doku örneklerini toplamaya geçin.Yaklaşık bir santimetre yarıçapında kulak dokusu ve yaklaşık beş santimetre uzunluğunda kuyruk dokusu toplayın. Dokuları, 40 milliliters %70 etanol içeren konik bir tüpe aktarın. Dokuları beş dakika boyunca bekletin ve ardından bir kültür davlumbazı içinde, açık 10 centimeter kültür kabında beş dakika boyunca havada kurutun.Dokular kuruduktan sonra, onları besiyeri yüklü plakaya aktarın. Şimdi, tüm dokulardaki kılları makasla kesin ve ardın

generating-primary-fibroblast-cultures-from-mouse-ear-and-tail-tissues

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu makalede, izolasyon ve bakım, cilt ve akciğer dokusunda yaban kemirgenler birincil fibroblast kültürlerinin için bir protokol tanımlamaktadır.

Kemirgenler itibaren İlköğretim Yetişkin Fibroblast Kültürleri kurulması

Fare embriyonik fibroblast (MEFS) kalitesi, CF-1 gibi farenin sağ suşu tarafından dikte edilir. Bu elde edilen Pluripotency destekleyici MEFS ve klimalı ortam (CM) işbirliği içinde kendini yenileyen ve pluripotency korumak için aktivin / Düğüm ve FGF yolları için gerekli aktivin A, Gremlin ve Tgfβ1 optimal konsantrasyonu içermelidir.

Kültürleme İnsan Embriyonik ve Bağlı Pluripotent Kök Hücrelerinin için uygundur Fare embriyonik fibroblast hücreleri hazırlanması

Onlar pluripotency için standart testleri geçmek bile oluşturuluyor indüklenen pluripotent kök hücre (IPSC) hatları gelişim potansiyeli birbirinden farklı çizgiler üretir. Burada sahip tam olarak pluripotency IPSC hattı tanımlayan iPSCs, tamamen edilen fareler üretmek için bir protokol...

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

Bu videoda, doğum sonrası fare yavrusunun derisinden melanositleri ve fibroblastı aynı anda izole etmek ve kültürlemek için hızlı yöntem açıklanmaktadır. Bu hücreler, cilt hücresi biyolojisini, yara iyileşmesini ve melanomu incelemek için in vitro olarak korunabilir ve manipüle edilebilir.

Primer Murin Melanositlerinin ve Fibroblastlarının Hızlı Kültürlenmesi: Tüm Murin Deri Örneğinden Melanositlerin ve Fibroblastların İzole Edilmesi

Burada, biz çift tohumlama kısmen uyarılmış pluripotent kök hücre ile farelere aşılama için fonksiyonel doku mühendisliği gemi greft oluşturmak için bir protokol mevcut (PiPSC) - Bir decellularized damar iskele biyoreaktör üzerinde elde edilen endotel hücreleri - düz kas hücreleri ve PiPSC türetilmiş.

Bir Fare Modeli Doku mühendisliği Kapların Üretimi ve Tırnak

Burada, polisistronik bir yapıda Gata4, Tbx5 ve Mef2c'nin retrovirüs aracılı dağıtımını kullanarak iCM'lerin üretilmesi için bir protokol açıklıyoruz. Bu protokol, geliştirilmiş verimlilik ve kaliteye sahip nispeten homojen bir yeniden programlanmış hücre popülasyonu sağlar ve gelecekteki iCM yeniden programlama çalışmaları için değerlidir.

Gata4, Mef2c ve Tbx5 Optimal Oranı ifade bir polisistronik Construct kullanma Kaynaklı kardiyomiyositlerde Geliştirilmiş Nesil

Fibroblast davranışı, bir klinik antite spektrumunun temelini oluşturur, ancak büyük ölçüde doğal heterojenlikleri nedeniyle zayıf karakterize edilirler. Geleneksel fibroblast araştırmaları, in vivo fibroblast davranışını maskeleyen in vitro manipülasyona dayanır. Hücre kültürü gerektirmeyen fare derisi fibroblastlarının izolasyonu için FACS tabanlı bir protokol tanımladık.

FACS ile Murin Dermal fibroblast İzolasyonu

Üreten indüklenen için burada bizim iletişim kuralı mevcut erythroid ataları (iEPs) üzerinden fare yetişkin fibroblastlar transkripsiyon faktörü odaklı kullanarak doğrudan lineage (DLR) yeniden şekillendirmek için.

Lineage yetişkin fare Fibroblast Erythroid ataları için yeniden programlama doğrudan

Bu protokol, 0-4 gün eski farelerin derisinden melanosit ve fibroblast kültürlerini eşzamanlı olarak oluşturmak için hızlı bir yöntem özetliyor. Bu primer kültürler, cilt hücresi biyolojisi, pigmentasyon, yara iyileşmesi ve melanom dahil olmak üzere fizyolojik olarak ilgili süreçlerin çeşitli çalışma için muhafaza ve manipüle edilebilir.

Primer Murine melanosit ve fibroblast kültürlerinin hızlı üretimi

Birincil erişkin fibroblastları, yeni başlayanlar tarafından (örn. öğrenciler) kolay, hızlı ve güvenilir bir şekilde ayırmak için bir protokol sunuyoruz. Prosedür primer fibroblastlar elde etmek için enzimatik doku sindirim ve ultrasonik dalgalar ile mekanik ajitasyon birleştirir. Protokol, belirli deneysel gereksinimlere (örn. insan dokusu) kolayca adapte edilebilir.

Ultrasonik-Augmented primer yetişkin fibroblast yalıtım

Burada sunulan, mekanistik çalışmalar, hastalık modelleme ve tarama uygulamaları için uygun, çift kutuplu çok kuyulu bir plakada 48 dokudan oluşan paralel bir kültür için tasarlanmış bağ dokuları üretmek için bir protokoldür. Protokol, farklı organ ve türlerden fibroblastlarla uyumludur ve burada insan primer kardiyak fibroblastlarla örneklenmiştir.

Fibroblast Türetilmiş İnsan Tarafından Tasarlanmış Bağ Dokusu Tarama Uygulamaları için

Öğrenin fare kulak ve kuyruk dokularından primer fibroblast kültürü oluşturmayı. Oda sıcaklığında 10 güne kadar saklanan dokular kullanılarak hücre biyolojisi araştırmaları yapılabilir.

Fare Kulak ve Kuyruk Dokular Yaratma İlköğretim Fibroblast Kültürleri

Daha fazla video keşfet