Fare Lenfoma Modellerinde İzleme Tümör ilerleme ve Tedavi Etkileri Biyoparlaklık Tabanlı Tümör Niceleme Yöntemi

Bu görüntüleme prosedürünün genel amacı, farklı deneyler içinde veya arasında karşılaştırma için nicel veriler elde etmek için biyolüminesans elde etme prosedürlerini ve görüntü analizlerini standartlaştırmaktır. Bu yöntem, biyolüminesans görüntüleme alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir, örneğin, görüntüleme verileri tekrarlanabilir bir şekilde nasıl ölçülebilir? Bu tekniğin temel avantajları, biyolüminesans görüntüleyiciye sahip herhangi bir hayvan tesisinde kurulumunun kolay olması ve karmaşık hesaplamalar gerektirmemesidir.

Görüntüleyiciyi açın ve Edinme yazılımını açın. Kamerayı, aşamaları ve lensleri başlatmak için Başlat'a tıklayın. Bacak sıkışmasına yanıt vermeyerek uygun sedasyon seviyesini onayladıktan sonra, bir fareyi bir ısıtma pedine yerleştirin ve göz merhemi uygulayın.

Ardından, 100 mikrolitre taze hazırlanmış D-Luciferin potasyum tuzu çözeltisini intraperitoneal olarak enjekte etmek için 25 gauge bir iğne kullanın. Bu durumda, tümör hücreleri ateşböceği lusiferaz eksprese eder. Bu protein, D-Luciferin'i oksitler ve görüntüleyici ile tespit edilebilen ışık üretir.

10 dakika sonra, fareyi yüzüstü bakacak şekilde, sırtı kameraya bakacak şekilde mümkün olduğunca düz bir konumda olacak şekilde görüntüleyiciye yerleştirin. Otomatik pozlama özelliğini seçin ve hayvanın arka görüntüsünü elde etmek için Al'a tıklayın. Ardından, fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve ön uzuvları göğsü tıkamayacak şekilde açın.

Otomatik pozlama onay kutusunun hala seçili olduğunu onaylayın ve Hayvanın ön görüntüsünü elde edin. Ardından, fareyi tamamen iyileşene kadar ısıtma pedine geri koyun, bu noktada hayvan kafesine geri döndürülebilir. Biyolüminesansı ölçmek için menüde Görünüm'e tıklayın ve henüz görüntülenmiyorsa Araç Paleti'ni seçin.

Ardından, ilgilenilen bölge araç sekmesine tıklayın, kontur düğmesini seçin ve Serbest Çekiliş'i seçin. Serbest Çizim aracını kullanarak, ilgilenilen bölgeyi işaretlemek için tüm farenin kenarlarını veya ön görünüm görüntüsündeki belirli bir alanı takip edin, konturu kapatmak için sağ tıklayın. Henüz seçili değilse, resmin sol üst kısmındaki Birimler kaydırma menüsünde Işıltı'yı seçin.

Daha sonra, foton akısını ölçmek için Saniyedeki Toplam Akı fotonları kutusundaki değeri okuyun. Ardından, Görünüm menüsüne ve ilgilenilen bölge ölçümlerine tıklayın. Arka görünüm görüntüsü için analizi tekrarladıktan sonra, luminoscore'u elde etmek için her iki görünüm için elde edilen fotoğraf akısı değerlerini ekleyin.

Bu deneyde, tümör enjeksiyondan 10 dakika sonra tespit edilebilirdi. Görüntüler tek başına tümör hücrelerinin doğru yerde bulunduğunu doğrular. Bununla birlikte, biyolüminesansın ölçülmesi, enjeksiyon alan ve almayan hayvanlar arasında açık bir fark olduğunu göstermiştir.

İlginç bir şekilde, deri altı modelde elde edilen sinyal, enjekte edilen hücre sayısı ile tutarlı olarak, primer göz içi lenfoma modelinden 100 kat daha yüksekti. Burada, kontrol ve CpG ile tedavi edilen primer göz içi lenfoma farelerinde temsili tümör büyüme görüntüleri, yeterli bir süre sonra kontrol grubunda metastazların ortaya çıkmaya başladığını göstermektedir. Primer tümör tedaviye duyarlı görünmese de, CpG ile tedavi edilen grupta daha az metastaz gözlendi.

Gerçekten de, her gruptaki tümör yükünün kantitatif analizi, CpG'nin tümör gelişimini yavaşlattığını ve 28 gün sonra tedavi edilen ve kontrol grupları arasında tümör lüminesansında istatistiksel olarak anlamlı bir fark yarattığını göstermektedir. Bu deri altı modelde, farenin her iki tarafına iki tümör aşılandı ve tedavi sıfırıncı günde tek bir tarafa yerinde uygulandı ve kontralateral tümör kontrol görevi gördü. Daha sonra fare başına iki ilgi bölgesi çizildi ve tedavi edilen ve kontrol taraflarındaki luminoskor arasındaki oran ölçüldü.

Tedavinin uygulanmasından 13 gün sonra, luminoskor oranında önemli bir azalma gözlendi ve bu, ilgili biyolüminesans görüntüleri ile daha fazla kanıtlandığı gibi, tedavi edilen tümörün rezorbe olduğunu ortaya koydu. Bir kez uygulandıktan sonra, bu analiz uygun şekilde yapılırsa hayvan başına iki dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü takiben, tümör hücresi hedef arama veya metastaz mekanizmaları hakkında ek soruları yanıtlamak için tümör bölgesinin kalitatif yerleşimi gibi başka bir yöntem uygulanabilir.

Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, klinik öncesi küçük hayvan modellerinde tümör ilerlemesini keşfetmek için araştırmacı ve biyolüminesans görüntüleme alanının yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, tümör yükünü tekrarlanabilir bir şekilde ölçmek için biyolüminesans görüntülemenin nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız. Küçük hayvanlar ve cerrahi aletlerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken aletlerin uygun şekilde sterilize edilmesi gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.