Name: Bir Model Olarak Zebra balığı Nitrit teratojenik potansiyelini değerlendirmek için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Öğrenin, zebra balığı embriyolarında nitrit maruziyetinin teratojenik etkilerini değerlendirmek için. Bu yöntem, kimyasalların gelişimsel toksikolojisini inceleyen araştırmacılar için değerli bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

VK, İÜP Biyoloji Bölümü ve Lisansüstü Eğitim ve Araştırma Okulu'ndan (Lisansüstü Öğrenci Mesleki Gelişim) sağlanan hibelerle finanse edilmiştir. CQD ve TWS, İÜP Lisansüstü Eğitim ve Araştırma Okulu (Fakülte Yayın Maliyetleri/Arızi Araştırma Giderleri) tarafından desteklenmiştir. Ayrıca zebra balığı tesisini korudukları için Diep laboratuvarı üyelerine de teşekkür ederiz.

Bu protokol açıklanan prosedürler Pennsylvania Indiana Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. 1. Hasat Embriyolar <ol><li> 28.5 ° C, pH 7, 500-1,500 uS arasındaki iletkenlik zebrafish muhafaza ve 14 saat ışık ve 10 saat 24 ışıksız bir ışık / karanlık çevrimi. Böyle Tü, AB ya da Tü / AB melez olarak yabani tip suşlar kullanın. Farklı suşları kimyasal arıtma 25 farklı yanıt verebilir. </li><li> Bir çiftleşme tankına balık sistem su ilave edilerek hasat yumurta önceki gece çiftleşme için balık ayarlayın. tanka bir erkek ve dişi balık ekleyin ve bir bölücü ile iki balık ayırın. Her balık çifti 50-300 yumurta bir dizi üretecek. bu yeterli yumurta balık 30 çift kurmak, üretilecek sağlamak. Tipik olarak, Başbakan çiftleşme yaşta balık çiftlerinin yaklaşık% 50 (6-9 aylık) 200 çifti başına yumurta ve 3&#39;e kadar maksimum sonuçlanan yumurta üretecekBu deney için 000 yumurta. </li><li> ışığı yanar sonra ertesi sabah, çiftleşme başlatmak için bölücü kaldırın. Yumurtalar için her 15 dakikada bir çiftleşme tankları kontrol edin. </li><li> Balık yumurtalarını kez, bir çay süzgeci kullanarak tüm embriyolar hasat ve E3 tamponu (5 mM NaCl, 0.17 mM KCI, 0.33 mM CaCl2, 0.33 mM MgSO 4) ile büyük bir kap içine bunları birleştirmek. 1.5 hpf, kaldırmak ve bir mikroskop altında plastik bir transfer pipet ile döllenmemiş yumurta atmak. Döllenmiş yumurtalar 34 şeffaf ise döllenmemiş yumurtalar opak bulunmaktadır. </li><li> Her bir tedavi durumu için 50 mi E3 tamponu ihtiva eden bir 100 x 15 mm ebadındaki bir cam Petri kabı içine başına 50 embriyo. 33 yemekleri toplam 11 tedavi koşulları ve 3 tekerrürlü için gereklidir. </li></ol> 2. Şifalı Embriyolar <ol><li> 2 saat sonrası fertilizasyon (hpf) 35 bakımları yürütmek. 28.5 ° C embriyolar / larvaları inkübe ve 120 hpf larvaları inceleyin. lea gerçekleştirmekst İstatistiksel analiz için her tedavi durumun üç suret. </li><li> 2 HPF 3 Petri kapları (her biri 50 embriyo) için bir transfer pipetiyle E3 tamponunu çıkarın ve E3 tamponu içinde seyreltilmiş 300 mM 50 ml etanol ekleyin. etanol buharlaşmasını en aza indirmek için Parafilm ile Petri kapları örtün. <ol><li> 22 saat boyunca etanol embriyolar maruz devam edin. Sonra bir transfer pipet ile etanol çıkarın. E3 tampon 50 ml ekleyin ve etanol yıkamak için çanak birkaç kez girdap. Bir transfer pipet ile bu E3 tamponu çıkarın ve yıkama adım 2 kez daha tekrarlayın. </li></ol></li><li> 2 HPF 3 Petri kapları (her biri 50 embriyo) için bir transfer pipetiyle E3 tamponunu çıkarın ve yeni bir E3 tamponu 50 ilave edin. </li><li> 2 hpf 9 Petri kapları (her biri 50 embriyo) için bir transfer pipetiyle E3 tamponunu çıkarın ve E3 tamponu içinde çözülmüş 1.000 mg / l sodyum nitrit 50 ilave edin. Önceden kullanarak stok nitrit çözeltisinin konsantrasyonu onaylayındiyazotizasyonda modifikasyonu (USEPA Yöntem 354.1) spektrofotometrik yöntem 28. <ol><li> 46 saat 3 yemekler, 70 saat boyunca 3 yemekler ve 94 saat süreyle 3 yemekler açığa devam edin. günlük taze yapılmış nitrit çözeltisi ile nitrit çözeltisi değiştirin. </li><li> Her maruziyet süresinden sonra, bir transfer pipet ile Nitrit çıkarın. E3 tampon 50 ml ekleyin ve nitrit yıkamak için çanak birkaç kez girdap. Bir transfer pipet ile bu E3 tamponu çıkarın ve yıkama adım 2 kez daha tekrarlayın. </li></ol></li><li> 2 HPF 3 Petri kapları (her biri 50 embriyo) için bir transfer pipetiyle E3 tamponunu çıkarın ve 200 mg / L sodyum nitrit 50 ilave edin. 400, 600, 800 ile bu işlemi tekrarlayın ve sodyum nitrit 1,000 mg / L. <ol><li> 70 saat süre ile nitrite embriyolar maruz devam edin. günlük taze yapılmış nitrit çözeltisi ile nitrit çözeltisi değiştirin. </li><li> pozlama süresinden sonra, bir transfer pipet ile Nitrit çıkarın. E3 tampon 50 ml ekleyin ve birkaç çanak girdapzaman nitrit yıkayın. Bir transfer pipet ile bu E3 tamponu çıkarın ve yıkama adım 2 kez daha tekrarlayın. </li></ol></li><li> 2 HPF 3 Petri kapları (her biri 50 embriyo) için bir transfer pipetiyle E3 tamponunu çıkarın ve E3 tamponu içinde çözülmüş 1.000 mg / L sodyum nitrat 50 ml ekleyin. Kadmiyum indirgeme (USEPA Yöntem 353.3) spektrofotometrik 28 bir modifikasyonu kullanılarak, önceden hazır nitrat çözeltisi konsantrasyonunu kontrol edin. <ol><li> 70 saat boyunca nitrata embriyolar maruz devam edin. günlük taze yapılmış nitrat çözeltisi ile nitrat çözeltisi değiştirin. </li><li> pozlama süresinden sonra, bir transfer pipet ile nitratı temizler. E3 tampon 50 ml ekleyin ve nitrat yıkamak için çanak birkaç kez girdap. Bir transfer pipet ile bu E3 tamponu çıkarın ve yıkama adım 2 kez daha tekrarlayın. </li></ol></li><li> maruziyet her gün boyunca, bir stereomikroskopta kullanarak ölü embriyo / larvaların sayısını. Ölüm İşaretlerkalp atışı eksikliği ve kan dolaşımını, ya da gözlem 1 dakika sonra hareketlilik eksikliği sayılabilir. E3 tampon kirlenmesini azaltmak için bir transfer pipet ile ölü embriyolar / larva çıkarın. </li><li> Deneyler 120 hpf bittiğinde, larva euthanize. <ol><li> Bir transfer pipet ile E3 tamponu çıkarın. Daha sonra, (pH 7 tamponlanmış)% 0.2, MS-222, 50 ml ilave edilir ve 10 dakika boyunca bekleyin. </li><li> Bir transfer pipet ile MS-222 çıkarın. MS-222 yıkamak için E3 tampon ve girdap 50 ml ekleyin. </li><li> Bir transfer pipet ile E3 tamponu çıkarın ve larvaları düzeltmek için% 4 paraformaldehid (PFA) 20 ml ekleyin. çanak birkaç kez girdap. şişeyi doldurmak için yeterli PFA ile birlikte bir cam şişenin içine larva aktarmak için bir aktarma pipeti kullanarak. gece buzdolabında şişeleri (O / N) saklayın. </li></ol></li><li> Bir dijital kamera ile Stereoskop kullanarak sabit larva fotoğraf çekmek. 30X büyütme, ISO 200 ve 200 msn pozlama süresini kullanın. larvaları yönlendirmek böylece le anteriorft ve dorsal alanının üst etmektir. </li></ol>

<ol><li>Gilbert-Barness, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratogenic+causes+of+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Teratogenic causes of malformations.</a> Ann Clin Lab Sci. 40 (2), 99-114 (2010).</li>
<li>Brent, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cause+and+prevention+of+human+birth+defects%3A+What+have+we+learned+in+the+past+50+years%5BTitle%5D)+AND+%22Con+Anom%22%5BJournal%5D)">The cause and prevention of human birth defects: What have we learned in the past 50 years.</a> Con Anom. 41 (1), 3-21 (2001).</li>
<li>Lin, S., Zhao, Y., Nel, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+an+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: an in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9 (9-10), 1608-1618 (2013).</li>
<li>Pamanji, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+effects+of+profenofos+on+embryonic+and+larval+development+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Toxicity effects of profenofos on embryonic and larval development of zebrafish (Danio rerio).</a> Environ Toxicol Pharmacol. 39 (2), 887-897 (2015).</li>
<li>Simmons, A. E., Karimi, I., Talwar, M., Simmons, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nitrite+on+development+of+embryos+and+early+larval+stages+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Effects of nitrite on development of embryos and early larval stages of the zebrafish (Danio rerio).</a> Zebrafish. 9 (4), 200-206 (2012).</li>
<li>Mantecca, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+Evaluation+of+a+New+Zn-Doped+CuO+Nanocomposite+With+Highly+Effective+Antibacterial+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Toxicity Evaluation of a New Zn-Doped CuO Nanocomposite With Highly Effective Antibacterial Properties.</a> Toxicol Sci. , (2015).</li>
<li>Jensen, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+formation+from+nitrite+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide formation from nitrite in zebrafish.</a> J Exp Biol. 210, 3387-3394 (2007).</li>
<li>Scholz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+embryo+model+in+environmental+risk+assessment--applications+beyond+acute+toxicity+testing%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Pollut+Res+Int%22%5BJournal%5D)">The zebrafish embryo model in environmental risk assessment--applications beyond acute toxicity testing).</a> Environ Sci Pollut Res Int. 15 (5), 394-404 (2008).</li>
<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>CDC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+abortions+possibly+related+to+ingestion+of+nitrate-contaminated+well+water--LaGrange+County%2C+Indiana%2C+1991-1994%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morb+Mortal+Wkly+Rep%22%5BJournal%5D)">Spontaneous abortions possibly related to ingestion of nitrate-contaminated well water--LaGrange County, Indiana, 1991-1994.</a> MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 45 (26), 569-572 (1996).</li>
<li>Brender, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+nitrate+intake+from+drinking+water+and+selected+birth+defects+in+offspring+of+participants+in+the+national+birth+defects+prevention+study%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Prenatal nitrate intake from drinking water and selected birth defects in offspring of participants in the national birth defects prevention study.</a> Environ Health Perspect. 121 (9), 1083-1089 (2013).</li>
<li>Huber, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+dietary+intake+of+nitrates%2C+nitrites+and+nitrosamines+and+selected+birth+defects+in+offspring%3A+a+case-control+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+J%22%5BJournal%5D)">Maternal dietary intake of nitrates, nitrites and nitrosamines and selected birth defects in offspring: a case-control study.</a> Nutr J. 12, 34(2013).</li>
<li>Phillips, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naturally+occurring+nitrate+and+nitrite+in+foods+in+relation+to+infant+methaemoglobinaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Cosmet+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Naturally occurring nitrate and nitrite in foods in relation to infant methaemoglobinaemia.</a> Food Cosmet Toxicol. 9 (2), 219-228 (1971).</li>
<li>Moncada, S., Palmer, R. M., Higgs, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide%3A+physiology%2C+pathophysiology%2C+and+pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology.</a> Pharmacol Rev. 43 (2), 109-142 (1991).</li>
<li>Gladwin, M. T., Crawford, J. H., Patel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biochemistry+of+nitric+oxide%2C+nitrite%2C+and+hemoglobin%3A+role+in+blood+flow+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">The biochemistry of nitric oxide, nitrite, and hemoglobin: role in blood flow regulation.</a> Free Radic Biol Med. 36 (6), 707-717 (2004).</li>
<li>Gupta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+acute+respiratory+tract+infections+in+areas+with+high+nitrate+concentrations+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Recurrent acute respiratory tract infections in areas with high nitrate concentrations in drinking water.</a> Environ Health Perspect. 108 (4), 363-366 (2000).</li>
<li>Kross, B. C., Ayebo, A. D., Fuortes, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methemoglobinemia%3A+nitrate+toxicity+in+rural+America%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Methemoglobinemia: nitrate toxicity in rural America.</a> Am Fam Physician. 46 (1), 183-188 (1992).</li>
<li>Greer, F. R., Shannon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+methemoglobinemia%3A+the+role+of+dietary+nitrate+in+food+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Infant methemoglobinemia: the role of dietary nitrate in food and water.</a> Pediatrics. 116 (3), 784-786 (2005).</li>
<li>Sanchez-Echaniz, J., Benito-Fernandez, J., Mintegui-Raso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methemoglobinemia+and+consumption+of+vegetables+in+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Methemoglobinemia and consumption of vegetables in infants.</a> Pediatrics. 107 (5), 1024-1028 (2001).</li>
<li>Reregistration Eligibility Decision: Inorganic Nitrate/Nitrite (Sodium and Potassium Nitrates). , U.S. Environmental Protection Agency. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/old_reds/4052red.pdf">http://www.epa.gov/oppsrrd1/REDs/old_reds/4052red.pdf</a> (1991).</li>
<li>Virtanen, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+and+nitrite+intake+and+the+risk+for+type+1+diabetes+in+Finnish+children.+Childhood+Diabetes+in+Finland+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Diabet+Med%22%5BJournal%5D)">Nitrate and nitrite intake and the risk for type 1 diabetes in Finnish children. Childhood Diabetes in Finland Study Group.</a> Diabet Med. 11 (7), 656-662 (1994).</li>
<li>Case Studies in Environmental Medicine: Nitrate/Nitrite Toxicity. , U.S. Agency for Toxic Substances and Diseases Registry. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.atsdr.cdc.gov/HEC/CSEM/nitrate/docs/nitrate_nitrite.pdf">http://www.atsdr.cdc.gov/HEC/CSEM/nitrate/docs/nitrate_nitrite.pdf</a> (2001).</li>
<li>Reimers, M. J., Flockton, A. R., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-+and+acetaldehyde-mediated+developmental+toxicity+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Ethanol- and acetaldehyde-mediated developmental toxicity in zebrafish.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 769-781 (2004).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book%3A+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 5th edn, University of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Loucks, E., Carvan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-dependent+effects+of+developmental+ethanol+exposure+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Strain-dependent effects of developmental ethanol exposure in zebrafish.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 745-755 (2004).</li>
<li>Bilotta, J., Barnett, J. A., Hancock, L., Saszik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+exposure+alters+zebrafish+development%3A+a+novel+model+of+fetal+alcohol+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Ethanol exposure alters zebrafish development: a novel model of fetal alcohol syndrome.</a> Neurotoxicol Teratol. 26 (2), 737-743 (2004).</li>
<li>Li, J., Jia, W., Zhao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excessive+nitrite+affects+zebrafish+valvulogenesis+through+yielding+too+much+NO+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Excessive nitrite affects zebrafish valvulogenesis through yielding too much NO signaling.</a> PLoS One. 9 (3), e92728(2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+chemical+analysis+of+water+and+wastes%22">Methods for chemical analysis of water and wastes</a>. , United States Environmental Protection Agency. Cincinnati, OH. Environmental Monitoring and Support Laboratory, Office of Research and Development (1983).</li>
<li>Loucks, E., Ahlgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+teratogenic+changes+in+a+zebrafish+model+of+fetal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessing teratogenic changes in a zebrafish model of fetal alcohol exposure.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Addiscott, T. M. Fertilizers and nitrate leaching. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAddiscott%2C+TM+%22Agricultural+Chemicals+and+the+Environment%2C+Issues+in+Environmental+Science+and+Technology%22">Agricultural Chemicals and the Environment, Issues in Environmental Science and Technology</a>. , book 5 1-26 (1996).</li>
<li>Su, Y. F., Lu, L. H., Hsu, T. H., Chang, S. L., Lin, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+treatment+of+methemoglobinemia+in+an+elderly+couple+with+severe+cyanosis%3A+two+case+reports%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Case+Reports%22%5BJournal%5D)">Successful treatment of methemoglobinemia in an elderly couple with severe cyanosis: two case reports.</a> Journal of Medical Case Reports. 6 (290), (2012).</li>
<li>Harvey, M., Cave, G., Chanwai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+methaemoglobinaemia+induced+by+self-poisoning+with+sodium+nitrite%5BTitle%5D)+AND+%22Emergency+Medicine+Australasia%22%5BJournal%5D)">Fatal methaemoglobinaemia induced by self-poisoning with sodium nitrite.</a> Emergency Medicine Australasia. 22, 463-465 (2010).</li>
<li>Nishiguchi, M., Nushida, H., Okudaira, N., Nishio, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+autopsy+case+of+fatal+methemoglobinemia+due+to+ingestion+of+sodium%5BTitle%5D)+AND+%22Forensic+Research%22%5BJournal%5D)">An autopsy case of fatal methemoglobinemia due to ingestion of sodium.</a> Forensic Research. 6, (2015).</li>
<li>Avdesh, A., Chen, M., Martin-Iverson, M. T., Mondal, A., Ong, D., Rainey-Smith, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+Care+and+Maintenance+of+a+Zebrafish+%28Danio+rerio%29+Laboratory%3A+An+Introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction.</a> J. Vis. Exp. (69), (2012).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Tsang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+tool+for+chemical+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A tool for chemical screens.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 90 (3), 185-192 (2010).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada anlatılan yöntemi nitrit ve nitrat teratojenik potansiyelini değerlendirirken zebrafish faydasını ortaya koyar. diğer omurgalılar ile karşılaştırıldığında, Zebra balığı yüksek doğurganlığını, dış döllenme, optik şeffaflık ve hızlı bir gelişme içeren avantajlara sahip. (Örneğin casper zebrabalıkları 36 gibi) pigmentasyon eksikliği mevcut mutantlar da iç organların görünürlüğünü artırmak için yardımcı olur. Ayrıca, canlı balık 37 analizini kolaylaştırmak için raportör genlerine sahip transgeni...

Teratojenez ağır vakalarda 1 kalıcı yapısal ve fonksiyonel anormallikler, büyüme geriliği, ya da düşük yapma yol açarak bir embriyo ya da ceninin normal gelişimini bozan bir süreçtir. Bu çeşitli şekillerde 2 embriyonik gelişim müdahale bazı doğal maddelerin (teratojenler), neden olabilir. insan fetal gelişim sırasında, radyasyon, enfeksiyöz ajanlar, toksik metaller ve organik kimyasallar gibi ortak teratojenler morfogenetik hatalar ile epicanthic kıvrımlar kusurları (üst göz kapağındaki deri kıvrımı) ve klinodaktili (kavisli parmak veya ayak) neden olduğu bildirilmiştir 1. teratogenez moleküler mekanizmasını anlamak tedavi ve korunma geliştirilmesine yönelik ilk adımdır. Böyle Afrika gibi bazı omurgalı modeller terat etkilenen moleküler yolları belirlemek için kullanılır olmuştur kurbağa (Xenopus laevis) ve zebrafish (Danio rerio) pençeliogens. Önceki çalışmalar epidemiyolojisi, toksikoloji ve teratogenez 3-7 için bir model olarak zebrafish kullandık. Scholz ve diğ. Çevresel toksisite değerlendirmesi için bir &quot;altın standart&quot; olarak kabul zebrafish. Bu 8 olarak ortaya çıkar araştırmacılar gelişimsel defekti görüntülemenizi sağlar zebrafish embriyo, şeffaflık, kısmen, kaynaklanmaktadır. İnsan genlerinin yaklaşık% 70&#39;i insan kusurları 9 çalışmak için Zebra balığı bir arzu omurgalı modeli yapma, zebrafish ortologlara var. Diğer çalışmalar bu ilişkiyi 12 desteği yok iken bazı epidemiyolojik çalışmalar çiftlik gıdalar ve su yaygın olarak mevcut olduğu nitrat ve nitrit, sürmüşlerdir, doğum kusurlarına veya spontan abortus 10,11 ile ilişkilidir. Nitrat (NO 3 -) ve nitrit (NO 2 -) toprak ve su doğal olarak bulunur. Bu bitkiler için bir azot kaynağı ve bir N bir parçasıdıritrogen döngüsü 13. Böyle nitrat yüksek gübre kullanımı çiftlikleri yeşil fasulye, havuç, kabak, ıspanak, ve pancar gibi yiyecekler ölçüde nitrat ve nitrit 7 seviyelerini yükseltmiştir. (Özellikle toprak ikinci tur 30) yüksek nitrat suda yüksek nitrat gıdalar ve balık ile beslenen ineklerden elde edilen süt nitrat ve nitrit 14 büyük miktarda tüketen insanlarda yol açabilir. Nitrat ve nitrit de yaygın dramatik insanlar 12 ile yutulur miktarı artar gıda muhafaza, kullanılmaktadır. Nitrat ve nitrit Optimal düzeyleri vasküler homeostaz ve fonksiyon, nörotransmisyon ve immünolojik konak savunma mekanizmaları 13-15 gibi fizyolojik süreçlerde önemli bir rol oynaması. Bununla birlikte, nitrat ve nitrit yüksek düzeyde maruz Özellikle bebeklerde ve çocuklarda 16, yan etkilere neden olabilir. Özeti Alınan nitrat mikroflorasının ve inci ağız boşluğunda nitrit da dönüştürüldüğübağırsak mikroflorası 17 e gastrointestinal sistem. Nitrat yeteneği 18 taşıyan kendi oksijen hemoglobin zarar, methemoglobin hemoglobin oksidasyonu ile mavi bebek sendromu için yüksek risk altında bebeklerin koyar. Bu, daha şiddetli vakalarda periferal dokulara uzanan cilt mavi renk elde edilir. Diğer belirtiler dokular sonuçların inhibe oksijenasyonu, en ağır koma ve ölüm 19,20 yol açar. Benzer semptomlar nitrat 21 daha yüksek konsantrasyonlarda bebeklerde ve yetişkinlerde görülür. Yükseltilmiş nedeniyle siyanoz, baş ağrısı nitrit zehirlenmesi sonuçlarına erişkinlerde methemoglobin düzeyleri, solunum bozuklukları, 31 ve ölüm nedeniyle hayati doku hipoksisi 32,33 ilgili komplikasyonlar tedavi edilmediği takdirde. daha yüksek seviyelerde yutulur nitrat, çeşitli sağlık komplikasyonlara neden olabilir. Çocukluk diyabet, tekrarlayan ishal ve tekrarlayan solunum yolu enfeksiyonlarıÇocuklarda yüksek nitrat alımı 11,17,22 ile bağlantılı olmuştur. nitrat yüksek düzeyde kronik maruz kalma idrar ve dalak kanaması ile ilişkilidir. Nitrat Akut yüksek doz maruz karın ağrısı, kas güçsüzlüğü, dışkı ve idrarda, bayılma kan ve ölüm 11 gibi tıbbi koşulları geniş bir yelpazede yol açabilir. Yüksek seviyelerde nitrata prenatal maruziyet nöral tüp ve kas-iskelet defekt 11 ile ilişkili olmuştur. Yeni bir rapor nitrit ile zebrafish embriyolar tedavi kesesi ödem, kraniofasial ve eksenel malformasyonlar sarisi yol açtı, ve mesane noninflation 5 yüzmek olduğunu gösterdi. Bu çalışmada, kendi teratojenik potansiyeli belirlemek için nitrat ve nitrit ile zebra balığı embriyolar tedavi etmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Embriyolar, farklı konsantrasyonlarda ve farklı zaman uzunlukları nitrit maruz bırakılmıştır. Bu kurulu bir teratojen 23 olduğu Etanol, bir pozitif kontrol olarak kullanıldı. Our yöntem nitrit yüksek konsantrasyonlarda ve uzun pozlama süreleri hem hayatta zarar ve şiddetli (brüt gelişimsel kusurlar) hafif (ödem) arasında değişen çeşitli fenotipleri yol açtığını gösterdi. Bu nedenle, zebra balığı doğrudan epidemiyolojik çalışmalar tamamlamak için embriyolar üzerinde nitrat ve nitrit potansiyel teratojenik etkileri keşfetmek için bir modeldir.

<table><tbody><tr><td>DREL/2010 cihazı</td><td>Hach</td><td>26700-03</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>KIMAX cam Petri Kabı</td><td>VWR</td><td>89001-244</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>NitraVer 5 Nitrat Reaktifi</td><td>Hach</td><td>14034-46</td><td></td></tr><tr><td>NitriVer 3 Nitrit Reaktifi</td><td>Hach</td><td>14065-99</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Fisher Scientific</td><td>3-374-10</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>S6E stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>10446294</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum nitrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>S343</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum nitrit</td><td>Fisher Scientific</td><td>S347</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipetleri</td><td>Laboratuvarı Ürünler Satış</td><td>L320072</td><td></td></tr><tr><td>Cam şişeler</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-338B</td><td></td></tr></tbody></table>

bir model olarak zebra balığı nitrit teratojenik potansiyelini değerlendirmek için

Zebrafish as a Model to Assess the Teratogenic Potential of Nitrite

ortamda yüksek nitrat seviyeleri insanlardaki konjenital bozuklukların ve düşüklere neden olabilir. Tahminen bu bağırsak ve tükürük bakterilerin nitratın nitrite dönüştürülmesi kaynaklanmaktadır. fakir üreme sonuçlara yol açabilir Ancak, her ne diğer memeli çalışmalarda, yüksek nitrit düzeyleri, doğum kusurlarına neden yok. Böylece, nitrit teratojenik potansiyel açık değildir. Kolayca nitrit veya ilgi duyulan herhangi bir başka kimyasal teratojenik etkileri değerlendirmek için bir omurgalı bir model sistemi olması yararlı olacaktır. Burada, toksisite ve embriyonik kusurları için bileşiklerin taranması için zebrabalıkları (Danio rerio) kullanımını göstermektedir. Zebra balığı embriyolar onlara teratojenik çalışmalar için iyi bir model yapma, dışarıdan döllenmiş ve hızlı bir gelişme vardır. Biz olumsuz nitrite maruz kalma süresinin artması hayatta kalmasını etkilediğini göstermektedir. nitrat bunu yapmaz nitrit konsantrasyonunu arttırarak da olumsuz, hayatta kalma etkiler. Embriyoların tha içint nitrit poz hayatta, çeşitli kusurlar perikardial dahil oluşabilir ve mesane noninflation ve kraniofasial malformasyon yüzmek, sac ödem yolk. Sonuçlarımız zebra balığı nitrit teratojenik potansiyeli çalışmaları için uygun bir sistem olduğunu göstermektedir. Bu yaklaşım kolayca erken, omurgalı gelişimi üzerindeki etkileri, diğer kimyasal maddeler test etmek için uyarlanabilir.

22 saat süre ile, 300 mM etanol maruz önceki raporlarda 5,23,26 tutarlı sağkalım (veriler gösterilmemiştir), üzerinde herhangi bir etki. etanol, bilinen bir teratojen ve pozitif kontrol olarak hizmet gibi bu beklenir. Gözlenen fenotipleri perikardiyal ödem, yüzme kesesi noninflation (Şekil 1), kraniofasyal kusurları ve gelişimsel gecikme (veriler gösterilmemiştir) dahil. nitrit ile muamele maruz kal...

teratojen Pozlama doğum kusurlarına neden olabilir. Balığı kimyasal teratojenik potansiyeli belirlemek için faydalıdır. Biz maruz kalma farklı zamanlarda da nitrit değişik düzeylerde embriyoların açığa tarafından zebrabalıkları yararını göstermektedir. Biz nitrit toksik ve ağır gelişimsel bozukluklara neden olduğunu göstermektedir.

Bir Model Olarak Zebra balığı Nitrit teratojenik potansiyelini değerlendirmek için

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of ...

Bu prosedürün genel amacı, zebra balığı embriyolarını nitrit ile işleme tabi tutmak ve nitritin teratojenik etkisini belirlemektir. Bu yöntem, kimyasalların embriyonik gelişim üzerindeki teratojenik etkilerinin değerlendirilmesi gibi gelişimsel toksikoloji alanındaki bazı temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu prosedürün temel avantajı, dış ortamda gelişen ve mikroskop altında gözlemlenebilen zebra balığı embriyolarının kullanılmasıdır.Burada gösterilen deneyler için, Tuebingen suşu gibi yabani tip zebra balığı suşlarını sırasıyla 28.5 °C'de ve 14 saat ışık-10 saat karanlık döngüsünde tutun. Yumurtalar toplanmadan önceki gece, çiftleşme tanklarına balık suyu ve bölmeler ekleyin; erkek ve dişi balıkları bölmenin ayrı taraflarına yerleştirin. Yeterli miktarda yumurta üretildiğinden emin olmak için 30 çift balık hazırlayın.Ertesi sabah, ışıklar açıldıktan sonra, çiftleşmeyi başlatmak için ayırıcıları çıkarın. Çiftleşme tanklarını her 15 dakikada bir yumurta açısından kontrol edin. Balıklar yumurta bıraktığında, embriyoları toplamak için bir çay süzgeci kullanın ve hepsini E3 tamponu içeren büyük bir kapta birleştirin.Yumurtaları 28.5 °C'de inkübe edin. Döllenmeden 1,5 sa

zebrafish-as-a-model-to-assess-the-teratogenic-potential-of-nitrite

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Etanol bağlı gelişimsel hasar moleküler mekanizmalarını anlayabilmek için, biz etanol maruz kalma zebrabalıkları modeli geliştirdik ve etanol maruz kaldıktan sonra meydana gelen fiziksel, hücresel ve genetik değişimler...

Fetal Alkol Pozlama bir Zebra balığı Modelinde teratojenik değişiklikler değerlendirilmesi

Burada, larva zebra balığı ve koca kafa minnow lokomotor aktivite ve bir otomatik izleme yazılımı kullanarak photomotor yanıt (PMR) incelemek için bir protokol mevcut. Ortak toksikoloji biyoanalizler dahil, bu davranışların analizleri kimyasal bioactivity incelemek için bir tanı aracı sağlarlar. Bu iletişim kuralı kafein, modeli neurostimulant kullanılarak açıklanmıştır.

Davranışsal yanıt profilleri larva balık incelenmesi için deneysel protokol: nöro-uyarıcı kafein uygulamaya

Bu iletişim kuralı fluorescently etiketli gıda yüksek üretilen iş moda larva zebra balığı bağırsak yoluyla transit süresini ölçmek için hedeftir.

Yüksek işlem hacmi ölçüm larva zebra balığı kullanarak Gut Transit süre

Zebra balığı embriyoları kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Onlar harici geliştirmek ve kimyasallara duyarlı, ince phenotik değişikliklerin tespitine izin. Deney sadece doğrudan embriyo içeren plaka eklenir bileşik küçük bir miktar gerektirir, test sistemi verimli ve maliyet-etkin hale.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Bu makalede zebrabalığı larvaları modeli kullanılarak çevresel kirleticilerin nörodavranışsal toksisitesinin değerlendirilmesi için ayrıntılı bir deneysel protokol sunulmuştur, buna maruz kalma süreci ve nörodavranışsal göstergeler için testler de dahildir.

Çevresel Kirleticilerin Zebrabalığı Larvaları Üzerindeki Nörodavranışsal Etkilerinin İncelenmi

Bu protokol, cisplatin'i nefrotoksik ajan olarak kullanarak yetişkin zebra balıklarında Akut Böbrek Yaralanmasına (AKI) neden olacak prosedürleri açıklar. Renal dokuda inflamasyon ve hücre ölümünü analiz etmek için tekniğin tekrarlanabilirliğini ve iki tekniği değerlendirme adımlarını, akış sitometrisini ve TUNEL'i ayrıntılı olarak detaylandırdık.

Yetişkin Zebra Balıklarında Cisplatin tarafından İndüklenen Akut Böbrek Yaralanması Modeli

Zebra balığındaki metallerin ve metal bazlı bileşiklerin farmakokinetik ve toksikokinetik analizlerinin artan oranı, çevresel ve klinik çeviri çalışmaları için avantajlı olabilir. Bilinmeyen su kaynaklı maruz kalma alımının sınırlaması, endüktif olarak eşleşmiş plazma kütle spektrometrisi kullanılarak sindirilmiş zebra balığı dokusu üzerinde eser metal analizi yapılarak aşılmıştır.

Zebra Balığında Platin ve Rutenyum Bazlı Bileşik Maruziyetinin Daha Geniş Uygulamalarla Endüktif Olarak Eşleşmiş Plazma Kütle Spektrometrisi ile Doz Alımı

Zebra balığı son zamanlarda potansiyel radyasyon değiştiricilerini doğrulamak için bir model olarak kullanılmıştır. Mevcut protokol, radyasyona dayalı tarama deneyleri için zebra balığı embriyolarını kullanmanın ayrıntılı adımlarını ve farklı tedavilerin ve radyasyonun etkisini değerlendirmek için bazı gözlemsel yaklaşımları açıklamaktadır.

Potansiyel Radyosensitizörleri veya Koruyucuları Değerlendirmek için Bir Model Olarak Zebra Balığı Larvaları

Burada, kimyasalların (örneğin, metamfetamin ve glifosat) yetişkin zebra balığı üzerindeki potansiyel nörotoksik etkilerini tek bir tank kullanarak etkili bir şekilde belirlemek için yeni tank, Shoaling ve sosyal tercih testleri dahil olmak üzere kapsamlı bir davranışsal test bataryası sunuyoruz. Bu yöntem nörotoksisite ve çevresel araştırmalarla ilgilidir.

Tek Bir Tankta Davranış Testleri Bataryası Kullanılarak Yetişkin Danio rerio'da Nörotoksisite Değerlendirmesi

Zebra balığı embriyo titreşimi ürkütücü tepkisine dayalı olarak kimyasal bileşik toksisitesini değerlendirmek için bir tarama sisteminin iş akışını ve veri analizini açıklıyoruz. Sistem, zebra balığı embriyolarının bir titreşim uyaranına maruz kaldıklarında hareketlerini kaydeder ve genel toksisite/ölümcüllük ve nöromüsküler toksisitenin entegre bir değerlendirmesine izin verir.

Zebra Balığı Titreşim İrkilme Tepkisi Tarama Sistemi Kullanılarak Kimyasalların Toksisitesinin Değerlendirilmesi

Bu protokol, zebra balığı larvalarında döllenmeden 3-7 gün sonra bir ilaç tarama prosedürünü ve ardından morfolojik değerlendirmeyi tanımlar.

Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Öğrenin, zebra balığı embriyolarında nitrit maruziyetinin teratojenik etkilerini değerlendirmek için. Bu yöntem, kimyasalların gelişimsel toksikolojisini inceleyen araştırmacılar için değerli bir model sunar.

Bir Model Olarak Zebra balığı Nitrit teratojenik potansiyelini değerlendirmek için

Daha fazla video keşfet