Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment

Joseph P. Klaus; Jason Botten

doi:10.3791/53682

Arenavirüs hücre Ek Ölçümü için son derece hassas Deneyi

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment

Arenavirüs hücre Ek Ölçümü için son derece hassas Deneyi

Full Text

10,138 Views

08:34 min

March 2, 2016

DOI: 10.3791/53682-v

Joseph P. Klaus¹, Jason Botten^1,2

¹Department of Medicine, Division of Immunobiology,University of Vermont, ²Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of Vermont

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Arenavirüs yaşam döngüsünün ilk adımı, viral partiküllerin konak hücrelere bağlanmasıdır. Arenavirüs bağlanma olaylarının ultra hassas tespiti ve kantitasyonu için kantitatif (q) RT-PCR tabanlı bir test sunuyoruz.

Bu protokolün genel amacı, arenavirüs partiküllerinin konakçı hücrelere bağlanmasını kantitatif olarak ölçmektir. Bu tekniğin en büyük avantajı yüksek hassasiyetidir. Ayrıca virion endositozunun yanı sıra füzyonu takiben genomun sitoplazmaya salınmasını ölçmek için de uyarlanabilir.

Başlamak için, tam DMEM yapmak için, 500 mililitrelik bir DMEM şişesine, 50 mililitre ısıyla etkisiz hale getirilmiş fetal sığır serumu ve her biri 100X penisilin-streptomisin ve 100X HEPES tamponundan beş mililitre ekleyin. Günün sonunda, 500 mikrolitre tam DMEM'lik bir son hacimde 48 oyuklu bir doku kültürü plakasında, her virüs için üç kopya halinde, oyuk başına 2.5 kez 10 ila 4. Vero E6 hücresine tohum atın. Plakayı 37 santigrat derecede% 5 karbondioksit içeren nemlendirilmiş bir inkübatörde 10 ila 18 saat inkübe edin.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos