Ex Akciğer Metastaz ve Bunların mikroçevresinin Canlı Görüntüleme vivo

Farelerde floresan haberci kullanılarak, akciğer metastazı olan tümör hücre stromanın etkileşimleri ex vivo canlı görüntüleme için nispeten basit bir yöntem tarif eder. iplik disk konfokal mikroskopi kullanılarak, bu teknik, en az 4 saat boyunca canlı hücre görüntülenmesini sağlayarak ve diğer enflamatuar akciğer koşulları incelemek için adapte edilebilir.

Bu prosedürün genel amacı, akciğer metastazları içindeki dinamik tümör hücresi stroma etkileşimlerini görselleştirmektir. Bu yöntem, kanser metastazı alanında, metastaz nasıl kurulur ve mikro çevredeki hangi hücre tipleri bu sürece dahil olur? Bu tekniğin sunduğu temel avantaj, canlı hücrelerin en az dört saat boyunca görselleştirilmesini sağlayan ex vivo akciğer görüntüleme için hızlı ve kolay bir yöntem olmasıdır. Bu teknik, akciğer metastazı tedavisi için çeşitli hedefe yönelik terapötiklerin etki mekanizmalarını anlamamızı daha da geliştirmiş olabilir. Bu yöntem için ilk olarak akciğer kesiti görüntüleme ile metastazı incelerken ve bu işlem sonucunda geniş hücre ölümü ile mücadele ederken aklımıza bir fikir geldi. Akciğerleri ex vivo canlı görüntülemeye hazırlamak için, fareyi bir parça sağanak ile kaplı polistiren köpük bir kapak üzerinde hareketsiz hale getirerek başlayın ve hayvanı %70 etanol ile sterilize edin. Daha sonra, cerrahi makas kullanarak deriden enine epigastrik bir kesi yapın, ardından peritondan benzer bir kesi yapın. Daha sonra, diseksiyon tahtasını dikey bir pozisyona getirin, inen aortu kesin, böylece kan göğüs boşluğuna değil karın içine toplanır. Vakumu serbest bırakmak için diyaframdaki küçük açıklığı kesin. Ardından, diyaframı çıkarmak ve akciğerleri görselleştirmek için göğüs kafesini kesin. Cerrahi makas kullanarak, kaburgaları sağlam bırakarak göğüs kafesi üzerinden cildi soluk borusuna kadar kesin. Daha sonra cildi göğüs kafesinden ayırın ve trakeanın kendisine zarar vermemeye dikkat ederek trakeayı ortaya çıkarmak için çevredeki bağ dokusunu çıkarın. Açıkta kalan trakeada yaklaşık bir milimetre çapında küçük bir açıklık açın, kıkırdak halkalarına paralel olarak gırtlağa mümkün olduğunca yakın, trakeayı tamamen kesmeden kesin. Ardından, 20 gauge bir iğneyi herhangi bir karşı kuvvet olmadan trakeaya dört ila beş milimetre yavaşça sokun. İğnenin ucu trakeadan görülebilmelidir. Bir şırıngayı 400 mikrolitre 37 santigrat derece% 2 düşük erime sıcaklığı agaroz ile doldurun ve ardından iğneyi forseps ile stabilize edin. Diseksiyon tahtasını dikey tutarak, tüm ılık agaroz miktarını iğneden akciğerlere yavaşça aşılayın. Akciğerler şişirildikten sonra, iğneyi trakeanın içinde tutarken şırıngayı çıkarın ve agarozun sertleşmesine yardımcı olmak için akciğerlerin üzerine yaklaşık 50 mililitre 20 santigrat derece PBS dökün. Agaroz katılaştığında, iğneyi çıkarın ve katılaşmamış agarozun sızmasını önlemek için trakeayı kapatmak için forseps kullanın. Şimdi sternotomi ile göğsü daha da açın ve soluk borusunu forseps ile kavrayın. Ardından, bir çift cerrahi makas kullanarak trakeayı tamamen kesin. Akciğerleri çıkarmak için trakeayı yavaşça yukarı çekin, bağ dokusunu ve yemek borusunu kesin ve akciğerleri göğüs boşluğundan tamamen dışarı çekin. Fazla kanı yıkamak için dokuyu 37 santigrat derece RPMI 1640'a daldırın. Makas ve forseps kullanarak lobları kesin