Name: suda çözünür Bileşikleri ile SCA1 Fare tedavisi, spesifik olmayan mitokondriyal fonksiyon Boost (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Öğrenin, SCA1 farelerinde sukrosik asit ile mitokondriyal aktivatör tedavisinin serebellar davranış ve doku üzerindeki terapötik etkilerini değerlendirmeyi. Bu yöntem nörodejeneratif hastalıklarda yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Minnesota Üniversitesi'nden Dr. Harry Orr'a transgenik farelere cömert hediyesi için teşekkür ederiz. Ayrıca, önceki deneyleri gerçekleştiren çalışmaları için aşağıdaki Skidmore College mezunlarına da teşekkür etmek isteriz: Monica Villegas, Porter Hall, Mitchell Spring, Nicholas Toker, Jenny Zhang, Chloe Larson ve Cheyanne Slocum. Ayrıca, bu yöntemlerin geliştirilmesini finanse ettiği için Skidmore College'a teşekkür ederiz.

<ol><li>Stucki, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+impairments+contribute+to+Spinocerebellar+ataxia+type+1+progression+and+can+be+ameliorated+by+the+mitochondria-targeted+antioxidant+MitoQ%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial impairments contribute to Spinocerebellar ataxia type 1 progression and can be ameliorated by the mitochondria-targeted antioxidant MitoQ.</a> Free Radic Biol Med. 97, 427-440 (2016).</li>
<li>Breuer, M. E., Willems, P. H., Russel, F. G., Koopman, W. J., Smeitink, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+mitochondrial+dysfunctions+in+the+brain%2C+from+mice+to+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inherit+Metab+Dis%22%5BJournal%5D)">Modeling mitochondrial dysfunctions in the brain, from mice to men.</a> J Inherit Metab Dis. 35 (2), 193-210 (2012).</li>
<li>Breuer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondrial+OXPHOS+dysfunction+in+the+development+of+neurologic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondrial OXPHOS dysfunction in the development of neurologic diseases.</a> Neurobiol Dis. , (2012).</li>
<li>Hroudová, J., Singh, N., Fizar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunctions+in+neurodegenerative+diseases%2C+relevance+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunctions in neurodegenerative diseases, relevance to Alzheimer's disease.</a> Biomed Res Int. 2014, 175062(2014).</li>
<li>Burright, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCA1+transgenic+mice%2C+a+model+for+neurodegeneration+caused+by+an+expanded+CAG+trinucleotide+repeat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SCA1 transgenic mice, a model for neurodegeneration caused by an expanded CAG trinucleotide repeat.</a> Cell. 82 (6), 937-948 (1995).</li>
<li>Clark, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purkinje+cell+expression+of+a+mutant+allele+of+SCA1+in+transgenic+mice+leads+to+disparate+effects+on+motor+behaviors%2C+followed+by+a+progressive+cerebellar+dysfunction+and+histological+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Purkinje cell expression of a mutant allele of SCA1 in transgenic mice leads to disparate effects on motor behaviors, followed by a progressive cerebellar dysfunction and histological alterations.</a> J Neurosci. 17 (19), 7385-7395 (1997).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+function+in+situ+in+permeabilized+muscle+fibers%2C+tissues+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial function in situ in permeabilized muscle fibers, tissues and cells.</a> Nat Protoc. 3 (6), 965-976 (2008).</li>
<li>Deng-Bryant, Y., Singh, I. N., Carrico, K. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+tempol%2C+a+catalytic+scavenger+of+peroxynitrite-derived+free+radicals%2C+in+a+mouse+traumatic+brain+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of tempol, a catalytic scavenger of peroxynitrite-derived free radicals, in a mouse traumatic brain injury model.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28 (6), 1114-1126 (2008).</li>
<li>Vaishnav, R. A., Singh, I. N., Miller, D. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+peroxidation-derived+reactive+aldehydes+directly+and+differentially+impair+spinal+cord+and+brain+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Lipid peroxidation-derived reactive aldehydes directly and differentially impair spinal cord and brain mitochondrial function.</a> J Neurotrauma. 27 (7), 1311-1320 (2010).</li>
<li>Matthews, R. T., Yang, L., Browne, S., Baik, M., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coenzyme+Q10+administration+increases+brain+mitochondrial+concentrations+and+exerts+neuroprotective+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Coenzyme Q10 administration increases brain mitochondrial concentrations and exerts neuroprotective effects.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (15), 8892-8897 (1998).</li>
<li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+creatine+in+a+transgenic+mouse+model+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of creatine in a transgenic mouse model of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 20 (12), 4389-4397 (2000).</li>
<li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+of+coenzyme+Q10+and+remacemide+in+transgenic+mouse+models+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects of coenzyme Q10 and remacemide in transgenic mouse models of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 22 (5), 1592-1599 (2002).</li>
<li>Hersch, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creatine+in+Huntington+disease+is+safe%2C+tolerable%2C+bioavailable+in+brain+and+reduces+serum+8OH2%27dG%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creatine in Huntington disease is safe, tolerable, bioavailable in brain and reduces serum 8OH2'dG.</a> Neurology. 66 (2), 250-252 (2006).</li>
<li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+with+coenzyme+Q10+and+creatine+produces+additive+neuroprotective+effects+in+models+of+Parkinson%27s+and+Huntington%27s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Combination therapy with coenzyme Q10 and creatine produces additive neuroprotective effects in models of Parkinson's and Huntington's diseases.</a> J Neurochem. 109 (5), 1427-1439 (2009).</li>
<li>Yang, X., Dai, G., Li, G., Yang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coenzyme+Q10+reduces+beta-amyloid+plaque+in+an+APP%2FPS1+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Coenzyme Q10 reduces beta-amyloid plaque in an APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Mol Neurosci. 41 (1), 110-113 (2010).</li>
<li>Sandhir, R., Mehrotra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+supplementation+is+effective+in+improving+mitochondrial+dysfunctions+induced+by+3-nitropropionic+acid%2C+implications+in+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Quercetin supplementation is effective in improving mitochondrial dysfunctions induced by 3-nitropropionic acid, implications in Huntington's disease.</a> Biochim Biophys Acta. 1832 (3), 421-430 (2013).</li>
<li>Ergonul, P. G., Nergiz, C. <a target="_blank" href="http://www.agriculturejournals.cz/publicFiles/31627.pdf">Determination of organic acids in olive fruit by HPLC.</a> 'Czech Food Sci. 28 (3), 202-205 (2010).</li>
<li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quantiative+measurement+of+motor+inco-ordination+in+naive+mice+using+an+acelerating+rotarod%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The quantiative measurement of motor inco-ordination in naive mice using an acelerating rotarod.</a> J Pharm Pharmacol. 20 (4), 302-304 (1968).</li>
<li>Luong, T. N., Carlisle, H. J., Southwell, A., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+motor+balance+and+coordination+in+mice+using+the+balance+beam%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessment of motor balance and coordination in mice using the balance beam.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Servadio, A., Koshy, B., Armstrong, D., Antalffy, B., Orr, H. T., Zoghbi, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+analysis+of+the+ataxin-1+protein+in+tissues+from+normal+and+spinocerebellar+ataxia+type+1+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Expression analysis of the ataxin-1 protein in tissues from normal and spinocerebellar ataxia type 1 individuals.</a> Nat Genet. 10 (1), 94-98 (1995).</li>
<li>Klement, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ataxin-1+nuclear+localization+and+aggregation%2C+role+in+polyglutamine-induced+disease+in+SCA1+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ataxin-1 nuclear localization and aggregation, role in polyglutamine-induced disease in SCA1 transgenic mice.</a> Cell. 95 (1), 41-53 (1998).</li>
<li>Serra, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+profiling+links+SCA1+pathophysiology+to+glutamate+signaling+in+Purkinje+cells+of+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene profiling links SCA1 pathophysiology to glutamate signaling in Purkinje cells of transgenic mice.</a> Hum Mol Genet. 13 (20), 2535-2543 (2004).</li>
<li>Carter, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+progressive+motor+deficits+in+mice+transgenic+for+the+human+Huntington%27s+disease+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of progressive motor deficits in mice transgenic for the human Huntington's disease mutation.</a> J Neurosci. 19 (8), 3248-3257 (1999).</li>
<li>Anjomani Virmouni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+GAA-repeat-expansion-based+mouse+model+of+Friedreich%27s+ataxia%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A novel GAA-repeat-expansion-based mouse model of Friedreich's ataxia.</a> Dis Model Mech. 8 (3), 225-235 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

tarif edildiği gibi, bu yöntemler kullanılabilir, bunlar tespit ve serebellar nörodejeneratif hastalık fare modellerinde oksidatif fosforilasyon aracılı mitokondriyal fonksiyon bozukluğu hafifletme yeteneğine sahiptir. Kombine biyokimyasal ve davranışsal deneyler serebellar nörodejeneratif hastalık patolojiye mitokondriyal katkının boyutlarını belirlemek için çok yönlü yöntemlerdir. metabolizmayı uyarır ve mitokondriyal fonksiyonunu artırmak için süksinik asit ile fareler tedavi, biz serebellar davranış açıkları ve sere...

Mitokondri elektron taşıma zinciri kullanarak oksidatif fosforilasyon (OXPHOS) ile üretilen mitokondriyal ATP çoğunluğu ile, adenozin trifosfat (ATP), hücresel enerji için önemli bir koenzim önemli üreticileridir. Beyin, yüksek metabolik talep ve nöral aktiviteyi güç için oksidatif fosforilasyon olan bağımlılığını göz önüne alındığında, mitokondriyal disfonksiyon son derece hassastır. Bunun bir sonucu olarak, mitokondriyal disfonksiyon yaşlanma sürecinde tetiklenir 1 ve birden fazla nörodejeneratif hastalıklar, 2, 3, 4 patojenezinde rol oynar. Nedenle, mitokondri nörodejenerasyonun için cazip tedavi hedefleri olduğunu izler. Bu protokol, biz mitokondri çalışmanın bir model nörodejeneratif hastalık olarak Spinoserebellar ataksi tip 1 (SCA1) kullanımını benimsemişl disfonksiyon ve mitokondriyal hedefli tedavilerin geliştirilmesi. SCA1 diğer beyin bölgelerinde Purkinje beyincik nöronların ve nöron ilerleyici dejenerasyonu tetikler ataksin-1 gen ürününde bir poliglutamin (poliQ) tekrar genişleme mutasyonu neden olmaktadır. Bir Purkinje hücresi spesifik promotörünün kontrolü altında bir poliQ mutant ataksin-1 transgeni ifade (SCA-1 fare gibi belirlenen) Burada kullanılan transjenik fare soyu, SCA1 5 Purkinje hücresi bileşeninin hedeflenen analizi sağlar. SCA1 fareler kademeli Purkinje hücre dejenerasyonu geçmesi ve ataksik yürüyüş 6 gelişir. Mitokondriyal karmaşık disfonksiyon ve mitokondriyal hedefli tedavi etkinliği, moleküler ve davranışsal deneyleri bir pil ile değerlendirilebilir. Mitokondriyal karmaşık disfonksiyon serebellar doku içinde değişmiş oksijen tüketimini tespit solunum tahlilleri ile ex vivo ölçülürelektron taşıma zinciri yüzeyler ve inhibitörleri 7 varlığı. Solunum tahlilleri, daha önce permeabilize doku mitokondriyal izolatlar ve bütün doku 7, 8, 9, kullanılmıştır. Bunlar transmisyon elektron mikroskobu ya immünofloresan boyama gibi morfolojik veri toplama yöntemlerinin aksine mitokondriyal fonksiyonun doğrudan değerlendirilmesi için izin verir. Bütün dokusu yerine izole mitokondri kullanımı izolasyon işlemi 7 sırasında oluşabilecek sağlıklı mitokondri önyargılı seçimini önler. gösterildiği gibi protokole adapte olduğunda, solunum tahlil serebellar nörodejeneratif hastalık durumlarında mitokondriyal disfonksiyon tespit etmek için değerli bir yöntemdir. metabolizma spesifik olmayan aktivatörler nörodejeneratif hastalığı etkeni transgenik fare modellerinde mitokondriyal disfonksiyon anlaması için kullanılabilirE ve yeni tedavilerin geliştirilmesinde yardım. Kersetin, koenzim Q10 ve kreatin tüm hastalarda ve nörodejeneratif hastalık 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, hayvan modellerinde nörodejeneratif hastalık patolojisini iyileştirilmesi için gösterilmiştir. Burada metabolizmasını uyaran ve nörodejeneratif hastalıkta mitokondriyal fonksiyonu artırmak için yeni metabolik aktivatörü, süksinik asit, sunuyoruz. Aktivatör, kan-beyin bariyerini geçen olduğundan emin olmak için, HPLC ile tedavi edilmiş farelerde 17 nöral dokuya teslim tespit etmek için kullanılmıştır. succinic asit ile oluşturulursa metabolik hedeflenen suda çözünür bileşiklerin terapötik etkisini değerlendirmek için, davranış paradigmalar ve immünopatolojik çalışmalar pil kullanılabilmektedir. duserebellar nörodejeneratif hastalık, ayak izi pist deneyi, ışın deneyi ve hızlanan dönen çubuk deneyinde bulunan motor koordinasyon açıkları e davranışsal patoloji 6, 18, 19 kurtarma tespit etmek için kullanılır. Bu önlemler, serebellar doku 6, 20, 21, tanımlı bir lobülün içinde molekül (Purkinje hücresi, dendritik mili uzunluğu olarak tanımlanır) tabaka kalınlığı ve Purkinje hücresi soma sayımları değerlendirerek serebellar hücre mimarisini bir immünopatolojik değerlendirilmesi ile takviye edilmiştir. Burada metabolik hedeflenen suda çözünür bileşikler ile tespiti ve mitokondriyal disfonksiyon tedavisi için çok sayıda nöropatolojik ve davranışsal yöntemler sunuyoruz. Biz SCA1 tran mitokondriyal disfonksiyon analiz mitokondriyal solunum ex vivo analiz kullanmaksgenic fare. Ayrıca, hastalık semptomları ve patolojisi daha SCA1, hastalığın ilerlemesine mitokondriyal fonksiyon bozukluğu karıştığı, suda çözünür mitokondriyal güçlendirici süksinik asit ile geliştirilmiş olduğunu göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Adenozin difosfat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2754</td><td>ADP</td></tr><tr><td>Askorbat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7631</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2153</td><td>BSA</td></tr><tr><td>4 ', 6-Diamidino-2-fenilindol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>Digitonin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0632</td><td>DTT</td></tr><tr><td>Eşek serumu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>Glutamat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1446600</td><td></td></tr><tr><td>Malat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>6994</td><td></td></tr><tr><td>Mannitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum-laktobiyonat</td><td>Biyo-Şekerler</td><td>69313-67-3</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Süksinik Asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3674</td><td></td></tr><tr><td>N, N, N ve prime;, N & prime; -Tetrametil-p-fenilendiamin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7394</td><td>TMPD</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Üre</td><td>Sigma Aldrich</td><td>U0631</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield montaj ortamı</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td><güçlü >Antikorlar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>11NQ antikoru (anti-ataksin-1 )</td><td></td><td></td><td>Servadio, et al. 1995, PMID: 7647801</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-fare ikincil antikoru</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A-11015</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 anti-tavşan ikincil antikoru</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A-11012</td><td></td></tr><tr><td>Calbindin antikoru (keçi)</td><td>Santa Cruz</td><td>C-20</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Hayvanlar</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transgenik fareleri kontrol edin</td><td>Harry Orr, Ph.D.</td><td>A02</td><td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td></tr><tr><td>SCA1 fareleri</td><td>Harry Orr, Ph.D.</td><td>B05</td><td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td></tr><tr><td>Wildtype fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>001800</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ESM-100L mikrotom</td><td>ERMA</td><td></td><td>Kızak mikrotomu</td></tr><tr><td>Fluoview FV1200 Konfokal Mikroskop</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gliserol-jelatin slaytlar</td><td>FD Nöro Teknolojiler</td><td>PO101</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırınga</td><td>Sigma Aldrich</td><td>VCAT 80465</td><td></td></tr><tr><td>OXYT1 Oxytherm Elektrot Kontrol</td><td>Ünitesi Hansatech Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PTFE kağıdı</td><td>Cole-Parmer</td><td>UX-08277-15</td><td></td></tr><tr><td>Rotallion Rotarod</td><td>PPP & G</td><td></td><td>bilgi için sorumlu yazarla iletişime geçin</td></tr><tr><td>Ultimate 3000</td><td>HPLC Dionex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Institute of Health</td><td></td><td><a href="http://imagej.nih.gov/ij/">http://imagej.nih.gov/ij/</a></td></tr><tr><td>Hücre sayacı eklentisi (ImageJ için)</td><td>National Institute of Health</td><td></td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html">http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html</a</td></tr><tr><td>>3P& G Rota-Rod v3.3.3 (rotarod yazılımı)</td><td>PPP & G</td><td></td><td>Bilgi için sorumlu yazarla iletişime geçin</td></tr><tr><td>Phidget21.dll (rotarod yazılımı için gereklidir)</td><td>DLL-Files.com</td><td></td><td><a href="https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html">https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html</a></td></tr></tbody></table>

suda çözünür bileşikleri ile sca1 fare tedavisi, spesifik olmayan mitokondriyal fonksiyon boost

Treating SCA1 Mice with Water-Soluble Compounds to Non-Specifically Boost Mitochondrial Function

Mitokondriyal disfonksiyon yaşlanma sürecinde ve birçok kalıtsal spinoserebellar ataksi ve beyincik ilerleyici dejenerasyonu ile işaretlenmiş diğer hareket bozukluklarının da dahil olmak üzere nörodejeneratif hastalıklarda önemli bir rol oynamaktadır. Bu protokolün amacı, Spinoserebellar ataksi tip 1 (SCA1) mitokondriyal disfonksiyon değerlendirilmesi ve hastalığın ilerlemesini yavaşlatmak için suda çözünür bir bileşik süksinik asit yoluyla metabolik solunum farmakolojik hedefleme etkinliğini değerlendirmektir. Bu yaklaşım, diğer serebellar hastalıklar için de geçerlidir ve suda çözülebilen tedavilerin bir konakçıya uyarlanabilir. Mitokondriyal solunumun ex vivo analiz algılar ve mitokondriyal fonksiyon hastalıkla ilişkili değişiklikleri ölçmek için kullanılır. Genetik delil (yayınlanmamış veri) ve SCA1 fare modelinde mitokondriyal disfonksiyon proteomik delil ile, suda çözünen metabolik güçlendirici s ile tedavinin etkinliğini değerlendirmekev kafes içme suyu doğrudan bu bileşiği çözülerek uccinic asit elde edildi. kan-beyin bariyerini geçmek ilacın özelliği, yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanılarak çıkarılabilir. Bu bileşiklerin etkinliği daha sonra hızlanan totarod, Denge testi ve ayak izi analizi de dahil olmak üzere çok sayıda davranış paradigmalar kullanılarak test edilebilir. Serebellumun Cytoarchitectural bütünlüğü Purkinje hücresi çekirdek ve Purkinje hücresi dendrit ve soma tespit imüno-flüoresan deneyleri kullanılarak değerlendirilebilir. Bu yöntemler, mitokondriyal disfonksiyon ve serebellar nörodejeneratif hastalık suda çözünür bileşikler ile tedavinin etkinliğini belirlemek için güçlü bir tekniktir.

süksinik asit ile serebellar mitokondri farmakolojik hedefleme sayesinde serebellar nörodejeneratif hastalık SCA1 bir fare modelinde mitokondriyal disfonksiyon önlemek edebiliyoruz. Suksinat dehidrojenaz, süksinik asit, kanonik elektron verici işleme (Şekil 1A), aşağıdaki tedavi ve nöropatolojik değerlendirme ikinci haftasında davranışsal değerlendirme başlangıcı ile, bir ay SCA1 farelerin ev kafes içme suyu içinde çözülmüştür. Izi tahlilinde, kiriş dene...

Spinoserebellar ataksi tip 1 (SCA1) ve diğer serebellar nörodejeneratif hastalıkların tedavisi için mitokondri hedefli suda çözünür bileşiklerin etkinliğini değerlendirmek için biyokimyasal ve davranışsal bir protokol sunuyoruz.

suda çözünür Bileşikleri ile SCA1 Fare tedavisi, spesifik olmayan mitokondriyal fonksiyon Boost

Mitochondrial dysfunction plays a significant role in the aging process and in neurodegenerative diseases including several hereditary spinocerebellar ...

Bu deneyin genel amacı, suda çözünür mitokondriyal aktivatörlerin spinal serebellar ataksi tip bir farelerde serebellar davranış ve doku üzerindeki terapötik etkilerini gözlemlemek ve ölçmektir. Bu yöntem, mitokondriyal eksikliklerin hastalık patolojisine katkıda bulunup bulunmadığı ve hastalığın suda çözünür bir mitokondriyal aktivatör tarafından engellenip engellenemeyeceği gibi spinal serebellar ataksi alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, süksinik asidin, içme suyu yoluyla doğrudan beyne verilebilen, FDA onaylı, ucuz, suda çözünür bir bileşik olmasıdır.Bu tekniğin sonuçları, diğer nörodejeneratif hastalıkların tedavisine kadar uzanabilir, çünkü mitokondriyal oksidatif fosforilasyon komplekslerindeki eksiklikler, Alzheimer ve Huntington hastalığı dahil olmak üzere birçok nörodejeneratif hastalıkta bulunur. Genel olarak, bu yönteme yeni olan bireyler, tutarlı sonuçlar elde etmek için ayarlanması gerekebilecek davranışsal paradigmaların ilk kurulumuyla mücadele edeceklerdir. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi faydalıdır, çünkü davranışsal adımların yazılı bir yöntem bölümünden çoğaltılması zor olabilir, ancak görsel bir kayıt yardımıyla çoğaltılması kolaydır.Bu prosedüre başlamak için, pisti ev kutusuna doğru hafif bir yukarı açıyla ayarlayın, yatak takımları ve ödül yiyecekleri ile kaplayın. Ardından piste bir sayfa beyaz kağıt serin. Farenin beş dakika boyunca ana kutuya alışmasına izin verin.Daha sonra tek bir konu alın ve sol ve sağ arka ayakları sırasıyla mavi ve kırmızı toksik olmayan su bazlı boya ile boyayın. Daha sonra nesneyi pistin başına yerleştirin ve ana kutuya yürümesine izin verin. Denek ev kutusuna ulaştığında, tuzak kapısını kapatın ve ilgili ev kafesine dönmeden önce bir dakika boyunca ev kutusunun içinde kalmasına izin verin.Ardından pisti ve ev kutusunu %30 etanol ile temizleyin ve bir sonraki deneme için yatak takımlarını, ödül yiyeceklerini ve pist kağıdını değiştirin. Aynı zamanda, deneyden sonra pist kağıdını toplayın ve denemeyi inceleyin. Başarılı bir ayak izi denemesi, deneğin dönmeden veya durmadan altın kutuya doğru yürüdüğü en az beş ardışık ayak izi olarak tanımlanır.Şimdi kiriş aparatını altı farklı kiriş ile çubuk çapraz özelliklerine göre ayarlayın. Kirişin bir ucuna, ödül yiyeceği olan karartılmış bir ev kutusu yerleştirin. Kiriş üzerindeki konuları eğitmek için, cihazı kiriş üç ile birleştirin.Konuyu nazikçe ana kutunun karşısındaki kirişin ucuna yerleştirin. Ve kiriş boyunca yürümesine izin verin. Başarılı bir çalışma elde etmek için her deneğe en fazla iki dakikalık üç deneme yapın.Bu, kirişi geçmek ve iki dakika içinde ana kutuya girmek olarak tanımlanır. Işın eğitiminin dördüncü gününde, cihazı ışın ile birleştirin. Ve ana kutuyu ayarlayın.Cihazın önüne bir video kamera yerleştirin ve uzun huzmeli uygulama aparatının videoya net bir şekilde çekilebildiğini doğrulayın. Farenin ışın boyunca hareket etmesine izin verin, her denemeyi videoya kaydedin ve ışın başına denek başına başarılı deneme sayısını kaydedin. Bu adımda, denekleri denemenin başlamasından önce 10 dakika boyunca şerit rezervuarlarına alıştırın.Bu alışma süresi boyunca, cihazın her şeridini %30 etanol ile temizleyerek rotarod aparatını hazırlayın. Ardından, rotarod yazılımını açın. Beş dakikalık bir süre içinde dört ila 40 RPM arasında sabit bir hızlanma sağlamak için başlangıç ayarlarını dört RPM'ye, hızlanma ayarlarını beş dakikaya ve son hız ayarlarını 40 RPM'ye ayarlayın.Alışma süresinden sonra, çubuk dört RPM'de dönerken denekleri kendi şeritlerinde rotarod üzerine yerleştirin. Tüm denekler kendi şeritlerine girdikten sonra ilk denemeye başlayın. Cihaz yazılımını kullanarak düşmek için gecikmeyi kaydedin.Yedek olarak ikincil bir zamanlayıcı kullanılabilir. Denemenin tamamlanmasının ardından, yorgunluğu önlemek için bir sonraki denemeden önce her deneğin kendi şerit rezervuarlarında 10 dakika dinlenmesine izin verin. Bu prosedürde, bir kızak mikrotomunun sıcaklık kontrol kutusu borusunu sahneden bir lavabo musluğuna takın.Mikrotom aşamasını 28 santigrat dereceye soğutmak için sıcaklık kontrol kutusunu kullanın. Ardından kesit kalınlığı kadranını 50 mikrometreye ayarlayın. Ardından, OTC çözeltisinin kuruş büyüklüğünde bir kısmını sahneye koyun.OTC donmadan önce, yarım küreyi, orta sagital kesim yüzeyi OTC tabakası üzerinde aşağı bakacak şekilde konumlandırmak için forseps kullanın. Dokuyu hızlı ve nazikçe yönlendirin, böylece yarım kürenin yan ucu bıçağa doğru bakar. Sahneden üstün.Katmanlar halinde çalışarak, dokunun etrafına ek OTC ekleyin ve bir sonraki katmanı eklemeden önce OTC'nin tamamen donmasına izin verin. Daha sonra dokunun üzerine ince bir OTC tabakası ekleyin ve dondurun. Daha sonra, kesme bıçağına dağıtılan dokuyu eşit vücut ağırlığına sahip bölümlere ayırın.Güzel bir sanatçı boya fırçası kullanarak bölümleri toplayın. Ve bunları bir XPBS içeren uygun şekilde etiketlenmiş bir kuyu plakasına yerleştirin. Bölümler arasında, gerekirse kesme kalınlığını 50 mikrometreye sıfırlayın.Bölümlere ayırdıktan sonra, plakanın her bir oyuğundaki PBS'yi üre çözeltisi ile değiştirin. Ve tabağı buzun üzerine yerleştirin. Hazır olduğunda, immüno-etiketleme için epitopları maskelemek amacıyla üre çözeltisi içindeki bölümleri kaynatmak için plakayı kaynama sıcaklığına ayarlanmış bir ısıtma bloğuna aktarın.Her kaynatma aşaması arasında, doku bölümlerini içeren plakayı buz üzerinde soğutun. Kaynattıktan sonra, bölümleri üç kez yıkayın, mevcut çözeltiyi bir XPBS ile değiştirin ve bölümleri 10 dakika boyunca çalkalayın. Daha sonra bölümleri, oda sıcaklığında hafif bir çalkalama ile bir saat boyunca serum içinde inkübe ederek eşek serumu solüsyonu ile bloke edin.Bölümler artık boyanabilir. Etiketlendikten sonra, foto-ağartmayı azaltmak için bölümleri montaj ortamı ile %2 jelatin kaplı slaytlara monte edin. Kaymayı örtün ve gece boyunca dört santigrat derecede kurulayın.Daha sonra, kapak fişlerini oje ile kapatın ve dört santigrat derecede saklayın. Taramalı bir konfokal mikroskop kullanarak, parlak alan ışığı altında beyinciğin birincil fissürünü bulun. Amino tahlilinin en kritik adımı, primer fissürün etrafını saran beşinci ve altıncı A modüllerindeki serebellar dokuyu doğru bir şekilde konumlandırmaktır.Boyama desenlerini ve tutarsız lobülleri analiz etmek, sonucunuzda değişkenlik sağlayacaktır. 10X objektif ile DAPI, Alexa Fluor 488 ve Alexa Fluor 594 kanallarını tarayın ve sırayla uyarın. Bir DM 488559 nanometre dikroik ışın ayırıcı ile birlikte sırasıyla 405 nanometre diyot lazer, 488 nanometre argon gazı lazeri ve 559 nanometre diyot lazer kullanarak.Ardından, sırasıyla SDM 490 ve SDM 560 ışın ayırıcılar ve bir BA 575675 bant geçiren filtre kullanarak yayılan ışığı ayırın ve toplayın. Süksinik asit, SCA1 farelerinin ev kafesi içme suyunda 17 haftalıktan başlayarak dört hafta boyunca çözüldü. SCA1 fareleri, beş haftalıkken ataksi fenotipini göstermeye başlar.Tedavi süresince davranışsal değerlendirmeler aşağıdaki şekilde yapılmıştır. 17. hafta boyunca ayak izi testi. 18. hafta boyunca ışın testi ve 19. hafta boyunca hızlandırılmış rotarod.20 haftalık iken fareler sakrifiye edildi ve amino patoloji testleri, HPLC testleri ve solunum testleri için serebellar doku toplandı. İşte bir araçla muamele edilmiş vahşi tip kapıyı, araçla muamele edilmiş bir SCA1 kapısını ve süksinik asitle muamele edilmiş bir SCA1 kapısını gösteren ayak izi tahlilinden elde edilen temsili veriler. Burada ışın analizi verileri, süksinik asit muamelesi ile SCA1 farelerinin ışın performansındaki iyileşmeyi göstermektedir.Süksinik asit muamelesi, düşme gecikmesinin artmasıyla gösterildiği gibi, SCA1 farelerinin hızlanan rotarod performansını önemli ölçüde iyileştirir. Bu prosedürü denerken, tekniği birden fazla deneme boyunca her denek için tutarlı bir şekilde uygulamayı unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, süksinik asit dağıtımını takiben bireysel oksidatif fosforilasyon kompleksleri yoluyla solunumun iyileştirilip iyileştirilmediği gibi ek soruları yanıtlamak için mitokondriyal solunum gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir.Bu videoyu izledikten sonra, davranışsal ve nöro-patolojik tahlillerin nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız. Bu, serebellar davranışın ve sitomimarinin iyileşmesini değerlendirir.

treating-sca1-mice-with-water-soluble-compounds-to-non-specifically

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, fare deneklerde motor koordinasyonu ve öğrenmeyi değerlendirmek için hızlanan dönen çubuk veya rotarod testini gerçekleştiriyoruz.

Hızlanan Döner Çubuk Testi veya Rotarod Testi: Farelerde Motor Koordinasyonu ve Öğrenmeyi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Mitokondriyal disfonksiyon hücresel yaşlanma bir özelliğidir. Bu kağıt yaşlanma fare vestibüler duyu epitel mitokondriyal fonksiyon geliştirmek için non-invaziv yakın kızılötesi (NIR) tedavi kullanır.

Yakın Kızılötesi (NIR) Işık Fare Vestibüler Duyu Epitelinin Mitokondriyal Fonksiyonun bir Marker Anlatım artırır

Fare modelleri kolon iltihabı çalışmalarda Mezenkimal Kök hücre (MSC) küçük bir yüzdesi (% 1-5) intravenöz enjekte veya intraperitoneally iltihaplı kolon1,2için ev gösterdi. Bu çalışmada ultrason destekli MSCs İntrakardiyak enjeksiyonlari bağırsak için artan yerelleştirme neden gösterir.

Ultrason destekli İntrakardiyak enjeksiyon bağırsak için giriş için deneysel iltihabi bağırsak hastalıkları fare modellerinde kullanım artırmak için insan Mezenkimal Kök hücre

Çevresel organoklorin pestisitlerinin (OKP) hepatositlerde mitokondriyal fonksiyon üzerindeki etkisinin anlaşılması metabolik bozukluklara neden olan OKP'lerin mekanizmasının araştırılmasında önemlidir. Bu yazıda hepatik mitokondriyal fonksiyonun saptanması nda ayrıntılı yöntemler yer alıyor.

Organoklor Intarımlarına Maruz Kalan Hepatositlerde Mitokondriyal Fonksiyonun Saptanması Için Deneysel Protokol

Bu proktokol, astrositlerde ve nöronlarda in vitro ve in vivo mitokondriyal Ca2+ görüntüleme için bir yöntem sağlamayı amaçlamaktadır.

Genetik Olarak Kodlanmış Ca2+ Göstergeleri (GECI'ler) Kullanarak Astrositlerde ve Nöronlarda Mitokondriyal Ca2+ Alımı Görüntüleme

Bu protokoller, kullanıcıların Denizatı hücre dışı akı analizini kullanarak 3D kanser hücre hattı kaynaklı sferoidlerde mitokondriyal enerji metabolizmasını araştırmalarına yardımcı olacaktır.

Hücre Dışı Akı Analizi Kullanarak Tek 3D Mikrodoku Sferoidlerinin Mitokondriyal Enerji Metabolizmasını Keşfetmek

Burada, mikropipet kılavuzluğunda ilaç uygulamasını (MDA), araştırma hayvanını minimum stres ve rahatsızlıkla tedavileri kolayca yutmaya teşvik eden oral gavaja alternatif bir yöntem olarak tanımlıyoruz.

Kemirgen Modellerinde Oral Gavaja Alternatif Bir Yöntem Olarak Mikropipet Kılavuzluğunda İlaç Uygulamasının Kullanımı

Beyin organoidleri, Mitokondriyal Ensefalomiyopati, Laktik Asidoz ve İnme benzeri ataklar (MELAS) çalışmaları için değerli bir model görevi görerek, bunların altında yatan patofizyolojiye dair içgörüler sunar ve ilaç taraması için bir platform sağlar. Hastalığa neden olan genlerin değişen seviyelerde heteroplazmisine sahip hücre dizilerinden türetilen organoidler, önemli fenotipik farklılıklar sergiler.

Beyin Organoidleri Kullanılarak Mitokondriyal Hastalığın Modellenmesi: Mitokondriyal Ensefalomiyopati, Laktik Asidoz ve İnme Benzeri Epizodlara Odaklanma

Mitokondriyal boya terminali olan Schwann hücre mitokondrilerinin in vivo konfokal mikroskopi için yerel enjeksiyonları. Bu yöntem, sağlıklı veya hasta kaslı farelerin iskelet kas dokularında gösterilen kavram kanıtını kullanarak yüksek çözünürlüklü mitokondriyal görselleştirme sağlar.

Farelerin Kas ve Terminal Schwann Hücrelerinde Mitokondriyal Morfolojinin Yerinde Niceletilmesi Yöntemleri

Endo-PAT 2000 kullanıyorsanız endotel fonksiyonunu değerlendirmek için bir non-invaziv prosedür gösterilmiştir.

Endo-PAT 2000 ile Endotel Vazodilatör Fonksiyon değerlendirilmesi

Öğrenin, SCA1 farelerinde sukrosik asit ile mitokondriyal aktivatör tedavisinin serebellar davranış ve doku üzerindeki terapötik etkilerini değerlendirmeyi. Bu yöntem nörodejeneratif hastalıklarda yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

suda çözünür Bileşikleri ile SCA1 Fare tedavisi, spesifik olmayan mitokondriyal fonksiyon Boost

Daha fazla video keşfet