2 Mayıs 2016
Bu el yazması fare basınç-volüm verilerinin toplanması için ayrıntılı bir protokol açıklar.
Faredeki basınç hacim döngülerini ölçmenin genel amacı, kardiyak fonksiyonun ayrıntılı bir değerlendirmesini elde etmektir. Bu yöntem, spesifik genetik manipülasyonları barındıran farelerin fizyolojik karakterizasyonu için kullanışlıdır ve bu da spesifik proteinlerin kardiyak fonksiyondaki rolü hakkında bilgi üretebilir. Bu tekniğin temel avantajı, diğer metodolojilerde bulunmayan kasılma fonksiyonunun ayrıntılı bir değerlendirmesini sağlamasıdır.
Fare ameliyat için hazırlandıktan sonra, sternal çentikte orta hattın yaklaşık beş milimetre sağından orta hattın yaklaşık beş milimetre soluna kadar uzanan bir kesi yaparak başlayın. İlk rostralin sağ kenarı boyunca, mandibulanın ucuna kadar yaklaşık iki milimetreye kadar uzanan ikinci bir kesi yapın. Ardından, ikinci insizyonun rostral ucundan orta hattın yaklaşık beş milimetre sağına kadar uzanan üçüncü bir insizyon yapın.
Ve altı çizili dokuları ortaya çıkarmak için ortaya çıkan cilt flebini sağa doğru geri çekin. Daha sonra, bir diseksiyon mikroskobu altında, trakeanın üzerini kaplayan altı çizili kas sistemini ortaya çıkarmak için orta hattaki parotid ve alt mandibular tükürük bezlerini künt diseksiyon yapın. Daha sonra sağ ve sol sternal hyoideus kaslarını künt bir şekilde ayırın.
Soluk borusu göründüğünde yemek borusunu dahil etmemeye özen göstererek boğaz dokusunun altından on santimetrelik üç sıfırlı ipek bir parça geçirin. 20 gauge bir iğne kullanarak, ilk trakeal halkadan önce gırtlağa doğru uzanan boşlukta geniş bir kesi yapın. Daha sonra anestezi maskesini hemen hayvandan çıkarın ve endotrakeal tüpü trakeaya dikkatlice yerleştirin.
Tüp sabitlendikten sonra, orijinal cilt kesisinin sol kenarını ksifoid sürecine kadar ve orta hat boyunca orta hattın beş santimetre sağındaki yaklaşık bir noktaya kadar uzatın. Daha sonra, altı çizili kas sistemini açığa çıkaran deri flebini yanal olarak geri çekmek için künt diseksiyon kullanın. Ve göğüs kafesinin sağ tarafa, sternumun kıvrılma yönüne yakın bir yere yerleştirilmesini izole etmek için damar genişletici forseps kullanın.
Kası koterize edin ve kesin. Daha sonra pektoralis majörünü sternuma bağlantısı boyunca kesin. Ve aynı taraftaki latissimus dorsi'yi baltalayın.
Kaburgaları ortaya çıkarmak için kesilen ucu kraniyal olarak geri çekin. Ve göğsüne girmek için interkostal kas katmanlarını dikkatlice incelemek için bir çift keskin forseps kullanın. Çoğul boşluk açıldıktan sonra, künt uçlu damar genişleticilerini dikkatlice yerleştirin ve göğüs duvarını hafifçe yukarı doğru kuvvetle kaldırın.
Şimdi, akciğer lobunu kesmemeye ve insizyonu medial olarak uzatmaya dikkat ederek interkostal kaslar boyunca yanal olarak kesin, sternuma paralel uzanan iç meme arterini önlemek için orta hattın üç ila dört milimetre yanını tutun. Ardından, tuzlu suya batırılmış küçük, pamuk uçlu bir aplikatörü kesiden orta hatta doğru yerleştirin ve göğüs duvarını alt çizgi yapılarından uzaklaştırmak için yukarı doğru hafif bir çekiş sağlayın. Kesiğin medial kenarından başlayarak ve sol taraftaki orta hattın yaklaşık bir santimetre lateralinde sona eren göğüs duvarını kesmek için dikkatlice bir koter kullanın.
Doku iyice koterize edildikten sonra, sternumu dikkatlice kesmek için makas kullanın. Kalbin tepesi açıkça görülebilmelidir. Daha sonra, künt diseksiyon kullanarak, perikard'ı bozun ve kaudal vena kava'yı tanımlayın.
Juguler ven kateterini yerleştirmek için, yüzde on albümin içeren bir şırıngaya bağlı 30 gauge iğne kateterini, iğne juguler ven üzerinde kendi başına, eğim tarafı yukarı bakacak şekilde yönlendirin. Şah damarını görselleştirmek için, bir elinizde forseps ile iğneyi kavrayın ve diğer elinizde doku forsepsleri ile tükürük bezini geri çekin. Damar duvarında gerginlik oluşturmak için dizel şah damarını çevreleyen dokuya hafif çekiş uygulayın.
Ardından, sığ bir yaklaşma açısı kullanarak, iğneyi dikkatlice damarın içine sokun ve ucu damarın içine üç ila dört milimetre ilerletin. Kateter yerine oturduğunda, cerrahi yapıştırıcı kullanarak iğneyi altı çizili tükürük bezlerine sabitleyin ve albümin solüsyonunu infüze etmeye başlayın. Basınç hacmi kateterini yerleştirmek için, önce dengelenmiş salin solüsyonu içeren bir şırıngayı ve basınç hacmi kateterini, kateter ucu kalple kabaca aynı yükseklikte olacak ve basınç okumasını sıfırlayacak şekilde farenin yanına hareket ettirin.
Daha sonra, tuzlu suya batırılmış küçük pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak, apeksi görselleştirmek için kalbi hareket ettirin ve apeksin merkezine mümkün olduğunca yakın bir bıçak kesisi yapmak için 25 gauge bir iğne kullanın. İğnenin çıkarılmasının ardından, kateteri kesiden hızlı ama nazik bir şekilde yerleştirin. Ventriküler basınç hacim döngüleri daha sonra ölçülebilir.
Kateterin yerleştirilmesinin ardından, anestezinin sahip olabileceği kardiyo depresif etkileri aydınlatmak için anesteziyi azaltın. İşlem sırasında aşırı kan kaybı varsa, infüze edilen albümin hacmini kolayca artırabilirsiniz. Konvansiyonel olarak, hacim X ekseni üzerinde ve basınç y ekseni üzerinde çizilir.
Basıncın hacme karşı çizilmesinden kaynaklanan basınç hacmi döngüleri, basınçtaki izovolumik değişiklikleri temsil eden dikey kenarlara sahip bir dikdörtgene benzemelidir. Alt yatay taraf, mitral kapak yoluyla ventriküler dolguyu temsil eder ve üst yatay taraf, aort kapak yoluyla ventriküler boşalmayı temsil eder. Sağlıklı bir vahşi tip farede, saniyede 8000 ila 12000 milimetre cıva basınç türevinin maksimum oranı ile 90 ila 110 milimetre cıva sol ventrikül basıncı beklenir.
Ayrıca, basınç hacmi verilerinin analizini zorlaştırabilecek en yaygın ölçüm artefaktlarından biri, muhtemelen basınç dönüştürücüsünün bir papiller kas veya ventrikül içindeki başka bir dinamik yapı tarafından doğrudan sıkıştırılmasından kaynaklanan sistolün sonundaki basınçta bir artış olarak belirgin olan kateter sıkışmasıdır. Bu prosedürü gerçekleştirirken, yeterli anestezik derinliği sağlamak için fareyi sürekli olarak izlemeyi unutmamak önemlidir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik kateter yerleştirildikten sonra kullanılan protokole bağlı olarak yaklaşık bir saat içinde tamamlanabilir.
Bu prosedürün tamamlanmasının ardından, kardiyak fonksiyon üzerindeki etkilerini değerlendirmek için deneysel bileşiklerin infüzyonları kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, farenin sol ventrikülüne cerrahi olarak bir basınç hacmi kateterinin nasıl yerleştirileceğini ve kardiyak analiz için yüksek kaliteli basınç hacmi döngülerinin nasıl elde edileceğini iyi anlamalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu makale, kardiyak fonksiyonu değerlendirmek amacıyla farelerden basınç-hacim verilerinin toplanmasına yönelik ayrıntılı bir protokol tanımlamaktadır. Bu yöntem, özellikle genetik olarak manipüle edilmiş farelerin fizyolojik özelliklerini anlamak için kullanışlıdır.
Farelerde basınç-hacim döngüsü analizi, kardiyak kontraktil fonksiyonun yüksek sadakatle değerlendirilmesini sağlayarak kardiyovasküler ilaç keşif süreçlerinde terapötik hedeflerin mekanistik risklerinin azaltılmasına olanak tanır. Bu yöntem, genetik manipülasyonları ölçülebilir hemodinamik fenotiplerle ilişkilendirerek hedef doğrulamayı destekler ve preklinik modellerdeki öngörü güvenilirliğini artırır. Ekokardiyografi veya tek başına terminal analizlerle erişilemeyen fonksiyonel veriler sunarak, erken keşif aşamasındaki kritik bir boşluğu doldurur.
Bu yöntem; hedef doğrulamasından öncü bileşik tanımlamaya ve preklinik etkinlik testlerine kadar uzanan keşif sürekliliğine uyum sağlayarak, her aşamada fonksiyonel kardiyak fenotipleme sunmaktadır.