Name: İzolasyon ve Serebral Parankimal arteriollerin kanülasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Öğrenin, farelerden serebral parankimal arteriyollerin izolasyonu ve kanülasyonu için basınç miyografisi kullanarak damar fonksiyonlarını incelemeyi. Bu yöntem, serebrovasküler hastalıkların araştırılmasında güvenilir bir protokol sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NHLBI R01HL091905 (SE), Birleşik Lökodistrofi Vakfı CADASIL araştırma bursu (FD) ve AHA 15POST247200 (PWP) tarafından finanse edilmektedir. Yazarlar, Şekil 1'deki görüntüyü sağladığı için Samantha P. Ahchay'a ve el yazması hakkında eleştirel yorumlar sağladığı için Dr. Gerry Herrera'ya teşekkür eder.

1. Kanül ve Odası Hazırlık <ol><li> (Dış çap: 1.2 mm; iç çapı: 0.69 mm, uzunluğu 10 mm), temiz borosilikat cam kılcal takın bir platin filaman (100 um çapında), bir pipet çektirmenin oluklara. </li><li> Uygun ayarları kullanarak, bir mikropipet çektirmenin kullanarak, uzun ve ince ucu (Şekil 2) ile bir kanül oluşturmak için kılcal çekin. kullanılan ayarlar şunlardır: Isı - 700, Pull - 100, Hız - 50, Zaman - 10. </li><li> Basınç myograph odasının tutucu içine kanül yerleştirin. uygun kanüller aynı hizaya getirin. </li><li> Dikkatle istenilen çapa mikroskop altında bir forseps kullanarak kanüller ipuçları bölünürler. Burada, bir 10 um ucu ile bir kanül (Şekil 2) göstermektedir. </li><li> 1.8 mM Ca2 + içeren yapay serebrospinal akışkan (CSF) her iki kanüllerin doldurmak; % 1 sığır serumu ile desteklenmiş Ca2 + içermeyen ACSF bölmeyi doldurmakalbümini (BSA) + 10 uM diltiazem (bütün çözeltiler, deney başlamadan önce taze hazırlanmalıdır). odasının boyutuna bağlı olarak, 5 ila 20 ml arasında aCSF hacmini gösterir. Kanülasyon başlatmak için hazır olana kadar 4 ᵒ C odasına saklayın. NOT: Diltiazem kanül kolaylaştıran arteriollerin genişlemesine neden olur tersine çevrilebilir bir L-tipi voltaj bağımlı kalsiyum inhibitörü, </li></ol> Parankimal arteriollerin 2. izolasyonu <ol><li> Kurumun hayvan bakım komitesi tarafından onaylanmış laboratuarda standart protokolleri kullanarak hemen önce diseksiyon hayvan Euthanize. Diğer yaygın olarak kullanılan anestezikler, serebral dolaşım 15 vazodilatör etkileri olabilir barbitüratlar veya karbon dioksit kullanılması tercih edilmektedir. Burada gösterilen tüm hayvan prosedürleri Kurumsal Hayvan Bakım ve Tıp Nevada Okulu Üniversitesi Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmış, ve ag geçmiş bulunmaktadır&quot;Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Yol Gösterici İlkeler&quot; Sağlık National Institutes ile reement. </li><li> Karbondioksit kullanarak hayvan Euthanize. dekapitasyon önce, hayvan nefes durdu ve pençeleri kısma zaman tepkisiz olduğunu olduğundan emin olun. </li><li> keskin bir makas (fare) ya da giyotin (sıçan) kullanarak hayvan başını kesmek. Hayvanın başının cildi çıkarın ve ince uçlu makas kullanılarak orta hat kafatası sütür boyunca kesilir. künt forseps (fare) ya da kemik Pense kullanarak dikkatli bir şekilde kafatası kemikleri kaldırmak ve beyni maruz kalmaktadır. yavaş ve dikkatli yüzey pial damarlara zarar etmeyecek şekilde beyin çıkarın. Buz üzerinde% 1 BSA ile desteklenmiş Ca2 + içermeyen aCSF 20 ml dolu bir kap içine beyin yerleştirin. </li><li> % 1 BSA ile desteklenmiş buz soğukluğunda Ca2 + içermeyen ACSF bir ped ihtiva eden bir diseksiyon çanak doldurun ve çanak (Şekil 2A) için yukarı doğru bakan ventral yüzeyi ile beyin aktarın. Bir dissec altında tabak yerleştirinting mikroskobu (Şekil 3A). 27-gauge iğne kullanılarak pad beyin sabitleyin. orta serebral arter (MCA) yakınlarındaki işaretçilerine yerleştirerek önlemek için dikkatli olun. </li><li> Willis ve ondan dallanma MCA Çemberi yerelleştirilmesine. Keskin ve hizalanmış Vannas yaylı makas kullanılarak, MCA etrafında küçük bir dikdörtgen kesin. Bu dikdörtgen MCA tüm uzunluğu boyunca genelinde 5 mm yakın olduğundan emin olun. Dikdörtgenin üst kısmı (Willis, Şekil 2B, ok Circle proksimal) Willis poligonu gelen dallanma noktasından öteye olmalıdır. </li><li> 3 mm - Vannas yaylı makas kullanılarak, yaklaşık 2 için doku derinlemesine bir alttan gerçekleştirin. NOT: Bu bölüm parankimal arteriollerin iyi izolasyonu için kritik olduğunu ve doğru almak için birkaç deneme alabilir. kesim yeterince derin yapılmış notu ise, izole parankimal arteriol kısa olacaktır; kesim çok derin ise disseke zaman, arteriol kendi dallanma noktasında kıracakdoku çıkarılır. </li><li> böcek pimleri kullanarak yukarı (Willis poligonu gelen distalinde) bakan MCA ile diseksiyon çanak içine beyin dilim en uzak ucunu aşağı pin. sığ bir kesi altta yatan serebral korteks (aksi pimleri tutmak olmaz) çok derin kesmek için dikkatli olmak, pin yakın pia kesmek için emin olun. </li><li> Dikkatle küçük forseps ile pia her tarafında yakala ve korteksten pia soyma başlar. Gerekirse, çevredeki pial zarı hasar olmadığından emin olduktan, MCA üzerinde tutmak. </li><li> MCA içeren pia korteks serbest kalıncaya kadar soyulması tutun. soyulmaya karşı direnç Çember Willis yakın artacağını unutmayın. uzun parankimal arteriyollerde bu bölgede olacak çünkü, bu noktada ekstra dikkatli olun. </li><li> Pia ücretsiz sonra, (Şekil 2B) aşağı bakacak şekilde Arteriolleri parenkimal yüzey ile ters diseksiyon çanak pedin üstüne dikkatlice yerleştirin. </li> &lt;li&gt; Vannas yaylı makas kullanarak, geminin uçları açık açık kesilir emin olun, MCA ücretsiz disseke Arteriolleri kesip. </li><li> Toplanan arteriyoller basınç myography, moleküler analiz, ya da yerli düz kas veya endotel hücrelerinin izolasyonu için de kullanılabilir. </li></ol> 3. Basınç myography <ol><li> Vaktinden önce dikiş hazırlayın. 5 mm parçalar halinde koyu yeşil naylon iplik kesin ve Petri kabı bir çift taraflı bant yapışkan tarafına yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu altında, ince forseps kullanarak filamentler içine her parçayı ayrı ve gevşek bir ucunu diğer içine filaman geçirerek basit bir yarı-hitch düğüm hazırlamak. </li><li> forseps kullanarak, çok fazla basınç ile kapmak için değil emin, çift taraflı bant kapalı bir düğüm seçin. kanül üzerine banyo çözüm, slayt düğüme dikiş çekin ve kanülün ucundan bir mesafede sıkın. Her kanül 2 sütür için bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Bir cam Coat% 10 BSA çözeltisi ile mikropipet ve daha sonra% 1 BSA ile desteklenmiş Ca2 + içermeyen ACSF aşırı durulayın. </li><li> Cam mikropipet içine çözeltinin 50 ul çekin bir parankimal arteriolden yukarı çekin ve basınç myography odasına transfer. Cam mikropipet iç odaya yapışmasını önlemek için odasına parankimal arteri dağıtmak için bir sıvı hareket pistonu itin. </li><li> iki süper ince forseps kullanarak, sadece geminin çok ucunu dokunmaya özen göstererek, PA lümen açın. </li><li> forseps kullanarak dikkatli bir şekilde kanül üzerine gemi çekme, parankimal arteriyol kenarlarını tutun. Damar kanül (Şekil 3A) çok konik sonunda olmayacak şekilde kanül üzerinde yeterince çekin. </li><li> Kanül 2 sütür gevşetin ve gemi (Şekil 3B) onları sıkın. Uzay gemi üzerinde ayrı sütür biraz ve operatöre doğru çekin tigh ikenOn onu. herhangi bir dalları parankimal arteriole diğer ucunu kapatmadan önce kapalı bağlı olduğundan emin olun. </li><li> etrafında odasına dönün ve bir kör-sac olarak parankimal arteriole diğer ucunu kapatın. Bunu başarmak için, ters kanül üzerinde bağları açıp arteriole üzerine geçmektedir. Yavaş yavaş parankimal arteriol kanülün tarafına bağlı olacaktır şekilde düğüm kapatın. arteriole boyuna streç kaçının. (Şekil 3C). NOT: Bu çalışmanın amacı, lümen yoluyla ilaç perfüze edilmesi için ise, kanülün tarafına parankimal arteri bağlama yerine ucunu kanüle. kanüller herhangi bir tuz kristalleri veya intraluminal akışını engellemek iç yapı-up yok emin olun. Fizyolojik seviyelerde kesme gerilimi muhafaza etmek için uygun bir şekilde akış hızını düzenler. Shih ve ark. Tarafından yapılan bir çalışmada sıçanlarda 8 Arteriolleri delici içinde debileri gösterir ve pi için bir başlangıç ​​rehber olarak hizmet verebilirlot çalışmaları. </li><li> Dikkatle damar çapı kayıt için kullanılmak üzere mikroskop aşamasına odası aktarın. Doğru tüplere perfüzyon için sıcaklık probu ve giriş ve çıkışları bağlamak, mikroskop sahneye odasına takın. (Bir basınç transdüktörüne bağlanan, peristaltik pompa, vb. Su sütunu) laboratuarda uygun bir basınç sistemi kullanılarak, 40 mm Hg lümen içi bir fare parankimal arteriyollerin için basınç veya sıçan arteriyollerin 50 mmHg arteri zorlar. Şekil 4D bir örneğini göstermektedir bir basınç transdüktörüne bağlı peristaltik pompa kanül arteri basınç uygulamak için. </li><li> Çapı (Şekil 3E) değişiklikleri tespit etmek için kullanılan sistemi açın. Mümkün olan en iyi algılama elde etmek amacıyla, bu tür aydınlatma ve kontrast gibi mikroskop ayarları ayarlayın. İdeal arteriole duvarları karanlık ve lümen saydam olmalıdır. algılama uygun olduğunda, t kaydetmeye başlamakO deneme. </li><li> superfusion sistemini başlatın. 5 ml / dak - 3 arasında bir akış hızında 15 ila 20 dakika süreyle 1.8 mM Ca2 + içeren sıcak (37 ᵒ C) ACSF kanüllenmiş, basınçlı parankimal arteri yıkayın. Bu CSF diltiazem ve BSA içermemelidir. </li><li> hazırlık canlılığı değerlendirmek için 60 mM KCI aCSF düzenli aCSF değiştirin. 60 mM KCI% 20 ​​daralma - Bu noktada PA 10 sergilemelidir. arteriole ölçüde daraltıyor vermezse, kaldırmak ve başka arteri cannulate. </li><li> Düzenli aCSF ile 60 mM KCl yıkayın. bir saat kadar sürebilir spontan miyojenik ton, üretimi kadar bekleyin. arteriole o zamana kadar miyojenik sesi yoksa, başka bir arteriyol ile değiştirin. Not: miyojenik sesi kontraktil agonistleri veya yüksek KCI çözeltisi uyarı olmaksızın kabın lümen çapına kademeli bir ve bazen yavaş azalma olarak görülmektedir. Miyojenik tonu aşağıdaki f hesaplanırormula: (1 - (aktif lümen çapından / pasif lümen çapı)) 100 5 x miyojenik sesi uygun miktarda vb tedaviler, suşlar, türler, transgenik göre değişebilir.. % 30 5 - Genel olarak, fizyolojik miyojenik ton 15 arasında değişmektedir. </li></ol> 4. Örnek Basınç myography deneyler: agonist kaynaklı Daralma andMyogenic reaktivite <ol><li> uygun konsantrasyonlarda ACSF tercih edilen bir agonistin bir seyreltme serisi hazırlanır. Bu örnek için tromboksan A2 reseptörü agonisti U46619 kullanılmıştır. 1 mM&#39;lik bir konsantrasyonda U46619 1 ml stok çözeltisi elde edilmiştir. Aktarım 100 uM U46619 ihtiva eden bir çözelti elde ilacın 10 kat seyreltme yapmak aCSF 900 ul ihtiva eden yeni bir tüpe 1 mM çözeltisinin 100 ul. Bir konsantrasyon-yanıt konstriktör eğrisi hazırlamak için 1 mM&#39;den 100 nm arasında değişen, 6 dilüsyonları için bu işlemi tekrar edin. </li><li> EkleaCSF superfusing 100 ml (daha sonraki bütün doz 900 ul ve ardından ilk doz için 1 ml) agonist içeren çözeltinin tüm hacmi. Bu agonistin ilave 100 kat seyreltildikten yol açacaktır. Bu durumda, 10 pM ila 10 uM banyosu aralığında agonist nihai konsantrasyonlar. lümen çapı kararlı duruma ulaşıncaya kadar, arteriol ~ her konsantrasyonda 10 dakika inkübe izin verin. </li><li> PA çapı özgün değerine geri gelene kadar herhangi bir ilaç vermeden aCSF PAS superfusing ile agonist yıkayın. Maksimum genişlemeyi başlatıcı ve arteriole pasif çapı kaydetmek için 10 uM Diltiazem + 2 mM EGTA ile desteklenmiş (BSA) olmadan Ca 2 + içermeyen aCSF parankimal arteri kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> dikkatlice ilişkilerin ucuna tutarak çekerek kanül parankim arteri çıkarın. artıkları ve agonist fazlasının ayrılması için çift deiyonize su ile damar haznesi yıkayın. Ca odasına doldurun2 + içermeyen aCSF + BSA ve başka bir arteri cannulate. Arteriol başına birden fazla deney yapılması tavsiye edilmez. </li><li> Bir miyojenik tepkime deneyi gerçekleştirmek için, kendiliğinden miyojenik tonu (yukarıda tarif edilen) oluşturulana kadar parankimal arteriol 40 mmHg lümen içi basınçta dengelenmeye gelmeye bırakın. lümen çapı kararlı duruma ulaşana kadar, 10 dakika - 5 mmHg intraluminal basıncı azaltmak ve PA ~ 5 için gelmesini sağlayınız. (20 mmHg artışlarla 5 140 mmHg örneğin) tercih aralığını kullanarak intraluminal basınç kademeli artırın. </li><li> Bu nedenle deney sonuçlarını değiştirerek, endotel çökmesine neden olabilir ve zarar verebileceğinden, 5 mmHg&#39;nin altında intraluminal basınç arteri maruz bırakmayın. </li><li> Basınç eğrisinin sonunda lowes başlayarak 10 uM Diltiazem + 2 mM EGTA ile takviye edilmiş Ca (BSA&#39;sız) 2 + içermeyen ACSF parankimal arteri superfuse ve basınç adımları tekrarlayınt basıncı. NOT: Bu formülle belirlenen% myojenik sesi hesaplanması için gerekli olan PA pasif çapları, verecektir:% tonu = (1 - (aktif çap / pasif çap)) x 100. </li></ol>

<ol><li>Dunn, K. M., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+signaling+in+the+brain+and+the+pathological+consequences+of+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Neurovascular signaling in the brain and the pathological consequences of hypertension.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 306, H1-H14 (2014).</li>
<li>Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+regulation+in+the+normal+brain+and+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurovascular regulation in the normal brain and in Alzheimer's disease.</a> Nat Rev Neurosci. 5, 347-360 (2004).</li>
<li>Dabertrand, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2%2C+a+postulated+astrocyte-derived+neurovascular+coupling+agent%2C+constricts+rather+than+dilates+parenchymal+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2, a postulated astrocyte-derived neurovascular coupling agent, constricts rather than dilates parenchymal arterioles.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33, 479-482 (2013).</li>
<li>Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetrating+arterioles+are+a+bottleneck+in+the+perfusion+of+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 365-370 (2007).</li>
<li>Pires, P. W., Jackson, W. F., Dorrance, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+myogenic+tone+and+structure+of+parenchymal+arterioles+by+hypertension+and+the+mineralocorticoid+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of myogenic tone and structure of parenchymal arterioles by hypertension and the mineralocorticoid receptor.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 309, H127-H136 (2015).</li>
<li>Longden, T. A., Dabertrand, F., Hill-Eubanks, D. C., Hammack, S. E., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+glucocorticoid+signaling+remodels+neurovascular+coupling+through+impairment+of+cerebrovascular+inwardly+rectifying+K%2B+channel+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Stress-induced glucocorticoid signaling remodels neurovascular coupling through impairment of cerebrovascular inwardly rectifying K+ channel function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 7462-7467 (2014).</li>
<li>Dabertrand, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+channelopathy-like+defect+underlies+early-stage+cerebrovascular+dysfunction+in+a+genetic+model+of+small+vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Potassium channelopathy-like defect underlies early-stage cerebrovascular dysfunction in a genetic model of small vessel disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112, E796-E805 (2015).</li>
<li>Shih, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+smallest+stroke%3A+occlusion+of+one+penetrating+vessel+leads+to+infarction+and+a+cognitive+deficit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit.</a> Nature neuroscience. 16, 55-63 (2013).</li>
<li>Cipolla, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+pressure-induced+tone+in+rat+parenchymal+arterioles+vs.+middle+cerebral+arteries%3A+role+of+ion+channels+and+calcium+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%22%5BJournal%5D)">Increased pressure-induced tone in rat parenchymal arterioles vs. middle cerebral arteries: role of ion channels and calcium sensitivity.</a> Journal of applied physiology. 117, 53-59 (2014).</li>
<li>Hamel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+nerves+and+the+regulation+of+cerebrovascular+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%22%5BJournal%5D)">Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone.</a> Journal of applied physiology. 100, 1059-1064 (2006).</li>
<li>Brayden, J. E., Li, Y., Tavares, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purinergic+receptors+regulate+myogenic+tone+in+cerebral+parenchymal+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Purinergic receptors regulate myogenic tone in cerebral parenchymal arterioles.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33, 293-299 (2013).</li>
<li>Dabertrand, F., Nelson, M. T., Brayden, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ryanodine+receptors%2C+calcium+signaling%2C+and+regulation+of+vascular+tone+in+the+cerebral+parenchymal+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Ryanodine receptors, calcium signaling, and regulation of vascular tone in the cerebral parenchymal microcirculation.</a> Microcirculation. 20, 307-316 (2013).</li>
<li>Dabertrand, F., Nelson, M. T., Brayden, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acidosis+dilates+brain+parenchymal+arterioles+by+conversion+of+calcium+waves+to+sparks+to+activate+BK+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Acidosis dilates brain parenchymal arterioles by conversion of calcium waves to sparks to activate BK channels.</a> Circ Res. 110, 285-294 (2012).</li>
<li>You, J., Johnson, T. D., Marrelli, S. P., Bryan, R. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+heterogeneity+of+endothelial+P2+purinoceptors+in+the+cerebrovascular+tree+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Functional heterogeneity of endothelial P2 purinoceptors in the cerebrovascular tree of the rat.</a> Am J Physiol. 277, H893-H900 (1999).</li>
<li>Nagase, K., Iida, H., Dohi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ketamine+on+isoflurane-+and+sevoflurane-induced+cerebral+vasodilation+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Anesthesiol%22%5BJournal%5D)">Effects of ketamine on isoflurane- and sevoflurane-induced cerebral vasodilation in rabbits.</a> J Neurosurg Anesthesiol. 15, 98-103 (2003).</li>
<li>Fisher, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+arterial+lesions+underlying+lacunes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The arterial lesions underlying lacunes.</a> Acta Neuropathol. 12, 1-15 (1968).</li>
<li>Brown, W. R., Moody, D. M., Thore, C. R., Anstrom, J. A., Challa, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+changes+in+the+white+mater+in+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Microvascular changes in the white mater in dementia.</a> J Neurol Sci. 283, 28-31 (2009).</li>
<li>Pires, P. W., Dams Ramos, C. M., Matin, N., Dorrance, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+hypertension+on+the+cerebral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">The effects of hypertension on the cerebral circulation.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304, H1598-H1614 (2013).</li>
<li>Filosa, J. A., Bonev, A. D., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+dynamics+in+cortical+astrocytes+and+arterioles+during+neurovascular+coupling%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Calcium dynamics in cortical astrocytes and arterioles during neurovascular coupling.</a> Circ Res. 95, e73-e81 (2004).</li>
<li>Dacey, R. G. Jr, Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am J Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Coyne, E. F., Ngai, A. C., Meno, J. R., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+isolation+and+characterization+of+intracerebral+arterioles+in+the+C57%2FBL6+wild-type+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for isolation and characterization of intracerebral arterioles in the C57/BL6 wild-type mouse.</a> J Neurosci Methods. 120, 145-153 (2002).</li>
<li>Cipolla, M. J., Smith, J., Kohlmeyer, M. M., Godfrey, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKCa+and+IKCa+Channels%2C+myogenic+tone%2C+and+vasodilator+responses+in+middle+cerebral+arteries+and+parenchymal+arterioles%3A+effect+of+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">SKCa and IKCa Channels, myogenic tone, and vasodilator responses in middle cerebral arteries and parenchymal arterioles: effect of ischemia and reperfusion.</a> Stroke. 40, 1451-1457 (2009).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Serebral parankimal arteriyollerde farklı nöron popülasyonları serpmek birkaç anastomoz ve şubeleri ile yüksek direnç arteriyollerinde vardır. Bu özel kan damarları astrosit aracılı vazodilatasyon 1 ile serebrovasküler otoregülasyonun ve nörovasküler kaplin merkezi oyuncular. Serebral vasküler hastalık bu özel kan damarlarının önemi Doktor Miller Fisher öncü çalışması hipertansif hastalarda ölüm sonrası 16 beyinlerinde laküner infarkt topraklarında parankimal arteriyollerde yapısal değişik...

serebral dolaşım benzersiz merkezi nöronları, enerji depolar sınırlı ve oksijen basıncı ve gerekli besinlerin temini değişimlere dolayısıyla son derece duyarlıdır hücrelerin metabolik taleplerini desteklemek üzere düzenlenmiştir. Özel görevler yapılırken özellikle nöronal alt popülasyonlar aktif hale geldikçe, damarsal yerel hipoksi ve besin 1 tükenmesi önlemek için perfüzyon oldukça lokalize bir artış teşvik etmektedir. Bu aktif nöronlar, astrositler ve serebral arterlerin 2 oluşan nörovasküler kaplin olarak bilinen fonksiyonel hiperemi şeklidir ve nörovasküler ünitenin düzgün çalışması bağlıdır. İntraserebral parankimal Arterioller, kan damarları, parankimal kapsayan delici ve pre-kapiller arteriol bir grup, bu yanıt için merkezi önem taşımaktadır ve nörovasküler kaplin 3 araştırmak amacıyla bunları tek tek incelemek için kritik öneme sahiptir. &lt;beyin içinde farklı nöron popülasyonları serpmek - (70 mikron iç çapı 20) yüksek dirençli kan damarları p class = &quot;jove_content&quot;&gt; parankim arteriol küçüktür. Yüzeyde pial arterlerden dallanma, parankimal arteriol yeraltı mikro dolaşımı (Şekil 1) beslemek için yaklaşık 90 ᵒ açıyla beyin parankimi içine nüfuz eder. Bu arteriyollerde onlar kılcal koruyan en uzak düz kas içeren kaplar gibi uygun perfüzyon basıncını muhafaza kritik bir rol oynamaktadır. Yüzey pial dolaşıma aksine, parankimal arteriol teminat şubesi ve anastomoz eksikliği ve dolayısıyla serebral dolaşımın 4 &quot;darboğazlar&quot; dir. Sonuç olarak, parankimal arteriollerin disfonksiyonu gibi vasküler kognitif bozukluk ve küçük iskemik inme (aynı zamanda sessiz veya laküner vuruş olarak da bilinir) gibi serebrovasküler hastalıkların gelişimine katkıda bulunur. çalışmalar Indicate bu parankimal arteriyollerinde disfonksiyonu esansiyel hipertansiyon 5, kronik stres 6 tarafından uyarılan ve küçük damar hastalığı, genetik fare modelinde 7 erken bir olaydır olabilir. Sıçanlarda bir nüfuz arteriyollerin Bundan başka, deneysel olarak indüklenmiş oklüzyon yaşlı insanlarda 8 gözlenenler silindirik, benzer küçük bir iskemik inme neden olmak için yeterli olduğunu. Bu anatomik farklılıklara ek olarak, kontraktil fonksiyon düzenleyici mekanizmalar Pial arter ve parenkimal arteriyollerin arasında farklılık gösterir. Miyojenik vazokonstriksiyon nedeniyle muhtemelen damar düz kas hücrelerinde 12,13 sinyalizasyon hücre içi Ca dışsal inervasyon 10, mechanotransduction 11 farklı modları ve farklılıkların olmaması 2+ arasında parankimal arteriyollerde 9 daha fazladır. Kanıt endotele bağımlı vazodilatör mekanizmaları da bu vascu arasında farklılık göstermektedirCa 2+ içeren mekanizmalar üzerinde daha fazla güven sergileyen parankimal arterler ile lar bölümleri, nitrik oksit ve prostasiklinler 14 olarak yayılabilir faktörlerle karşılaştırıldığında damar duvarındaki K + kanalları ve elektrotonik iletişim -etkinleştirilmiş. Bu nedenle, veri serebral perfüzyon yerel kontrolü bilgimizin bir boşluk bırakarak, mutlaka Arteriolleri parenkimal için geçerli olmayabilir pial arterleri kullanarak deneylerde toplandı. Onların önemine rağmen, parankimal arteriol öncelikle izolasyon ve ex vivo çalışma için montaj teknik zorluklar altında incelenmiş, büyük ölçüde vardır. Bu yazıda izole ve basınç myography için kullanılabilir ya da immunolabeling, elektrofizyoloji, moleküler biyoloji, ve biyokimyasal analiz için doku izole etmek için olan serebral parenkimal arteriyollerin kanülasyonu için bir yöntem tarif eder.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><güçlü>Yapay Beyin Omurilik Sıvısı</güçlü></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S-640</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>MgCl Susuz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-8266</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>S233</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glukoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2870</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">İzolasyon/Kanülasyon</td></tr><tr><td>Stereo Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZX7</td><td></td></tr><tr><td>Süper İnce Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Yaylı Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Wiretrol 50 & mu; l</td><td>VWR Bilimsel</td><td>5-000-1050</td><td></td></tr><tr><td>0.2 & mu; m Steril Şırınga Filtresi</td><td>VWR Scientific</td><td>28145-477</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet Çektirme</td><td>Sutter Aletleri</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Borosilikat Cam OD: 1.2 mm, İç Çap: 0.68 mm</td><td>Sutter Instruments</td><td>B120-69-10</td><td></td></tr><tr><td>Koyu Yeşil Naylon İplik</td><td>Yaşam Sistemleri Enstrümantasyon</td><td>THR-G</td><td></td></tr><tr><td>Doğrusal Hizalama Tek Damar Hazneli</td><td>Yaşam Sistemleri Enstrümantasyon</td><td>CH-1-LIN</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik Pompalı Basınç Servo Kontrol</td> Cihazı <td>Yaşam Sistemleri Enstrümantasyon</td><td>PS-200</td><td></td></tr><tr><td>Video Boyut Analiz</td><td>Cihazı Canlı Sistemler Enstrümantasyon</td><td>VDA-10</td><td></td></tr><tr><td>LabScribe 3 Kayıt ve Analiz Yazılımlı Dört Kanallı Kaydedici</td><td>Canlı Sistemler Enstrümantasyon</td><td>DAQ-IWORX-404</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma Ünitesi</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0102</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-324B</td><td></td></tr></tbody></table>

İzolasyon ve serebral parankimal arteriollerin kanülasyonu

Isolation and Cannulation of Cerebral Parenchymal Arterioles

parankimal Arteriolleri, delici arteriol ve pre-kapiller Arteriolleri içeren Intraserebral parankimal arteriol (genelge), beyin parankimi içine pial arterler ve arteriol ve dalış dallanma yüksek direnç kan damarları vardır. Bireysel PA parankim ayrı bir silindirik bölge ve içinde bulunan nöronlar serpmek. Bu arteriyollerde yerel serebral kan akımı, hem küresel (serebrovasküler otoregülasyon) ve (fonksiyonel hiperemi) düzenlenmesinde merkezi bir oyuncu vardır. PA nörovasküler biriminde, beyin içinde metabolik aktivite bölgesel kan akımı ile eşleşen bir yapının parçası olan ve aynı zamanda nöronlar, internöronlardan ve astrositler içerir. Pleomorfik adenomun ile perfüzyon doğrudan yem PA genişlemesinden kaynaklanır yerel perfüzyon bir artışlarına söz konusu bölgede nöronlar ve nöronal metabolizma kurşun artışların aktivitesi ile bağlantılıdır. Pleomorfik düzenlenmesi daha iyi karakterize farklıdırpial arterler. Basınç kaynaklı vazokonstriksiyon PA olgularında daha büyüktür ve vazodilatör mekanizmaları değişir. Buna ek olarak, PA perivasküler sinirler dışsal innervasyon almıyorsunuz - innervasyon astrositik endfeet ile temas yoluyla içsel ve doğada dolaylı olduğunu. Böylece, pial arterleri kullanarak çalışmalarla biriken kontraktil düzenlenmesi ile ilgili verileri doğrudan PA işlevini anlamak için anlamına gelmez. Hipertansiyon ve diyabet gibi patolojik durumlar, PA yapısı ve reaktivite nasıl etkilediğini Ayrıca, belirsiz kalır. Bu bilgi boşluğu kısmen PA izolasyon ve kanülasyona ilişkin teknik zorluklar bir sonucudur. Bu yazıda izolasyon ve kemirgen PA olgularının kanülasyon için bir protokol mevcut. Dahası, agonist kaynaklı daralma içi ve kas reaktivitesi de dahil olmak üzere, bu arteriyoller ile yapılabilir deneylerin örnekleri göstermektedir. Bu yazının odak noktası PA kanülasyon ve basınç myography üzerinde olmasına rağmen, PA izoles da biyokimyasal biyofiziksel moleküler ve görüntüleme çalışmaları için kullanılabilir.

Şekil 5A hazırlık bütünlüğünü değerlendirmek için 60 mM KCI aCSF fare PA olgularının temsili daralmasını gösterir. 60 mM KCI mevcudiyetinde% 30 - PA 15 arasında büzülür gerekir. daralma% 15 altında ise, PA atmak ve arteriole izolasyon ve kanülasyon sırasında zarar gördüğünü anlaşılacağı gibi, başka bir cannulate. Şekil 5B, superfusing banyosuna tromboksan A 2 analog U 46619 (22:00 u...

Bu el yazması, basınç miyografisi, immünofloresan, biyokimya ve moleküler çalışmalarda kullanılmak üzere farelerden intraserebral arteriyollerin (parankimal arteriolleri, penetran arteriolleri ve pre-kılcal arteriolleri kapsayan bir grup kan damarı) izolasyonu için basit ve tekrarlanabilir bir protokolü açıklamaktadır.

İzolasyon ve Serebral Parankimal arteriollerin kanülasyonu

Intracerebral parenchymal arterioles (PAs), which include parenchymal arterioles, penetrating arterioles and pre-capillary arterioles, are high resistance ...

Bu prosedürün genel amacı, basınç miyografisi kullanarak vasküler fonksiyon ve yapı çalışmalarında kullanılmak üzere serebral arteriyolleri izole etmek ve monte etmektir. Bu yöntem, serebral mikrovaskülatürün intralüminal basınçtaki değişimlere, besin talebine veya patolojik koşullara nasıl hızla adapte olduğu gibi serebrovasküler alandaki temel soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, vasküler fonksiyonun önemli fizyolojik belirleyicileri olan intralüminal basınca ek olarak arteriyolün basınçlandırılmasına olanak tanımasıdır.Başlamak için, burada listelenenler gibi uygun ayarlara sahip bir mikropipet çekici kullanarak, kanüller oluşturmak amacıyla kapillerleri çekin. Bir kanülü miyograf odasının tutucusuna yerleştirip hizaladıktan sonra, bir diseksiyon mikroskobu altında, pens yardımıyla ucu burada gösterildiği gibi 10 micrometers gibi istenen çapa gelecek şekilde dikkatlice kırın. Her iki kanülü de 1.8 millimolar kalsiyum içeren beyin omurilik sıvısı veya aCSF ile doldurun ve odayı doldurmak için %1BSA ve 10 micromolar diltiazem ile desteklenmiş 5 ila 20 milliliters kalsiyumsuz aCSF kullanın.Kanülasyondan hemen öncesine kadar hazneyi dört derece Celsiu

isolation-and-cannulation-of-cerebral-parenchymal-arterioles

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kaynak: Rennert, R. C., et al. Serebral arteriyovenöz malformasyonların kapsamlı endovasküler ve açık cerrahi yönetimi.  J. Vis. Uzm. (2017).Bu video, bir insan beynindeki serebral arteriyovenöz malformasyonun (AVM) açık cerrahi rezeksiyonunu göstermektedir. Prosedür, bir kemik flebi oluşturmayı, subaraknoid boşluğa erişmeyi, besleyici arterleri tanımlamayı ve tıkamayı ve damarları boşaltmayı ve AVM'yi dikkatlice çıkarmayı içerir. İntraoperatif anjiyografi tam rezeksiyonu doğrular, ardından...

Serebral Arteriovenöz Malformasyonların Açık Cerrahi Rezeksiyonu

Bu videoda, endotel tüplerini fare serebral parankiminden izole etmek için bir yöntem gösterilmektedir. Enzimatik sindirim ve mekanik ayrışmanın bir kombinasyonu yoluyla, işlem endotel hücrelerine sahip sağlam bir tüp verir.

Fare Parankimal Arteriyollerinden Serebral Endotel Tüplerinin Hazırlanması

Kaynak: Larpthaveesarp, A., et. al. P10 Sıçanlarda Neonatal İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, bir sıçan yavrusunda Orta Serebral Arter Oklüzyonu modelinin kurulmasını göstermektedir. İç karotis arter (ICA) açığa çıkar ve kan akışını sınırlamak için bir bağ sabitlenir. Orta Serebral Artere ulaşmak için IKA'dan bir oklüd yerleştirilir. Daha sonra daha fazla analizden önce yavrunun iyileşmesine izin verilir.

Lokal beyin iskemisini indüklemek için bir sıçan yavrusunda orta serebral arter tıkanıklığı oluşturmak

Biz bir kemirgen büyük bir beyin damar daimi tıkanıklığı için son derece tekrarlanabilir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik çok az çevresel zarar, en az kan kaybı, uzun süreli sağkalım oranının yüksek ve insan klinik nüfusu ile orantılı tutarlı infarkt hacmi ile gerçekleştirilebilir.

Kalıcı Serebral Gemi Tıkanıklığı<em&gt; Ile</em&gt; Çift Ligature ve transeksiyonu

Ameliyat için erişilebilir arteriovenious malformasyon (AVMs) altın standarttır ve pre-operative embolizasyon bu yordamı basitleştirebilirsiniz. Biz bizim yaklaşım aşamalı Endovasküler embolizasyon ve AVMs açık rezeksiyon için açıklar ve multi-disipliner bir klinik takım lider kapsamlı bir şekilde eğitilmiş nörovasküler cerrahi avantajları vurgulayarak temsilcisi bir klinik örnek sağlar .

Kapsamlı Endovasküler ve serebral Arteriovenöz malformasyonlar açık cerrahi yönetimi

Bu yordamı genel amacı fare modelleri iskemik inme kan - beyin bariyerini bozulma vivo içinde değerlendirmesi için son derece tekrarlanabilir bir teknik sağlamaktır.

Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi

Bu el yazması arteriyoller elektrofizyolojik, kalsiyum görüntüleme ve baskı myography çalışmalarda kullanılan fare retina üzerinden yalıtım için basit bir protokol açıklar.

Retina arteriyoller yalıtım Ex Vivo Hücre fizyolojisi çalışmaları için

Burada gösterdi (1) taze olduğu gibi beyin endotel "boru" ve endotel kalsiyum ve membran endotel kaynaklı hyperpolarization sırasında potansiyel (2) eşzamanlı ölçümler sorunlarının yalıtılması iletişim kurallarıdır. Ayrıca, bu yöntemler farmakolojik endotel hücre kalsiyum ve bireysel veya etkileşimli deneysel değişkenler olarak elektrik sinyali ayarlamak için izin verir.

Hücre içi kalsiyum ve taze izole ve olduğu gibi fare serebral endotel membran potansiyeli eşzamanlı ölçümler

Mevcut el yazması, hipokampal arteriyol ve kılcal damarları fare beyninden nasıl izole edilebildiğini ve basınç miyografisi, immünoresans, biyokimya ve moleküler çalışmalar için nasıl basınçlandırılabildiğini ayrıntılarıyla anlatmaktadır.

Fonksiyonel Çalışma için Ex Vivo Basınçlı Hipokampal Kapiller-Parenkimal Arteriyol Hazırlığı

Serebral parankimal arteriollerden sağlam fare serebral endotelyal "tüplerinin" yoğun bir şekilde hazırlanması, serebral kan akışı regülasyonunu incelemek için gösterilmiştir. Ayrıca, bu endotel çalışma modelinin floresan görüntüleme ve anahtar hücresel sinyal yollarının elektrofizyoloji ölçümü için, hücre içi [Ca2+] ve membran potansiyelindeki değişiklikler de dahil olmak üzere deneysel güçlerini gösteriyoruz.

Fare Beyin Parankiminin Arteriyolar Endotelinin İzolasyonu ve Fonksiyonel Analizi

Bu protokol, araştırmacıların modifiye Longa eksternal karotis arter yöntemini kullanarak fareler üzerinde orta serebral arter oklüzyon prosedürünü gerçekleştirmeleri için adım adım bir kılavuz sunar. Bu makalede sunulan modifikasyonlar orta serebral arter oklüzyonunun doğruluğunu arttırmayı ve tam reperfüzyonu sağlamayı amaçlamaktadır.

Longa Orta Serebral Arter Oklüzyon Yönteminin Tam Reperfüzyon için Optimizasyonu

Öğrenin, farelerden serebral parankimal arteriyollerin izolasyonu ve kanülasyonu için basınç miyografisi kullanarak damar fonksiyonlarını incelemeyi. Bu yöntem, serebrovasküler hastalıkların araştırılmasında güvenilir bir protokol sunar.

İzolasyon ve Serebral Parankimal arteriollerin kanülasyonu

Daha fazla video keşfet