Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Burada tarlada bu tekniğin standardizasyonu teşvik etmek mortalite olmadan tekrarlanabilir yaralanma ile sonuçlanan farelerde bağırsak iskemi-reperfüzyon ayrıntılı prosedürü açıklar. Bağırsak iskemi-reperfüzyon hasarının Bu model yaralanma ve yenilenme hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.

Bu prosedürün genel amacı, superior mezenterik arterin periferik ve terminal kollateral dallarını geçici olarak tıkayarak mousedistalilium bölgesinde tekrarlanabilir İntestinal İskemi Reperfüzyonuna Bağlı Yaralanma gerçekleştirmektir. Bu yöntem, patella yaralanması ve rejenerasyonunun mekanizmasının anlaşılması gibi gastroenteroloji ve immünoloji alanındaki temel bir yöntemin anlaşılmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin avantajı, bir laboratuvarda eğitimli herhangi bir kişi tarafından yapılabilmesidir.

Diğer bir avantaj, prosedürün kendisinin farelerde ölüme neden olmamasıdır. Ameliyat bölgesini metin protokolünde belirtildiği gibi hazırlayın. Ardından, üç ila beş orta çizgi santimetre laparotomi yapmak için cerrahi makas kullanın.

Daha sonra cerrahi alanı tuzlu su ile nemlendirilmiş steril, yapışmayan bir ped ile örtün. Çekum ve ilium'u izole edin ve üstün mezenterik arteri ortaya çıkarmak için tuzlu suyla nemlendirilmiş pamuklu çubuklar kullanın. Daha sonra, klips uygulamasını kolaylaştırmak için, bağırsağı nazikçe kaldırmak için germe forsepsleri kullanın ve istenen kırpılmış pozisyonda superior mezenterik arterin her iki tarafındaki mezentary'yi kesmek için iris makası bulun.

Bağırsağı yükseltilmiş pozisyonda tutarak, yüksek kaliteli 70 G-Force mikrovasküler damar klipsinin çenelerini açmak için diğer elinizle bir klips uygulayıcıyı hafifçe sıkın. Ardından klipsi kabın üzerine yerleştirin ve çeneleri yavaşça serbest bırakarak damarı tıkayın. Üst mezenterik arterin birinci dereceden dallarının tıkanmasıyla çekuma bitişik iskemik iliumun beş ila yedi santimetrelik bir bölgesi oluşturulana kadar aynı şekilde bir ila iki mikrovasküler klips daha yerleştirin.

Şimdi kollateral kan akışını engellemek ve iskemik bağırsak bölgesini belirtmek için bağırsağa iki adet 40 G-Force mikrovasküler klips yerleştirin. Tüm klipsler yerine oturduğunda, cerrahi bölgeye 37 santigrat derece tuzlu su ile nemlendirilmiş steril ve hassas bir mendil uygulayın ve yakın izleme ile iskemiyi 60 dakika boyunca koruyun. İskemi prosedürü doğru bir şekilde uygulandıysa, bölge yaklaşık 30 dakika içinde şarap kırmızısı rengine dönecek ve klips pozisyonunun distalindeki kan damarları genişleyecek ve bu da başarılı bir oklüzyonu gösterecektir.

İskeminin sonunda, iskemik ve bitişik sağlıklı dokuların toplanmasını kolaylaştırmak için iskemik alanın kenarlarını on mikro litre Gill's Hematoxylin ile işaretleyin. İskeminin sonunda, klips alanına birkaç damla salin ekleyin ve mikrovasküler klipsleri bir klips uygulayıcı ile nazikçe çıkarın. Ardından, tuzlu suyla nemlendirilmiş pamuklu uçlar kullanarak bağırsağı nazikçe karın boşluğuna geri itin.

Yapışmayan pedi çıkarın ve dokuz milimetre paslanmaz çelik yara klipsi kullanarak karın duvarını ve cildi kapatın. Hayvanları istenen reperfüzyon süresi boyunca ısıtılmış, temiz bir kafeste tutun ve stabilitelerini doğrulamak için fareleri her 30 dakikada bir kontrol edin. Reperfüzyonun sonunda, fareyi ötenazi yapın, karın boşluğunu açın ve iskemik ve bitişik sağlıklı normal dokuları toplayın.

Daha sonra, bağırsak içeriğini yıkamak için tuzlu su ile doldurulmuş bir gavaj iğnesi ile donatılmış 30 mililitrelik bir şırınga kullanın ve ardından bağırsakları uzunlamasına kesin. Gen ekspresif analizi için bir bağırsak örneği gerekiyorsa, bir nokta beş ila iki milimetre uzunlamasına bir parça ayırın. Histolojik analiz için, bağırsağı bir İsviçre rulosuna yuvarlamak için bir çift forseps kullanın ve yoğun parçaları biyopsi köpük pedleri arasına kasete yerleştirin.

Son olarak, iskemik ve sağlıklı bağırsak dokularını sabitlemek için kasetleri yüzde on tamponlu formalin içine yerleştirin. Burada, bir saatlik iskemi ve bir saatlik reperfüzyon sonrası iliumun iskemik bölgeleri ve kontrolden hazırlanan İsviçre rulolarını içeren temsili bir doku kaseti gösterilmektedir. Kontrol ve iskemik dokular arasındaki renk farkına dikkat edin.

İşleme ve boyama sırasında kontrol ve iskemi reperfüzyon bağırsağının konumlandırılmasını kolaylaştırmak için bir dalak parçası da dahil edildi. Bu görüntülerde, kontrolün temsili hematoksilen ve eozin boyaması ve bir saatlik iskemi sonrası iliumun iskemik bölgeleri veya bir saatlik iskemi ve ardından iki saatlik reperfüzyon gösterilmiştir. Hemorajik VILI, kripslerin kısmi ila tam ablasyonu ile epitel denüdementi ve bağışıklık hücresi infiltrasyonu ile karakterize edilen bir saatlik iskemi sonrasında gözlenen epitelin ciddi hasarına dikkat edin.

İki saatlik bir reperfüzyondan sonra VILI hasarı ve iltihaplanma devam eder, ancak doku kanaması olmaz. İskemik ve kontrol bağırsaklarında iskemi reperfüzyonundan bir ve iki saat sonra inflamatuar sinika ekspresyonunun analizi, TNF alfa, IL bir beta, IL altı sideasinin yanı sıra kontrol sağlıklı dokusuna kıyasla her iki iskemi reperfüzyon koşulu altında Cxcl iki kemokin mRNA ekspresyonunda bir artış olduğunu göstermektedir. Bu tekniğe hakim olduktan sonra, düzgün bir şekilde gerçekleştirilmesi için üç buçuk saatte tamamlanabilir.

Bu videoyu izledikten sonra, tekrarlanabilir İntestinal İskemi Reperfüzyon Hasarının nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.