Name: Normal Farelerde% 70 hepatektomi sonrası Vasküler ve Parankimal Rejenerasyon görselleştirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 10 s
Description: Öğrenin, farelerde %70 parsiyel hepatektomi sonrası damar ve parankimal rejenerasyonu görselleştirmek için MikroCT taraması, 3D rekonstrüksiyon ve kantitatif analiz yöntemlerini kullanarak vasküler büyümeyi nicelendirmeyi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Alman Eğitim ve Araştırma Bakanlığı (BMBF) tarafından sistem biyolojisi ağı "Virtual Liver" aracılığıyla fon sağlandığını, 0315743 (ExMI), 0315765 (UK Jena), 0315769 (MEVIS) hibe numaralarını kabul ediyor. Yazarlar ayrıca teknik destek için Frank Schubert'e teşekkür eder.

Hayvan denekleri Prosedürleri Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz Abteilung Tiergesundheit und Tierschutz, Almanya tarafından onaylanmıştır. Portal venöz sistem hepatik venöz sistemden ayrı olarak görüntülendi Çünkü, ayrı hayvanlar farklı vasküler ağaçlar için ihtiyaç vardı. 1. Reaktifler Hazırlık <ol><li> Heparin-tuzlu su çözeltisi <ol><li> 10 mi tuzlu su (5 U / ml) içine 0.1 ml heparin ekleyin. </li></ol></li><li> Silikon bileşik karışımı <ol><li> Bir 5 ml tüp içinde 2 mi MV-120 ekleyin. % 40 çözelti elde 3 mi OG seyreltici eklenerek PD-120 seyreltilir. </li></ol></li></ol> 2. Portal Venöz Sistem Silikon Enjeksiyon <ol><li> laparotomi <ol><li> Anestezi indüksiyon odasında fare yerleştirin ve% 2 izofluran ve 0.3 L / dk oksijen ile uyuşturan. </li><li> % 2 sürekli solunması ile bant kullanarak ameliyat masasında anestezi fare Fixoflurane ve 0.3 L / dk oksijen. fare ayak-tutam çekilme refleksi kontrol edin ve refleks devamsızlık ise çalışmaya başlayacaktır. </li><li> deri tabakasının ve kas tabakası için elektrikli pıhtılaştırıcı için makas kullanarak karın üzerinde enine bir kesi yapmak. Pamuk ipuçlarını kullanarak sol tarafına bağırsakları dışarı taşımak ve tuzlu batırılmış gazlı bez ile bağırsakları kapsamaktadır. </li></ol></li><li> kateter ekleme <ol><li> Mikro forseps kullanarak mikroskop altında portal ven incelemek. onun çatallanma yaklaşık 1 mm mesafeden, ekstrahepatik portal ven altına bir 6-0 ipek dikiş yerleştirin ve daha sonra kullanılmak üzere gevşek kravat. </li><li> 5 dakika boyunca sistemik heparin için penil ven (erkek) üzerinden hazırlanmış heparin tuzlu su çözeltisi ya da (kadın) inferior vena kava enjekte edilir. </li><li> portal ven içine 26-gauge iğne ile (26 G) kateter takın ve bir kelepçe ile sabitleyin </li></ol></li><li> Heparin-tuzlu su çözeltisi ve silikon bileşik perfüzyon <ol><li> Yük heparin tuz Sol5 ml şırınga içinde Katkı ve perfüzyon aygıtı açın. Hava kabarcıklarını önlemek için heparin tuz çözeltisi ile tam kateter doldurun. </li><li> katetere uzatma borusunu bağlayın ve sıkıca sabitleyin. / Dakika 0.4 ml&#39;lik bir perfüzyon oranı ile heparin tuz perfüzyon başlatın. </li><li> çift ​​kateter sabitleme ve dalak ven ve mezenterik ven kan akışını bloke etmek için ligate önceden yerleştirilmiş 6-0 ipek sütür. anestezi altında perfüzyon yoluyla, kanları tümüyle alınarak fare Euthanatize. </li><li> nemli tutmak için tüm perfüzyon işlemi sırasında tuz kullanarak karaciğer durulayın. </li><li> PD-120 tüpüne sertleştirme maddesi 0.1 ml ilave edilir. Silikon şırıngaya heparin tuzlu şırınga değiştirin. </li><li> Kateter sistemi önceden doldurmak için ve portal damar sisteminin doldurmak için yaklaşık olarak 1 dakika boyunca 0.2 ml / dk&#39;lık bir perfüzyon oranında silikon perfüzyon başlatın. yüzeyde damarlar mavi açtığınızda silikon perfüzyon durdurun. </li></ol></li><li> Örnekleme <ol><li> In-situ unt karaciğer tutmakIL silikon tamamen sonra yaklaşık 15 ila 30 dakika polimerize edilir. sağlam karaciğer tutmak için dikkatle karaciğer ve bitişik organlara bağlayan bağlar teşrih. karaciğer Eksplantasyona ve sabitleme için formalin koydu. </li></ol></li></ol> 3. Karaciğer Venöz Sistem Silikon Enjeksiyon <ol><li> Adım 2.1 gerçekleştirilen şekilde laparotomi gerçekleştirin ve tam ameliyat alanını maruz kalmaktadır. </li><li> kateter ekleme <ol><li> Mikro forseps kullanarak mikroskop altında portal ven incelemek. onun çatallanma yaklaşık 1 mm mesafeden, ekstrahepatik portal ven altına bir 6-0 ipek dikiş yerleştirin ve daha sonra kullanılmak üzere gevşek kravat. </li><li> 5 dakika boyunca sistemik heparin için penil ven (erkek) üzerinden hazırlanmış heparin tuzlu su çözeltisi ya da (kadın) inferior vena kava enjekte edilir. </li><li> portal ven içine iğne ile bir 26 G kateter (sonda 1) takın ve bir kelepçe ile sabitleyin. inferior vena kava içine iğne ile başka bir 26 G kateter (sonda 2) takın ve bir kelepçe ile sabitleyin. </li><li> 6-0 sentetik, monofilament, emilmeyen polipropilen sütür kullanılarak (sol ve sağ renal venlerin dahil) inferior vena kava ve distal ucunun dalları bağlayan. </li></ol></li><li> Heparin-tuzlu su çözeltisi ve silikon bileşik perfüzyon <ol><li> 5 ml şırınga içinde heparin tuzlu su çözeltisi yükleyin ve perfüzyon aygıtı açın. Hava kabarcıklarını önlemek için heparin tuz çözeltisi ile tam olarak kateter 1 doldurun. kateter 1&#39;e uzatma borusunu bağlayın ve sıkıca sabitleyin. / Dakika 0.4 ml&#39;lik bir oranda heparin tuz perfüzyon başlatın. </li><li> çift ​​kateter sabitleme ve dalak ven ve mezenterik ven kan akışını bloke etmek için ligate önceden yerleştirilmiş 6-0 ipek sütür. anestezi altında perfüzyon yoluyla, kanları tümüyle alınarak fare Euthanatize. </li><li> nemli tutmak için tüm perfüzyon işlemi sırasında tuz kullanarak karaciğer durulayın. PD-120 tüpüne sertleştirme maddesi 0.1 ml ilave edilir. Değişim heparin tuzlu silikon şırınga ile şırınga. </li><li> suprahepat bir kelepçe yerleştirinic inferior vena kava karaciğerin çıkışı engellemek için. </li><li> 2 kateter ve rapor edildiği gibi objektif hepatik vasküler hacme ulaşmak için yaklaşık 2 dakika boyunca 0.2 ml / dk&#39;lık bir perfüzyon oranında silikon perfüzyon başlatmak için uzatma borusu bağlayın. yüzeyde damarlar mavi açtığınızda silikon perfüzyon durdurun. </li></ol></li><li> Örnekleme <ol><li> karaciğere herhangi bir yaralanma kaçınarak karaciğer ligament teşrih. karaciğer Eksplantasyona ve sabitleme için formalin koydu. </li></ol></li></ol> 4. Mikro-BT (uCT) Tarama uCT kullanarak Eksplante karaciğer örneği taramak için, aşağıdaki adımlar gereklidir. <ol><li> sabitleme çözeltisi dışarı karaciğer örnek almak. uCT yatağa karaciğer yerleştirin. uCT içine karaciğer örneği ile uCT yatak koymak. </li><li> Taramaya başlamadan önce Topogram kazanır. Küçük karaciğer örnek için bir subscan ve büyük numune için iki subscans kullanın. </li><li> seçin81; yüksek çözünürlüklü BT protokolü (örneğin, HQD-6565-390-90). Bu protokol alt tarama başına 90 sn tarama süresi ile bir tam dönüşü sırasında 1032 x 1012 piksel 720 projeksiyonları kazanır. uCT taramayı başlatın. </li></ol> 5. Histolojik Seri Bölümler <ol><li> uCT taramadan sonra bir bütün olarak parafin karaciğer örneği gömün. 2.000 ila 2.500 bir seri bölüme sonuçlanan 4μm bölüme bütün parafin örnek kesin. </li><li> Uygun boyama tekniği ile leke bölümleri gibi iskemik hasarın belirteci olarak proliferasyon markeri ve HMGB1 olarak Ki-67 gibi ilgi moleküler olayları görselleştirmek için. bilimsel soruya bakımından boyama sırasını belirleyin. </li><li> lekeli bölümleri dijitalleşmeye için bütün slayt tarayıcı kullanın. </li><li> (Zaten mümkün) damar ağacı (ler) 3D-rekonstrüksiyon gerçekleştirin ve damar ağacı (devam araştırma) göre moleküler olayların 3D-dağılımını görselleştirmek. </li></ol>

<ol><li>Bearden, S. E., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+alignment+in+adult+mouse+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Neurovascular alignment in adult mouse skeletal muscles.</a> Microcirculation. 12 (2), 161-167 (2005).</li>
<li>Brown, R. P., Delp, M. D., Lindstedt, S. L., Rhomberg, L. R., Beliles, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+parameter+values+for+physiologically+based+pharmacokinetic+models%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.Ind.Health%22%5BJournal%5D)">Physiological parameter values for physiologically based pharmacokinetic models.</a> Toxicol.Ind.Health. 13 (4), 407-484 (1997).</li>
<li>Dai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-Induced+Intracranial+Dolichoectasia+Model+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Elastase-Induced Intracranial Dolichoectasia Model in Mice.</a> Neurosurgery. , (2015).</li>
<li>Ding, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inductive+angiocrine+signals+from+sinusoidal+endothelium+are+required+for+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inductive angiocrine signals from sinusoidal endothelium are required for liver regeneration.</a> Nature. 468 (7321), 310-315 (2010).</li>
<li>Downey, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+ex-vivo+micro-computed+tomographic+imaging+of+blood+vessels+and+necrotic+regions+within+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.One%22%5BJournal%5D)">Quantitative ex-vivo micro-computed tomographic imaging of blood vessels and necrotic regions within tumors.</a> PLoS.One. 7 (7), 41685(2012).</li>
<li>Ehling, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL2-dependent+infiltrating+macrophages+promote+angiogenesis+in+progressive+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">CCL2-dependent infiltrating macrophages promote angiogenesis in progressive liver fibrosis.</a> Gut. , (2014).</li>
<li>Ehling, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+imaging+of+tumor+angiogenesis%3A+quantitative+measures+describing+micromorphology+and+vascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Pathol%22%5BJournal%5D)">Micro-CT imaging of tumor angiogenesis: quantitative measures describing micromorphology and vascularization.</a> Am.J.Pathol. 184 (2), 431-441 (2014).</li>
<li>Ghanavati, S., Yu, L. X., Lerch, J. P., Sled, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perfusion+procedure+for+imaging+of+the+mouse+cerebral+vasculature+by+X-ray+micro-CT%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci.Methods%22%5BJournal%5D)">A perfusion procedure for imaging of the mouse cerebral vasculature by X-ray micro-CT.</a> J.Neurosci.Methods. 221, 70-77 (2014).</li>
<li>Gremse, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+microCT-FMT+imaging+and+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.Vis.Exp%22%5BJournal%5D)">Hybrid microCT-FMT imaging and image analysis.</a> J.Vis.Exp. (100), (2015).</li>
<li>Jing, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiomorphometric+quantitative+analysis+of+vasculature+utilizing+micro-computed+tomography+and+vessel+perfusion+in+the+murine+mandible%5BTitle%5D)+AND+%22Craniomaxillofac.Trauma+Reconstr%22%5BJournal%5D)">Radiomorphometric quantitative analysis of vasculature utilizing micro-computed tomography and vessel perfusion in the murine mandible.</a> Craniomaxillofac.Trauma Reconstr. 5 (4), 223-230 (2012).</li>
<li>Melloul, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+magnetic+resonance+imaging%3A+an+efficient+tool+to+assess+liver+volume+and+intrahepatic+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J.Surg.Res%22%5BJournal%5D)">Small animal magnetic resonance imaging: an efficient tool to assess liver volume and intrahepatic vascular anatomy.</a> J.Surg.Res. 187 (2), 458-465 (2014).</li>
<li>Schwier, M., Bohler, T., Hahn, H. K., Dahmen, U., Dirsch, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Registration+of+histological+whole+slide+images+guided+by+vessel+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.Pathol.Inform%22%5BJournal%5D)">Registration of histological whole slide images guided by vessel structures.</a> J.Pathol.Inform. 4 ((Suppl)), 10(2013).</li>
<li>Selle, D., Preim, B., Schenk, A., Peitgen, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+vasculature+for+liver+surgical+planning%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans.Med.Imaging%22%5BJournal%5D)">Analysis of vasculature for liver surgical planning.</a> IEEE Trans.Med.Imaging. 21 (11), 1344-1357 (2002).</li>
<li>Shergill, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+of+VEGF-+and+NO-dependent+angiogenesis+does+not+impair+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Physiol+Regul.Integr.Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of of VEGF- and NO-dependent angiogenesis does not impair liver regeneration.</a> Am.J.Physiol Regul.Integr.Comp Physiol. 298 (5), 1279-1287 (2010).</li>
<li>Sueyoshi, R., Ralls, M. W., Teitelbaum, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucagon-like+peptide+2+increases+efficacy+of+distraction+enterogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.Surg.Res%22%5BJournal%5D)">Glucagon-like peptide 2 increases efficacy of distraction enterogenesis.</a> J.Surg.Res. 184 (1), 365-373 (2013).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+and+imaging+techniques+to+study+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.Surg.Res%22%5BJournal%5D)">Rodent models and imaging techniques to study liver regeneration.</a> Eur.Surg.Res. 54 (3-4), 97-113 (2015).</li>
<li>Xie, C., Wei, W., Zhang, T., Dirsch, O., Dahmen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+systemic+and+hepatic+hemodynamic+parameters+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.Vis.Exp%22%5BJournal%5D)">Monitoring of systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice.</a> J.Vis.Exp. (92), e51955(2014).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Silikon enjeksiyonu ve uCT tarayarak vasküler ağaç zıt anjiyojenik ilerlemesini 5,7,8,10 incelemek için sık sık tümör modellerinde ve nörolojik hastalık modellerinde girmiştir. silikon enjeksiyon metodolojisi gelişmeler görselleştirilmesi ve farelerde hepatektomiden sonra damar büyümesi miktarının belirlenmesi için, bu çalışma yapıldı. İyi perfüzyon kalitesi elde etmek için dikkat gerektiren kritik adımlar vardır. Her şeyden önce, sistemik heparinizasyon yüksek karaciğer içinde ka...

Karaciğer yenilenmesi sıkça, karaciğer ağırlık ve hacim artışı ölçerek hepatosit çoğalma hızı 16 değerlendirilerek belirlenir. Ancak, karaciğer rejenerasyonu parankimal rejenerasyonu değil, aynı zamanda vasküler yenilenmesi 6 indükleyici tesis edilir. Bu nedenle, vasküler büyüme daha da karaciğer rejenerasyonu ilerlemesinde rolü açısından araştırılmalıdır. hepatik vasküler sistemin görselleştirme vasküler rejenerasyon anlayışımızı ilerleyen için kritik öneme sahiptir. Çok sayıda dolaylı yöntemler hepatik vasküler rejenerasyon altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için geliştirilmiştir. Geleneksel olarak, sitokin tespiti (VEGF vasküler endotel büyüme faktörü) 14, kemokinler ve bunların reseptörleri (CXCR4 / CXCR7 / CXCL12) 4 vasküler rejenerasyon çalışmak için dayanak noktası olmuştur. Ancak, damarsal kantitatif analizi ile birlikte bir 3D modeli kritik anatomik eklersinizbilgi hepatik parankimal ve vasküler rejenerasyon arasında önemli bir ilişki daha iyi anlamak için. Vasküler ağaçları zıt gerektirir hepatik vasküler sistemi, görselleştirmek için, fareler doğrudan portal veya hepatik venöz damar ağaca radyoopak silikon kauçuk kontrast madde enjekte edildi. Silikon ve organ eksplantasyonunun Polimerizasyondan sonra karaciğer örnekleri BT tarayıcısı kullanarak uCT tarama tabi tutuldu. taramalar voksel görüntü temsilleri sonuçlandı silikon enjeksiyon 9 numune. kalite kontrolü için, damar sistemi ilk olarak klinik öncesi yazılımı kullanarak 3D görüntülendi. Bölümleme yumuşak doku yoğunluğu ve kap yoğunluğu arasında bir eşik ayarı yapıldı. Ortaya çıkan damar maskesi yüzey render kullanılarak görüntülendi. Yazılım, aynı zamanda vascul iki parametre el belirlenmesi için izinar büyüme: maksimal damar uzunluğu ve yarıçapı. Bir preklinik yazılım sonra 3D vasküler ağaçların yeniden yapılanma ve tedarik veya drenaj damar toprakları 13 sonraki hesaplanması için kullanılmıştır. Buna ek olarak, bu yazılım otomatik olarak bu zamanda toplam kenar uzunluğu veya toplam sıvı hacmi olarak bilinen tüm görünür vasküler yapıların toplam uzunluğunun damar büyüme belirli parametreleri belirlenmiştir. Silikon perfüzyon işlemi naif farelerde ve% 70 hepatektomiden (PH) uygulanan farelerde gerçekleştirilmiştir. Karaciğerleri Anılan görselleştirme ve miktar tekniği kullanılarak damar ve parankimal karaciğer rejenerasyonu analiz etmek için rezeksiyonu sonrası farklı gözlem zaman noktalarında toplandı. (1) optimum kontrast ve (2) potansiyel yarar elde edilen fr göstermek elde etmek için gerekli hassas enjeksiyon tekniği göstermek: Bu filmin ana hedefleri şunlardıruCT ve histolojik seri bölümleri kullanarak elde edilen numunenin om detaylı bir analiz. Bu filmi izledikten sonra, okuyucu belirli bir damar sistemi içine ve tekniğin yararlılığı ve uygulanabilirliği silikon bileşiği enjekte etmek için nasıl daha iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.

<table><tbody><tr><td>PERFUSOR&REG; VI</td><td>B.BRAUN</td><td>87 222/0</td><td></td></tr><tr><td>Pipetus&reg;-akku</td><td>Hirschmann</td><td>9907200</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler</td><td>Greiner</td><td>606180</td><td></td></tr><tr><td>mikro makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (F&middot; S&middot; L)</td> <td>No. 14058-09</td><td></td></tr><tr><td>mikro serrefine</td><td>Güzel Bilim Araçları (F & middot; S&middot; L)</td> <td>No.18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Mikro kelepçeler aplikatör</td><td>Güzel Bilim Araçları (F & middot; S&middot; L)</td> <td>No. 18057-14</td><td></td></tr><tr><td>Düz mikro forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları (F & middot; S&middot; L)</td> <td>No. 00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli mikro forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları (F & middot; S&middot; L)</td> <td>No. 00649-11</td><td></td></tr><tr><td>iğne tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları (F & middot; S&middot; L)</td> <td>No. 12061-01</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td>B.Braun</td><td>9161406V</td><td></td></tr><tr><td>5 ml şırınga</td><td>B.Braun</td><td>4606051V</td><td></td></tr><tr><td>uzatma ve bağlantı hatları</td><td>B.Braun</td><td>4256000</td><td>30 cm, iç & oyulma; 1,2 mm</td></tr><tr><td>6-0 ipek (Perma-El Seide)</td><td>Ethicon</td><td>639H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 prolene</td><td>Ethicon</td><td>8711H</td><td></td></tr><tr><td>Mikrofil&reg; OG seyreltici</td><td>AKIŞ TEKNOLOJİSİ, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfil&reg; MV - 120</td><td>FLOW TECH, INC</td><td>MV - 120 (mavi)</td><td></td></tr> <tr><td>MV kürleme maddesi</td><td>FLOW TECH, INC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparin 2500 IE/5 ml</td><td>Rotexmedica</td><td>ETI3L318-15</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Fresenius Kabi Deutschland GmbH</td><td>E15117/D DE</td><td></td></tr><tr><td>Imalytics Preklinik yazılım</td><td>Deneysel Moleküler Görüntüleme, RWTH Aachen Üniversitesi, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HepaVision</td><td>Fraunhofer MEVIS, Bremen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoZoomer 2.0-HT&nbsp; Dijital slayt tarayıcı</td><td>Hamamatsu Electronic Press, Japonya&nbsp;</td><td>C9600</td><td></td></tr><tr><td>Tomoskop İkilisi CT&nbsp;</td><td>CT Imaging GmbH, Erlangen, Almanya</td><td>TomoScope&reg; &nbsp; Sinerji</td><td></td></tr></tbody></table>

normal farelerde% 70 hepatektomi sonrası vasküler ve parankimal rejenerasyon görselleştirme

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

Bir modifiye silikon enjeksiyon prosedürü hepatik vasküler ağacın görüntülenmesi için kullanıldı. Bu prosedür, portal veya hepatik ven içine, bir 26 G kateter vasıtasıyla, bir silikon bileşiği, in vivo olarak enjekte oluşuyordu. Silikon enjeksiyonundan sonra, organlar eksplante ve ex-vivo mikro-BT (uCT) Tarama için hazırladı. silikon enjeksiyon işlemi teknik olarak zordur. Başarılı bir sonuç elde cerrah kapsamlı mikrocerrahi tecrübe gerektirir. Bu prosedürün zorluklardan biri silikon bileşiği için yeterli perfüzyon oranının belirlenmesini içerir. Silikon bileşiği için perfüzyon oranı ilgi damar sisteminin hemodinamik göre tarif edilmesi gerekmektedir. Uygunsuz perfüzyon oranı vasküler ağaçların tamamlanmamış bir perfüzyon, yapay dilatasyon ve kopması yol açabilir. vasküler sistem 3D rekonstrüksiyon BT&#39;de dayanıyordu ve kullanılarak elde edilmiştirBöyle HepaVision olarak klinik öncesi yazılımı. yeniden vasküler ağacın kalitesini doğrudan silikon perfüzyon kalitesi ile ilgilidir. Bu, toplam damar hacminin vasküler büyüme göstergesi sonra hesaplanan vasküler parametreler, vasküler rekonstrüksiyonlar göre hesaplanmıştır. uCT taramadan sonra numunenin sonraki histolojik çalışma-up için izin verilen silikon ile damar ağacı Zıt. numune seri kesit, histolojik analiz ve tüm slayt tarama tabi, ve bundan sonra histolojik görüntüleri dayalı damar ağaçların 3D rekonstrüksiyon için yapılabilir. Bu moleküler olayların saptanması ve damar ağacı ile ilgili olarak kendi dağıtım için ön koşuldur. Bu modifiye silikon enjeksiyon prosedürü de görselleştirmek ve diğer organlarda damar sistemlerini yeniden kullanılabilir. Bu teknik potansiyeli kapsamlı çeşitli hayvan a vasküler anatomi ve büyümeyi ilişkin çalışmalara uygulanmalıdırnd hastalık modelleri.

kalite Kriterleri silikon enjeksiyon kalitesi işlemi sırasında çıplak gözle yargılanabilir. Karaciğer yüzeyinde küçük damarlar mavi bileşik ile yavaş yavaş doldurun. normal vasküler yapı karaciğer yüzeyinde gözlenmiştir ise, silikon kauçuk enjeksiyon kalitesi iyi. perfüzyon hacmi yetersiz olsaydı, karaciğer yüzeyinde küçük damarlar tamamen dolu değildi. organın yüzeyinde düzensiz mavi lekeler belirtildiği gibi...

Vasküler rejenerasyonu görselleştirmek için kullanılan aletler, vasküler ağaçları kontrastlamak için yöntemler gerektirir. Bu film, vasküler ağaçların optimal kontrastını elde etmek için kullanılan hassas bir enjeksiyon tekniğini gösterdi ve elde edilen örneğin μCT ve histolojik seri kesitler kullanılarak ayrıntılı bir analizinden kaynaklanan potansiyel faydaları gösterdi.

Normal Farelerde% 70 hepatektomi sonrası Vasküler ve Parankimal Rejenerasyon görselleştirme

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Normal farelerde %70 parsiyel hepatektomi sonrası vasküler ve parenkimal rejenerasyonun görüntülenmesi. Geleneksel olarak karaciğer rejenerasyonu, karaciğer ağırlığındaki ve hacmindeki artışın ölçülmesinin yanı sıra hepatosit proliferasyon hızının belirlenmesiyle değerlendirilir. Günümüzde, farelerde vasküler karaciğer rejenerasyonu ile ilgilenmekteyiz ve vasküler büyümeyi görüntülemek ve nicelleştirmek istiyoruz.Böylece, vasküler rejenerasyonun görüntülenmesi için iş akışını belirliyoruz. İş akışı dört adımdan oluşmaktadır: vasküler ağacın kontrastlanması, BT taramalarının alınması, 3D-rekonstrüksiyon ve elde edilen görüntülerin kantitatif ve kalitatif analizi. İş akışı, vasküler ağacın kontrastlanmasıyla başlar.İlk olarak, normal veya rezeke edilmiş olan karaciğer açığa çıkarılır, ardından ilgi duyulan vasküler sisteme bağlı olarak polimerize silikon kontrast bileşiği ya portal vene ya da hepatik vene enjekte edilir. Sonrasında, eksize edilen karaciğerler MicroCT ile taramaya tabi tutulur. Tarama işleminden sonra, Imalytics preklinik yazılımı kullanılarak 3 boyutlu vasküler rekonstrüksiyon gerçekleştirilir.Elde edilen görüntülerin teknik kalitesi yeterince iyiyse, HepaVision kullanılarak 3D rekonstrüksiyon gerçekleştirilebilir. Bu program, hepatobiliyer cerrahi planlaması için kliniklerde kullanılmaktadır. Bu program, vasküler ağacın 3D görselleştirmesinin yanı sıra, besleyici ve drenaj damarlarına dayanarak toplam karaciğer hacminin ve her bir lobun hacminin görselleştirilmesine ve hesaplanmasına olanak tanır.Rekonstrüksiyon sonrası, hesaplama teknikleri yardımıyla belirli bir damarın uzunluğu ve çapı gibi vasküler büyümeye işaret eden ek parametreleri belirleyebiliriz. Bu, vasküler büyümenin kantitatif bir tanımına olanak sağlayacaktır. Öte yandan, formaline sabitlenmiş Microfil örnekleri seri kesitler halinde kesilebilir.Seri kesitler boyanabilir ve bir tüm slayt tarayıcı kullanılarak dijitalleştirilebilir. Seri kesitlerin rijit ve elastik rejistrasyonunun ardından, hem portal venöz hem de hepatik venöz sistemlerin 3B vasküler ağaçları yeniden oluşturulabilir. Gelecekteki bir adımda, moleküler olayların uzaysal dağılımını incelemek istiyoruz.Karaciğer rejenerasyonunda ilgi çeken moleküler olaylara bir örnek, hepatosit çekirdeklerinde proliferasyon belirteci Ki-67'nin ortaya çıkışı ve 3B olarak yeniden yapılandırılmış vasküler ağaçlardaki uzamsal dağılımıdır. Bundan sonra, Microfil enjeksiyonunun nasıl gerçekleştirileceğine dair ayrıntılı bir giriş yapacağız. Reaktiflerin hazırlanması.Microfil bileşik karışımı için MV dilüent, MV bileşiği (bizim durumumuzda mavi MV-120) ve kürleme ajanına ihtiyacımız vardır. Ayrıca pipetlere, tüpe ve bir pipetöre ihtiyacımız olacaktır. Beş mililitrelik bir tüp içerisinde iki mililitre MV-120 hazırlayın.Ardından, üç mililitre MV dilüent ekleyerek seyreltin. Nazikçe çalkalayarak karıştırın. Heparinli salin çözeltisi için, 10 mililitre saline 1 mililitre heparin ekleyin.Operasyon masasının hazırlanması. İlk olarak bir mikroskoba, ikinci olarak ise bir dizi sarf malzemesine ihtiyaç vardır. 6-0 ipek ve 6-0 polipropilen süturlar, beş mililitrelik ve bir mililitrelik şırıngalar, 30 gauge ve 21 gauge iğneler, şırınga ile kateteri bağlamak için uzatma tüpü, iğne girişli 26 gauge kateter, pamuklu çubuklar ve gazlı bez.Üçüncü olarak, cerrahi aletlere ihtiyaç vardır. Mikro aletler, klemp ve elektrikli koagülatör. Dördüncü olarak, bir perfüzyon pompası gereklidir.Hayvanın hazırlanması. Fareyi anestezi indüksiyon kamarasına yerleştirin ve fareyi %2 isoflurane ve dakikada 0.3 mililitre oksijen ile anesteziye alın. Anestezize edilmiş fareyi, %2 isoflurane ve dakikada 0.3 mililitre oksijen inhalasyonuna devam ederek bantlar yardımıyla ameliyat masasına sabitleyin.Microfil enjeksiyonu, portal venöz sistem. Deri tabakası için makas, kas tabakası için ise elektrikli koagülatör kullanarak abdomen üzerinde transvers bir insizyon yapın. Pamuklu çubuklar yardımıyla bağırsakları sol tarafa çekin ve bağırsakların üzerini salinle ıslatılmış gazlı bezle örtün.Portal ven mikroskop altında diseke edilir. Ekstrahepatik portal venin bifurkasyonuna yaklaşık bir milimetre mesafede, damarın altına 6-0 ipek sütur yerleştirilir. Daha sonra kullanılmak üzere gevşekçe bağlanır.Sistemik heparinizasyon için heparinli salin çözeltisini beş dakika boyunca bir penis veninden enjekte edin. Bu animasyon, kateter yerleştirme prosedürünü gösterecektir. İlk olarak, 6-0 ipek süturu ekstrahepatik portal venin altına yerleştirin, ardından 26 gauge kateteri portal vene yerleştirin ve bir klemple sabitleyin.Kateteri sabitlemek, splenik ven ve mezenterik ven kaynaklı kan akışını engellemek için önceden yerleştirilmiş sütürü bağlayın. Burada cerrahi prosedür uygulamalı olarak gösterilecektir. 26 gauge kateteri iğnesiyle birlikte yerleştirin.Kateteri daha ileriye yerleştirin ve aynı anda iğneyi yavaşça dışarı çıkarın. Kateteri bir klemple sabitleyin. Hava kabarcıklarını önlemek için kateteri tamamen heparinli salin çözeltisiyle doldurun.Uzatma tüpünü katetere bağlayın ve sıkıca sabitleyin. Perfüzyon pompasını açın. 0.4 milliliter per minute akış hızıyla heparinli salin perfüzyonuna başlayın.Perfüzyonun hemen ardından sağ lobların soluklaştığını gözlemleyin. Tüm perfüzyon prosedürü boyunca karaciğeri nemli tutmak için salin ile yıkayın. Anestezi altında perfüzyon yoluyla kan kaybı (eksanguinasyon) ile fareyi ötanize edin.Tüm karaciğer soluklaşana kadar heparin perfüzyonuna birkaç dakika daha devam edin. Microfil perfüzyonundan önce, polimerizasyon işlemini hızlandırmak için hazırlanan Microfil bileşiğine 0,1 mililitre kürleme maddesi ekleyin. Microfil bileşiğini beş mililitrelik şırınga ve uzatma tüpüne doldurun.Daha önce yapıldığı gibi, katetere heparinli salin solüsyonu enjekte ederek hava kabarcıklarını giderin. Tüpü katetere bağlayın ve sıkıca sabitleyin. Microfil enjeksiyonuna dakikada 0.2 mililitre akış hızıyla yaklaşık bir ila iki dakika boyunca başlayın.Mavi ajanın portal ven dallarına yavaşça yayıldığını gözlemleyin. Kırmızı bir daire ile belirtildiği gibi, mavi damar yapısı her bir karaciğer lobunun yüzeyinde göründüğünde perfüzyonu durdurun. Microfil bileşiğinin polimerizasyonu için karaciğeri en az 15 dakika bekletin.Microfil enjeksiyonu, hepatik venöz sistem. Prosedür temelde portal venöz sistem enjeksiyonu ile aynı adımları izler. Ekstrahepatik portal venin altına, bifurkasyonun yaklaşık bir milimetre mesafesine 6-0 ipek sütur yerleştirin.Ardından portal vene bir kateter yerleştirin ve klemple sabitleyin. İnferior vena cava'ya başka bir kateter yerleştirin ve bunu da bir klemple sabitleyin. Kateteri sabitlemek ve splenik ven ile mezenterik venden gelen kan akışını engellemek için önceden yerleştirilen sütürü bağlayın.Karaciğerin çıkışını engellemek için suprahepatik inferior vena cava üzerine bir klempleme yapın. Her iki renal ven ve inferior vena cava'nın distal ucu dahil olmak üzere, inferior vena cava'nın dallarını bağlayın. Birinci kateter aracılığıyla heparinli salin solüsyonu kullanarak karaciğeri yıkayın.Karaciğer venöz sistemini iki numaralı kateter aracılığıyla Microfil bileşiği ile perfüze edin. Sonuçlar, Micro CT rekonstrüksiyonu. Micro CT taramasının ardından Imalytics preklinik yazılımını kullanarak 3B vasküler rekonstrüksiyonlar elde ettik.Hem portal hem de hepatik venöz sistemlerdeki vasküler rejenerasyon, ana vasküler yapıların uzaması ve genişlemesinin yanı sıra daha küçük damarların dallanması şeklinde görülmüştür. Ameliyat sonrası ikinci günde, remnant lobların vasküler ağaçları uzamıştır. Ameliyat sonrası yedinci güne gelindiğinde, aynı ana portal ven ve hepatik venden çıkan ek küçük dallar görünür hale gelmiştir.Sonuçlar, hepatik vasküler ağacın ve ona bağlı hepatik bölgelerin 3 boyutlu renk kodlu rekonstrüksiyonu. HepaVision tarafından yapılan renk kodlu rekonstrüksiyon sonrası, her bir karaciğer lobu üç boyutta da kolayca görselleştirilmiştir. Tabloda belirtildiği gibi, normal bir karaciğerin hepatik venöz sistemi için burada gösterildiği şekilde toplam karaciğer ve her bir lobun hepatik hacimleri belirlenmiştir.Sonuçlar, seri kesitler ve rekonstrüksiyon. Öte yandan, formalinle fikse edilmiş Microfil örneği seri kesitlere tabi tutulmuştur. Boyanan seri kesitler, bir tam slayt tarayıcı kullanılarak dijitalleştirilmiş ve her iki sistemin vasküler ağ rekonstrüksiyonu için kullanılmıştır.Bunlar, rijit ve elastik kayıtlama öncesi ve sonrasındaki fare karaciğeri seri kesit yığınının enine kesitleridir. Bilgisayar destekli kayıtlamadan sonra, portal venöz ve hepatik venöz sistemler tek bir 3D modelde yeniden oluşturulabilir. Manuel ve hesaplamalı olarak zaman alan bu adımın daha fazla optimizasyona ihtiyacı vardır.Sıradaki adım, yani moleküler olayların vasküler ağaçlara göre uzaysal dağılımının görselleştirilmesi şu anda geliştirilme aşamasındadır. Bu adım, kontrastlı vasküler ağaçtan elde edilen Micro CT bilgilerinin histolojik bilgilerle birleşimi veya tamamen histolojik bilgilerin 3D görselleştirmesi olarak öngörülebilir. Bu durumda Micro CT bilgileri, zahmetli olan histoloji tabanlı 3D rekonstrüksiyon için kalite kontrolü görevi görecektir.Bu başarıldığında, karaciğer rejenerasyonunu daha iyi incelemek için bir araca sahip olmuş oluruz. Özellikle moleküler olayların uzaysal dağılımı ve vasküler rejenerasyon açısından hepatik parenkim üzerinde çalışılabilir.

visualization-vascular-parenchymal-regeneration-after-70-partial

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kısmi hepatectomy (PHx) ve hücre transplantasyonu dalak ile NOD gerçekleştirmek için bir protokol anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fareler. Bu protokol için ortaya çıkarmak ve hücre intrasplenic nakli için başka bir kesi ardından karaciğer sol lob çıkarabileceğim için bir kesi yapılır.

Hepatositlerin intrasplenic nakli düğümde kısmi Hepatectomy sonra. SCID fareler

Burada, yenidoğan (0 gün) farelerde karaciğer sol lob kısmi rezeksiyon için yeni bir yöntem mevcut. Bu yeni iletişim kuralı akut karaciğer hasarı ve yaralanma yanıt yenidoğan ortamda çalışmak için uygundur.

Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model

Biz daha fazla vivo içinde kısmi karaciğer gelecekte mühendislik eğitimi için bir önkoşul olarak köstebeğiyle vivo içinde tek karaciğer lob perfüzyon modeli için yeni bir cerrahi teknik kurmak.

Sıçan Vivo içinde kısmi karaciğer Dairesi'nde için bir temel olarak yeni bir cerrahi teknik

Bu protokol, karaciğer yenilenmesinin incelenmesini sağlamak için yetişkin zebra balıklarında karaciğerin ventral lobunun çıkarılması prosedürünü açıklar.

Yetişkin Zebra Balıklarında Kısmi Hepatektomi

Lipid yüklü hepatositler karaciğer rejenerasyonuna özgüdür, ancak genellikle yoğunluk gradyan santrifüjleme ile kaybolurlar. Burada, steatotik hepatositleri tutan ve farelerde parsiyel hepatektomi sonrası rejenere hepatositlerin temsili popülasyonlarını veren optimize edilmiş bir hücre izolasyon protokolü sunuyoruz.

Farelerde Parsiyel Hepatektomi Sonrası Rejenere Hepatositlerin İzolasyonu

Bu protokolde, farelerde başarılı bir ortotopik karaciğer transplantasyonu (OLT) modelinin uygulanmasını tartışıyoruz. Ek olarak, bir farede başarılı OLT'den sonra allogreft açıklığını daha fazla analiz etmek için adjuvanlar, özellikle mikrobilgisayarlı tomografi (mikroBT) taramaları kullanılarak tartışılmaktadır.

Mikrobilgisayarlı Tomografi Anjiyografi Kullanan Farelerde Başarılı Ortotopik Karaciğer Nakli

Aşamalı Hepatektomi (ALPPS) için Karaciğer Bölünmesi ve Portal Ven Ligasyonunun İlişkilendirilmesinin, birinci aşama ameliyattan birkaç hafta sonra kayda değer karaciğer rejenerasyonu ile sonuçlandığı gösterilmiştir. ALPPS uygulanan hayvan modelleri, potansiyel karaciğer rejenerasyon yeteneğini araştırmak ve olumlu klinik sonuçlar elde etmek için geliştirilmiştir.

Mikroskopi Destekli Aşamalı Hepatektomi Prosedürü için İlişkilendirici Karaciğer Bölünmesi ve Portal Ven Ligasyonunun Bir Fare Modeli

Bu protokol, fare ortotopik karaciğer transplantasyonunda manşet tekniği kullanılarak damar rekonstrüksiyonu için teknik bilgi sağlar.

Fare Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunda Cuff Tekniği ile Vasküler Rekonstrüksiyon

Hasta tümörlerinden üretilen organoidler ortotopik olarak fare karaciğerine enjekte edilir. Tümör olmayan karaciğer dokusunun rezeksiyonu, tümörün bulunduğu karaciğer dokusunda rejeneratif bir ortama yol açar.

Karaciğer Rejenerasyonunun Tümör Büyümesi Üzerindeki Etkisini Araştırmak İçin Hepatosellüler Kanser Hastasından Elde Edilen Bir Organoid Ksenogreft Modeli

Parsiyel 2/3 (%66) hepatektominin fare modeli literatürde iyi tanımlanmıştır, ancak karaciğer transplantasyonundan sonra boyuta göre küçük sendromu taklit eden daha geniş hepatektomiler nadiren kullanılmıştır. Sağlıklı farelerde yaklaşık %50 postoperatif ölümcüllük ile sonuçlanan bir fare modelinde genişletilmiş %78'lik bir hepatektomi prosedürünü tanımladık.

Bir Fare Cerrahi Modelinde Genişletilmiş %78 Hepatektomi

Bu protokol, sağlam karaciğer dokusunda karaciğer stellat hücrelerinin morfolojisini görselleştirmek ve modellemek için kapsamlı bir görüntüleme hattı sunar. Bu yaklaşım, fare genetiği kullanılarak fibroblastların floresan etiketlenmesini, yerinde karaciğer perfüzyon tabanlı doku hazırlığını ve modifiye edilmiş iDISCO doku temizleme yöntemini birleştirerek optik şeffaflığı sağlar.

Karaciğer Fibrozisi Fare Modellerinde Hepatik Yıldız Hücre Morfolojisinin Haritalanması

Öğrenin, farelerde %70 parsiyel hepatektomi sonrası damar ve parankimal rejenerasyonu görselleştirmek için MikroCT taraması, 3D rekonstrüksiyon ve kantitatif analiz yöntemlerini kullanarak vasküler büyümeyi nicelendirmeyi.

Normal Farelerde% 70 hepatektomi sonrası Vasküler ve Parankimal Rejenerasyon görselleştirme

Daha fazla video keşfet