Name: için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü Drosophila melanogaster Larva (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster larvalarında yiyecek arama davranışını ölçme yöntemini. Bu hızlı ve tekrarlanabilir analiz, genetik ve çevresel faktörlerin davranışsal farklılıklara katkısını değerlendirmek için büyük örneklem boyutlarına olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Konseyi'ni (NSERC) MBS'ye finanse etmeye devam ettiklerini kabul ediyorlar.

1. Larva Tahsil Üzüm Plakaları ve Holding Şişeler hazırlayın <ol><li> Tutan şişe yapmak için, hava temini için bir sinek flakon fiş sığacak kadar büyük 6 oz sinek kültürü şişeleri, (Şek. 1D) bir tarafında delikler kesti. </li><li> (Ağar, üzüm suyu kaynatma ile üzüm suyu ortamında (% 1.8 ağar,% 45 üzüm suyu,% 2.5 asetik asit,% 2.5 etanol) 250 ml hazırlanması ve suyun büyük bölümü, 70 ° C kadar soğumaya, üzüm plakaları yapmak için ) soğutma sırasında, daha sonra asetik asit ve etanol ekleyin ve su ile hacme getirmek karıştırın. </li><li> Üzüm suyu ortamının yüzey kapağının (Şek. 1A) dudak üzerinde bir kubbe edinceye kadar 35 x 10 mm Petri kabı kapaklarını doldurmak için (iğne olmadan) bir şırınga kullanın. </li><li> 4 ° C&#39;de nemli ve hava almayan kaplarda saklayın üzüm plakaları kullanıma kadar (2 hafta maksimum). </li></ol> Gıda Tabaklar 2. Hazırlık <ol><li> Standart sinek gıda tarifi hazırlayın. Not: t için% 10 sakroz,% 1.3 ağar,% 0.8 potasyum sodyum tartrat, 0.1% monopotasyum fosfat,% 0.05 sodyum klorür,% 0.05 kalsiyum klorid,% 0.05 magnezyum klorür: yol uzunluğu EST yetiştirme gıda kalitesi etkisi Bu düşük besin sinek gıda kullanılan % 0.05 su içinde demir sülfat,% 5 ve% 0.5 maya propionik asit; ve yüksek besin sinek gıda:% 1.5 sukroz,% 1.4 ağar,% 3 glükoz,% 1.5 mısır unu,% 1 buğday tohumu,% 1 soya unu,% 3 melas,% 3.5 maya,% 0.5 propionik asit,% 0.2 Tegosept 1 su içinde% etanol. Her iki yiyeceklerde propiyonik asit, Tegosept ve etanol eklemeden önce 50 o C &#39;çözüm ve serin otoklav. </li><li> 100 x 15mm Petri kapları içine sinek gıda 40 ml dökün. </li><li> 4 ° C&#39;de nemli ve hava almayan kaplarda saklayın gıda plakaları kullanıma kadar (2 hafta maksimum). </li></ol> 3. Test Plakaları hazırlayın <ol><li> çapı 58 x 25 cm, 10, 1 mm derinliğinde dairesel çukurlar 6 mm kalınlığında siyah Pleksiglas plakalar, 10 cm hazırlamak ve 2 x 5 gün içinde düzenlenmişlarva üzerinde test etmek esign (Şek. 1C). Not: 3 ya da yukarıdaki pleksiglas plakaların daha mevcut olup olmadığını 30 larva kadar bir seferde test edilebilir. Seçenek olarak ise, larvalar petri kase çapı 10 cm test edilebilir. Bu seçenek daha zahmetlidir ve test edilecek larvaların düşük sayılar için izin verir. </li><li> Pleksiglas testi plakalar üzerinde maya macunu yaymak için bir siyah 39 x 8 cm, 6 mm kalınlığında pleksiglas serpme edinin. </li><li> önceden dipleri kapaklarını ayırarak larva yol-uzunlukları kayıt için 100 x 15 mm Petri kabı kapaklarını hazırlayın. </li></ol> 4. Ebeveyn Populasyonlarında ayarlama <ol><li> Tüm tahlil boyunca sabit yetiştirme koşulları tutmak (örneğin, 25 ºC,% 60 nem ve 12:12 ışık: Standart sinek gıda karanlık döngüsü). </li><li> Aynı yetiştirme koşullarında ebeveyn nüfusu kaldırın. </li><li> 150 kadın ve 50 - - 100 toplayın 75 erkek ve optimum doğurganlık için 5 ± 1 gün boyunca onları yaş. </li><li> f izinemales ve erkekler standart sinek gıda ile 6 oz sinek kültür şişe gecede çiftleşme. </li><li> Maskeleme bandı (Şekil 1E.) Ile üst üzerinde, Transfer tutma şişenin içine uçar ve bir üzüm plakasını (Şekil 1B döşeme yumurta teşvik edecektir üzüm plaka üzerinde taze maya hamur küçük bir miktar.) Sabitleyin. </li><li> Altındaki üzüm plaka ile, baş aşağı (Şek. 1F) ayakta şişeleri yetişkin üzüm plaka üzerinde yumurtalarını bırakmak için izin bırakın. </li><li> 24 saat sonra ilk üzüm plaka atın ve tutma şişe yeni bir üzüm plakasını yerleştirin. Bu larvalar, ertesi gün toplanıp getirildiği, üzüm plaka olacaktır. Not: Üzüm plakaları kurmak erken ertesi gün silinebilir, böylece plakaları kurmak sonra larva 22 saat temizlenecek gerekecektir (. Örneğin 12 pm plaka kurmak ve 10 net ertesi gün ben). Kadın stopaj ve tha olmuş olabilecek yumurta önlemek için ilk üzüm plaka atmak için tavsiye edilirt gelişiminde ileri olabilir. </li></ol> 5. Üzüm Tabaklar L1 (İlk Evre) Larva toplayın <ol><li> 60 x 15 mm Petri kabındaki onlar kuruldu 22 saat sonra şişe ve yerden üzüm plakaları çıkarın. </li><li> tutma şişesi üzerinde taze maya macun ile yeni bir üzüm plaka koyun. </li><li> Açık ve diseksiyon prob kullanılarak seri başı üzüm plaka tüm larvaların atın. </li><li> Inkübe standart koşullarda 4 saat süreyle üzüm plakaları temizlenir. </li><li> 4 saat sonra, üzüm plakalardan suş başına 100 L1 larvaları almak ve gıda plakaları üzerinde yerleştirin. <ol><li> (Larva gıda delme ve gömme olmadan) nazikçe gıda larvaları koyun ve gıda plaka üzerinde larvaları dağıtarak kalabalığı önlemek. </li></ol></li><li> Test hayvanları dolaşıp başlamadan önce yaklaşık 10 saat kadar gıda inkübe. Not: - yumurtadan çıktıktan sonra 96 ​​saat 25 ºC &#39;de, genel olarak dolaşıp 10 saat önce 72 karşılık gelir. exacinkübasyon süresi t miktarı her bir suş için larva bir başlangıç ​​seti toplama ve göçebe başlangıcına kadar saat sayısını kaydederek deney başlamadan önce belirlenmelidir (dolaşıp larvalar gıda tarafına ve kapağın üzerine gıda dışında hareket edecek levha). Not: Gerekirse, aynı anne 3 larva toplamak için kullanılabilir - 5.5 adımları 4.7 tekrarlayarak test 4 gün. suşları yol uzunluğu bir test sipariş etkisini önlemek için gün boyunca kurmak ve test edildiği sırasını değiştirin. Aynı &quot;kontrol&quot; gerginlik test / gün etkileri kontrol etmek için test her gün suşları. </li><li> Birçok suş test edilir ise, daha sonra, uygun bir zaman noktasında her bir suş test edilmesi için izin vermek için, larvaların kurmak ve toplama süreleri sersemleme. </li></ol> 6. Larva Yol boyu Testi <ol><li> 2 oranında (hacime göre ağırlık) bir 1: su içinde, kuru aktif fırıncı mayası içinde çözülür. bitmiş maya yapıştırmak pa daha ince olmalıdırncake meyilli, macun dışında bir kaşık kaldırma bir şekilde, o damlar ve hızlı bir şekilde eriyip hamur yüzeyinde şeritler geride bırakır. Not: Maya macunun kıvamı önemlidir ve deney boyunca sabit olmalıdır. Tam maya: su oranı marka ve maya toplu bağlı ayarlanması gerekebilir. </li><li> Yavaşça ilk gerginlik larvaları bir boya fırçası kullanarak gıda plaka test edilecek seçin. </li><li> Bir Petri kabındaki larvaları toplayın ve yavaşça tüm yiyecek çıkarmak için su ile yıkayın. <ol><li> bir laboratuvar ile 2 ml su ve hafifçe dab larva kuru test plakası üzerinde larvaları verirken suyun aktarılmasını engellemek için silin - Çabuk 1 ile larva yıkayın. , Stres önlemek nemli ama suya batırıldıktan değil larvaları tutmak için. </li></ol></li><li> yan üç test plakaları yan düzenleyin ve her bir test plakası için 5 dk zamanı ayarlayın. </li><li> Test plakalarının üstüne maya macunu sürün ve serpme kullanarak, ince yatıyordu yayıldıtüm kuyuları maya düz bir tabaka var ki her test plakası üzerinde maya hamur er. </li><li> Yavaşça her tabakta ilk larvaları yerleştirdikten sonra 5 dakika zamanlayıcı başlayarak her bir merkezi bir larva yerleştirin. Not: Üç tabak 500 larva toplam kadar 30 / suş / test günün bir örneklem büyüklüğü veren, bir defada yapılabilir. </li><li> her bir üstüne bir Petri kabı kapağı yerleştirin. </li><li> Zamanlayıcı bittiğinde, plakadan larvaları çıkarmadan, kalıcı bir kalem kullanarak maya geride bıraktığı yol-uzunlukları izleme başlar. larva aynı sırayla iz yolu uzunlukları testi plakalar üzerine yerleştirildi. <ol><li> Larvalar tabakalarına yerleştirildi ile aynı hızda izlemeyi gerçekleştirin. Daha sonra veri analizinde tutarlılık için, tüm yol-uzunlukları aynı işaretleyici kullanın. Kalıcı işaretleyici tavsiye edilir. </li></ol></li><li> Yineleyin her suş test edilecek için 6.8.1 için 6.2 adımları tekrarlayın. hemen pa üzerinde açlık etkilerini önlemek için test etmeden önce gıda her yük almakinci uzunlukta. </li></ol> 7. Gıda Yoksunluk <ol><li> Larvalar, gıda test edilmeden önce yoksun olması adım 6.2 6.3&#39;e tarif edildiği gibi larvaları toplamak için, ancak gıda yoksunluğu zaman istenilen miktarda daha önce (örn., Larvalar eğer gıda 4 saat yoksun olması ise daha önce larva 4 saat toplama Test süresi). </li><li> iki gruba yıkanmış larvaları bölün ve 5 ml standart gıda ile bir Petri kabındaki 5 ml% 1 agar ve kontrol grubu ile 60 x 15 mm Petri kabındaki gıda yoksun grubu yerleştirin. </li><li> Petri yemekleri ters kapak (Aksi larva yiyecek ararken Sürünerek edebiliyoruz) üstüne bir ağırlık koyun. </li><li> Daha önce kurulan gıda yoksunluğu dönemi boyunca inkübe ve adımları 6.9 6.2 tarif edildiği gibi test ile devam edin. </li><li> Birçok suş test edilecek ise, aç bırakma, uygun bir zaman noktasında her bir suş test edilmesi için sürelerin başlangıç ​​yalpalayarak. </li></ol> 8. Veri Analizi Not: diğer yazılım kullanılabilir olmasına rağmen, bu bölümde, yol-uzunlukları işleme ImageJ 7 veya Fiji 8 kullanılarak veri analizi için bir yöntemi anlatmaktadır. <ol><li> (Kapaklar etanol ile yıkandı ve daha fazla yol uzunluğu kayıt için tekrar edilebilir) beyaz kağıda Petri kabı kapaklarının tüm takip yolu-uzunlukları aktarmak için bir ışık tabloyu kullanın. </li><li> kağıt yaprak birinde 50 mm düz referans çizgisi çiziniz. </li><li> 300 dpi çözünürlükte yol-uzunlukları tarayın ve bitmap veya TIFF görüntü dosyaları olarak kaydedin. </li><li> &quot;Süreç&quot; sekmesine&gt; &quot;Binary&quot;&gt; &quot;ikili olun&quot; seçeneğini görüntü dosyasını açın. Sonra &quot;Süreç&quot; sekmesi altında,&gt; &quot;iskeletini&quot; &quot;İkili&quot; seçeneğini seçin. Bu ne olursa olsun iz kalınlığı, bir piksel genişliği hattını oluşturur. </li><li> Her yol uzunluğu hiçbir geçitler ile sürekli tek bir satır olarak göründüğünden emin olun. </li><li> &quot;Düz li kullanarak herhangi kavşakları ayırınne aracı Wand &quot;(izleme) aracı&quot; ve çizgi beyaz (yolun devamlılığını boyama ile kontrol edilebilir &quot;, tüm yolu sarı vurgulanmış olmalıdır (Şek. 2). </li><li> &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; Set ölçümleri seçin ve &quot;Çevre&quot; ve &quot;Ekran etiketi&quot; seçeneğini seçin. </li><li> &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; &quot;Set ölçeği&quot; seçin ve &quot;ölçek Kaldır&quot; seçeneğini seçin. </li><li> resmin üzerine,&gt; &quot;Analiz parçacıkları&quot; &quot;Analiz&quot; sekmesini seçin, sadece referans satırı seçin ve &quot;Göster: Anahatları&quot;, &quot;sonuçlarını görüntüle&quot; ve &quot;Temizle sonuç tablosu&quot;. Not: Çıktı 50 mm çaplı hattına gelen piksel sayısını gösterir. </li><li> &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; &quot;Set ölçeği&quot; seçin ve &quot;piksel uzaklığı&quot; piksel sayısı ve &quot;Bilinen mesafe&quot; karşılık gelen mesafe (50 mm) doldurun. </li><li> Son olarak, bir genotip a tüm yol uzunluğu çizimleri seçinta zaman, &quot;Analiz&quot; sekmesi&gt; &quot;Analiz parçacıkları&quot; seçeneğini seçin &quot;Göster: hatlarını&quot;, &quot;sonuçlarını görüntüle&quot; ve &quot;Temizle sonuç tablosu&quot;. <ol><li> alanı seçerek ve beyaz doldurularak seçilen alanın içinde herhangi bir yazılı etiketleri veya bariz yabancı işaretleri (onlar yol-uzunlukları olarak kabul edilecektir) çıkarın. </li></ol></li><li> Görme perimeters doğru tespit emin olmak için &quot;Ana Hatları&quot; çıktı dosyası kontrol edin. çıkışı seçimi her yol uzunluğu çizim için mm cinsinden bir yol-uzunluğunu gösterecektir. Bu kolay bir elektronik tablo ihraç ve herhangi bir istatistik yazılımı ile analiz edilebilir. </li></ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Behavioral+Genetics+of+the+Fly+%28Drosophila+melanogaster%29%22">Behavioral Genetics of the Fly (Drosophila melanogaster)</a>. Dubnau, J. , Cambridge University Press. New York. 173(2014).</li>
<li>Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foraging+strategies+of+Drosophila+melanogaster%3A+a+chromosomal+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Genet%22%5BJournal%5D)">Foraging strategies of Drosophila melanogaster: a chromosomal analysis.</a> Behav Genet. 10, 291-302 (1980).</li>
<li>de Belle, J. S., Hilliker, A. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+localization+of+foraging+%28for%29%3A+A+major+gene+for+larval+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic localization of foraging (for): A major gene for larval behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 123, 157-164 (1989).</li>
<li>Osborne, K. A., Robichon, A., Burgess, E., Butland, S., Shaw, R. A., Coulthard, A., Pereira, H. S., Greenspan, R. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+behavior+polymorphism+due+to+a+cGMP-dependent+protein+kinase+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Natural behavior polymorphism due to a cGMP-dependent protein kinase of Drosophila.</a> Science. 277, 834-836 (1997).</li>
<li>Kalderon, D., Rubin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cGMP-dependent+protein+kinase+genes+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">cGMP-dependent protein kinase genes in Drosophila.</a> J Biol Chem. 264 (18), 10739-10748 (1989).</li>
<li>Reaume, C. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cGMP-dependent+protein+kinase+as+a+modifier+of+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Exp+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">cGMP-dependent protein kinase as a modifier of behavior.</a> Handb Exp Pharmacol. 191, 423-443 (2009).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Pereira, H. S., MacDonald, D. E., Hilliker, A. J., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chaser+%28Csr%29%2C+a+new+gene+affecting+larval+foraging+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Chaser (Csr), a new gene affecting larval foraging behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 140, 263-270 (1995).</li>
<li>Shaver, S. A., Riedl, C. A. L., Parkes, T. L., Sokolowski, M. B., Hilliker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+larval+behavioral+mutants+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Isolation of larval behavioral mutants in Drosophila melanogaster.</a> J Neurogenet. 14, 193-205 (2000).</li>
<li>Graf, S. A., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rover%2Fsitter+Drosophila+foraging+polymorphism+as+a+function+of+larval+development%2C+food+patch+quality+and+starvation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Behav%22%5BJournal%5D)">The rover/sitter Drosophila foraging polymorphism as a function of larval development, food patch quality and starvation.</a> J Insect Behav. 2, 301-313 (1989).</li>
<li>Gonzalez-Candelas, F., Mensua, J. L., Moya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Larval+competition+in+Drosophila+melanogaster%3A+effects+on+development+time%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Larval competition in Drosophila melanogaster: effects on development time.</a> Genetics. 82, 33-44 (1990).</li>
<li>Durisko, Z., Kemp, R., Mubasher, R., Dukas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+social+behavior+in+fruit+fly+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dynamics of social behavior in fruit fly larvae.</a> PLoS One. 9 (4), e95495(2014).</li>
<li>Sawin, E. P., Harris, L. R., Campos, A. R., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+transformation+from+light+reception+to+phototactic+behavior+in+Drosophila+larvae+%28Diptera%3A+Drosophilidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Behav%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor transformation from light reception to phototactic behavior in Drosophila larvae (Diptera: Drosophilidae).</a> J Insect Behav. 7, 553-567 (1994).</li>
<li>de Belle, J. S., Sokolowski, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heredity+of+rover%2Fsitter%3A+alternative+foraging+strategies+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Heredity of rover/sitter: alternative foraging strategies of Drosophila melanogaster.</a> Heredity. 59, 73-83 (1987).</li>
<li>de Belle, J. S., Sokolowski, M. B., Hilliker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+the+foraging+microregion+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genome%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of the foraging microregion of Drosophila melanogaster.</a> Genome. 36, 94-101 (1993).</li>
<li>Sokolowski, M. B., Pereira, H. S., Hughes, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+foraging+behavior+in+Drosophila+by+density+dependent+selection%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Evolution of foraging behavior in Drosophila by density dependent selection.</a> PNAS. 94, 7373-7377 (1997).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada özetlenen yol uzunluğu tahlil Drosophila larvaların toplayıcı davranış sağlam ve basit bir ölçü sunmaktadır. Protokol Sokolowski 2&#39;de tarif edilen genel metodolojiyi takip eder, ancak bu yana verimlilik ve deneysel kontrol açısından iyileştirilmiştir. Bizim bilgimize göre bu yöntem larva yol-uzunluk ölçüm için mevcuttur yöntemdir. Yol uzunluğu protokol 2, 3, 15, bir fırça ile uygulanır maya hamur ince bir tabaka, ve çubuk yayılan, daha sonra bir bardak Petri 16 test l...

1910 yılında Thomas Hunt Morgan laboratuvarında beyaz genin bulunmasından bu yana, meyve sineği, Drosophila melanogaster (D. melanogaster), çeşitli biyolojik süreçlerin moleküler ve fizyolojik temellerinin çalışma için bir model olarak kullanılmıştır. D. popülerlik melanogaster büyük ölçüde genetik araçları önemli miktarı ve çeşitliliği kaynaklanmaktadır. Drosophila en küçük boyutlu, taşıma ve kısa nesil süresi göreli kolaylığı o genetik çalışmalar için ideal bir model oluşturmak. Aynı derecede önemli olan memeliler dahil olmak üzere daha karmaşık organizmalar tarafından ifade fenotipleri birçok göstermek için Drosophila kapasitesidir. Bu organizma ve çevresi arasındaki arayüzde durmak böyle bir davranışa gibi karmaşık fenotipleri içerir. meyve sineği böyle, davranışsal çalışmalar genler ve çevre davranışı aracılık nasıl anlayışımıza önemli ölçüde katkıda bulunmuştur olarak1. D. ilk çalışmalardan biri melanogaster larva davranış beslerken larva 2 yolu-uzunluklarını ölçerek larva toplayıcı stratejileri bireysel farklılıkları araştırıldı. Yol uzunluğu beş dakikalık bir süre içinde, maya tek bir larva tarafından katedilen toplam mesafe olarak tanımlanmıştır. Toronto&#39;da bir doğal nüfus hem laboratuar suşları ve sinekler kendi toplayıcı davranışlarında farklılık ve yol uzunluğu bireysel farklılıklara genetik bir bileşeni oldu. İki larva toplayıcı morphs nicel yol uzunluğu dağıtımlarından tarif edildi ve onlar gezici ve bakıcısı çağrıldı. daha büyük bir alanı geçme sırasında Rovers ise oturabilenler daha gıda alt tabaka üzerinde uzun yol-uzunlukları sergilerler. Bu yol uzunluğu deneyi kullanılarak, de Belle ve ark., 3 chromosome- 2 (24A3-24C5) bir ayrık konuma bu bireysel davranış farklılıkları altında yatan toplayıcılık (için) genini eşleştirilmiş. D. mgen için elanogaster sonra 4 klonlanabilir ve bir cGMP bağımlı protein kinaz 5, fizyoloji ve davranış Drosophila ve diğer organizmaların 6 bir modülatörü olduğu ortaya çıkmıştır. Burada aslında Sokolowski 2 geliştirilen larva yol uzunluğu tahlil için geçerli protokol özetlemektedir. testinin bazı yönleri yıllar içinde değişti olmasına rağmen, tasarımın arkasındaki kavram değildir vardır. Biz de Drosophila larva toplayıcı davranış bireysel farklılıklara genetik ve çevresel katkılarını değerlendirmek deney potansiyelini göstermek için veri sağlar. larva yol uzunluğu tahlil, basit, verimli ve henüz sağlam. Tek bir kişi, dört saat içinde kolaylıkla 500 larva kadar test ve sonuçlar tekrarlanabilirlik yüksek düzeyde elde edilebilir. Başlangıçta çalışmalarda genetik ekranlar, niceliksel özellik lokusu haritalama kullanılan ve edilebilir için lokalize için geliştirilmişgen-by-çevre (GXE) etkileşimleri. Dahası, onun basitliği ve uyarlık o lisans öğretimi için büyük bir kaynaktır olun.

<table><tbody><tr><td>6 oz&nbsp; Sinek Kültür Şişeleri&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>AS355 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Fly flakon tapaları</td><td>Droso-Plugs</td><td>59-201</td><td></td></tr><tr><td>35 x 10 mm Petri kapları&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 mm Petri kapları&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>875712</td><td></td></tr><tr><td>60 x 15 mm Petri kapları</td><td>VWR</td><td>25384-168&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon probları</td><td>Almedic</td><td>2325-58-5300 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Maya</td><td>Laboratuvarı Bilimsel</td><td>FLY-8040-20F</td><td></td></tr></tbody></table>

için yiyecek arama yolu uzunluğu protokolü<em&gt; drosophila melanogaster</em&gt; larva

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Drosophila melanogaster larva yol uzunluğu fenotip davranışsal değişim genetik ve çevresel katkılarını incelemek için kullanılan bir tesis ölçüsüdür. Larva yol uzunluğu tahlil sonra toplayıcı genin bağlantılı olduğunu toplayıcı davranış bireysel farklılıkları ölçmek için geliştirilmiştir. Larva yol uzunluğu genetik ekranlar için, en az maliyetle, büyük örneklem boyutlarının toplama kolaylaştıran bir kolay gol özelliktir. Burada ilk Sokolowski tarafından kullanılan larva yol uzunluğu tahlil için geçerli protokol ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. protokol tekrarlanabilir test hayvanları ele davranışsal tahlil gerçekleştirmek ve verileri analiz nasıl ayrıntıları. Deney ortamı besleme manipüle önce tahlil gerçekleştirerek çevresel değişikliğe yanıt olarak davranış plastisite ölçmek için nasıl kullanılabileceğini bir örneği, aynı zamanda temin edilmektedir. Son olarak, uygun test tasarımı yanı sıra çevresel faktörlerin değiştirebileceğinizBöyle gıda kalitesi, gelişimsel yaş ve gündüz etkileri gibi larva yol uzunluğu tartışılmıştır.

<html> Gezici ve bakıcısı suşlar için ve yol uzunluğu gıda yoksunluk etkisi yolu uzunluğu farklılıklar Şekil l&#39;de gösterilmiştir. . Rovers uzak oturabilenler daha yolculuk ile; (Şekil 3A. F (1,421) = 351,89, p &lt;2.20 x 10 -16) 3 Veri test üç ardışık gün boyunca toplanan önemli bir gerilme etkisi gösterdi. Gıda, dört saat önce test için yoksun bırakıldı larvaları ile, suş etkisine ek olarak, aynı zamand...

Drosophila melanogaster yiyecek arama yolu uzunluğu testi için ayrıntılı bir protokol sağlıyoruz. Test hayvanlarının hazırlanmasını ve işlenmesini, testin nasıl gerçekleştirileceğini ve verilerin nasıl analiz edileceğini tartışıyoruz.

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Bu deneyin genel amacı, Drosophila larval davranışının lokomotor bileşenini nicelleştirmektir. Bu yöntem, davranış genetiği alanında, larval davranıştaki bireysel farklılıklara yönelik genetik ve çevresel katkılarla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajları; hızlı, tekrarlanabilir olması ve büyük örneklem boyutlarının toplanmasına olanak tanımasıdır.Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler zorluk yaşayabilir çünkü analizin başarısı gelişimsel zamanlamaya ve test hayvanlarının tutarlı ve dikkatli bir şekilde yönetilmesine bağlıdır. Prosedürü laboratuvarımdaki lisansüstü öğrenciler Ina Anreiter ve Oscar Vasquez uygulamalı olarak gösterecektir. Altı onsluk plastik bir sinek kültür şişesinin bir yanına delikler açarak tutma şişesini hazırlayın.Ardından, bir şırınga kullanarak Petri kabı kapaklarını, üzüm suyu ortamı yüzeyi kapağın kenarının üzerinde bir kubbe oluşturana kadar önceden hazırlanmış üzüm suyu ortamı ile doldurun. Üzüm plakalarını nemli ve hava sızdırmaz bir kapta, dört °C'de iki haftaya kadar saklayın. Önceden hazırlanmış 40 mL sinek yemini 100 x 15 mm'lik Petri kaplarına dökün.Larvaları test etmek için on santimetre çapında, ikiye beş düzeninde yerleştirilmiş on dairesel kuyucuğa sahip üç adet siyah Pleksiglas plaka ve maya pastasını Pleksiglas plakalara yaymak için kullanılan siyah bir Pleksiglas yayma çubuğu temin edin. Ardından, Petri kaplarının kapaklarını tabanlarından ayırın. 100 ila 150 dişi ve 50 ila 75 erkek toplayın.Dişi ve erkek sineklerin, standart sinek besiyeri içeren altı onsluk bir sinek kültür şişesinde gece boyunca çiftleşmelerini sağlayın. Sinekleri bir tutma şişesine aktarın ve şişenin üst kısmına, üzerinde az miktarda taze maya macunu bulunan bir üzüm plakasını maskeleme bandı kullanarak sabitleyin. Erişkinlerin üzüm plakasına yumurta bırakmalarına izin vermek için şişeyi, üzüm plakası altta kalacak şekilde ters konumda bırakın.İlk üzüm plakasını 24 saat sonra atın ve tutma şişesine yeni bir üzüm plakası yerleştirin. 22 saat sonra, üzüm plakalarını şişelerden çıkarın ve 60 by 15 milimetrelik bir Petri kabına yerleştirin. Ardından, tutma şişesine taze maya macunu içeren yeni bir üzüm plakası yerleştirin.Ekili üzüm plakasındaki tüm larvaları bir disseksiyon probu kullanarak temizleyin ve atın. Temizlenen üzüm plakalarını standart koşullarda dört saat boyunca inkübe edin. Dört saat sonra, her suştan üzüm plakalarından 100 adet L1 veya birinci evre larva seçin ve bunları besiyeri plakalarına yerleştirin.Larvaları, besini delmeden ve larvaları gömmeden nazikçe besinin üzerine yerleştirin. Her seferinde onlu larva grupları alınarak yerleştirilebilir. Larvaları besin plakasına yayarak sıkışıklığı önleyin.Besiyeri plaklarını, test hayvanlarının gezinme başlangıcından on saat öncesine kadar inkübe edin; bu aşamada larvalar, pupa olma alanı aramak için besiyerini terk ederler. Burada görebileceğiniz üzere, larvalar gezinmeye başlamışsa ve Petri kabının kapağı üzerinde hareket ediyorlarsa, hayvanlar test için çok yaşlıdır ve gelişim sürelerinin yeniden değerlendirilmesi gerekir. Mayayı su içerisinde bir-iki oranında çözün.Hazırlanan macunun damladığından ve yüzeyde hızla eriyen şeritler bıraktığından emin olun. Markalar, maya partileri ve ortam arasındaki değişkenlik nedeniyle, maya macununun doğru kıvamının değerlendirilmesi, tam oranın kullanılmasından daha önemlidir. Bir resim fırçasıyla, larvaları ilk suşun besiyeri plağından nazikçe toplayın.Larvaları bir Petri kabında toplayın ve tüm yem kalıntılarını temizlemek için larvaları suyla nazikçe yıkayın. Larvaları hızlıca iki mililitre su ile yıkayın ve bir laboratuvar mendiliyle nazikçe kurulayın. Stresi önlemek için larvaları nemli bir ortamda tutun ancak suyun içine daldırmayın.Üç test plağını yan yana dizin ve her bir test plağı için beş dakikalık bir zamanlayıcı ayarlayın. Test plaklarının üzerine maya pastası sürün ve her bir test plağında tüm kuyucukların eşit bir maya tabakasına sahip olması için yayma çubuğunu kullanarak ince bir maya pastası tabakası yayın. Her bir kuyucuğun merkezine nazikçe bir larva yerleştirin.Her plakadaki ilk larvaları yerleştirdikten hemen sonra beş dakikalık zamanlayıcıyı başlatın. Ardından geri kalan larvaları diğer kuyucuklara yerleştirin. Her kuyucuğun üzerine bir Petri kabı kapağı kapatın.Zamanlayıcı sona erdiğinde, larvaları plakadan çıkarmadan kalıcı bir marker kullanarak mayalar üzerinde bıraktıkları yol uzunluklarını takip etmeye başlayın. Yol uzunluklarını, larvaların plakalara yerleştirilme sırasına ve hızına uygun olarak çizin. Son olarak, larval yol uzunluğu testi adımlarını her suş için tekrarlayın.Üç ardışık test günü boyunca toplanan veriler, rover'ların sitter'lara göre daha fazla mesafe katettiğini ve belirgin bir suş etkisi olduğunu ortaya koymuştur. Suş etkisinin yanı sıra, testten önce dört saat boyunca aç bırakılan larvaların katettiği yol uzunlukları, beslenen larvalara göre anlamlı derecede daha düşüktü. Genel olarak, her iki suş yüksek besinli gıdalarla yetiştirildiğinde, düşük besinli gıdalarla yetiştirilenlere kıyasla yol uzunlukları daha fazlaydı.Doğru şekilde uygulandığında bu analiz, tek bir kişinin dört saat içinde 500 larva kadar örneği kolayca test etmesine olanak tanır ve bu da yöntemi geniş ölçekli fenotipleme için değerli kılar. Az önce gösterdiğimiz prosedür izlenerek; cinsiyet, gıda yoksunluğu veya gıda kalitesi gibi diğer değişkenlerin, gıdayla ilişkili hareket kalıpları üzerindeki etkisini göstermek için testler yapılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, davranışlardaki bireysel farklılıklara genetik ve çevresel katkıların değerlendirilmesi amacıyla Drosophila larvalarının gıdayla ilişkili lokomosyonunun nasıl ölçüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

foraging-path-length-protocol-for-drosophila-melanogaster-larvae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Drosophila larvaları tat ödül ile koku uyaranlara ilişkilendirmek edebiliyoruz. Burada iştahlı çağrışımlı koku öğrenme analizine olanak sağlayan bir basit davranışsal paradigma tarif.

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Bilim adamları, farklı deneysel koşulların sineklerin ömrünü nasıl etkilediğini ölçmek ve deneysel sonuçları ölçmek için süreçte hayatta kalma eğrileri oluşturmak için Drosophila yaşam süresi protokolünü kullanır. Numune protokolü, değişen konsantrasyonlarda endokrin bozucu kimyasallara veya 17-α-etinilestradiol (EE2) gibi EDC'lere maruz kalmanın uzun ömür üzerindeki etkilerini incelemek için uygulanan testi içerir.

Drosophila melanogaster için Yaşam Süresi Protokolü: Sinek Uzun Ömürlülüğündeki Farklılıkları Belirlemek için Hayatta Kalma Eğrileri Oluşturma

Bu videoda, genel hareket kabiliyetlerini değerlendirmek için serbestçe yürüyen sineklerin nasıl izleneceği açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol, video izleme yazılımı kullanarak tahlilin kurulumunu ve veri analizini gösterir.

Serbestçe Yürüyen Sineklerin İzini Sürmek: Drosophila'da Hareketi Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

Drosophila melanogaster larvaları besleme devresi besleme hızındaki değişimler stomatogastric sinir devresi değişiklikler ile korelasyon sağlayan bir basit ama güçlü bir model oluşturuyor. Bu devre, ağız kanca projeksiyonlar hem de foregut göndermek merkezi serotonerjik nöronların oluşmaktadır.

Içinde larvaların Devre Fonksiyonel Analiz Drosophila</i

Drosophila melanogaster gibi spontan lokomotor aktivite gibi davranışları etkileyen genetik veya çevresel manipülasyonlar okuyan yararlıdır. Burada kızılötesi ışınları ve spontan lokomotor aktivitesini ölçmek için veri analiz yazılımı ile monitör kullanan bir protokol açıklar.

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila larva davranış nöral kontrolünü incelemek için güçlü bir model sistem. Bu yayın, tekrarlanan tarama davranışı sırasında, larva yapılarının dinamik ölçmek için lineer tarama ve yöntemler sürekli nöbetleri ortaya çıkarmak için, doğrusal agaroz kanallarının kullanımını tarif eder.

Doğrusal Agaroz Kanallar kullanarak Okuyacak<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva Tarama Davranış

Bu protokol, Drosophila'nın embriyodan yetişkine kadar her gelişim aşamasındaki canlılığını değerlendirmek için tasarlanmıştır. Yöntem, farklı genotiplerin veya büyüme koşullarının canlılığını belirlemek ve karşılaştırmak için kullanılabilir.

Drosophila Melanogaster'In Embriyodan Yetişkine Canlılığını Değerlendirmek Için Doğrudan ve Basit Bir Yöntem

Bu protokol, Drosophila melanogaster kullanılarak şeker açığa çıkarılan arama davranışını kaydetmek için davranışsal bir testi açıklar. Test, beslenme ve yiyecek arama ile ilgili davranışların yanı sıra altta yatan nöronal mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.

Drosophila'da Şeker Kaynaklı Yerel Arama Davranışının İzlenmesi

Burada, pupa evresinde Drosophila bacağının uzun süreli canlı görüntülenmesi için pupariumun tamamen çıkarılmasını içeren bir protokol sunulmaktadır. Bu protokol diğer dokulara da uygulanabilir.

Puparium çıkarıldıktan sonra Drosophila pupa bacak gelişiminin uzun süreli canlı görüntülenmesi

Öğrenin Drosophila melanogaster larvalarında yiyecek arama davranışını ölçme yöntemini. Bu hızlı ve tekrarlanabilir analiz, genetik ve çevresel faktörlerin davranışsal farklılıklara katkısını değerlendirmek için büyük örneklem boyutlarına olanak tanır.

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü

Daha fazla video keşfet