Name: Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Öğrenin farelerde prostat mikro-diseksiyon ve cerrahi kastrasyon yöntemlerini. Bu teknikler hormon etkilerini ve prostat kanseri gelişimini tek tek bezlerde incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yazıda bazı rakamlar cömertçe Bart O. Williams laboratuvar tarafından sağlanmıştır. Yazarlar U54CA143803, CA163124, CA093900 VE CA143055 Ulusal Kanser Enstitüsü tarafından verir desteklenir.

Bu protokol karşılar ve Johns Hopkins Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara uyar. 1. Fare Prostat Mikro diseksiyon <ol><li> Karbondioksit boğulma ya da kurumsal hayvan bakımı ve kullanım yönergelerine uygun bir alternatif onaylı yöntemle fare Euthanize. </li><li> Dört bacak her aracılığıyla bir iğne koyarak bir diseksiyon kurulu bir yatar pozisyonda fare sabitleyin. </li><li> % 70 etanol ile karın püskürtün. </li><li> forseps ile alt karın cildi tutun ve deri yoluyla kesilmiş ve herhangi bir organ kesmek için dikkatli penis açılması, yaklaşık 1 cm anterior periton için makas kullanın. </li><li> periton boşluğuna açığa alt karın, göğüs kafesi karın kadar her iki taraftan deri ve periton kesip. </li><li> mesane ve ürogenital yolu belirlemek ve yavaşça yanına yağ ve diğer organları hareket ettirerek maruz bırakmaktadır. </li><li> using forseps, kavrama üretra yakın üssünde vas deferens ve uzak gözyaşı. </li><li> ters vas deferens ile tekrarlayın. </li><li> Aynı anda mesane ve ventral prostatın (mesane tabanının altında yaklaşık 1 cm) altında üretra yoluyla kesmek için makas kullanırken, dikkatli, mesane kavrama forseps kullanarak ve yukarı doğru çekin. Not: Mesane çekti gibi, tüm ürogenital sistem (içeren mesane, üretra, tüm prostat loblar ve seminal vezikül bir bölümü) onunla gelecektir. Bazı direnç olabilir. </li><li> 5-10 ml fosfat tamponlu tuz (PBS) ihtiva eden bir 60-100 mm Petri kabı içine ürogenital sistem (UGT) koyun. </li><li> Bir diseksiyon mikroskobu altında protokolün kalan kısmını gerçekleştirin. İki ince forseps, her el birini kullanın. &quot;Bir kalem gibi&quot; forseps tutun ve onları sakinleştirmeye şekilde tezgah üstünde Dirseklerinizi bekletin. </li><li> Mesane olduğunu UGT gibi konumlandırmak için ince forseps kullanınüzerine, idrar yolu basılı işaret edilmektedir, ve seminal veziküller mesane her iki tarafında konumlandırılmıştır. </li><li> Kavrama bir forseps ve dikkatle ile üretra herhangi bir prostat dokusunu uzak yırtmadan diğer forseps ile uzak yağ çekin. Not: Yağ çevre dokuya &quot;parlak&quot; göreli görünecektir. </li><li> yağ çıkarıldıktan sonra, prostat iki ventral lobları arasındaki bağ dokusunu gözyaşı ve onları ayırmak için forseps kullanabilir. </li><li> Ventral lobları birini kaldırmak ucuna yakın kavrama tek bir ventral lobu bir forseps kullanabilir ve kavrama diğer forseps kullanmak için mümkün olduğunca üretraya yakın üssünde lob. hala lobun tabanını sıkarken, kavrama diğer forseps üretra kullanın. Bir firma, düzgün hareket ile uzak üretradan lob çekin. olmamasına dikkat prostat dokusu üretra bağlı kalır emin olun. Bir sonraki deneysel aşamada bağlı olarak uygun ortama lob yerleştirin. <ol><li> düzeltmek ve s parafin gömmek içinbol histolojik analiz için% 10 nötr tamponlu formalin (NBF) 8 lob yerleştirin. </li><li> Dondurulması için, OKT gibi orta, dondurma ve 8 kesit içinde lob yerleştirin. </li><li> Kültür için tek bir hücre izolasyonu için soğuk PBS lob yerleştirin veya 9 akım sitometri. </li></ol></li><li> diğer ventral lobu ile adımı yineleyin 1.15. </li><li> Emin seminal vezikül delmek değil yapım yavaşça seminal vezikül gelen lob çekmek için forseps kullanabilir, ön lob birini kaldırmak için. lob seminal vezikül bağımsız sonra, adım 1.15 ventral lob aynı şekilde çıkarın. </li><li> diğer ön lob ile adımı yineleyin 1.17. </li><li> dorsal prostat görünür şekilde üzerinde kalan ürogenital yolu çevirin. </li><li> İki dorsolateral lob ve ayrıca loblar ve t arasındaki bağ dokusu arasındaki bağ dokusu gözyaşı forseps kullanabilir, dorsolateral lob birini kaldırmak içinO seminal vezikül posterior bölgeye. Adım 1.15 ventral lob olarak benzer bir şekilde lob çıkarın. </li><li> diğer dorsolateral lob ile adımı yineleyin 1.20. </li></ol> 2. Cerrahi Hadımlaştırma Not: Bu bir hayatta kalma ameliyat, bu nedenle asepsi, anestezi ve ağrı yönetimi, bu protokolün etik ve başarılı bir şekilde tamamlanması için önemlidir. tüm kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı yönergeleri izleyin. hipotermi önlemek için cerrahi işlem sırasında, böyle bir çevrimli su battaniye gibi harici ısı kaynağı kullanın. sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin. cerrahide Kullanmadan önce tüm cerrahi aletler otoklav. <ol><li> Temiz, steril bir yüzey üzerinde uygun önlemleri (örneğin% 2 inhale izofluran) kullanarak fare uyutmak ve m konumlandırmakBir yatar pozisyonda ouse. Not: ketamin gibi alternatif anestezi yöntemleri, de kullanılabilir, onaylanmış hayvan protokolüne göre. </li><li> ayak kısma farenin refleksleri kontrol edin. Fare tepki vermezse, bir sonraki adıma geçin. o tepki vermezse, 1-3 dakika bekleyin ve tekrar kontrol edin. Bir elektrikli tıraş makinesi ile cerrahi alan tıraş. </li><li> Aseptik kurumsal veteriner personel veya IACUC tarafından önerilen% 70 etanol ve iyot veya prosedürlerin alternatif scrubs kullanarak fare karın hazırlar. </li><li> Steril bir neşter kullanılarak, penise, alt karın orta hattında yaklaşık 1.5 cm ön deri yoluyla 1 cm dikey bir kesi yapmak. </li><li> Dikkatli herhangi organları kesmek için değil, periton içinden küçük bir kesi (&lt;1 cm) olun. </li><li> Steril forseps, kavrama periton kesim kenarı kullanılarak ve altındaki periton boşluğuna görmek mümkün olacak şekilde yavaşça yukarı kaldırın. </li><li> başka bir steril forseps kullanarak, th içine ulaşmake mesaneye yanal periton boşluğu ve kavrama ya sol ya da sağ testis yağ yastığı. Testis yanı çıkana kadar periton ve deride açıklıktan yağ yastığı çekin. Bu adımı sırasında başka doku veya organ zarar vermemek için dikkatli olun. </li><li> Bir koter kalemini kullanarak, testis tutan yağ yastığı kesti. koter kalem Not testis arter yoluyla yavaş yavaş Cut: testiküler arter çok hızlı kesilirse, orada çok fazla kanama olabilir ve fare ötenazi gerekebilir. </li><li> yağ yastığı ve arter kesilir sonra, testis ve yağ yastığı çıkarın. </li><li> Dier testisli 2,6-2,9 adımları. Not: Testis kaldırılması için alternatif bir yöntem, cerrahi makas ile kap kesme ardından testis arter bağlanması için olan. </li><li> Periton emilebilir sütür ile kapatılır dikin. </li><li> Zımba cilt cerrahi yara klipleriyle kapatılmıştır. </li><li> ağrı yönetmek için bir ağrı kesici yönetme ve yer5-10 dakika sıcak bir kafes temiz bir kafeste fare. ağrı veya kanama belirtileri için fare izleyin. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Impot+Res%22%5BJournal%5D)">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238(2011).</li>
<li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice%3A+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li>
<li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li>
<li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li>
<li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Wnt%2Fbeta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li>
<li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li>
<li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men--warning%3A+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li>
<li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li>
<li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+genetics+of+prostate+cancer%3A+new+prospects+for+old+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Prostat mikro diseksiyon lob özel deney ve fare prostat analizi (Şekil 1) sağlar. genetiği değiştirilmiş fare modellerinde, fenotipleri diğerlerinde görülmez bir lobun görülebilir. Ayrıca, histolojik analiz için, bu protokol, saf prostat dokusunun maksimum miktarı bölümünde mevcut olan diğer ürogenital sistem doku olmadan kesitli ve lekeli edilebilir olmasını sağlar. Son olarak, tek hücreli deneyler için, bu protokol hemen hemen saf prostat hücrelerinin izolasyonu sağlar. Epitel hücre zenginleştirme kit...

Prostat ABD&#39;de erkeklerde en sık görülen kanser sitedir. Her yıl prostat kanseri tanısı olacak yaklaşık 220.000 erkek ve yaklaşık 27.000 erkeklerin hastalığa 1 yenik düşer. Erkekler ABD 1 bir prostat kanseri tanısı 1 7 ömür boyu riski vardır. İyi huylu prostat hiperplazisi (BPH), prostat yaşla ilgili bir noncancerous genişleme, 80 2 üzerindeki erkeklerin% 80 üzerinde etkileyen, aynı zamanda yaygın bir durumdur. Bu nedenle, prostat önemli araştırmaların odak noktasıdır. Fare model prostat 3 hastalıklar çalışma yaygın olarak kullanılmaktadır. Genel olarak, fare prostat insan bezinin 4 mükemmel bir temsilcisidir, fakat benzerlikler ve fare ve insan prostat anatomisi ve fizyolojisi 5 arasında farklar vardır. Her iki türde de, prostat üretra çevresindeki, mesane tabanında yer almaktadır. insan prostat bezi, tek bir lomerkezi, geçiş, periferik ve ön fibromusküler stroma: dört bölgeye ayrılmıştır olmak. anterior, ventral ve dorsolateral: aksine, fare prostat üretra etrafında farklı pozisyonlarda üç eşli lob oluşmaktadır. Hücresel seviyede, temel fark insan lümen hücre oranı bazal hücreli 1 olmasıdır: 1, fakat 1: Farelerde 6 4. fare stroma da insanlara göre farelerde farklı - kas tabakası fare prostat daha incedir iken insanlar, daha kapsamlı düz kas vardır. Fare prostat uygun bir şekilde tanımlanması, diseksiyon ve taşıma fare prostat araştırma için gereklidir. Hormon düzeyleri ölçüde hem insanlarda hem farelerde prostat bezinin gelişim ve homeostazis etkiler. Östrojen prostat gelişiminde 7&#39;de bir rol oynadığı gibi görünüyor olsa da, prostat en önemli hormonu testosteron olduğunu. Testosteron glandüler gelişimin için gereklidird bakım. ya fiziksel ya da kimyasal hadım etme sonra, yaklaşık 90 yetişkin prostat apoptoz luminal hücrelerin% ve bez küçülür. Testosteron hadım etme koşulları altında bir bireye yeniden ortaya çıkar, prostat tam kapasite kendini yeniden edebilmektedir. Testosteron ayrıca androjen baskılayıcı tedavi yaygın olarak kullanılan tedavi stratejisi neden olan prostat kanseri, sürücü görünüyor. Ancak, birçok prostat kanseri androjen yoksunluğu dayanıklı hale gelir. Buna ek olarak, prostat kanserinin tedavisi için androjen blokaj tedavisi gören hastalarda hadım edildi ve yeniden koşulları çevrimi geçirmektedir. Fare, cerrahi kastrasyon, testosteron yeniden devreye sokarak prostatın hormonal rejenerasyon ile birlikte, kastrasyon direnci ve prostat üzerinde testosteron bisiklet etkilerini incelemek amacıyla hangi ile önemli bir araçtır. Bu yazıda tartışmak ve locat tarafından uygun teknikleri gösterecektirE ve mikro-tahlil fare prostat, hem de fare hadım cerrahi olarak.

<table><tbody><tr><td>Cerrahi aletler</td><td>Roboz</td><td>Çeşitli Formaldehit</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT orta</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Donması için kuru buz üzerine yerleştirilmeli ve -80 °C'de saklanmalıdır; C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>Ayrıca çevrimiçi satıcılardan da temin edilebilir</td></tr><tr><td>Koter Kalemi</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>İpek sütür</td><td>AD Cerrahi</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Yara Klipsleri</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

mürin prostat mikro-diseksiyon ve cerrahi kastrasyon

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Fare modelleri, prostat kanseri ve diğer hastalıkları incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Fare, prostatı incelemek için mükemmel bir modeldir ve insan prostat gelişimi ve hastalığındaki keşifler için bir vekil olarak kullanılmıştır. Prostat mikrodiseksiyonu, diğer dokuların kontaminasyonu olmadığında lob spesifik prostat anatomisi, histolojisi ve hücresel özelliklerinin tutarlı bir şekilde incelenmesine izin verir. Testosteron prostat gelişimini ve hastalığını etkiler. Androjen yoksunluğu tedavisi, prostat kanseri hastaları için yaygın bir tedavi yöntemidir, ancak birçok prostat tümörü kastrasyona dirençli hale gelir. Fare modellerinin cerrahi olarak kastrasyonu, prostat üzerindeki kastrasyon direncinin ve hormonal biyolojinin diğer yönlerinin incelenmesine izin verir. Bu prosedür, prostattaki kök hücre soylarını incelemek için güçlü bir yöntem olan testosteronun yeniden eklenmesi veya prostatın hormonal rejenerasyonu ile birleştirilebilir. Prostat mikrodiseksiyonu ve cerrahi kastrasyon birlikte, prostat gelişimi ve hastalığının sağlam ve tutarlı bir şekilde araştırılması için çok sayıda fırsat sunar. Bu yazıda laboratuvar faresinde prostat mikrodiseksiyonu ve cerrahi kastrasyon protokolleri anlatılmaktadır.

Altı prostat lobları prostat mikro diseksiyon yoluyla bir fare (Şekil 1) çıkarıldı. Tam ürogenital sistem (UGT) tüm prostat loblar, mesane, seminal veziküller ve üretra (Şekil 1a) oluşmaktadır. Vaz deferens üretra verdiği, ancak prostat mikro diseksiyon için gereksizdir ve böylece idrar yolu (Şekil 1b-1c) keserek UGT sökülmeden önce ayrılabilir. Ürogenital sistem birlikte kalacağız kez karın (Şekil 1d) kaldırılır olacakt...

Bu el yazması laboratuvar fare prostat mikro diseksiyon ve cerrahi kastrasyon için protokolleri açıklar. Biz de bu protokoller tarafından üretilen temsilcisi sonuçları tasvir. Son olarak, biz avantaj ve bu protokollerin kullanımını tartışmak.

Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Bu prosedürlerin genel amacı, farelerde prostatın yanı sıra farklı hormonal durumların incelenmesine olanak sağlamaktır. Bu yöntem, hormon yoksunluğunun prostat karsinojenezi üzerindeki etkileri gibi prostat kanseri alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, çeşitli patolojik süreçlerin ve hormonal değişimlerin etkilerinin münferit prostat bezlerinde incelenebilmesidir.İşe, bir fareyi her patisinin ayak tabanından iğneleyerek sırt üstü pozisyonda bir diseksiyon tahtasına sabitleyerek ve karnına %70 ethanol püskürterek başlayın. Ardından, alt karın derisini pensle tutarak, penis açıklığının yaklaşık bir santimetre anteriorundan deri ve peritonyumu makasla kesin. Deri ve peritonyumu alt karından karnın her iki yanından göğüs kafesine kadar kesmeye devam ederek periton boşluğunu açığa çıkarın.Mesane ve ürogenital kanalın (UGT) konumu belirlendikten sonra, üriner dokuları açığa çıkarmak için yağ ve diğer organları nazikçe kenara çekin. Ardından, pens kullanarak bir vas deferensi üretraya yakın tabanından yakalayın ve kanalı koparın. Diğer kanalı da çıkardıktan sonra, pens yardımıyla mesaneyi dikkatlice tutup yukarı kaldırırken, aynı anda makas kullanarak ventral prostatın altındaki üretrayı ve mesane tabanının yaklaşık bir santimetre altını kesin.Hasat edilen UGT'yi, yaklaşık beş ila 10 ml PBS içeren 60 ila 100 milimetrelik bir petri kabına aktarın ve kabı bir diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin. Ardından, her iki elinize birer adet ince pens alarak aletleri kurşun kalem gibi tutun ve kollarınızı sabit tutmak için ön kollarınızı mikroskobun her iki yanındaki tezgah üstüne yaslayın. UGT'yi penslerle; mesanenin yukarı baktığı, üretranın aşağıyı gösterdiği ve seminal veziküllerin mesanenin her iki yanında konumlandığı şekilde yerleştirin.Üretrayı bir forsepsle kavrayın, diğer forsepsi kullanarak prostat dokusunu çıkarmadan yağ dokusunu dikkatlice sıyırın. Tüm yağ dokusu uzaklaştırıldığında, prostatın iki ventral lobunu ayırmak için aradaki bağ dokusunu yırtın. Ardından, ventral loblardan birini uç kısmından bir çift forsepsle tutarken, lobun tabanını üretraya mümkün olduğunca yakın bir noktadan kavrayın.Şimdi, lobu damardan sıkı ve pürüzsüz bir hareketle uzaklaştırırken üretrayı sabitlemek için diğer forseps çiftini hareket ettirin. Üretraya yapışık prostat dokusu kalmadığını doğrulayın. Ardından, lobu bir sonraki deneysel adıma göre uygun ortama yerleştirin.Diğer ventral lobu aynı şekilde izole ettikten sonra, seminal vezikülü delmemeye dikkat ederek, pens yardımıyla anterior loblardan birini seminal vezikülden nazikçe ayırın. Lob seminal vezikülden bağımsız hale geldiğinde, onu az önce ventral lob için gösterilen yöntemle çıkarın. İkinci anterior lobu izole ettikten sonra, kalan UGT'yi dorsal prostat görünür olacak şekilde ters çevirin ve pens kullanarak iki dorsal lateral lob arasındaki ve loblar ile seminal veziküllerin posterior bölgesi arasındaki bağ dokusunu yırtın.Ardından, az önce gösterildiği gibi, tekil dorsal lateral lobları çıkarın. Kastrasyonu gerçekleştirmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi temiz, steril bir yüzeye sırt üstü pozisyonda yerleştirerek başlayın ve uygun sedasyon seviyesini ayak parmağı sıkıştırma testiyle doğrulayın. Fare tepki vermiyorsa, cerrahi alanı tıraş etmek için elektrikli tıraş makinesi kullanın ve abdomen bölgesini sterilize edin.Ardından, penisinin yaklaşık bir buçuk santimetre anteriorunda, alt karın bölgesinin orta hattındaki deride steril cerrahi makas kullanarak bir santimetrelik dikey bir insizyon yapın ve herhangi bir organı kesmemeye dikkat ederek periton boyunca daha küçük bir insizyon daha gerçekleştirin. Periton boşluğunu görüntülemek için steril pens kullanarak peritonun kesilen kenarını nazikçe kaldırın ve testisler görünene kadar steril başka bir pensle testiküler yağ yastıklarından birini dışarı çekin. Daha sonra, testiküler arter kesilene kadar testisleri tutarak, koter kalemi ile yağ yastığını yavaşça kesin.Arter çok hızlı kesilirse, damardan aşırı kanama meydana gelebilir ve bu durum farenin ötanasya edilmesini gerektirebilir. Koter kaleminin kısa aralıklarla ısıtılmasını, aşırı ısınmasına izin verilmemesini ve ardından hayvanın kan kaybından ölmemesi için enstrümanın arter boyunca yavaşça hareket ettirilmesini öneririm. Yağ yastığı ve arter kesildikten sonra, testisleri ve yağ yastığını atın ve kastrasyon işlemini diğer testis için tekrarlayın.İkinci testis çıkarıldıktan sonra, peritonu steril ipek sütürlerle kapatın ve cildi cerrahi yara klipsleri ile zımbalayın. Ardından, ağrıyı yönetmek için analjezi uygulayın ve fareyi, tamamen iyileşene kadar izleyerek 5 ila 10 dakika boyunca bir kafes ısıtıcısı üzerinde, temiz bir kafese yerleştirin. Tüm ürogenital sistem; altı prostat lobunun tamamından, mesaneden, seminal veziküllerden ve üretradan oluşur.Vas deferens üretraya bağlanır, ancak prostat mikro-diseksiyonu için gerekli değildir ve bu nedenle UGT çıkarılmadan önce ayrılabilir. Ürogenital kanal karından çıkarıldığında bütün halde kalacaktır; prostat loblarına erişmek için temizlenmesi gereken yağ dokusu ile kaplıdır. Bu temsili deneyde, kastrasyonu iki hormonal rejenerasyon döngüsü takip etmiş ve serumdaki testosteron seviyeleri ELISA ile izlenmiştir.Beklendiği üzere, kastrasyon koşulları altında testosteron seviyeleri neredeyse tamamen ortadan kalktı. Seçici bir östrojen reseptör modülatörü olan tamoksifen varlığında, hormonal olarak normal durumla kıyaslandığında anlamlı bir fark gözlemlenmedi. Ancak kastrasyon sonrası testosteronun yeniden verilmesi, serum testosteron seviyelerinde dramatik bir artışa neden oldu.Mikrodiseksiyon sonrası, kastre edilmiş farelerin prostat lobları önemli ölçüde küçülmüşken, testosteron tedavisi uygulanmış hayvanların lobları orijinal boyutlarına geri döner. Ayrıca; normal, kastre edilmiş ve rejenerasyon durumlarındaki ön prostat dokusunun hematoksilen ve eozin boyaması, kastre edilmiş hayvanlardan alınan kesitlerde güçlü doku büyümesinde çarpıcı bir azalma olduğunu ortaya koyar. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, işlem düzgün bir şekilde gerçekleştirilirse fare başına beş dakikada tamamlanabilir.Kısırlaştırma işlemi uygulanırken, her şeyin steril tutulması ve farenin hissettiği ağrının kontrol altına alındığından emin olunması önemlidir. Kısırlaştırmanın ardından, testosteronun prostat tümörleri üzerindeki etkilerine dair ek soruları yanıtlamak için androjen yeniden verilmesi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, prostat kanseri alanındaki araştırmacıların farelerde karsinojenezi, gelişimi ve kısırlaştırma direncini incelemelerinin önünü açmıştır.

murine-prostate-micro-dissection-and-surgical-castration

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, bir erkek fare modelinden ürogenital sistem veya UGS'nin diseksiyonu prosedürünü açıklıyoruz. Bu UGS, prostat bezini izole etmek ve prostat kanseri gelişimindeki rolünü incelemek için ex vivo olarak daha da diseke edilir.

Fare Ürogenital Sisteminden Prostat Çıkarılması: Erkek Farede Prostat Bezini Diğer İdrar ve Genital Sistem Organlarından Ayırma Tekniği

Bu videoda, prostat kanseri hücrelerinin bir fare modeline intra-prostat enjeksiyonu uygulama prosedürünü gösteriyoruz. Ortotopik murin modelleri, non-invaziv ve klinik olarak ilgili bir ortamda hastalığın kökenini ve tedavi tedavilerine yanıtı incelemek için kullanılabilir.

Kanser Hücrelerinin İntraprostat Enjeksiyonu: Ortotopik Prostat Kanseri Fare Modeli Oluşturmak için Kanser Hücreleri Verme Tekniği

Bu videoda, adenovirüs tabanlı bir dağıtım sistemi kullanarak prostat bezi hücrelerindeki belirli genleri düzenlemek için bir yöntem açıklanmaktadır. Yaklaşım, prostat kanseri için yeni fare modelleri geliştirmek için CRISPR teknolojisini kullanarak gen ekspresyonunun ortotopik ve lokalize değiştirilmesine izin verir.

Genetik Olarak Tasarlanmış Fare Modellerinde Prostat Kanserinin Modellenmesi: Fare Ön Prostat Lob Hücrelerinde CRISPR/Cas9 Aracılı Lokalize Gen Düzenleme Tekniği

Insan prostat kanser ortotopik bir model akciğer tümör hücreleri ve farklı metastaz oluşumu dolaşan tümör boyutu ölçümü sağlar. Hücreler birincil organı kaçmak gerekir gibi, kan dolaşımına girerek, ve bir ikincil site içine implant, bu modeli etkin insanlarda senaryo tartışıldı.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

Bu iletişim kuralı, prostat kanseri hücreleri, sonraki kastrasyon içi Prostatik enjeksiyon göstermek için hedeftir. Orthotopic önceden klinik androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri hastalığı klinik tümör microenvironment ve immün bir ana bilgisayar bağlamında incelemek için kritik modellerdir.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Böbrek yapıları doku Mühendisliği zararlı etkileri diyaliz ve organ sıkıntısı için bir çözüm sağlar. Burada, bir protokol mikro tarif yalıtım kortiko-medüller segmentleri için fare böbrekler incelemek. Bu segmentler oluşturan böbrek organoids iskele-Alerjik Hücresel yapıları implante edilir.

Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Bu iletişim kuralı virüs teslim edilmek üzere fare prostat yeni kurulan bir yöntem açıklanır. CRISPR/Cas9 teknolojisi, gen overexpression veya Cre recombinase teslim kullanarak, teknik gen ifadesinin orthotopic değişiklik sağlar ve prostat kanseri için bir roman fare modeli uygular.

Virüs gen değiştirme için fare prostat CRISPR kılavuzları teslimini

Genetik fareler prostat kanseri mekanizmaları araştıran için yararlı modellerdir. Burada bir fare ürogenital sistemden prostat loblar incelemek, Histoloji üzerinde göre ayırt etmek ve yalıtmak ve pulcuklarının aşağı akım analizleri için olarak birincil Prostat hücreleri vitro kültür için bir iletişim kuralı mevcut.

Kimlik, histolojik karakterizasyonu ve için fare Vitro 3D küresel kültür modelleri prostat lob diseksiyonu

Biz prostat tümörü diseksiyon odaklanmak, fare prostat kanseri modellerinin otopsi ve diseksiyon için bir yöntem göstermektedir. Fare prostat tümörü organoidlerin oluşturulması için adım adım bir protokol de sunulmaktadır.

Prostat kanseri genetiği Işlenmiş fare modelleri tümör Organoids üretimi

Bu el yazması, hayatta kalma kemirgen orkiektomilerini ve yumurtalıklarını hızlı bir şekilde gerçekleştirmenin tutarlı bir yolunu açıklamaktadır.

Seks Hormonu Üretimini Azaltmak için Murin Orşiektomi ve Ovariektomi

Öğrenin farelerde prostat mikro-diseksiyon ve cerrahi kastrasyon yöntemlerini. Bu teknikler hormon etkilerini ve prostat kanseri gelişimini tek tek bezlerde incelemeyi sağlar.

Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon

Daha fazla video keşfet