Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon

Bu prosedürlerin genel amacı, prostatın incelenmesine ve fare içindeki değişen hormonal koşullara izin vermektir. Bu yöntem, prostat kanseri alanında, hormon yoksunluğunun prostat karsinogenezi üzerindeki etkileri nelerdir gibi önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, bireysel prostat bezlerinde çeşitli patolojik süreçlerin ve hormonal değişikliklerin etkilerinin incelenebilmesidir.

Bir fareyi her bir pençenin ayak pedi boyunca sırtüstü pozisyonda bir diseksiyon tahtasına sabitleyerek ve karına% 70 etanol püskürterek başlayın. Daha sonra, alt karın derisini forseps ile tutarak, penisin açıklığının yaklaşık bir santimetre önündeki cildi ve peritonu kesmek için makas kullanın. Cildi ve peritonu alt karın bölgesinden karnın her iki tarafından göğüs kafesine kadar kesmeye devam edin ve periton boşluğunu açığa çıkarın.

Mesane ve ürogenital sistemin veya UGT'nin yerini belirledikten sonra, idrar dokularını açığa çıkarmak için yağ ve diğer organları yavaşça yana doğru hareket ettirin. Daha sonra, forseps kullanarak, üretranın yakınındaki tabanında bir vas deferens'i kavrayın ve damarı yırtın. Diğer kanalı çıkardıktan sonra, mesaneyi dikkatlice tutmak ve yukarı çekmek için forseps kullanın, aynı anda ventral prostatın altındaki üretrayı ve mesanenin tabanının yaklaşık bir santimetre altından kesmek için makas kullanın.

Hasat edilen UGT'yi yaklaşık beş ila 10 mililitre PBS içeren 60 ila 100 milimetrelik bir petri kabına aktarın ve çanağı bir diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. Ardından, aletleri kalem gibi tutarak her iki elinize bir çift ince forseps alın ve ön kolları sabit tutmak için mikroskobun her iki yanındaki bankın üzerine koyun. UGT'yi forseps ile, mesane yukarı bakacak, üretra aşağı bakacak ve seminal veziküller mesanenin her iki tarafına yerleştirilecek şekilde konumlandırın.

Üretrayı bir forseps ile kavrayarak, herhangi bir prostat dokusunu çıkarmadan yağı dikkatlice çekmek için diğer forseps kullanın. Yağın tamamı alındığında, prostatın iki ventral lobu arasındaki bağ dokusunu ayırmak için yırtın. Daha sonra, ventral loblardan birini bir çift forseps ile uca yakın tutarak, lobun tabanını üretraya mümkün olduğunca yakın tutun.

Şimdi, lobu sert ve yumuşak bir hareketle damardan uzaklaştırırken üretrayı dizginlemek için diğer forseps çiftini hareket ettirin. Üretraya bağlı prostat dokusu kalmadığını onaylayın. Ardından, bir sonraki deneysel adıma göre lobu uygun ortama yerleştirin.

Diğer ventral lobu da aynı şekilde izole ettikten sonra, ön loblardan birini seminal vezikülden nazikçe çekmek için forseps kullanın ve seminal vezikülü delmemeye dikkat edin. Daha sonra, lob seminal vezikülden bağımsız olduğunda, ventral lob için gösterildiği gibi aynı şekilde çıkarın. İkinci ön lobu izole ettikten sonra, dorsal prostat görünecek şekilde kalan UGT'yi ters çevirin ve iki dorsal lateral lob arasındaki ve loblar ile seminal veziküllerin arka bölgesi arasındaki bağ dokusunu yırtmak için forseps kullanın.

Ardından, az önce gösterildiği gibi tek tek dorsal yan lobları çıkarın. Kastrasyonu gerçekleştirmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi sırtüstü pozisyonda temiz, steril bir yüzeye yerleştirerek başlayın ve ayak parmağınızı sıkıştırarak uygun sedasyon seviyesini onaylayın. Fare tepki vermezse, cerrahi bölgeyi tıraş etmek ve karnı sterilize etmek için elektrikli bir tıraş bıçağı kullanın.

Daha sonra, alt karın bölgesinin orta hat derisinden bir santimetre dikey bir kesi yapmak için steril cerrahi makas kullanın, penisin yaklaşık bir nokta beş santimetre önünde, ardından peritondan daha küçük bir kesi yapın ve herhangi bir organı kesmemeye dikkat edin. Steril forseps kullanarak, periton boşluğunu görselleştirmek için peritonun kesik kenarını nazikçe kaldırın ve testisler görünene kadar testis yağ yastıkçıklarından birini çıkarmak için başka bir steril forseps kullanın. Ardından, testis arteri kopana kadar testisleri tutarak yağ pedini yavaşça kesmek için bir koter kalemi kullanın.

Arter çok hızlı kesilirse, damar çok fazla kanayabilir ve farenin ötenazi yapılmasını gerektirir. Koter kalemini fışkırtarak ısıtmanızı ve çok ısınmasına izin vermemenizi, ardından hayvanın kanamaması için aleti arterden yavaşça hareket ettirmenizi öneririm. Yağ yastığı ve arter kesildikten sonra, testisleri ve yağ yastığını atın ve diğer testisler için kastrasyonu tekrarlayın.

İkinci testisler çıkarıldıktan sonra, peritonu steril ipek dikişlerle kapatın ve cildi cerrahi yara klipsleri ile zımbalayın. Daha sonra, ağrıyı yönetmek için analjezi uygulayın ve fareyi tamamen iyileşene kadar izleme ile 5 ila 10 dakika boyunca temiz bir kafese, bir kafes ısıtıcısına yerleştirin. Tam ürogenital sistem, altı prostat lobunun tümünden, mesaneden, seminal veziküllerden ve üretradan oluşur.

Vas deferens üretraya bağlanır, ancak prostat miro-diseksiyonu için gereksizdir ve bu nedenle UGT'nin çıkarılmasından önce ayrılabilir. Ürogenital sistem, karından çıkarıldıktan sonra sağlam kalacaktır; prostat loblarına erişim sağlamak için çıkarılması gereken yağ dokusu ile kaplıdır. Bu temsili deneyde, kastrasyonu iki hormonal rejenerasyon döngüsü izledi ve serumdaki testosteron seviyeleri ELISA tarafından izlendi.

Beklendiği gibi, kastrasyon koşulları altında, testosteron seviyeleri neredeyse ortadan kayboldu. Seçici bir östrojen reseptör modülatörü olan tamoksifen varlığında, hormonal olarak normal durumda önemli bir fark gözlenmemiştir. Bununla birlikte, kastrasyondan sonra, testosteronun yeniden girişi, serum testosteron seviyelerinde dramatik bir artışa neden oldu.

Mikro diseksiyondan sonra, hadım edilmiş farelerin prostat lobları önemli ölçüde azalırken, testosteron ile tedavi edilen hayvanların lobları orijinal boyutlarına geri döner. Ayrıca, normal, hadım edilmiş ve rejenere koşullar altında ön prostat dokusunun hematoksilen ve eozin boyanması, hadım edilmiş hayvanlardan alınan kesitlerde sağlam doku büyümesinde dramatik bir azalma olduğunu ortaya koymaktadır. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, düzgün bir şekilde gerçekleştirilirse, fare başına beş dakika içinde tamamlanabilir.

Kastrasyonu denerken, her şeyi steril tutmayı unutmamak ve farenin hissettiği acıyı kontrol ettiğinizden emin olmak önemlidir. Kastrasyonun ardından, testosteronun prostat tümörleri üzerindeki etkileri hakkında ek soruları yanıtlamak için androjen yeniden yerleştirme gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik prostat kanseri alanındaki araştırmacıların farelerde karsinogenez, gelişme ve kastrasyon direncini keşfetmelerinin yolunu açtı.