Name: Diseksiyon ve Threespine Stickleback Brankial İskelet Düz montaj (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Öğrenin üç dikenli püsküllü balığın brankiyal iskeletini diseke etme ve düz montaj yapma yöntemini. Bu teknik gelişim, genetik ve evrimsel biyolojideki trofik özellikleri görselleştirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen NIH R01 #DE021475 CTM ve NAE'ye NSF Lisansüstü Araştırma Bursu tarafından finanse edilmiştir. Görüntüleme konusundaki yardımları için Miles Johnson'a ve el yazmasının eleştirel okuması için Priscilla Erickson'a teşekkür ederiz.

Tüm balık çalışmaları California-Berkeley Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (protokol numarası R330) tarafından onaylandı. Ötenazi% 0.1 sodyum bikarbonat 39 ile tamponlanmış% 0.025 Tricaine-S daldırma kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Bütün aşamalar oda sıcaklığında gerçekleştirilir. 1. Hazırlık Not: sıkıca kapatabilir ve yatay döşenebilir konik tüpler veya sintilasyon şişeleri adımları 1.1-1.5 gerçekleştirin. Balıklar sürekli sarsılmış olması gerekir, fakat nazikçe tersini veya boyama çözeltisine balık her tarafını ortaya çıkarmak ve leke eşit dokuya nüfuz sağlamak için tüpler veya şişelere raf sallayarak mümkün olduğunca sık çözüm karıştırmak kalkmayın. sıvı ağır çalkalayıcı kıracak gibi bir çalkalama platformunda balık büyük bir toplu koymayın. <ol><li> gece boyunca,% 10 nötral tamponlu formalin (NBF), etanol içinde depolanmış ya da taze ötanazi balık ya da balık düzeltildi. Alternatif olarak,% 4 paraformaldehid kullanımı1x PBS çözeltisi yerine% 10 NBF aldehit. Not: DNA ayıklanması ise, etanol içinde fiksasyon ve saklamak için önce kuyruk veya göğüs yüzgeçleri küçük bir bölümünü klibi. </li><li> 2 saat boyunca (yani ~ pH 7.0) kimyasal bir kaput düzgün düzeltmenin atınız ve musluk suyu ile değiştirin. genellikle, asidik olabilir ve kemik kirecini gibi de-iyonize su kullanmayın. </li><li> 24 saat boyunca su içinde% 1 KOH% 0.008 Alizarin Kırmızısı S su ve leke balık çıkarın. Balık az 20 mm standart uzunluk için% 0.004 Alizarin Kırmızı S. (daha sonra seyreltilmiş olabilir Alizarin Kırmızı S 100x (% 0.8) stok solüsyonu olun) kullanın. </li><li> Bir kaç saat musluk suyunda leke (başlık uygun çöp bidonuna koyarak) ve yer balık çıkarın. su ile durulama çoğunlukla netleşene kadar gerektiği gibi suyu değiştirin. </li><li> % 50 gliserol, hafif takas ve sonraki diseksiyon için% 0.25 KOH içine su ve yer balık çıkarın. Not: Bu boyama protokolü daha önce tarif edilen yöntemler 40,41 modifiye edilir. </li></ol><pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. teşrih Not: İlgili kafa iskelet morfolojisi bir inceleme için Şekil 1&#39;e bakınız. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig1.jpg" /> Şekil 1:. Stickleback kafa iskelet morfolojisi Alizarin Kırmızı bir rodamin B filtre kümesi altında floresan ile görüntülenmiş threespine dikenli kafasını boyandı. Faydalı morfolojisi etiketlenmiştir: Op = opercle, Subop = suboperkülün, BSRs = branchiostegal ışınları, Ameliyat öncesi = preopercle, Infraorb 1-3 = infraorbital 1-3 (diğer adıyla circumorbitals veya suborbitals), Dent = dentary, PREMAX = premaxilla, Max = maksilla Nas = burun, Lat. ethm = yanal etmoid, Psph = parasphenoid, Fron = frontal kemik. Dikenli kafa iskeletinin daha ayrıntılı bilgi için (1974) 31 Anker bkz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig1large.jpg" target="_blank">Büyük halini görmek için tıklayınız</a>bu figür. <ol><li> Balık düz (Şekil 2A) Lay ve göz kapsayan membran delinme için ~ 45 ° &#39;lik açıyla gözün yan içine keskin 5. saatçilik forseps yerleştirin. </li><li> Uzak bir yoğurt kapağı (Şekil 2B) soyma benzer göz, gelen membran soyun. </li><li> Gözün arkasındaki açık forseps yerleştirin gözün arkasındaki optik sinirin tutunmasını ve göz (Şekil 2C) çıkarın. o melanin sızıntısı gibi göz delmeyin. delinmiş ise, melanin sonraki adımlarda sırasında uzak yıkanabilir. </li><li> diğer tarafta tekrarlayın. </li><li> Posterior itibaren opercle flep altında küçük bir diseksiyon makas bıçak yerleştirin sürükleme makas bıçak dorsal opercle üstünde, daha sonra göz soket (Şekil 2B) aracılığıyla yumuşak dokuyu kesti. opercle kemiğe dorsal kesin. </li><li> Frontal kemik (göz soket dorsal) (Şekil 2E) kesin. </li><li> t etrafında orta hat parasphenoid kemik kesmekgöz çukurları (Şekil 2F) o merkezi. </li><li> Rakip tarafta tekrarlayın opercle kesti. </li><li> Opercle altında forseps yerleştirin ve yavaşça hala (Şekil 2G - H) bağlı herhangi bir yumuşak doku kırparak, vücuttan uzak yüzünü soymak. solungaç diken ilk satırı bozmak için özen gösterin. <ol><li> Dış dermal opercle, preopercle, suboperkülün dahil olmak üzere tüm hyoid iskeleti ve; forseps ile, uzak soyulması ve ön kraniofasyal iskelet (dentary, premaxilla ve maksilla dahil olmak üzere tüm çene çıkarırken orta hat basihyal gelen her iki tarafta ceratohyals ayırmak branchiostegal ışınları ve altta yatan dorsal ve ventral endochondral elemanları ve burun, yan etmoid dahil kafatasının ön kısmı ve infraorbital kemikler,) Şekil 1 ve 2I bakın. </li><li> Pelvik dikenler vücuttan dışarı katlanabilir ve forseps tutun o kapmak için bir tutamak olarak hizmet verebilirne zaman f mevcut. Dikenler yerine kilitleyin. Kilidi açmak için, yavaşça doğrudan uzak balık vücuttan forseps ile omurga çekin, sonra yavaşça balık karşı düz omurga basın posterior viraj. </li></ol></li><li> Ekle dışında brankiyal iskeletinin (- K Şekil 2J) bağlı kalan kasları ve bağları alay, öne ve sürükle forseps (sadece gut tüp altında) brankiyal iskeletine forseps posterior ve ventral kapattı. </li><li> Anterior yönde (Şekil 2L) bir posterior ventral braincase dorsal brankiyal iskeleti bağlama kasları kazınması, kapalı forseps ipuçlarını kullanarak. </li><li> Karşı tarafın 2.9&#39;a ve 2.10 tekrarlayın. </li><li> Bağırsak tüp tabanını kavrayın ve brankiyal iskelet ve bağırsak tüp (Şekil 2M - N) çıkarmak için öne doğru çekin. </li><li> (Beşinci ceratobranchial sonuna Şekil 2O dik kesme posterior yaparak bağırsak tüpü ayırın </strong&gt;). </li><li> Brankiyal iskeletin sırt tarafında braincase kalan kemik parçaları çıkardıktan sonra, dorsal diş plakalarının ikili kümeleri arasında dorsal kesim (posterior anterior kesme) (- D Şekil 3A) yapmak için brankiyal sepetin içine makas yerleştirin. Emin olun kesme dorsal diş plakaları zarar vermemek için ortalanır. </li><li> Brankiyal iskeleti (Şekil 3E) açılması ile yardımcı olmak için brankiyal iskeletin (bağırsak borusunun ön ucu) arka ucundaki lastik bağırsak lümeninde iki sığ yan keser. </li><li> balık ve bir kavanoza tüm doku parçaları yerleştirin ve başka temizleme gerekli ise yumuşak temizleme, ya da% 100 gliserol devam% 50 gliserol,% 0.25 KOH içeren bir mikrosantrifüj tüpü içine brankiyal iskelet yerleştirin. benzersiz bir tanımlayıcı ile etiket kavanoz ve tüpler böylece izlenebilir. Gerekli temizleme miktarı 40 m üzerinde (çoğunlukla balık, büyük bir yetişkin balık büyüklüğünün bir fonksiyonudurstandart boyda m), tipik olarak ek takas gerektirir. </li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54056/54056fig2.jpg" /> Şekil 2:. Stickleback brankiyal iskelet diseksiyonu Alizarin Kırmızı diseksiyon için threespine dikenli balık hazır boyandı. Göz geniş açıklıkta gelen depigmente edilir. Mavi oklar hareket yönünü gösterir. (A), dikenli kafasının yanal görünüşüdür, ön sağ etmektir. (B) göz kaplayan zarın çıkarılması. Gözün (C) çıkarılması. (D) dorsal opercle üzerinde kesti. (E) Cephe kemik kesim. (F) Parasphenoid kesti. (G - I) yüz iskeletinin çıkarılması. Ventral brankiyal iskelet yumuşak doku bağlantılarının (J) Sökme. (K - L) dorsal brankiyal iskelet bağlantılarının kaldırılması. (&lt;strong&gt; M - N) brankiyal iskeletinin çıkarılması. (O) brankiyal iskeletinden bağırsak tüpü ayırın. Daha fazla bilgi için adımları 2.16 ile 2.1 bakınız. Ölçek çubuğu = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 3. Brankial İskelet Yeniden boyama (Gerekli ise) <ol><li> solungaç iskelet koyu ya da açık dokuya daha fazla leke için,% 50 gliserol,% 0.25 KOH çözeltisi çıkarın ve iki kez% 1 KOH (bir çalkalama platformunda yatay çalkalama sırasında, ikinci bir 24 saat yıkama, ardından bir ila beş dakikalık bir yıkama) ile yıkayın. </li><li> 24 saat boyunca% 1 KOH içinde 0.008% Alizarin Kırmızı S% 1 KOH ve yeniden leke çıkarın. </li><li> leke çıkarın ve 24 saat süreyle% 1 KOH ile değiştirin. </li><li> KOH çözeltisi çıkarın ve% 50 gliserol,% 0.25 KOH ile değiştirin. </li></ol> 4. Brankial Skeleton Montaj <ol><li> Brankial iskeleti kaldırsırt tarafında bir 22 mm x 60 mm cam kapak slip altına yakın% 50 gliserol,% 0.25 KOH veya% 100 gliserol ve yerden (Şekil 3F) yukarı bakacak. branşiyal iskeletin üstüne% 50 gliserol,% 0.25 KOH veya% 100 gliserol birkaç damla ekleyin. Bir mikrosantrifüj tüp içinde% 50 gliserol,% 0.25 KOH% 100 gliserol, değişim çözümden geçiş ve&gt; 5 dakika boyunca önceden doku dengelenmesi montaj sallamak durumunda. </li><li> ayırıcılar olarak hareket etmek kapak kayma her iki ucunda kil modelleme ve yerin iki küçük topları dışarı rulo. </li><li> Gevşek ön brankiyal iskeleti (Şekil 3G) düzleştirmek için yeterli basınçla üstünde ikinci bir lamel yerleştirin. </li><li> Peel, dorsal diş plakalar dahil sol dorsal kapağını açmak düzleştirmek ve lamelleri (Şekil 3H) arasında slayt. </li><li> Sağ dorsal flep ile tekrarlayın tekniği ve lamel (Şekil 3H) kenarından uzak tüm brankiyal iskeleti itin. <ol><li> değiştirmekdoğal, forseps ile açık hem dorsal flep tutun ve dikkatli bir şekilde tek bir hareketle brankiyal iskelet düzleşme, üzerine lamel yerleştirin. </li><li> yerçekimi brankiyal iskelet geri kapatmak için izin vermez Alternatif olarak, dışarı yanal her dorsal yüzü eğimlendirme, bir kapak kayma ters brankiyal iskeleti monte edin. Sonra ikinci 22 mm x 60 mm cam kapak slip ile kaplayın ve hazırlık ters. Not: Farklı montaj teknikleri iyi ya da kötü her birey için çalışmak eğilimindedir. Her deneyin ve en rahat hissettiği bakın. </li></ol></li><li> Hafif brankiyal iskeleti tutmak için yeterli kil topları düzleştirmek için üst lamel düz monte edilmiş basın, ancak örnek ezmek için özen gösterin. <ol><li> Montaj işlemi sırasında, ceratobranchials döndürmek ve diken bir satır gizleyebilir. lamelleri ve yeniden yönlendirme ceratobranchials veya tüm brankiyal iskelet arasındaki forseps kaydırarak bu sorunu. </li></ol></li><li> Mağaza ro slayt tepsilerde düz prepsom sıcaklığı. % 100 gliserol monte, prepler en az on yıl için köprülü lamelleri arasında saklanabilir. Temiz forseps ve izopropanol veya etanol ve kapak ipuçları makas. </li></ol><img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54056/54056fig3.jpg" /> Şekil 3:. Daire brankiyal iskelet Manipülasyon montaj ve brankiyal iskeletin montajı gösterilmiştir. Mavi oklar hareket yönünü gösterir. (A) Brankial iskelet dorsal yüzü yukarı. Dorsal diş plakaları arasında - (B D) Rotasyon ve kesi. Yumuşak dokuda (E) Yanal kesim daha bağırsak borusunun tabanını açmak için. Montaj için hazır bir lamel altına yerleştirilen (F) Brankial iskelet. (Dorsal diş plakaları üzerinde) brankiyal iskeletin ön yarısında yerleştirilen (G) İkinci lamel. (H - I)dorsal diş plaka kanatlarını açarak ve iki kapak fişleri arasında kaydırarak brankiyal iskeletin düz montaj. Daha fazla bilgi için adımları 4,6 ile 4.1 bakınız. Ölçek çubuğu = 5 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54056/54056fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

<ol><li>Cooper, W. J., Westneat, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+and+function+of+damselfish+skulls%3A+rapid+and+repeated+evolution+into+a+limited+number+of+trophic+niches%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Form and function of damselfish skulls: rapid and repeated evolution into a limited number of trophic niches.</a> BMC Evol. Biol. 9 (24), (2009).</li>
<li>Albertson, R. C., Kocher, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+developmental+basis+of+cichlid+trophic+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Genetic and developmental basis of cichlid trophic diversity.</a> Heredity. 97 (3), 211-221 (2006).</li>
<li>Martin, C. H., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trophic+novelty+is+linked+to+exceptional+rates+of+morphological+diversification+in+two+adaptive+radiations+of+cyprinodon+pupfish%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Trophic novelty is linked to exceptional rates of morphological diversification in two adaptive radiations of cyprinodon pupfish.</a> Evolution. 65 (8), 2197-2212 (2011).</li>
<li>Wainwright, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+pharyngognathy%3A+A+phylogenetic+and+functional+appraisal+of+the+pharyngeal+jaw+key+innovation+in+labroid+fishes+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Syst.+Biol%22%5BJournal%5D)">The evolution of pharyngognathy: A phylogenetic and functional appraisal of the pharyngeal jaw key innovation in labroid fishes and beyond.</a> Syst. Biol. 61 (6), 1001-1027 (2012).</li>
<li>Sibbing, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+capture+and+oral+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Cyprinid+Fishes%22%5BJournal%5D)">Food capture and oral processing.</a> Cyprinid Fishes. , 377-412 (1991).</li>
<li>Bell, M., Foster, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBell%2C+M+%22The+Evolutionary+Biology+of+the+Threespine+Stickleback%22">The Evolutionary Biology of the Threespine Stickleback</a>. , Oxford University Press. New York. (1994).</li>
<li>Kimmel, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+of+facial+bone+morphology+in+threespine+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Evolution and development of facial bone morphology in threespine sticklebacks.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102 (16), 5791-5796 (2005).</li>
<li>Mcgee, M. D., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+evolution+as+a+generator+of+phenotypic+diversity+in+threespine+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Convergent evolution as a generator of phenotypic diversity in threespine stickleback.</a> Evolution. 67 (4), 1204-1208 (2013).</li>
<li>McGee, M. D., Schluter, D., Wainwright, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+basis+of+ecological+divergence+in+sympatric+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional basis of ecological divergence in sympatric stickleback.</a> BMC Evol. Biol. 13, 277(2013).</li>
<li>McGuigan, K., Nishimura, N., Currey, M., Hurwit, D., Cresko, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+variation+in+static+allometry+in+the+threespine+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic variation in static allometry in the threespine stickleback.</a> Integr. Comp. Biol. 50 (6), 1067-1080 (2010).</li>
<li>Caldecutt, W. J., Bell, M. A., Buckland-Nicks, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+and+geographic+variation+in+dentition+of+threespine+stickleback%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism and geographic variation in dentition of threespine stickleback, Gasterosteus aculeatus.</a> Copeia. 2001 (4), 936-944 (2001).</li>
<li>Berner, D., Moser, D., Roesti, M., Buescher, H., Salzburger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+architecture+of+skeletal+evolution+in+european+lake+and+stream+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Genetic architecture of skeletal evolution in european lake and stream stickleback.</a> Evolution. 68 (6), 1792-1805 (2014).</li>
<li>Jamniczky, H. a, Barry, T. N., Rogers, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eco-evo-devo+in+the+study+of+adaptive+divergence%3A+examples+from+threespine+stickleback+%28Gasterosteus+aculeatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Integr.+Comp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Eco-evo-devo in the study of adaptive divergence: examples from threespine stickleback (Gasterosteus aculeatus).</a> Integr. Comp. Biol. 55 (1), 166-178 (2015).</li>
<li>Magnuson, J., Heitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gill+raker+apparatus+and+food+selectivity+among+mackerels%2C+tunas%2C+and+dolphins%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Bull%22%5BJournal%5D)">Gill raker apparatus and food selectivity among mackerels, tunas, and dolphins.</a> Fish. Bull. 69 (2), 361-370 (1971).</li>
<li>Kahilainen, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+gill+raker+number+variability+in+adaptive+radiation+of+coregonid+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Evol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">The role of gill raker number variability in adaptive radiation of coregonid fish.</a> Evol. Ecol. 25 (3), 573-588 (2011).</li>
<li>Arnegard, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+ecological+divergence+during+speciation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetics of ecological divergence during speciation.</a> Nature. 511 (7509), 307-311 (2014).</li>
<li>Gross, H. P., Anderson, J. M., Gross, H. P., Anderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geographic+variation+in+the+gillrakers+and+diet+of+European+threespine+sticklebacks%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">Geographic variation in the gillrakers and diet of European threespine sticklebacks, Gasterosteus aculeatus.</a> Copeia. 1984 (1), 87-97 (1984).</li>
<li>Hagen, D., Gilbertson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geographic+variation+and+environmental+selection+in+Gasterosteus+aculeatus+L+in+the+Pacific+Northwest%2C+America%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Geographic variation and environmental selection in Gasterosteus aculeatus L in the Pacific Northwest, America.</a> Evolution. 26 (1), 32-51 (1972).</li>
<li>McPhail, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecology+and+evolution+of+sympatric+sticklebacks+%28Gasterosteus%29%3A+morphological+and+genetic+evidence+for+a+species+pair+in+Enos+Lake%2C+British+Columbia%5BTitle%5D)+AND+%22Can.+J.+Zool%22%5BJournal%5D)">Ecology and evolution of sympatric sticklebacks (Gasterosteus): morphological and genetic evidence for a species pair in Enos Lake, British Columbia.</a> Can. J. Zool. 62 (7), 1402-1408 (1984).</li>
<li>Schluter, D., McPhail, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+character+displacement+and+speciation+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Nat%22%5BJournal%5D)">Ecological character displacement and speciation in sticklebacks.</a> Am. Nat. 140 (1), 85-108 (1992).</li>
<li>Robinson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trade+offs+in+Habitat-specific+foraging+efficiency+and+the+nascent+adaptive+divergence+of+sticklebacks+in+lakes%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Trade offs in Habitat-specific foraging efficiency and the nascent adaptive divergence of sticklebacks in lakes.</a> Behaviour. 137 (7), 865-888 (2000).</li>
<li>Glazer, A. M., Cleves, P. A., Erickson, P. A., Lam, A. Y., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+developmental+genetic+features+underlie+stickleback+gill+raker+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Evodevo%22%5BJournal%5D)">Parallel developmental genetic features underlie stickleback gill raker evolution.</a> Evodevo. 5 (1), (2014).</li>
<li>Miller, C. T., Glazer, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+skeletal+evolution+in+sticklebacks+is+controlled+by+additive+and+clustered+quantitative+trait+loci%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Modular skeletal evolution in sticklebacks is controlled by additive and clustered quantitative trait loci.</a> Genetics. 197 (1), 405-420 (2014).</li>
<li>Glazer, A. M., Killingbeck, E. E., Mitros, T., Rokhsar, D. S., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+assembly+improvement+and+mapping+convergently+evolved+skeletal+traits+in+sticklebacks+with+Genotyping-by-Sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">Genome assembly improvement and mapping convergently evolved skeletal traits in sticklebacks with Genotyping-by-Sequencing.</a> G3. 5, 1463-1472 (2015).</li>
<li>Wainwright, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+morphology+of+the+pharyngeal+jaw+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Physiol.+Fish+Biomech%22%5BJournal%5D)">Functional morphology of the pharyngeal jaw apparatus.</a> Fish Physiol. Fish Biomech. , 77-102 (2006).</li>
<li>Hulsey, C. D., Fraser, G. J., Streelman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+of+complex+biomechanical+systems%3A+300+million+years+of+fish+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Evolution and development of complex biomechanical systems: 300 million years of fish jaws.</a> Zebrafish. 2 (4), 243-257 (2005).</li>
<li>Lauder, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+design+and+evolution+of+the+pharyngeal+jaw+apparatus+in+euteleostean+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Zool.+J.+Linn.+Soc%22%5BJournal%5D)">Functional design and evolution of the pharyngeal jaw apparatus in euteleostean fishes.</a> Zool. J. Linn. Soc. 77, 1-38 (1983).</li>
<li>Fraser, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ancient+gene+network+is+co-opted+for+teeth+on+old+and+new+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">An ancient gene network is co-opted for teeth on old and new jaws.</a> PLoS Biol. 7 (2), e1000031(2009).</li>
<li>Stock, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+dentition+in+comparative+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool.+B.+Mol.+Dev.+Evol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish dentition in comparative context.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 308, 523-549 (2007).</li>
<li>Liem, K., Greenwood, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+approach+to+the+phylogeny+of+the+pharyngognath+teleosts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Zool%22%5BJournal%5D)">A functional approach to the phylogeny of the pharyngognath teleosts.</a> Am. Zool. 21 (1), 83-101 (1981).</li>
<li>Anker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+kinetics+of+the+head+of+the+stickleback%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Trans.+Zool.+Soc.+London%22%5BJournal%5D)">Morphology and kinetics of the head of the stickleback, Gasterosteus aculeatus.</a> Trans. Zool. Soc. London. 32 (5), 311-416 (1974).</li>
<li>Meyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometrics+and+allometry+in+the+trophically+polymorphic+cichlid+fish%2C+Cichlusomu+citrinelfum%3A+Alternative+adaptations+and+ontogenetic+changes+in+shape%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zool.%2C+Lond%22%5BJournal%5D)">Morphometrics and allometry in the trophically polymorphic cichlid fish, Cichlusomu citrinelfum: Alternative adaptations and ontogenetic changes in shape.</a> J. Zool., Lond. 221, 237-260 (1990).</li>
<li>Huysseune, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+plasticity+in+the+lower+pharyngeal+jaw+dentition+of+Astatoreochromis+alluaudi+%28Teleostei%3A+Cichlidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic plasticity in the lower pharyngeal jaw dentition of Astatoreochromis alluaudi (Teleostei: Cichlidae).</a> Arch. Oral Biol. 40 (11), 1005-1014 (1995).</li>
<li>Muschick, M., Indermaur, A., Salzburger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+Evolution+within+an+adaptive+radiation+of+cichlid+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Convergent Evolution within an adaptive radiation of cichlid fishes.</a> Curr. Biol. 22 (24), 2362-2368 (2012).</li>
<li>Cleves, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolved+tooth+gain+in+sticklebacks+is+associated+with+a+cis-regulatory+allele+of+Bmp6%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolved tooth gain in sticklebacks is associated with a cis-regulatory allele of Bmp6.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (38), 13912-13917 (2014).</li>
<li>Ellis, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+developmental+and+genetic+mechanisms+underlie+convergently+evolved+tooth+gain+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct developmental and genetic mechanisms underlie convergently evolved tooth gain in sticklebacks.</a> Development. (142), 2442-2451 (2015).</li>
<li>Tucker, A. S., Fraser, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+developmental+diversity+of+tooth+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Evolution and developmental diversity of tooth regeneration.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 25-26, 71-80 (2014).</li>
<li>Erickson, P. A., Glazer, A. M., Cleves, P. A., Smith, A. S., Miller, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+developmentally+temporal+quantitative+trait+loci+underlie+convergent+evolution+of+increased+branchial+bone+length+in+sticklebacks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+B%22%5BJournal%5D)">Two developmentally temporal quantitative trait loci underlie convergent evolution of increased branchial bone length in sticklebacks.</a> Proc. R. Soc. B. 281, (2014).</li>
<li>Leary, S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeary%2C+S+%22AVMA+Guidelines+for+the+Euthanasia+of+Animals%22">AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals</a>. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, IL. (2013).</li>
<li>Bell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+phenetics+and+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Evol.+Genet.+Fishes%22%5BJournal%5D)">Evolutionary phenetics and genetics.</a> Evol. Genet. Fishes. , 431-528 (1984).</li>
<li>Taylor, W. R., Van Dyke, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+procedures+for+staining+and+clearing+small+fishes+and+other+vertebrates+for+bone+and+cartilage+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cybium%22%5BJournal%5D)">Revised procedures for staining and clearing small fishes and other vertebrates for bone and cartilage study.</a> Cybium. 9 (2), 107-119 (1985).</li>
<li>Erickson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+190+base+pair%2C+TGF-%CE%B2+responsive+tooth+and+fin+enhancer+is+required+for+stickleback+Bmp6+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A 190 base pair, TGF-β responsive tooth and fin enhancer is required for stickleback Bmp6 expression.</a> Dev. Biol. 401 (2), 310-323 (2015).</li>
<li>Miller, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cis-Regulatory+changes+in+Kit+ligand+expression+and+parallel+evolution+of+pigmentation+in+sticklebacks+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">cis-Regulatory changes in Kit ligand expression and parallel evolution of pigmentation in sticklebacks and humans.</a> Cell. 131 (6), 1179-1189 (2007).</li>
<li>Aigler, S. R., Jandzik, D., Hatta, K., Uesugi, K., Stock, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+and+constraint+underlie+irreversibility+of+tooth+loss+in+cypriniform+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Selection and constraint underlie irreversibility of tooth loss in cypriniform fishes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (21), 7707-7712 (2014).</li>
<li>Pasco-Viel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+trends+of+the+pharyngeal+dentition+in+Cypriniformes+%28Actinopterygii+Ostariophysi%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evolutionary trends of the pharyngeal dentition in Cypriniformes (Actinopterygii Ostariophysi).</a> PLoS One. 5 (6), e11293(2010).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Brankial iskelet, bir balığın boğazında bulunan ve yemek borusuna giderken gıda maddelerini manipüle eden, filtreleyen ve çiğneyen karmaşık bir kemik setidir. Solungaç tırmıklarının, faringeal dişlerin ve branşiyal kemiklerin desenlenmesi de dahil olmak üzere birçok ilginç trofik özellik, türler arasında ve türler içinde farklılık gösterir. Bu özelliklerin çoğunun, branşiyal iskelet in situ ile doğru bir şekilde ölçülmesi zor veya neredeyse imkansızdır (örneğin, solungaç tırmığı uzunluğu, branşiyal kemi...

çeşitlilik inanılmaz bir miktar özellikle balıklar arasında, omurgalılar arasında baş iskeleti var. Birçok durumda bu çeşitlilik, farklı beslenme stratejileri 1 kolaylaştırır - 4, ve her ikisi de dış ve iç kraniofasyal desenlendirme büyük değişiklikler içerebilir. brankiyal iskelet bir balık boğaz dahili olarak yer alan ve ağız boşluğu en çevreler. brankiyal iskelet solungaçları destekleyen ön dördü 5 seri homolog segmentleri, oluşmaktadır. Birlikte bu beş segment balık ve onların yiyecek 5 arasında bir arayüz olarak işlev görür. solungaç diken, yutak dişleri ve brankiyal kemikleri de dahil olmak üzere özellikleri çok sayıda varyasyon yiyecek farklı türlerde etkili yiyecek arama katkıda bulunur. Sticklebacks kuzey yarımkürede boyunca tatlı su gölleri ve dereleri kolonize atalarının okyanus formları sonra bir adaptif radyasyon uğramıştır. diyet kaymasıtatlı daha büyük av için okyanusta küçük zooplankton birkaç kraniofasyal özellikleri 6 dramatik trofik değişmesine neden olmuştur. Birçok çalışma Sticklebacks 7 dış kraniofasial farklılıkları odaklanmış olsa da - 13, önemli kraniofasial değişiklikler iç brankiyal iskelette defalarca gelişmeye. Morfolojik farklı dikenli popülasyonlar arasındaki verimli melezler oluşturma yeteneği brankiyal iskeletine evrimleşmiş değişikliklerin genetik temelini eşleştirmek için mükemmel bir fırsat sağlar. ekolojik öneme sahip biri tropik özelliği solungaç diken, brankiyal kemiklerin anterior ve posterior yüzleri satır ve av öğeleri filtrelemek için kullanılan periyodik dermal kemiklerin desenleme olduğunu. Genellikle küçük av öğeleri beslemek balıklar daha uzun ve daha yoğun aralıklı solungaç büyük yırtıcı 14,15 beslenen balıklara oranla diken sahip olma eğilimindedir. solungaç diken varyasyon bildirilmiştir hem within ve türler 14-19 arasında ve solungaç havalandırma makinesi desenlendirme yönleri trofik nişler ve fitness 16 katkıda bulunur. Araştırma Yıllar yoğun threespine Sticklebacks 17 solungaç raker numarası ve uzunluk varyasyonu belgeledi - 21; Ancak, bu çalışmalar genellikle solungaç diken ilk satırında odaklanmak. Son çalışmalar, bir veya bir tek solungaç havalandırma makinesi anlamak için satır daha çalışmanın önemini vurgulayarak 23 ve uzunluk 24 aralık brankiyal iskelet 22,23 genelinde ve solungaç Tarak tek satır boyunca solungaç havalandırma makinesi sayısının genetik kontrol modüler göstermiştir solungaç raker azaltma gelişimsel genetik temeli. hem ekolojik ve biyomedikal önemi ikinci trofik özellik faringeal dişlerin desenleme olduğunu. Balıklarda Diş yutak dişleri olarak da bilinir, hem sözlü çene ve brankiyal iskeletinde yer olabilir. Ağız diş p amacıyla kullanılır27 - yutak dişleri çiğneme ve av manipülasyon 25 için kullanılır ise rey yakalamak. Her iki takım ortak gelişimsel mekanizmaları aracılığıyla oluşturur ve homolog 28 gelişimsel olarak kabul edilir. Bazen böyle zebrafish, eksikliği ağız ve dorsal faringeal dişler 29 diğer türler birden dişli ceratobranchials, pharyngobranchials varken gibi türler, ve basihyal dişli ve 30 hypobranchials sayede ilginç modülerlik oluşur. Sticklebacks olarak, yutak dişleri ön beşinci ceratobranchial ve dorsal üzerinde ventral bulundu ve posterior 31 pharyngobranchials edilir. Dikenli beslenme ile ilgili Kinematik sözlü çene öncelikle av yakalama ve yutak çenesine çiğneme bırakarak emme besleme 9 kolaylaştırılması kullanılır gösteriyor. Çiklitlerinde, alt yutak çene morfolojisi dramatik 32,33 değişir ve adaptif ve trofik niş 34 ile korelasyon olduğu gösterilmiştir. Çokple tatlısu dikenli popülasyonları ventral faringeal diş sayısı 23,35,36 dramatik artışlar meydana gelmiştir. Son çalışmalar bu evrimleşmiş diş kazanç gelişimsel genetik temeli tatlısu Sticklebacks 36 iki bağımsız toplumlarında büyük ölçüde farklı olduğunu ortaya koymuştur. Memeli dişlerin aksine, balık yetişkin yaşam 37 boyunca sürekli dişlerini yeniden. Bu daha önce açıklanan yüksek dişli tatlı su popülasyonlarının ikisi de rejenerasyon 36 genetik temelini incelemek için nadir bir omurgalı sistemi sağlayarak, hızlandırılmış protez oranını gelişmiştir. Tatlısu Sticklebacks defalarca gelişti üçüncü trofik özellik artık sırasıyla 38 epibranchial ve ceratobranchial kemikler, üst ve alt çene solungaç kemeri segmental homologları vardır. Uzun brankiyal kemikleri daha geniş bir yanak boşluğu görüşmek ve muhtemelen daha büyük av öğeleri c olmak için izin verdiği için uyarlanabilironsumed. Ayrıca, diğer balıklarda, epibranchial kemikler dorsal faringeal diş plakaları 25 depresyon açısından önemlidir. solungaç diken ve yutak dişleri gibi, brankiyal kemikler kolayca görselleştirmek veya ölçmek zordur, bu nedenle iç ve vardır. Burada incelemek için detaylı bir protokol mevcut ve önemli kraniofasyal özelliklerin çeşitli kolay görselleştirme ve sayılmasına olanak tanıyan, brankiyal iskeleti düz monte edin. Bu protokol, dikenli diseksiyon açıklanmış olsa da, aynı yöntem, diğer balıkların çeşitli çalışır.

<table><tbody><tr><td>Potasyum Hidroksit (KOH)</td><td>EMD</td><td>PX1480-1</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7893-4L</td><td></td></tr><tr><td>%10 Nötr Tamponlu Formalin (NBF)</td><td>Azer Scientific</td><td>NBF-4-G</td><td></td></tr><tr><td>Alizarin Kırmızı S</td><td>EMD</td><td>AX0485-3</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Kapak Camları 22 mm x 60 mm</td><td>VWR</td><td>16004-350</td><td></td></tr><tr><td>100 mm x 10 mm Cam Petri Çanak</td><td>Kimble Chase</td><td>23064-10010</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer Kiti</td><td>Ellsworth Yapıştırıcılar</td><td>184 SIL ELAST KİTİ 0.5KG</td><td>Diseksiyon plakaları yapmak için cam veya plastik Petri kaplarına dökülebilir</td></tr><tr><td>Modelleme Kil</td><td>Sargent Art</td><td>22-4000</td><td>1 lb krem</td></tr><tr><td>Sintilasyon Şişeleri (500 kutu)</td><td>Wheaton</td><td>986586</td><td>Vidalı Kapaklı Borosilikat Cam</td></tr><tr><td>Forceps-Dumont #5 Inox (Biyoloji ucu)</td><td>FST</td><td>11252-20</td><td>Dumostars alternatif bir</td></tr><tr><td>Diseksiyon Makasıdır&nbsp;</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td>Numunenin boyutuna bağlı olarak alternatif boyutlar mevcuttur</td></tr><tr><td>KL300 LED'li</td><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Leica</td> S6E <td>Diğer birçok model iyi çalışır, düz bir tabana sahip olmak</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj Tüplerine yardımcı olur 1.7 ml</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>Karton kayar tepsi</td><td>Fisher</td><td>12-587-10</td><td></td></tr></tbody></table>

diseksiyon ve threespine stickleback brankial İskelet düz montaj

Dissection and Flat-mounting of the Threespine Stickleback Branchial Skeleton

Omurgalı başının arka faringeal segmentleri, balıklarda gıda işlemenin birincil bölgesi olan dalsal iskelete yol açar. Balık dalsal iskeletinin morfolojisi, bir türün diyetiyle eşleştirilir. Üç omurgalı yapışkan balıklar (Gasterosteus aculeatus), çeşitli özelliklerdeki evrimleşmiş farklılıkların genetik ve gelişimsel temelini incelemek için bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. Stickleback'lerin deniz popülasyonları, sayısız yeni tatlı su gölünü ve deresini defalarca kolonileştirdi. Bu tatlı su ortamlarında yeni diyete adaptasyon, muhtemelen bağımsız olarak türetilmiş tatlı su popülasyonlarında tekrar tekrar gelişen bir dizi kraniyofasiyal değişikliğin temelini oluşturmaktadır. Bunlar, branş iskeletinde üç ana desen değişikliğini içerir: solungaç tırmığı kemiklerinin sayısında ve uzunluğunda azalma, faringeal diş sayısında artış ve dalsal kemik uzunluklarında artış. Burada, üç omurgalı yapışkan sırtlı balıklarda iç dal iskeletini incelemek ve düz bir şekilde monte etmek için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz. Tüm üç boyutlu branş iskeletinin diseksiyonu ve büyük ölçüde iki boyutlu bir hazırlığa düz bir şekilde monte edilmesi, dalsal iskelet morfolojisinin kolay görselleştirilmesini ve nicelleştirilmesini sağlar. Bu diseksiyon yöntemi ucuz, hızlı, nispeten kolaydır ve çok çeşitli balık türlerine uygulanabilir. Stickleback'lerde, bu verimli yöntem, kraniyofasiyal modellemeyi kontrol eden genomik bölgeleri haritalamak için genetik çaprazlamalardaki iskelet morfolojisinin nicelleştirilmesine izin verir.

<html> Önemli trofik özelliklerin çeşitli ölçülebilir bir disseke ve düz monte brankiyal iskelet Bu protokol sonuçları (Şekil 4). Dorsal görünümünde, solungaç diken, tüm faringeal diş plakaları, ve neredeyse tüm brankiyal kemiklerin tüm satırları kolayca görüntülendi ve 22 sayısal olabilir - 24,35,36,38,42. Alizarin Kırmızı S diğer belirteçleri (örneğin, transgenik GFP 42) ve görselleştirme alternatif bir yöntem ile çif...

Solungaç tırmıkları, faringeal dişler ve branş kemikleri dahil olmak üzere branş iskeleti, çoğu balıkta birincil gıda işleme bölgesi olarak hizmet eder. Burada, bu iç iskeleti üç omurgalı dikme sırtlarında incelemek ve düz bir şekilde monte etmek için bir protokol açıklıyoruz. Bu yöntem aynı zamanda çeşitli diğer balık türleri için de geçerlidir.

Diseksiyon ve Threespine Stickleback Brankial İskelet Düz montaj

The posterior pharyngeal segments of the vertebrate head give rise to the branchial skeleton, the primary site of food processing in fish. The morphology ...

Bu prosedürün genel amacı, Stickleback solungaç iskeletinin diseksiyonunu yapmak ve düzleme ile monte etmektir. Bu yöntem; hayvanların yeni ortamlara nasıl adapte oldukları ve yetişkin morfolojisindeki varyasyonların gelişim sürecinde nasıl ortaya çıktığı gibi gelişim, genetik ve evrim alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Bu tekniğin temel avantajı, brankiyal iskeletin diseke edilip düz monte edilmesi sayesinde, bütünle montajla çalışılamayan çeşitli trofik özelliklerin görselleştirilebilmesidir. Hazırlık aşamasında, üç dikenli kitlenin ilgili baş iskelet morfolojisini gözden geçirin. Balığı diseksiyona hazırladıktan sonra, gözü örten membranı delmek için 5 numaralı keskin penseti gözün yan tarafına 45 derecelik bir açıyla yerleştirerek başlayın.Ardından, bir yoğurt kabının kapağı gibi göz membranını soyun. Sonra, açık pensi gözün arkasına yerleştirin, optik siniri kavrayın ve gözü çıkarın. Gözü delmemeye dikkat edin, aksi takdirde melanin sızacaktır.Bu işlemi karşı taraftaki göz için tekrarlayın. Ardından, küçük bir makasın ucunu operkül flebinin arka tarafının altına yerleştirin ve operkülün üzerindeki yumuşak dokuyu, göz çukuruna doğru dorsal yönde kesin. Daha sonra, göz çukurunun dorsalinde bulunan frontal kemiği kesin.Ardından, göz çukurunun merkezinin etrafından, parasfenoid kemiğin orta hattı boyunca kesin. Operkül kesimini karşı tarafta tekrarlayın. Sonraki adımlar için pelvik dikenler tutamak olarak kullanılabilir.Vücuttan doğrudan ve nazikçe çekilerek dışarı doğru açılırlar. Şimdi, penseti operkülün altına yerleştirin ve yüzü yavaşça vücuttan ayırarak soyun. Bu işlem sırasında hala yapışık olan tüm yumuşak dokuları budayın.Solungaç tırmıklarının çevresinde dikkatli olun ve onları bozmamaya özen gösterin. Yüz iskeleti çıkarılırken, percoll ile birlikte ilk ceratobranchial kemiğini yanlışlıkla tutmak kolaydır. Percolli öne doğru soyarken, fazladan bir şeye tutunmadığınızdan emin olmak için altına bakın.Şimdi, penset kullanarak, anterior kranial fasiyal iskeleti soyup çıkarırken ceratohyals'leri orta hattaki basihyal'in her iki yanından ayırın. İşlemi karşı tarafta tekrarlayın. Anterior kranial fasiyal iskelet; tüm çeneyi, tüm hyoid iskeleti, alttaki dorsal ve endokondral elementleri ve kafatasının anterior kısmını içerir.Ardından, kapalı pensleri bağırsak tüpünün hemen altına yerleştirin ve onları anteriora doğru çekin. Bu işlem sırasında brankiyal iskelete bağlı kalan kasları ve ligamentleri birbirinden ayırın. Daha sonra, kapalı penslerin ucunu kullanarak dorsal brankiyal iskeleti ventral beyin kasasına bağlayan kasları kazıyarak temizleyin.Posteriyordan anteriyora doğru bir hareketle sıyırın. Kas çıkarma işlemini stickleback'in karşı tarafında tekrarlayın. Ardından, bağırsak tüpünün tabanını kavrayıp anteriyora doğru çekerek brankiyal iskeleti çıkarın.Bağırsak tüpünü, beşinci ceratobranchial'in posteriorundan dik bir kesi yaparak ayırın. Sık yapılan bir hata, bağırsak tüpünü çok anterior kısımdan tutmaktır; bu durum ventral frontal tüpün çok geride kalmasına neden olur. Torasik kavitenin posterior derinliğinden tuttuğunuzdan emin olun; fazla olan bağırsak tüpünü her zaman daha sonra temizleyebilirsiniz.Brankiyal iskeletin dorsal tarafındaki beyin kasasında kalan tüm kemik fragmanları temizlendikten sonra, makası brankiyal sepete yerleştirin ve bilateral dorsal diş plakları setleri arasından dorsal bir kesi yapın. Dorsal diş plaklarına zarar vermemek için bu kesinin merkezde kalmasını sağlayın.Ardından, brankiyal iskeletin posterior ucundaki lastiksi bağırsak lümenine iki sığ lateral kesi yapın. Bağırsak tüpünün anterior ucuna, brankiyal iskeletin açılmasına yardımcı olmak için.Şimdi, nazik bir şeffaflaştırma işlemi için iskeleti %50 gliserol ve %0,25 potasyum hidroksit içeren bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Alternatif olarak, daha fazla şeffaflaştırmaya gerek yoksa doğrudan saf gliserole aktarın. Yeniden boyama gerekirse, ayrıntılar metin protokolünde verilmiştir.Montaj hazırlığı için solüsyonu saf gliserol ile değiştirin ve tüpü en az beş dakika boyunca çalkalayın. Ardından, brankiyal iskeleti çıkarın ve dorsal tarafı yukarı bakacak şekilde 22 x 60 milimetrelik bir cam lamelin altına yakın bir yere yerleştirin. Şimdi, iskeletin üzerine birkaç damla gliserol aktarın.Ardından, modelleme kilinden iki küçük top yapın ve bunları kapatma camının her iki ucuna yerleştirin; bunlar ara parça görevi görecektir. Daha sonra, anterior brankiyal iskeleti düzleştirmeye yetecek kadar basınç uygulayarak, hazırlığın üzerine ikinci bir kapatma camını gevşekçe yerleştirin. Şimdi, dorsal diş plakaları da dahil olmak üzere sol dorsal flebi soyarak açın ve flebi kapatma camlarının arasına kaydırın.Ardından aynı işlemi sağ dorsal flap ile gerçekleştirin. Ve tüm brankiyal iskeleti lamın kenarından uzaklaştırın. Prosedürü tamamlamak için, kil toplarını düzleştirmek amacıyla üst lamba üzerine hafifçe bastırın.Sadece brankiyal iskeletin düz bir şekilde sabit kalacağı kadar basınç uygulayın. Ancak, iskeletin ezilmesine yol açacak kadar fazla baskı yapmayın. İşlem sırasında bir sıra tırmık dişinin görünürlüğü kaybolursa, lamların arasına bir pens yerleştirerek seratobrankiyalı veya hazırlığın tamamını yeniden yönlendirin.Saf gliserol ile düz monte edildiğinde, preparat oda sıcaklığında düz bir şekilde en az on yıl boyunca saklanabilir. Bu protokol, disseke edilmiş ve düz monte edilmiş bir brankiyal iskelet ile sonuçlanır. Burada, çeşitli önemli trofik özellikler kronikleştirilebilir.Dorsal görünümden, tüm solungaç tırmıkları sıraları, tüm faringeal diş plakaları ve neredeyse tüm brankiyal kemikler kolayca görselleştirilebilir ve kronifiye edilebilir. Alizarin red S, aynı zamanda rhodamine veya benzeri bir kırmızı filtrede floresans verir; bu da diğer işaretleyicilerle çift etiketlemeye ve görselleştirme için alternatif yöntemlere olanak tanır. Bu görüntüde solungaç tırmıkları şevronlarla işaretlenmiştir.Dişler ok başlarıyla, kemikler ise yıldızlarla işaretlenmiştir. Uzmanlaşıldığında, diseksiyon birkaç dakika içinde tamamlanabilir ve yüzlerce hayvana nispeten hızlı bir şekilde uygulanabilir. Bu videoda bir üç gözlü kılıç balığı (stickleback) brankial iskelet diseksiyonu göstermiş olsak da, bu prosedürün çeşitli balık türleri için bir kılavuz olarak kullanılabileceğini umuyoruz.Branchial iskeletin diseksiyonu ile, bütün montajlarda görünmeyen bir dizi önemli trofik özelliği hızlı ve kolay bir şekilde görselleştirebiliriz. Bu durum, kraniofasiyal iskeletin gelişiminin ve evriminin daha iyi anlaşılmasını sağlar.

dissection-flat-mounting-threespine-stickleback-branchial

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Gibi nöromüsküler kavşaklar (NMJs) terminal Schwann hücreleri (SC'ler) gibi sık donatılı dokularda, tek tek hücrelerin Görselleştirme zordur. "Ardışık fotoğraf beyazlatma" bleaching sıralı time-lapse görüntüleme ile kombine edilebilir triangularis sternumun kas eksplant, elverişli bir sinir-kas preparatı,, örneğin tek bir terminal SC'ler, tasvir verir...

Sıralı Nöromusküler Kavşağı&#39;nda Tek Schwann Hücreleri belirginleştiren Photo-beyazlatma

Bu videoda, kardiyak gelişim, olgunlaşma ve yaşlanmayı incelemek için birden fazla gelişim aşamasında kalbi bir zebra balığından izole etme tekniği açıklanmaktadır.

Kalp Diseksiyonu: Zebra Balığı Kardiyak Gelişimini Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

Çoğalma, desenleme, farklılaşma ve akson rehberlik gibi gelişimsel süreçleri kolaylıkla Zebrafish omurilikte örnek alınabilir. Bu yazıda, bu olayların görselleştirme optimize eden, zebra balığı embriyolarının için bir montaj prosedürü açıklar.

Diseksiyon ve Zebra balığı Embriyolar Yanal Montaj: Omurilik Kalkınma Analizi

Lamprey tam omurilik hasarı sonrası lokomosyonu kurtarmak. Ancak, bazı spinal çıkıntı nöronlar iyi rejeneratörler ve diğerleri değildir. Bu kağıt tam omurilik kesilerde üreten ve in situ hibridizasyon için Wholemount beyinleri ve omurilik hazırlama, konut deniz taşemen larvaları (ve son zamanlarda dönüştürülmüş yetişkinler) için teknikleri göstermektedir.

Sonradan wholemount için komple Omurilik Yaralanmalı ve Beyin Diseksiyon Protokolü<em&gt; Yerinde</em&gt; Larva Deniz taşemen içinde Hibritleşme

Bu kağıt mekansal ilişkili kimyasal, yapısal ve nanoindentation kullanarak Atractosteus spatula katmanlı ölçeği (A. spatula) mekanik özelliklerinin incelenmesi için kullanılan yöntemler sunar, Fourier dönüşümü kızılötesi (FTIR) spektroskopisi, taramalı elektron mikroskobu (SEM) ve X- ışını tomografi (X-ışını BT) bilgisayarlı. Deney sonuçları, koruyucu, biyolojik malzemelerin tasarım ilkelerini araştırmak için kullanılmıştır.

Çok katmanlı Balık Ölçekler (Of Karakterizasyonu<em&gt; Atractosteus spatula</em&gt;) Nanoindentation, X-ray CT, FTIR ve SEM kullanma

Zebra balığı embriyo gelişim biyoloji araştırma için mükemmel bir model. Embriyogenez sırasında, zebra balığı örnek gözlem ve analiz için üç-boyutlu zorluklar sunuyor, bir yumurta sarısı kitle ile gelişir. Bu protokol situ (DİLERİZ) lekeli Zebra balığı embriyo örnekleri içinde bütün montaj iki-boyutlu düz monte hazırlıkları nasıl oluşturulacağı açıklanır.

Tüm Dağı ile Zebra balığı Embriyo örnekler Vitray gözlenmesi ve Analiz Daire Dağı Hazırlık<em&gt; In situ</em&gt; Melezleme

Transgenik manipülasyonlar ve genom düzenleme işlevsel genler ve sis -regulatory unsurların rollerini test etmek için kritik öneme sahiptir. Burada (Tol2 aracılı flüoresan raportör transgen yapıları, Talens ve CRISPRs dahil) genomik değişiklik üretimi için ayrıntılı bir mikroenjeksiyon protokolü acil modeli balık, threespine dikenli balıkgil sunulmuştur.

Threespine Sticklebacks içinde Transgenesis ve Genom Kurgu Mikroenjeksiyon

Sonlu Elemanlar Analizi, yapıların yük altındaki mekanik performansını araştırmak için sıkça kullanılan bir araçtır. Burada, zebra balığı çenesinin biyomekaniğini modellemek için kullanımını uyguluyoruz.

Zebra balığı Çeneli Biyomekanik Araştırma Sonlu Elemanlar Modelleri Bina

Burada, omurgalı segmentasyonunun canlı çalışmasını sağlayan zebra balığı arka vücut ekseninin 3 boyutlu doku kültürü protokolünü sunuyoruz. Bu eksplant model eksen uzama, morfojen kaynaklarının değiştirilmesi ve hücre altı çözünürlük doku düzeyinde canlı görüntüleme üzerinde kontrol sağlar.

Zebra Balıklarında Omurgalı Segmentasyonunu İncelemek için 3-D Kuyruk Eksplant Kültürü

Burada, fare embriyolarının üç ve dört boyutlu görüntü verilerinin, toto optik projeksiyon tomografisi ve multifoton mikroskobu kullanılarak canlı görüntüleme ve tam montajlı immünofloresan boyama ile elde edilen eksenel uzama ve segmentasyon bağlamında görselleştirilmesini ve analizini sağlayan hesaplamalı araç ve yöntemleri açıklamaktayız.

Omurgalı Eksenel Uzama ve Segmentasyonunu İncelemek için Üç ve Dört Boyutlu Görselleştirme ve Analiz Yaklaşımları

Öğrenin üç dikenli püsküllü balığın brankiyal iskeletini diseke etme ve düz montaj yapma yöntemini. Bu teknik gelişim, genetik ve evrimsel biyolojideki trofik özellikleri görselleştirmeyi sağlar.

Diseksiyon ve Threespine Stickleback Brankial İskelet Düz montaj

Daha fazla video keşfet