Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Bu tekniğin genel amacı, Retinal İskemi-Reperfüzyon Hasarı ve bunun patolojik sonuçlarının deneysel bir modelini sunmaktır. Bu yöntem, Retinal İskemi-Reperfüzyonun altında yatan mekanizmaları araştırmak ve ilişkili patolojileri tedavi etmek için potansiyel terapötik yaklaşımları değerlendirmek için yaygın olarak kullanılır. Bu tekniğin en büyük avantajı, çevre dokulara minimum zarar verirken, oküler yapıları yüksek oranda hedef alan bir yaralanma oluşturmasıdır.

Bu tekniğin kullanışlılığı, Retinal İskemi-Reperfüzyon Hasarının aşağıdakiler de dahil olmak üzere çoklu tezahürlerinin anlaşılmasına ve üç aylık olmasına kadar uzanır: retinal nörovasküler ünitede iltihaplanma, oksidatif stres ve bakış disfonksiyonu. Bu yöntemin video gösterimi kritiktir, çünkü kanül yerleştirme için cerrahi tekniklerin görsel bir kılavuz olmadan çoğaltılması zor olabilir. Prosedüre başlamadan önce, masanın üzerinde boş bir kafesi ısıtın.

Ardından, birincil set önceden delinmiş Y bölgesi borusunun keskin ucunu bir % 0.1 Heparin sodyum şişesine yerleştirin ve Heparin sodyumun altını bir IV kutup uzantısından asın. Hortumdaki hava filtresi kapağını çıtçıtla açın. Daha sonra, 120 mililitre cıvalı bir Heparin sodyum akış basıncı üretmek için Heparin sodyum şişesini masa üstünden sodyum Heparin damlasının zirvesine kadar 163 santimetreye yükseltin.

Heparin sodyumun boruyu doldurmasına izin vermek için birincil set önceden delinmiş Y bölgesi borusunu açın ve birincil set önceden delinmiş Y bölgesi borusunu beş valf manifolduna bağlayın. Ardından, Luer erkekten Luer erkek boru bağlantı parçalarını kullanarak, 30 gauge yarım inçlik iğneleri beş portlu manifolda bağlayın. İğnelerin her birini kendi on inçlik 30 gauge boru segmentine yerleştirin.

Ardından, kanama durdurucuları kullanarak, yeni 30 gauge yarım inç iğne uçlarını kırın ve künt uçlarını 30 gauge borunun açık uçlarına yerleştirin. Daha sonra, iğne tüplerini, Ön Kamara Kanülasyonu sırasında borunun dolaşmasını önlemek için iç portlara bağlı tüpler dış portlara bağlı tüplerin üzerine yerleştirilecek şekilde düzenlemek için bant kullanın. Şimdi, hava kabarcıklarını gidermek için beş valf manifolduna ve her bir porta iki ila üç dakika boyunca% 0.1 Heparin sodyum akışını açın.

Ardından, beş valf manifoldundaki tüm bağlantı noktalarını kapatın. Kanülasyonu gerçekleştirmek için, anesteziyi uyguladıktan sonra, tüm fareleri ameliyat masasının üzerindeki ılık kafese yerleştirin ve beş ila on dakika sonra ayak parmağı sıkışmasına yanıt vermeyerek derin anestezinin başarıldığını onaylayın. Daha sonra göz bebeği genişlemesi için bir damla Tropicamide ve lokal anestezi için bir damla Proparacaine uygulayın ve fareleri anestezi sırasına göre düzenleyin, böylece uyuşturulan ilk fare kanüle edilecek ilk fare olacaktır.

Göz damlasının etkisini göstermesini beklerken, dört inçlik düz bant parçaları hazırlayın, yırtmadan önce bandı sıkıca çekin ve hayvan başına bir parça bant ayırın. Bandı sıkıca çekmemenin bandın kıvrılmasına neden olacağını unutmayın. İlk fare hazır olduğunda, hayvanı cerrahi mikroskop altına yerleştirin.

Ardından, beş valf manifoldundaki ilk% 0.1 Heparin sodyum portunu açın ve bir gözü nazikçe proptos etmek için bir çift forseps kullanın. Ardından, 30 gauge kanül iğnesini, zonüler lifler ile korneanın tepesi arasındaki ön kamaranın yaklaşık yarısına yerleştirin. Conrea'ya ikinci kez girmemeye özen gösterin.

Kanülü ön kamaranın derinliklerine yerleştirmek için hafif bir bükülme hareketi kullanıldığını unutmayın. Şimdi, bir bant parçasına ulaşırken takılan kanülün herhangi bir hareketini en aza indirmek için 30 gauge boruyu masanın üstüne doğru bastırın ve boruyu masaya sabitlemek için bandı kullanın. Tüp sabitlendikten sonra, ameliyatın başlama zamanını kaydedin.

Oküler distansiyonun varlığını belirlemek için sızıntı olmadığını ve İskemi-Reperfüzyon gözünün karşı gözden daha büyük olduğunu doğrulamak için mikroskobu kullanın. Korneayı yağlamak ve mikro sızıntıları kapatmak için deneyin sonuna kadar her 30 dakikada bir her iki göze de Hipromelloz uygulayın. İşlem sırasında bir hayvan karışırsa, kuyruğu kaldırın ve intraperitoneal olarak bir Ketamin güçlendirici uygulayın.

İlk hayvanı kanüle ettikten 90 dakika sonra, kanülü ön odadan yavaşça çekin ve her iki gözü de kayganlaştırıcı jöle ile yağlayın. Sonraki kanüller çıkarılırken, hayvanlar tamamen iyileşene kadar her fareyi ameliyat masasının üzerindeki kafese geri koyun. Tüm kanüller çıkarıldıktan sonra alkollü mendillerle dezenfekte edin.

Ardından, Heparin sodyumunu beş valf manifoldundan, 30 gauge iğneden, 30 gauge borudan ve kanüllerden çıkarmak için hava ile doldurulmuş 60 mililitrelik bir şırınga kullanın. Ardından, tüm aletleri damıtılmış suyla doldurulmuş 60 mililitrelik bir şırınga ile durulayın. Son olarak, damıtılmış suyu 60 mililitre hava ile tüm malzemelerden dışarı atın ve dezenfekte edilmiş ve durulanmış ekipmanı daha sonra kullanmak üzere saklayın.

Nöronal çekirdeklerin NeuN immünoetiketlemesi, İskemi-Reperfüzyon Hasarından yedi gün sonra konfokal mikroskobik görüntüleme ile İskemi-Reperfüzyon hakaretini takiben önemli nuronal hücre kaybını ortaya koymaktadır. Gerçekten de, kontrol ve İskemi Reperfüze gözlerdeki NeuN pozitif hücrelerin manuel olarak ölçülmesi, yaralanma sonrası gangelion hücre tabakası nöron sayılarında bir azalma olduğunu gösterir ve bu da İskemi-Reperfüzyonun neden olduğu hücre ölümünün varlığını gösterir. Elektroretinografi ile belgelenen düşük a-dalgası ve b-dalgası amplitüdleri, kontrol, yaralanmamış gözlere kıyasla retinal nöronal fonksiyonda İskemi-Reperfüzyonun neden olduğu bozuklukların ortaya çıktığını da gösterir.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, farelerin anesteziden iyileşmesini beklemek için harcanan son iki saat de dahil olmak üzere, yaklaşık beş saat içinde on hayvan üzerinde gerçekleştirilebilir. Bu işlemi denerken, derin anesteziyi sürdürmek önemlidir. Etkili bir sedasyon olarak, kanülün hayvan hareketi ile yer değiştirmesini önleyecektir.

Bu prosedürü takiben, retina fonksiyonu ile ilgili ek soruları yanıtlamak için elektroretinografi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu teknik, oftalmoloji, sinirbilim ve vasküler biyoloji alanlarındaki araştırmacıların retinal nörovasküler patogenezi ve kemirgenlerde terapötik müdahaleyi keşfetmelerini sağlamıştır. Bu videoyu izledikten sonra, oküler ön kamaranın kanülasyonu olsa da, hedeflenen bir retina yaralanmasının nasıl oluşturulacağını iyi anlamış olmalısınız.

Cerrahi aletlerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü uygularken her zaman etkili bir kesici alet kullanmak gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.