Name: Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Keşfedin endotel hücre tüp oluşumu testi ile anjiyogenez üzerindeki ilaç etkilerini nicel olarak değerlendirin. Farklı ekstraselüler matrisler kullanarak CXCR2 inhibitörlerinin doza bağımlı etkilerini HUVEC hücreleriyle analiz edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma, Wayne State Üniversitesi, Detroit, MI, Tıbbi Araştırma ve Eğitim Fonu tarafından finanse edildi.

1. Hücre Kültürü <ol><li> Tohum 3x10 75 cm bir şişe içinde, tam büyüme ortamında 10 10 ml 5 HUVEC hücreleri. </li><li> 70-80% konfluansa CO2,% 5 37 ° C&#39;de inkübe hücreleri. </li></ol> 2. borucuk oluşumu Deneyi <ol><li> 4 ° C &#39;de bir gece boyunca buz üzerinde büyüme faktörü azaltılmış (GFR) hücre dışı matrisi veya normal hücre dışı matrisi ya da çözülme. Not: &#39;ekstraselüler matriks&#39; kısalık uğruna bundan sonra GFR ve normal hücre dışı matriks hem başvurmak için kullanılır. bunları hazırlamak için proses ile aynıdır. </li><li> Buz üzerinde 96 oyuklu kültür plakaları tutmak ve de önceden soğutulmuş ipuçlarını kullanılarak göz başına soğutulmuş hücre dışı matrisin 50 ul ekle. Yalnızca normal hücre dışı matriks içeren 5 kuyu üç kopya hazırlayın. Sadece GFR hücre dışı matriks içeren 5 kuyu başka üç nüsha hazırlayınız. </li><li> 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de 96 oyuklu plaka inkübe edin. </li><li> HUVECler yıkayınbir kez fosfat tamponlu kalsiyum ve magnezyum (PBS) olmadan çözelti ve 1 ml% 0.05 tripsin-EDTA ekleyin. En Hücreler kadar yuvarlak kadar hücreleri her dakika kontrol 1-5 dakika süreyle 37 ° C&#39;de çanak inkübe edin. bir kez balon dokunarak hücreleri çıkarmak. <ol><li> 5 ml bazal ortamı ekleme% 1 Fötal Sığır Serumu (FBS) ile (herhangi bir şey, yani endotelyal hücre büyüme ortamı (örneğin, ek) ilave edildi). pipetleme şişede hücreleri toplamak ve 15 ml&#39;lik bir tüpe transfer. 5 dakika boyunca 200 xg&#39;de hücreleri Santrifüj ve supernatant atın. </li><li> 2 ml bazal ortam ile yeniden askıya hemasitometre kullanarak hücreleri sayın ve 2-3 x 10 5 hücre / ml hücre yoğunluğu ayarlanır. </li></ol></li><li> bazal ortamda CXCR2 önleyicisi SB225002 aşağıdaki 10x konsantrasyonlarda 100 ul hazırlanması: 11 uM, 5.6 uM, 1.1 uM, 0.56 uM ve 0 uM (kontrol). </li><li> Her 5 MICR içine HUVEC süspansiyon 300 ul pipetocentrifuge borular. inhibitör konsantrasyonu 33 ul ekle (11 uM, 5.6 uM, 1.1 uM, 0.56 uM ve 0 uM), bir tüp içine HUVECler ve vorteks içeren. </li><li> Pipet hücre dışı matrisin ayrı ayrı gözlere hücre süspansiyonları (1-1.5 x 10 4 hücreleri) her birinin 50 ul. Üç kez, her süspansiyon plaka ve 37 ° C&#39;de,% 5 CO2 seviyesinde 4-16 saat süreyle inkübe edin. </li><li> 4-16 saat sonra, iyi bir ters mikroskop kamera 11 (orijinal büyütme x 100) ile başına oluşan tüplerin 4 fotoğraf çekmek. </li></ol> 3. tübül bozulması Testi <ol><li> Tüp Oluşumu Testi (2.3 2.1 adımları) ile aynı özelliklere göre hücre dışı matriks ve tabak hazırlayın. </li><li> &#39;Deki gibi 2.4- tüp formasyonu deneyi ve kısım 2.4.2 hücre dışı matris içeren bir 96-çukurlu plaka içinde göz başına 50 ul olmak HUVEC süspansiyonu hazırlanır. Not: Yeterince kuyu s PlakalıBu o ilaç tedavisine başına 3 kuyu vardır. </li><li> 37 ° C&#39;de 4 saat hücre dışı matris üzerinde hücreler büyümek,% 5 CO2. İlaç tedavisine başlanmadan önce görüntüleri çekin. </li><li> Tüp formasyonu deneyi Aşama 2.5 de tarif edildiği gibi CXCR2 önleyicisi SB225002 2x konsantrasyonları hazırlamak ve HUVECler içeren 96 çukurlu bir levhanın her çukuruna Her konsantrasyondan 50 ul ekle. üç nüsha halinde her konsantrasyon Plate. </li><li> 37 ° C&#39;de bir 2-12 saat boyunca inkübasyona bırakılır,% 5 CO2. Iyi 11 (100 × orijinal büyütme) ters bir mikroskop kamera kullanarak her birinde oluşan tüplerin 4 fotoğraf çekmek. </li></ol> 4. ükler Verileri <ol><li> mikroskop kamera yazılımı kullanarak dört rastgele mikroskobik alanlarda boruların toplam boru uzunluğu ölçülerek görüntülerde yakalanan tüp oluşumunu değerlendirin. </li><li> mikroskop kamera yazılımı görüntüyü açın ve &#39;Annotations ve Ölçümleri tıklayın9 ;. &#39;Uzunluk&#39; bölümü altında, &#39;basit çizgi&#39; aracını seçin. daha sonra sağ tıklayın, tüpün uzunluğu boyunca bir çizgi çizin, resmin üzerine tıklayın. Not: Yazılım otomatik piksel hattının uzunluğunu hesaplamak ve bir dosyaya veri koyacağız. </li><li> &#39;Basit çizgi&#39; aracını seçerek görüntüdeki tüm boru hatları için aynı işlemi tekrarlayın. daha sonra sağ tıklayın, tüpün uzunluğu boyunca bir çizgi çizin, resmin üzerine tıklayın. Not: Yazılımın her satırın uzunluğunu kaydetmek ve ekranda verileri görüntüler. </li><li> Resimde her tüp ölçüldükten sonra, daha sonra, &#39;Export&#39; tık &#39;e-tabloya Uzunluğu&#39; seçti. Not: uzunluk verileri bir elektronik tablo ihraç edilecek. </li><li> Toplam tüp uzunluğunu almak için e-tablodan boru uzunlukları tüm ekleyin. Hesaplayın ve tüplerin ortalama uzunluğu kaydedin. Not: Dört çoğaltır ortalama ve belirlenen standart sapma ile tavsiye edilir. </li></ol> Ekstrasellüler Matriks Kültür 5. kurtarma hücreler <ol><li> Kültür ve bir tüp formasyonu deneyi gerçekleştirmek yeterli hücre sayısını vermez, 96 gözlü bir levha olarak daha büyük bir ölçekte (bakınız bölüm 2). 12 gözlü levhalar için, hücre dışı matrisin 500 ul ve HUVEC hücre süspansiyonu 500 ul (1.5x10 5 hücreleri) kullanın. </li><li> tüpler oluşturmak üzere 4-16 saat boyunca inkübe hücreleri. Daha sonra, hücre kültür ortamı aspire. kalsiyum ve magnezyum içermeyen soğuk 1 x PBS, 1 ml hücre durulayın. </li><li> Kültür üzerine soğuk PBS-2.5 mM EDTA tampon 1 ml ilave edilir ve 10 dakika boyunca buz üzerinde tutulur. </li><li> yıkama, ucu kesilmiş bir 1000 ul pipet kullanarak çanak hücreleri ve hücre dışı matris karışımı yerinden çıkarır ve daha sonra soğuk bir 15 ml tüp transferi de 4 ml buz gibi soğuk PBS-2.5 mM EDTA ve tüp içine yerleştirilmiş . </li><li> 1-4 saat boyunca buz üzerinde tüpler koyun ve hücre dışı her kadar tüpü birkaç kez ters çevirinMatris çözündürülür. </li><li> 0 ° C&#39;de 1.620 x g&#39;de 10 dakika boyunca santrifüj </li><li> Buz üzerinde bir 1.ml tüpüne 1 ml soğuk PBS ile hücre pelletleri yeniden askıya. </li><li> Yine 0 ° C&#39;de 3,000 x g&#39;de 5 dakika boyunca, daha sonra üstte kalan sıvı kısmın bertaraf santrifüjlenir. </li><li> -80 ° C hücreleri saklayın. </li></ol>

<ol><li>Sharma, B., Nawandar, D. M., Nannuru, K. C., Varney, M. L., Singh, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+CXCR2+enhances+chemotherapeutic+response%2C+inhibits+mammary+tumor+growth%2C+angiogenesis%2C+and+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeting CXCR2 enhances chemotherapeutic response, inhibits mammary tumor growth, angiogenesis, and lung metastasis.</a> Mol Cancer Ther. 12 (5), 799-808 (2013).</li>
<li>Birbrair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type-2+pericytes+participate+in+normal+and+tumoral+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Type-2 pericytes participate in normal and tumoral angiogenesis.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 307 (1), 25-38 (2014).</li>
<li>Ferrara, N., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+as+a+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis as a therapeutic target.</a> Nature. 438 (7070), 967-974 (2005).</li>
<li>Speyer, C. L., Hachem, A. H., Assi, A. A., Johnson, J. S., DeVries, J. A., Gorski, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabotropic+glutamate+receptor-1+as+a+novel+target+for+the+antiangiogenic+treatment+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Metabotropic glutamate receptor-1 as a novel target for the antiangiogenic treatment of breast cancer.</a> PLoS One. 9 (3), 88830(2014).</li>
<li>Gu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Apurinic%2FApyrimidinic+Endonuclease+siRNA+Inhibits+the+Angiogenesis+Induced+by+X-Ray+Irradiation+in+Lung+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Human Apurinic/Apyrimidinic Endonuclease siRNA Inhibits the Angiogenesis Induced by X-Ray Irradiation in Lung Cancer Cells.</a> International Journal of Medical Sciences. 10 (7), 870-882 (2013).</li>
<li>Manjunathan, R., Ragunathan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chicken+chorioallantoic+membrane+as+a+reliable+model+to+evaluate+osteosarcoma-an+experimental+approach+using+SaOS2+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">Chicken chorioallantoic membrane as a reliable model to evaluate osteosarcoma-an experimental approach using SaOS2 cell line.</a> Biol Proced Online. 17, 10(2015).</li>
<li>Nidhyanandan, S., Boreddy, T. S., Chandrasekhar, K. B., Reddy, N. D., Kulkarni, N. M., Narayanan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphodiesterase+inhibitor%2C+pentoxifylline+enhances+anticancer+activity+of+histone+deacetylase+inhibitor%2C+MS-275+in+human+breast+cancer+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Phosphodiesterase inhibitor, pentoxifylline enhances anticancer activity of histone deacetylase inhibitor, MS-275 in human breast cancer in vitro and in vivo.</a> Eur J Pharmacol. 764, 508-519 (2015).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+improves+the+anti-angiogenic+activity+of+disulfiram+through+the+EGFR%2Fsrc%2FVEGF+pathway+in+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett.+Aug%22%5BJournal%5D)">Copper improves the anti-angiogenic activity of disulfiram through the EGFR/src/VEGF pathway in gliomas.</a> Cancer Lett. Aug. , (2015).</li>
<li>Park, H. J., Zhang, Y., Georgescu, S. P., Johnson, K. L., Kong, D., Galper, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+umbilical+vein+endothelial+cells+and+human+dermal+microvascular+endothelial+cells+offer+new+insights+into+the+relationship+between+lipid+metabolism+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Human umbilical vein endothelial cells and human dermal microvascular endothelial cells offer new insights into the relationship between lipid metabolism and angiogenesis.</a> Stem Cell Rev. 2 (2), 93-102 (2006).</li>
<li>Clonetics Endothelial Cell System Technical Information & Instructions. , Lonza Walkersville, Inc. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://bio.lonza.com/uploads/tx_mwaxmarketingmaterial/Lonza_ManualsProductInstructions_Instructions__Technical_Info_-_Endothelial_Cell_Systems.pdf">http://bio.lonza.com/uploads/tx_mwaxmarketingmaterial/Lonza_ManualsProductInstructions_Instructions__Technical_Info_-_Endothelial_Cell_Systems.pdf</a> (2015).</li>
<li>The Essence of Cutting-edge Microscopy Research. , Nikon Corporation. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.nikoninstruments.com/images/stories/PDFs/Eclipse_Ti_Brochure.pdf">http://www.nikoninstruments.com/images/stories/PDFs/Eclipse_Ti_Brochure.pdf</a> (2008).</li>
<li>de Wit, C., Fautz, C., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+quantitative+PCR+for+retrovirus-like+particle+quantification+in+CHO+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biologicals%22%5BJournal%5D)">Real-time quantitative PCR for retrovirus-like particle quantification in CHO cell culture.</a> Biologicals. 28 (3), 137-148 (2000).</li>
<li>50% of what? How exactly are IC50 and EC50 defined. , Graphpad Software. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.graphpad.com/support/faqid/1356/">http://www.graphpad.com/support/faqid/1356/</a> (2015).</li>
<li>Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+human+endothelial+cells+for+derived+from+umbililcal+veins.+Identification+by+morphologic+and+immunologic+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Culture of human endothelial cells for derived from umbililcal veins. Identification by morphologic and immunologic criteria.</a> J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bu tahlilin gerçekleştirilmesi, aksi belirtilmediği sürece, her zaman buz ya da 4 ° C&#39;de bir hücre dışı matris tutmak esastır. hücre dışı matris 4 ° C&#39;nin üzerinde ısınmaya bırakıldı, bu polimerize olur, ve deney harap. Bu temas edecek bir şey temin etmek de önemlidir (ör pipet uçları, plaka) hücre dışı matris ile önceden soğutulmuş bahsedilen nedenle içindir. Her bir oyuk tohumlandı hücre sayısı önemlidir, çok az sayıda hücre, kontrol örneğinde beklenen ağ-vermeyecektir Çok fazla sayıda hücre, büyük hücre kümeleri ya bir tek tabaka oluşturacak ve deney geçerli olmayacaktır. Bu deneyde başarısında bir başka önemli faktör, HUVEC hücre kanalı sayısıdır. geçit numarası her zaman aksi takdirde sağlam tüp oluşumu oluşabilir, on daha düşük olmalıdır. Buna ek olarak, tek bir kullanılan hücre kültürü ortamı süresi henüz sağlamalıdır veya hücreler canlı değildir. Alternatively, bir orta ve bileşenlerini kısım ve son kullanma tarihi sonra belli bir süre için muhafaza -20 ° C &#39;de saklayabilir. Tabii ki, son kullanma tarihine kadar orta kullanmak için hala tercih edilir Tüm prosedürler gibi, endotelyal hücre tüp formasyonu deneyi yürütmek için bazı dezavantajları da vardır. Önemli bir sorun, endotel hücreleri ve destek matrisi farklı olduğundan, Analizin sonuçları hücre ve matris türü kullanıldığı bağlı olarak büyük ölçüde değişebilir olmasıdır. kullanılan endotel hücreleri (HUVECler, HAECs ya HMVECs) da ölümsüzleştirilmiş hücreler ile karşılaştırıldığında değişkenlik alma ve için pahalı, primer hücrelerdir. Birincil hücreler, kullanım için sınırlı bir geçitler vardır ve bu nedenle, uzun dönemli anjiyojenez deneyler 14 için uygun değildir. güvenilir veri, bir zaman tayini için aynı tip kullanmalıdır. In vitro deneyler, diğer gibi bir tüp formasyonu deneyi sonuçları con olmalıdıriki boyutlu doku kültürü kontrollü ve yapay koşullarda elde edilen sonuçlar her zaman yaşayan bir organizma karmaşık biyosistemde yansıyan olmayabilir çünkü, in vivo güçlendi. Tüp oluşturan hücreler Bu tür testlerde, sadece endotel hücre tüp oluşumunu göstermek için kullanılabilir akılda tutmak önemlidir ve diğer non-endotelyal test etmek için kullanılmamalıdır. Bu tahlil, bir bileşiğin anjiyojenik potansiyelini ölçmek için oldukça basit ve hızlı bir yöntemdir. Ayrıca, tek başına olarak, bileşim henüz kabı oluşturan işlemi etkiler belirli bir mekanizma ile ilgili bilgiler elde etmez, daha başka deneyler için bir platform oluşturur. Ancak, çeşitli hücre dışı matris kullanımı ayrıca yaygın kullanılmaz araştırma sorularına yönelik bir çerçeve oluşturmak için nasıl bir örnektir. bileşenlerini hedef spesifik inhibitörleri de dahil olmak üzere bileşiğin spesifik biyo-kimyasal mekanizmaları incelemek için yaklaşımlar vardıranjiyogenez yolu. Bir başka yaklaşım ise endotel hücrelerinden RNA çıkarmak ve deneyde gözlemlenen büyüme çalışmasına yol açabilir gen ekspresyonu değişiklikleri analiz etmek için RT-PCR (Real Time PCR) 12 kullanmak olabilir. Bu yöntemin gelecekte uygulamaları anjiyogenez yolun belirli adımlar için knock-down deneyleri oluşturmak için HUVECler transfekte içerir. lenfanjiogenetik yolunu incelemek için bu yaklaşımı uygulamak için potansiyel var. hücre-dışı matris bileşenlerini değiştirerek, matris ve kanserde anjiyogenez destek veren selüler işlemin etkileşimi ortaya çıkarılabilir olabilir. Bu özel şartlar altında endotel hücrelerinden RNA ekstraksiyonu ve proteinler, ek ölçülebilir veriler veri görüntüleme karşılık gelen sağlar.

hayatta kalmak için besin gerekli elde etmek için, habis tümörler hastanın kan akışına erişim gerektirir. Bu erişim elde etmek için, tümör hücreleri böylece anjiyogenez 2 olarak bilinen normal fizyolojik süreç kaçırma, tümörün yeni kan damarlarının büyümesini teşvik kimyasal sinyalleri bırakın. Bu metastazı (yani, diğer organlara kanser yayılması) oluşabilir anjiyogenez ile oluşturulan kan damarları aracılığıyla da. Anjiyogenez süreci, kanser gibi çeşitli ilerlemesi için çok önemli olduğu için, anti-kanser terapisi araştırmaları 3 çekici bir hedeftir. anjiyojenezi ölçmek için kullanılan bir yöntem, hücre dışı bir matris üzerine yerleştirildiğinde tüpler oluşturmak üzere endotelyal progenitör hücre yeteneğini ölçmektir. Bu tüplerin oluşumu çevre koşullarına (belirli bir co örneğin, varlığı ya da eksikliği test anjiyogenez kritik bir erken adımdır, çünkümpound) teşvik veya inhibe edebilir tüp oluşumu anjiogenezisi inhibe hedeflenebilir belirli adımlar içgörü sağlar. Endotel hücre tüp oluşumu tahlil tüpleri oluşturmak üzere hücrelerin yeteneğini ölçen en yaygın olarak kullanılan 4, in vitro yöntemlerden biridir. Nispeten az sayıda bileşen ve kısa bir kültür dönemi 5 gerektiren basit bir tahlilidir. Belki de en önemlisi, tahlil bu tür elde edilen veriler ölçülebilir olmasıdır. tüp formasyonu deneyi kullanımı için bir örnek, indirgenmiş gelişme faktörü (GFR) hücre dışı matrisin genel hücre dışı matrisin üzerinde büyümüş vasküler endotel hücrelerinden tüplerin gelişmesini karşılaştırılmaktadır. laminin, tip IV kolajen, büyüme faktörleri ve proteoglikanlar hücre dışı matris sarkoma hücreleri ve ana bileşenlerinin izole edilen bir bazal membran-benzeri malzeme olduğu bulunmaktadır. Bazı bileşikler, tüpler oluşturmak için hücre yeteneği üzerinde farklı etkileriAzaltılmış büyüme faktörleri ve düşük heparan sülfat proteoglikan (HSPGs) ile bir ortam. HSPGs anlamlı GFR hücre dışı matris içinde azalır hücre dışı matrisin bir bileşenidir. Bir örnek olarak, hipotez bu HSPGs bol tüp oluşumunu durdurmak için önemli ölçüde daha zayıf yeteneğine sahip blok CXCR2 reseptörü SB225002 gibi anjiyojenez inhibitörleri, daha sonra hücre dışı matris ve GFR, hücre dışı matris içinde tüp oluşumu aktivitesi arasında bir karşılaştırma bu ise, HSPGs kontrolü yoluyla anjiyogenez inhibisyonu olasılığını keşfetmek önemlidir. Genel olarak angiogenesis üzerinde bileşiklerin etkisini belirlemek için kullanılan diğer deneyler, in vivo yöntemlerde bulunmaktadır. Bu kayda değer örnekleri tavuk yumurtası kullanılarak civciv koriyoallantoik membran (CAM) deneyi 6, ve in vivo Matrigel fareler kullanılarak anjiyogenez tahlil 7 takın. In vivo yöntemler t anjiyogenez ölçmek ikenHREE boyutları ve in vitro olarak tüp formasyonu deneyi ile karşılaştırıldığında, insan vücudunun fazla temsilcisi, önemli ölçüde daha fazla zaman gerektiren kusur acı ve önemli ölçüde daha fazlasını gerçekleştirmek zordur. CAM tahlil ve hücre dışı fiş tahlil Hem karşılaştırıldığında, tüp oluşumu tahlil tek bir gün içinde yapılabilir iken, yapmak için en az bir hafta 8 almak ve hayvan kullanımını gerektirmez. Raporda kullanılan endotelyal hücreleri, insan göbek damarı endotelial hücreleri (HUVEC) olduğuna dikkat etmek önemlidir. Bu hücreler, vasküler filiz ve kan damarlarının büyümesi önemli bir rol oynar, ve yeterince in vitro ve in vivo deneylerde 9 anti-anjiyojenez etkinliğini değerlendirmek için kullanılan kanserlerinde endotel hücrelerine benzer şekilde yapılır. primer mikrovasküler endotel hücreleri gibi diğer hücreler de kullanılabilir. Alt taşımasının yanısıra dikkat etmek de önemlidirNormal hücre dışı matris ile karşılaştırıldığında HSPGs düzeyleri de GFR hücre dışı matris bir çok bileşenlerinin seviyelerinin azalttı. Dahil, ancak bunlarla sınırlı değildir: EGF, IGF-1, PDGF ve TGF-beta. anjiyogenez ile ilgili bu bileşiklerin önemini okuyan performans deneyleri GFH hücre dışı matriks kullanarak ilginizi çekebilir.

<table><tbody><tr><td>EGM-2 tam büyüme ortamı (EGM-2 mermi kiti CC-3162</td>) <td>Fisher</td><td>NC9525043</td><td>HUVEC tam büyüme ortamı: BBE (Sığır Beyni Özü), hEGF (İnsan Epidermal Büyüme Faktörü), Hidrokortizon, GA-1000 (Gentamisin, Amfoterisin-B), %2 FBS (Fetal Sığır Serumu), VEGF (Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü), hFGF-&beta ile karıştırılmış EGM-2 baz ortamı; (İnsan Fibroblast Büyüme Faktörü Beta), R3-IGF-1 (Uzun R İnsülin Benzeri Büyüme Faktörü Bir), Askorbik Asit ve Heparin. Ortamı ve bileşenlerini ayırın ve -20 ° C'de saklayın; &deg; C, 37 ° C'de sıcak; &deg; Kullanmadan önce C.</td></tr><tr><td>MATRIGEL MATRIX 10ML Büyüme Faktörü Azaltılmış (GFR); 10&nbsp; Ml; LDEV-Free</td><td>Fisher</td><td>CB-40230</td><td>Büyüme Faktörü Azaltılmış (GFR) hücre dışı matris, -20&nbsp; &deg; C, 4&nbsp'de sıcak; &deg; Kullanmadan önce C.</td></tr><tr><td>MATRIGEL MATRISI 10ML; 10&nbsp; Ml; LDEV-Free</td><td>Fisher</td><td>CB-40234</td><td>hücre dışı matris, -20&nbsp; &deg; C, 4&nbsp'de sıcak; &deg; Kullanmadan önce C.</td></tr><tr><td>SB225002</td><td>Fisher</td><td>559405</td><td>CXCR2 inhibitörü, -20&nbsp; &deg; C, kullanmadan önce oda sıcaklığında ısıtın.</td></tr><tr><td>Primer insan umbilikal ven endotel hücreleri (HUVEC)&nbsp;</td><td>ScienCell Araştırma Laboratuvarları&nbsp;</td><td>8000</td><td>Referansa Göre Kültür&nbsp; 10.Tripsin</td></tr><tr><td>% 0.05 -EDTA fenol kırmızı</td><td>Invitrogen</td><td>25300-054</td><td>4 & nbsp; &deg; C, 37 ° C'de sıcak; &deg; Kullanmadan önce C.</td></tr><tr><td>Nikon ECLIPSE Ti</td><td>Nikon</td><td></td><td>Ters Araştırma Mikroskobu.</td></tr><tr><td>NIS-Elements AR 4.20.02 64 bit</td><td>Nikon</td><td></td><td>Ters Araştırma Mikroskobu yazılımı</td></tr><tr><td>Graph-pad Prism 5</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td>IC < alt > 5<0 / alt > hesaplamak için bilimsel grafik ve istatistik yazılımı.</td></tr></tbody></table>

stratejik endotel hücre tüp oluşumu testi: azaltılmış ekstrasellüler matrix ekstrasellüler matrix ve büyüme faktörü karşılaştırılması

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

Kötü huylu tümörler hayatta kalmak ve yayılmak için kan kaynağına ihtiyaç duyarlar. Bu tümörler, mevcut kan damarlarından yeni kan damarlarının oluşturulduğu anjiyogenez sürecini ele geçirerek ihtiyaç duydukları kanı hastanın kan dolaşımından alırlar. CXCR2 (kemokin (CXC motifi) reseptörü 2) reseptörü, anjiyogenez1 ile yakından ilişkili olan birçok hücrede bulunan transmembran G-proteinine bağlı bir moleküldür. CXCR2 reseptörünün spesifik blokajı, endotel tüpü oluşum testi gibi çeşitli deneylerle ölçüldüğü gibi anjiyogenezi inhibe eder. Tüp oluşumu testi, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, çünkü herhangi bir bileşiğin veya çevresel durumun anjiyogenez üzerindeki etkilerini incelemek için mükemmel bir yöntemdir. Ölçülebilir veriler üreten ve nispeten az bileşen gerektiren basit ve hızlı bir in vitro testtir. İn vivo tahlillerin aksine, hayvan gerektirmez ve iki günden daha kısa sürede gerçekleştirilebilir. Bu protokol, CXCR2 reseptörünü test eden endotel tüp oluşumu testini destekleyen hücre dışı matrisin bir varyasyonunu tanımlar.

Önemli, sağlıklı endotel tüp oluşumu kolayca mikroskopi görüntüleri inhibe tüp oluşumuna tezat olabilir. Sağlıklı tüp oluşumu kılcal geçiş benzeri yapılar (Şekil 1) bir organize ağ gibi görünür. Buna karşılık, inhibe tüp oluşumu dağınık hücreleri (Şekil 2) olarak tezahür eder. Tüp formasyonu deneyi verileri kılcal tüpler (Tablo 1) toplam tüp uzunluğunu ölçerek belirlenir. Toplam boru uzunluğunun dışında, branş noktası ortalama boru uzunluğu, tüplerin sayısı veya toplam sayısı ölçülebilir. Yapılandırılmış tüp oluşumu dağınık inhibe tüp büyüme daha fazla net tüp uzunluğunu verir. Şekil 3&#39;te, bir doz yanıt eğrisi GFR hücre dışı matrisin bir CXCR2 inhibitörü SB225002 ilgili HUVEC&#39;lerin deney koşulları altında IC50 hesaplanmasını mümkün kılar. Ekstrasellüler matriks ve büyüme faktörü-azaltılmış (GFH) ekstraselüler matriks Şekil 1. Endotelyal t ube oluşumu. İki görüntü ekstrasellüler matriks (A) ve GFR ekstrasellüler matriks (B) başarılı tüp oluşumunu göstermektedir. tüpler ağından açık borular büyümesi bu HUVEC sağlıklı olduğunu göstermektedir. Ölçek çubuğu = 10 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54074/54074fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54074/54074fig2.jpg" /> Faktörün indirgenmiş (GDH) CXCR2 önleyicisi SB225002 (5.6 uM) ile hücre dışı matris hücre dışı büyüme. Tüp oluşumu Şekil 2. önlemesi, iki resim tüpü göstermektedirhücre-dışı matrisi (A) ve GFR hücre dışı matrisin (B) üzerindeki bir CXCR2 önleyicisi SB225002 (5.6 uM) ile inhibe edilmiştir oluşumu. Bu görüntü gösterisinde görülen HUVEC hücrelerinin izole kümeleri hücreleri birbirine bağlamak için gerekli tüpler oluşturmak mümkün değildi. Ölçek çubuğu = 10 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54074/54074fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54074/54074fig3.jpg" /> Büyüme faktörü indirgenmiş (GFR) hücre dışı matrisin Şekil 3. Doz-yanıt eğrisi. X-ekseni boru uzunluğunu ve Y-ekseni bir CXCR2 inhibitörü konsantrasyonunu göstermektedir. Doz-yanıt eğrisi GFR hücre dışı matris üzerinde CXCR2 inhibitörüne HUVEC yanıtı doza bağlı olduğunu göstermektedir. IC50 (yarı-maksimum engelleyiciY konsantrasyon), örneğin, yazılım 13 ile ve hücre dışı matris için bir doz-yanıt eğrisi ile mukayese edilebilir hesaplanmıştır. IC50% 50 yanıt azaltır inhibitör konsantrasyonudur. Hata çubukları, standart sapmayı temsil ederler. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Büyüme Faktörü Azaltılmış (GFH) ekstraselüler matriks ve inhibitör (4 adet çoğaltır) </td><td> Toplam Tüp Uzunluğu Ortalama (piksel) (1 piksel = 0.34 um) </td><td> Standart sapma </td><td> P Değeri </td></tr><tr><td> GFR hücre dışı matris kontrolü </td><td> 2447 </td><td> 168,174 </td><td></td></tr><tr><td> GFR hücre dışı matris + 0.56 uM SB225002 </td><td> 1422,5 </td><td> 185.4218 </td><td> 0.000395 </td></tr><tr><td>GFR hücre dışı matris + 1.1 uM SB225002 </td><td> 1004 </td><td> 126.1784 </td><td> 2.14 x 10 -5 </td></tr><tr><td> GFR hücre dışı matris + 5.6 uM SB225002 </td><td> 519,25 </td><td> 129.6368 </td><td> 4.19 x 10 -6 </td></tr><tr><td> GFR hücre dışı matris + 11 uM SB225002 </td><td> 393,75 </td><td> 212.6857 </td><td> 1.21 x 10 -5 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. değişen koşullar altında büyüme faktörü indirgenmiş (GFR) hücre dışı matrisin toplam boru boyları nicel. CXCR2 bir inhibitörü değişken konsantrasyonlarda GFR hücre dışı matris üzerinde yetiştirilen örneklerde kaydedilen toplam boru boyları kullanılarak bir tablonun bir bölümü. Veri CXCR2 önleyicisi tüp oluşumunu inhibe etmediğine de işaret etmektedir. Böyle dört suretin, standart sapmanın ortalama ve P değeri olarak ilişkili değerler bulunuyor. göstermek için piksel cinsinden ölçülürihraç edilmektedir verileri. IC 50 istatistiksel yazılım 13 kullanılarak hesaplanabilir. (1 piksel = 0.34 um)

Bu el yazması, kontrollü bir ortamda endotel hücre tüpü oluşumunu kullanarak belirli bir bileşiğin veya durumun anjiyogenez üzerindeki etkilerini ölçmek için bir tüp oluşturma testini açıklar.

Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...

Bu deneyin genel amacı, çeşitli anjiyojenik moleküllerle etkileşime giren bileşenler içeren iki farklı hücre dışı matris kullanarak, endotel hücre tüp oluşumunun anjiyojenik kemokinlere olan bağımlılığını nicel olarak belirlemektir. Bu yöntem, kanser anjiyogenezi alanındaki "hücre dışı matristeki değişiklikler kullanılarak alternatif yolaklar üzerinden anjiyogenez neden desteklenir?" gibi temel sorulara yanıt verebilir. Bu tekniğin temel avantajları, nicel olarak ölçülebilir olması ve daha az değişken kullanmasıdır.Prosedürü, laboratuvar araştırma görevlisi Bayan Donghong Ju gösterecek. Bu prosedüre başlamak için, GFR ekstrasellüler matriksini veya normal ekstrasellüler matriksini dört santigrat derecede gece boyunca çözdürün. 96 kuyucuklu kültür plağını buz üzerinde tutun ve önceden soğutulmuş pipet uçlarını kullanarak her kuyucuğa 50 µL soğutulmuş ekstrasellüler matriks ekleyin.Sadece normal hücre dışı matris içeren beş kuyucuktan üç tekrar, ardından sadece GFR hücre dışı matris içeren beş kuyucuktan üç tekrar hazırlayın. Daha sonra, plakayı 37 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin. 30 dakika sonra, HUVEC'leri kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile bir kez yıkayın ve 0,5% Trypsin EDTA'dan bir mililitre ekleyin.Ardından, hücreleri 37 °C'de bir ila beş dakika boyunca inkübe edin ve hücrelerin çoğu yuvarlaklaşana kadar her dakika kontrol edin. Daha sonra, flask'a vurarak hücreleri yerinden ayırın. Sonrasında, flask'a %1 FBS içeren beş mL bazal besiyeri ekleyin.Hücreleri 15 mL'lik bir tüpe aktarın. Ardından, hücreleri 200 ×g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Beş dakika sonra, süpernatantı atın ve hücreleri 2 mL Bazal ortam ile yeniden süspanse edin.Bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın ve hücre konsantrasyonunu mililitre başına 2 ila 3 x 10⁵ hücre olacak şekilde ayarlayın. Ardından, Bazal besiyerinde beş farklı 10X konsantrasyonda 100 µL CXCR2 inhibitörü hazırlayın. Beş ayrı mikro santrifüj tüpünün her birine 300 µL HUVEC süspansiyonu pipetleyin.Ardından, her konsantrasyondan 33 µL 10X inhibitörü HUVEC içeren tüplere ekleyin ve vorteksleyin. Daha sonra, hücre süspansiyonlarının her birinden 50 µL'yi ekstraselüler matrisin ayrı kuyucuklarına pipetleyin. Her süspansiyonu üç tekrarlı olarak ekimleyin ve 37 °C'de dört ila 16 saat inkübe edin.Ardından, ters mikroskop kamerası kullanarak kuyucuk başına dört fotoğraf çekin. Bu prosedürde, hücre dışı matrisi ve plakları tüp oluşum deneyi ile aynı özelliklere göre hazırlayın. Sonrasında, HUVEC süspansiyonunu hazırlayın ve hücre dışı matris içeren 96 kuyucuklu bir plaka içerisine kuyucuk başına 50 µL olacak şekilde paylaştırın.Bunu takiben, hücreleri ekstraselüler matris üzerinde 37 °C'de dört saat boyunca büyütün. Ardından, ilaç tedavisi başlatılmadan önce görüntüler alın. Sonra, Bazal medyum içerisinde CXCR2 inhibitörünün beş farklı 2X konsantrasyonunu hazırlayın.HUVEC içeren 96 kuyucuğun her birine, her konsantrasyondan 50 µL CXCR2 inhibitörü ekleyin. Ardından, plakayı 37 °C'de iki ila 12 saat daha inkübe edin. Sonrasında, ters mikroskop kamerası kullanarak her kuyucuktan dört görüntü alın.Görüntülerde yakalanan tüp oluşumunu değerlendirmek için, mikroskop kamera yazılımını kullanarak dört rastgele mikroskobik alandaki toplam tüp uzunluğunu ölçün. Bunun için, görüntüyü mikroskop kamera yazılımında açın ve Annotations and Measurements kısmına tıklayın. Length bölümünün altından, basit çizgi aracını seçin.Görüntüye tıklayın, ardından tüp boyunca bir çizgi çizin ve hesaplamayı gerçekleştirmek için sağ tıklayın. Sonrasında, basit çizgi aracını seçerek görüntüdeki tüm tüp çizgileri için işlemi tekrarlayın. Görüntüye tıklayın, tüp boyunca bir çizgi çizin ve ardından sağ tıklayın.Yazılım, her bir çizginin uzunluğunu kaydedecek ve verileri ekranda görüntüleyecektir. Resimdeki tüm tüpler ölçüldükten sonra Export seçeneğine tıklayın, ardından uzunluk verilerini bir hesap tablosuna aktarmak için Length to Spreadsheet seçeneğini belirleyin. Toplam tüp uzunluğunu elde etmek için hesap tablosundaki tüm tüp uzunluklarını toplayın.Ardından, tüplerin ortalama uzunluğunu hesaplayın ve kaydedin. Bu prosedürde, 12 kuyucuklu plakada kültürleme yapın ve tüp oluşum analizi gerçekleştirin. Tüplerin oluşması için hücreleri 4 ila 16 saat boyunca inkübe edin.Ardından, hücre kültür ortamını aspire edin ve hücreleri kalsiyum ve magnezyum içermeyen 1 mL soğuk 1XPBS ile durulayın. Sonrasında, kültürün üzerine 2,5 mM EDTA içeren buz gibi soğuk PBS tamponu ekleyin ve 10 dakika boyunca buz üzerinde bekletin. 10 dakika sonra, ucu kesilmiş bir 1.000 µL pipet ucu kullanarak hücreleri ve hücre dışı matris karışımını kaptan ayırın.Ardından, hücreleri soğuk bir 15 mL'lik tüpe aktarın. Kuyucuğu 4 mL buz gibi soğuk PBS ile yıkayın ve aynı tüpe ekleyin. Sonra, tüpü bir ila dört saat boyunca buz üzerinde bekletin ve hücre dışı matris çözünene kadar tüpü birkaç kez altüst edin.Ardından, örneği 0 °C'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin. Daha sonra, hücre peletini buz üzerinde, 1,5 mL'lik bir tüp içerisinde 1 mL soğuk PBS ile yeniden süspande edin. Örneği 0 °C'de beş dakika daha santrifüjleyin.Ardından süpernatanı atın ve hücreleri 80 °C'de saklayın. Bu iki görüntü, normal ekstraselüler matris ve GFR ekstraselüler matrisi üzerinde başarılı endotelyal tüp oluşumunu göstermektedir. Birbirine bağlı tüp ağı, bu HUVEC'lerde tüp büyümesinin sağlıklı olduğunu açıkça ortaya koymaktadır.Bu iki görüntü, normal ekstraselüler matriks ve GFR ekstraselüler matriksi üzerinde, 5.6 micromolar konsantrasyondaki bir CXCR2 inhibitörü olan SB225002'nin tüp oluşumunu inhibisyonunu göstermektedir. Bu görüntüde görülen izole HUVEC kümeleri, hücrelerin birbirine bağlanmak için gerekli tüpleri oluşturamadığını göstermektedir. Bu grafik, GFR ekstraselüler matriksi üzerindeki HUVEC'lerin CXCR2 inhibitörüne verdiği yanıtın doz bağımlı olduğunu göstermektedir.Prosedürün ardından, hazırlanan hücreler kullanılarak QRTPCR veya RNA dizileme gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Deneysel koşullar altındaki anjiyogenez sürecini karakterize etmek amacıyla, görüntüler kullanılarak ortalama tüp uzunluğu, toplam tüp sayısı veya toplam dallanma noktası sayısı gibi veriler elde edilebilir.

strategic-endothelial-cell-tube-formation-assay-comparing

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bir tüp oluşum denemesi tümör hücrelerinin damar etkinliğini değerlendirmek için kullanılır.

Tümör Hücrelerinin vaskülojenik Faaliyet değerlendirin bir Matrigel Tabanlı Tüp Oluşumu Testi

Tüp formasyonu deneyi in vitro olarak anjiyojenezi ölçmek için bir hızlı, ölçülebilir bir yöntemdir. Endotel hücreler, koşullu ortam ile bir araya yerleşen ve bazal zar özü ekilir. Tüp oluşumu saat içinde meydana gelir ve yeni oluşan tübülleri kolayca ölçülebilir.

Endotel Hücre için Tüp Deneyi birleşimi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Anjiyogenezin Çalışması

Biz, tespit miktarının ve ligandların vasküler endotelyal büyüme faktörü ailesinin üyelerinin aktivitesini izlemek için basit bir hücre bazlı biyolojik tayini açıklamaktadır. Deney ligand ile reseptör ve çapraz bağlama bir yarı-nicel veya kantitatif bir değerlendirmesini sağlamak için bir faktör bağımlı hücre hattı içinde ilave kimerik reseptörler kullanır.

Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörlerinin Değerlendirilmesi için Basit Biyoassay

Hücresel sinyal yolları içinde EndMT ilgili soruşturma için yararlı olan endotel mezenkimal geçiş (EndMT), vitro indüksiyon için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneysel modelinde, TGF-β MS-1 endotel hücreleri ile tedavi tarafından EndMT indüklenen.

Mezenkimal endotel geçiş büyüme faktörü β sinyal dönüşüm tarafından indüklenen moleküler Analizi

Burada, biz su ekstresinin etkilerini değerlendirmek Ruta graveolens gemi ağ oluşumu üzerinde bir tüp oluşumu tahlil kullanarak bir jelli Bodrum matris.

HUVEC tüp-formasyon assay doğal ürünlerin anjiyogenezi üzerinde etkisini değerlendirmek için

Üç boyutlu eş-kültür spheroid anjiyogenez tsay sistemi fizyolojik anjiyogenezi taklit etmek için tasarlanmıştır. Co-kültür sheroidler iki insan vasküler hücre öncüleri, ECFCs ve MSCs oluşur ve kollajen jel gömülü. Yeni sistem anjiyojenik modülatörlerin değerlendirilmesinde etkilidir ve in vivo çalışmaya daha uygun bilgiler sağlar.

Endotel Kolonisi Oluşturan Hücreler ve Mezenkimal Kök Hücreler tarafından Oluşturulan Eş Kültür Sfaoidler Kullanılarak Üç Boyutlu Anjiyogenez Tsay Sistemi

Bu yöntemin amacı sonraki hücresel tahliller için doğal bir iskele olarak fibroblast türetilmiş 3D matris elde etmektir. Fibroblastlar önceden işlenmiş bir kültür plakası içinde tohumlanır ve matris üretimi için askorbik asit ile uyarılır. Matrisler hücreden arındırılır ve kültürle ilgili hücrelere (örn. endotel hücreleri) bloke edilir.

Endotel Tüp Oluşumu Namına Uygulanan Fibroblast Türetilmiş 3D Matris Sistemi

Burada sunulan zebra balığı ve tüp oluşumu tahlil de hasta kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı endotel hücrelerinde tam montaj in situ RNA hibridizasyon analizi için bir protokol vasküler oluşumunda endoglin rolünü incelemektir.

Zebrabalığı Embriyolarında Situ Hibridizasyon ve IPSC-EC'lerde Tüp Oluşumu Nda Endoglin'in Vasküler Gelişimdeki Rolünü İncelemek İçin Tam Montaj

Mevcut protokol, trofoblast hücreleri gibi hücrelerin, hücre dışı bazal membran matrisinin bir tabakası üzerinde kılcal benzeri yapılar halinde organize olduğu klasik in vitro anjiyogenez-tüp oluşum testinde oluşan tüp benzeri yapıların geri kazanılmasına izin verir. Geri kazanılan yapılar, çeşitli biyokimyasal analizler için RNA ve protein izolasyonu için kullanılır.

Farklılaşma İşaretleyici İfade Analizi için Anjiyogenez-Tüp Oluşum Testinden Trofoblast Hücre Geri Kazanımı

Bu çalışma, iki boyutlu (2D) çizik yara migrasyon testini ve üç boyutlu (3D) küresel filizlenme testini, RNA ekstraksiyonu ve immünositokimya dahil olmak üzere ilgili aşağı akış analiz yöntemleriyle birlikte, in vitro anjiyogenezi incelemek için uygun testler olarak sunmaktadır.

Çizik Yara Migrasyon Testi ve Sferoid Filizlenme Testinden Yararlanarak Anjiyogenezin Fonksiyonel ve Moleküler Düzeyde İncelenmesi

Keşfedin endotel hücre tüp oluşumu testi ile anjiyogenez üzerindeki ilaç etkilerini nicel olarak değerlendirin. Farklı ekstraselüler matrisler kullanarak CXCR2 inhibitörlerinin doza bağımlı etkilerini HUVEC hücreleriyle analiz edin.

Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması (Video) | JoVE Journal

Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması

Daha fazla video keşfet