Bir ıntrinsic Vaskülarizasyon tarafından Doku Mühendisliği İn Vivo Doku Mühendisliği Odası

Bu prosedürün genel amacı, dokunun sağlam bir kan kaynağının gelişmesiyle birlikte büyüyüp genişleyebileceği bir alan yaratmak ve sonuçta vaskülarize, büyük, üç boyutlu bir doku bloğunun oluşmasına yol açmaktır. Bu yöntem, rekonstrüktif amaçlar için olduğu kadar organ replasmanı ve onarımı için vaskülarize doku mühendisliğindeki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, yeni üretilen dokunun, hayatta kalmak için çevreden difüzyona güvenmek zorunda kalmadan kendi vasküler ağı tarafından içsel olarak beslenmesidir.

Prosedürü gösteren Sue McKay ve Liliana Pepe olacak. En az 250 gram ağırlığındaki bir fareyi uyuşturun ve bir ayak parmağı tutamını kullanarak anestezi derinliğini değerlendirin. Sıçan yanıt vermiyorsa, prosedür boyunca% 2 izofluran kullanarak sedasyonunu koruyun.

Sonra, gözlere epsomik merhem sürün. Ardından, sıçan sırtüstü yatarken, kasıkları tıraş etmek için elektrikli tıraş makineleri kullanın ve tüyleri nemli gazlı bezle çıkarın. Daha sonra cerrahi bölgeleri %70 etanol içeren bir klorheksidin solüsyonu ile temizleyin.

Son olarak, hayvanı steril havlularla örtün ve ameliyata devam edin. 15 numara bıçak kullanarak, kasık bağına paralel olarak sol kasığa dört santimetre uzunluğunda bir cilt kesisi yapın. Daha sonra, açıkta kalan kasık yağ pedini makasla çevresel olarak kesin ve epigastrik damarlara bağlı olarak vasküler pedikülüne bağlı bırakın.

Şimdi, mikro makasla, karın duvarı ile alttaki femoral damarlar arasındaki film kıvamında bağ dokusu yapışıklıklarını serbest bırakın. Ardından, karın duvarına bir ekartör yerleştirin ve kasık bağını ve femoral damarların tüm uzunluğunu ortaya çıkarmak için medial olarak çekin. Daha sonra, mikro forseps ve kavisli makas kullanarak epigastrik damarı inceleyin ve çevredeki yağdan izole edin.

Bu damar bir ip olarak işlev görecektir. Femoral damarları ve siniri içeren perivasküler kılıfı açarak devam edin. Kasık ligamentinden epigastrik dalın distalindeki çatallanmasına kadar tamamen açın.

Bu noktada ve tüm prosedür boyunca, femoral damarların nazikçe kullanılması çok önemlidir. Hasarları tromboza ve tüm deneyin başarısız olmasına neden olabilir. Daha sonra, mikro forseps kullanarak, femoral veni adventitia ile alın ve onu çevreleyen dokulardan ve beraberindeki arterden nazikçe ayırın.

Bu adım sırasında, damar duvarının tüm kalınlığını tutmayın, bu da intimada travmaya neden olabilir, böylece damarı tromboza yatkın hale getirir. Ayrıca bu adım sırasında, yan dalları 10-0 naylon sütür ile bağlayın veya bipolar bir pıhtılaştırıcı ile pıhtılaştırın. Femoral ven tamamen serbest durumdayken, epigastrik dalın yaklaşık yarım santimetre uzunluğunu içeren en az 10 milimetre uzunluğunda bir ven grefti elde etmek için proksimal ve distal olarak 4-0 ipek dikişlerle bağlayın.

Şube, halkayı haznede açık tutmak için bir gergi ipi ipi olarak çalışır. Ardından, adventitia'yı greftin uçlarından kesin. Gerekirse, bu adım mikro cerrahi anastomoz öncesine ertelenebilir.

Ven greftini heparinize salin solüsyonu ile yıkayarak ve heparinize salin solüsyonu ile yüklü olarak dinlenmeye bırakarak hazırlamayı bitirin. Daha sonra, sürekli çalışan 4-0 ipek dikiş ve iki veya üç ek basit kesikli dikiş kullanarak yarayı kapatın. Başlamak için, daha önce gösterildiği gibi inguinal ligamenti ve kontralateral ekstremitenin femoral damarının tüm uzunluğunu ortaya çıkarın.

Daha sonra, mikro forseps kullanarak, hem epigastrik arteri hem de veni çevreleyen yağ pedinden ayırın ve izole edin. Dokuyu damarlardan çekerken nazik olun. Femoral arteri adventitia ile alarak ve onu çevre dokulardan serbest bırakarak devam edin.

Bu süreçte, arter yan dallarını bağlayın veya pıhtılaştırın. Ardından, hem femoral arter hem de ven üzerine proksimal olarak bir klemp yerleştirin. Şimdi, 4-0 ipek sütür kullanarak, epigastrik damarların ortaya çıkmasına distal femoral arter ve veni bağlayın.

Şimdi kapların altına steril bir plastik kontrast arka plan yerleştirin ve her bir kabı enine kesmek için keskin, düz bir mikro makas kullanın. Kesildikten sonra, lümenden tüm kan alınana kadar damarları bol miktarda heparinize salin ile kuvvetlice yıkayın. Şimdi damar greftini ameliyat alanına getirin.

Damar greftini, damar greftinin proksimal ucu alıcı femoral ven'e ve distal ucu alıcı femoral artere anastomoz edilmeye hazır olacak şekilde konumlandırın. Bu, damar grefti içindeki valflerden direnç olmadan kanın arteriyelden venöz tarafa akmasına izin verecektir. Femoral damarların ve ven greftinin herhangi bir bükülme olmadan doğal pozisyonlarında durduğundan emin olun.

10-0 naylon sütür kullanarak her iki tarafta cerrahi anastomoz yapın. İyi ve atravmatik bir mikrocerrahi anastomoz çok önemlidir. Damar intimasının hasar görmesi, damarların kuruması veya yanlış yerleştirilmiş dikişler anastomoz bölgesini trombüs oluşumuna yatkın hale getirir.

Ardından, her iki anastomoz bölgesinde sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Anastomoz bölgesinden çıkan titreşimsiz kan gibi görünen küçük sızıntıları, üstüne küçük bir parça yağ veya sünger koyarak ve beş ila 10 dakika boyunca hafifçe sıkıştırarak çözün. Tüm alanı hızla sular altında bırakan daha büyük titreşimli sızıntılar ek dikişlere ihtiyaç duyacaktır.

Ardından, arteriyovenöz döngünün açıklığını kontrol edin. Femoral arterin hafif tıkanması onu küçültmelidir. Tersine, femoral venin tıkanması ilmeği tıkamalıdır.

Şimdi doku mühendisliği odasının tabanını arteriyovenöz döngünün altına yerleştirin. İlmeğin herhangi bir bükülme veya bükülme olmadan doğal konumunda durduğundan emin olun. Daha sonra 6-0 naylon dikişlerle haznenin tabanını kasık bağına ve alttaki kas fasyasına sabitleyin.

Ardından, kapağı odanın tabanının üzerine yerleştirin. Halkayı yerinde tutmak için epigastrik dalları kapağın altına sıkıştırın. Ardından, sürekli çalışan 4-0 ipek sütür ve ayrıca iki veya üç ek basit kesintili dikiş kullanarak yarayı kapatın.

Son olarak, hayvanın ayrı bir kafeste anesteziden kurtulmasına izin verin ve analjezik olarak deri altına tek bir doz carprofen uygulayın. Hayvanı daha önce olduğu gibi ameliyata hazırlayın. Her kasıkta bir tane olmak üzere tek bir sıçana iki oda implante edilebilir.

Ardından, femoral damarı daha önce tarif edildiği gibi izole edin. Hem atardamar hem de toplardamar çevre dokulardan tamamen arındırılmış ve dalları bağlanmış olarak, odayı ameliyat alanına getirin. Ardından, sağlam femoral damarların her birini oda tabanının karşılık gelen yarıklarına yerleştirin.

Hiçbirinin bükülmediğinden veya bükülmediğinden emin olun. Ardından, kapağı tabana takarak hazneyi kapatın. Sonra yarayı kapatın ve hayvanın daha önce tarif edildiği gibi iyileşmesine izin verin.

Doku mühendisliği odalarının mikro cerrahi oluşturulması tarif edildiği gibi gerçekleştirildi. Yenidoğan sıçan kardiyomiyositleri olan kardiyak doku, sıçan iskelet miyoblastları ile kas dokusu ve yağ dokusu hücre dışı matriksten türetilen hidrojel ile yağ dokusu dahil olmak üzere in vivo vaskülarize oda kullanılarak çeşitli doku tipleri başarıyla tasarlanmıştır. Stereoloji sistemi, spesifik doku hacminin tarafsız bir şekilde ölçülmesine izin verir.

Örneğin, vasküler hacimleri tahmin etmek için enine kesitlerde lektin ile boyanmış endotel hücreleri kullanıldı. Floresan boyalarla etiketlenmiş hücrelerin in vivo implantasyonunu takiben, kaderleri izlenebilir. Örneğin, implantasyondan üç gün sonra doku yapılarında boya i ile işaretlenmiş yenidoğan sıçan kardiyomiyositleri tespit edildi.

Alternatif olarak, ksenotransplanasyon çalışmalarında implante edilmiş hücreleri tanımlamak için türe özgü antikorlar kullanılabilir. Örneğin, bağışıklığı baskılanmış sıçanlara implante edilen insan kaynaklı pluripotent kök hücreler, odadan toplanan dokuda tanımlanabilir. Bir kez ustalaştıktan sonra, akış odası ve arteriyovenöz döngü sırasıyla yaklaşık 20 ve 90 dakika içinde implante edilebilir.

Bu prosedürü denerken, her zaman steriliteyi korumak ve kontaminasyon meydana gelmesi durumunda gerekli önlemleri almak önemlidir. Kan damarlarının nazikçe ele alınmasının ve atravmatik mikrocerrahi anastomozun başarıyı sağlamanın anahtarı olduğunu unutmayın. Bu anlamda, bu prosedürü denemeden önce, özellikle arteriyovenöz döngünün inşası için temel mikro cerrahi eğitimi öneriyoruz.