Yüksek verimlilik sıralaması kullanılması Tüm-Protein Doygunluk Mutagenez Kütüphaneleri Fonksiyonel Değerlendirme Protokolü

Bu protokolün genel amacı, yüksek verimli dizileme kullanarak proteinlerin kapsamlı, tek bölgeli doygunluk mutajenez kütüphanelerinin fonksiyonel değerlendirmesini tanımlamaktır. Bu yöntem, biyokimya ve moleküler evrim alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Örneğin, proteinler üzerindeki biyokimyasal, yapısal ve evrimsel kısıtlamalar nelerdir?

Ve yeni işlevlere sahip proteinleri nasıl tasarlayabiliriz? Bu tekniğin ana avantajı, bir tam protein doygunluğu mutajenez çalışmasında, kütüphane yapımını ve dizilemeyi çoklu plitplexing yaparak bir dizi yararlı dizileme okumasını en üst düzeye çıkarmasıdır. Metnin protokolüne göre bir PCR Master Mix plakası hazırladıktan sonra, daha önce seyreltilmiş duyu mutajenez primerlerini içeren 96 oyuklu plakalardan 10 mikrolitreyi PCR plakalarındaki aynı kökenli kuyucuklara aktarmak için çok kanallı bir pipet kullanın.