Name: Isı Önlenmesi ile Sıçanlarda Olumsuz Etkileri Stres Bacillus subtilis Gerilme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Öğrenin sıçanlarda ısı stresi komplikasyonlarına karşı Bacillus subtilis BSB3 ile önleyici tedavi yöntemini. Bu protokol farklı uygulama yolları ve bileşikler için uyarlanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Auburn Üniversitesi fonu FOP 101002-139294-2050 tarafından desteklenmiştir.

Tüm deney prosedürleri Auburn Üniversitesi IACUC, Auburn, Alabama tarafından kabul edildi. Kültür Medya, Yemekleri ve Bakteriyel Kültür 1. Hazırlık <ol><li> Bir besleyici agar plakası üzerinde bir gece büyütüldü Bacillus subtilis BSB3 kültürünün tek bir koloni ile bir şişe içinde besleyici sıvı 10 ml inoküle. </li><li> Litre başına sporlaşma ortamının 19 (500 ml yapmak: Bacto besleyici Broth, 8 g,% 10 (ağ / hac) KCI, 10 mi,% 1.2 (h) 4 x 7H 2, O, 10 mi MgSO / a; ağar, 15 g) ve 20 dakika boyunca 121 o C&#39;de otoklav. Aşağıdaki steril çözümleri 50 o C soğumasına ve eklemek için izin: 1 M Ca (NO 3) 2, 1 ml; 0.01 M MnCl2, 1 mi; 1 ila 4 mm, 1 ml FeSO. </li><li> Oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 40 ° C&#39;nin soğutun hazırlanan orta ve steril bir kabine 20 steril Petri kapları her birine 25 ml dökün. orta gecede katılaşmaya edelim. </li><li> B gecelik kültürün 0.5 ml yayıldıacillus subtilis BSB3 Petri kutularına ortamın yüzeyi üzerine. % 90 Sporulationun kadar 5 gün boyunca 37 o C&#39;de kültür inkübe. yüksek çözünürlüklü mikroskopi ile faz-parlak sporlar ortaya koymaktadır. </li><li> levhaya steril fosfat tamponlu salin (PBS) 1 ml ekleme ve steril bir hücre dağıtıcı ile bir yüzeyden bakteriler, kazınarak Hasat bakteri. ihtiyaç kadar buzdolabında süspansiyon saklayın. </li><li> 37 o C&#39;de 24 saat - 18 kuluçkalandı sporlaşma ortamının plakaları üzerinde bakteri süspansiyonu uygun seyreltme (10 -5 -6 ila 10), 0.1 ml kaplama bakterilerin canlılığı teyit </li><li> Bir koloni sayacı kullanılarak plakalar üzerinde bakteri kolonileri sayın ve test süspansiyon bakteri titresi hesaplamak. Nihai konsantrasyon 1 x 10 8 CFU / ml&#39;lik son yoğunluğa seyreltildi bakteriyel süspansiyon hazırlayın. </li></ol> 2. Hayvanlar <ol><li> 300 gr - 32 erkek Sprague-Dawley sıçanları (250 kullanın). standart pelet yemi ve su ücretsiz erişim ile spesifik patojen free şartlarda hayvanları korumak. Ortalama sıcaklığı (21 ± 1 ° C), nem (% 50 ± 5) ve 12 saat ışık-karanlık döngüsü kurmak. </li></ol> 3. Deney Tasarımı <ol><li> Iklimlendirme 2 gün sonra, oral gavaj 11 hayvanların tedavisini başlatın. ağızdan sonda iğne ile şırınga kullanın. B. ile 16 sıçan tedavi subtilis BSB3 süspansiyonu (sıçan başına 1 mi), iki gün boyunca günde iki kez (B. subtilis grubu). PBS ile 16 sıçan (sıçan başına 1 mi), iki gün (PBS grubu) (Şekil 1) için günde iki kez tedavi edin. </li><li> Grup 1- kontrolü (PBS / hiçbir stres), Grup 2- B: Tedaviden sonra, her gruba (grup başına 8 sıçan) subdivide subtilis (B. subtilis / hiçbir stres), Grup 3- stres (PBS / ısı stresi) ve Grup 4- B. subtilis + stres (B. subtilis / ısı stresi). </li><li> Bir elec kullanarak her sıçanın rektal sıcaklığını ölçmekdijital termometre tronic. 25 dakika için oda sıcaklığında Grup 1 ve 2&#39;nin sıçanları tutun. 45 o C&#39;de iklim odasına gruplar 3 ve 4 ve bağıl nem 25 dakika boyunca% 55 yer hayvanları. </li><li> Daha sonra, bir elektronik dijital bir termometre kullanılarak tüm gruplarda, her sıçanın rektum sıcaklığının ölçülmesi. 4 saat oda sıcaklığında tüm hayvanlar koyun. </li><li> Bir yapışmalı anestezi kavanoza - (% 4 2) ve sıçanlar derinden (ayak tutam yanıt yokluğu) anestezi kadar dikkat izofluran ile sıçan anestezisi. Bir Giyotin ile hızlı dekapitasyon sıçan Euthanize. </li><li> Serum elde ve hemen mikroskobik inceleme için bir pipet ile kan örnekleri (her sıçan 7 ul) almak için apirojen tüpler içine apirojen pipetler ile - (16 ml 15) her sıçan 20 gövde kan toplayın. </li><li> pıhtılaşmayı izin vermek için en az 30 dakika boyunca bir soğutucuda kan Tüpleri koyun. 20 o C santrifüj tüpleri, 7000 xg 10 dakika ve hızlı bir şekildeBir pipet ile serum kaldırın. Tahlil kadar -20 o C&#39;de her 50 ul birimlere sıçan ve mağazadan alınan Kısım serumu. </li></ol> 4. Cerrahi Prosedür <ol><li> Kes / elektrikli makas ile karkasın alt karın ve göğüs tüm kürk Döşeme. steril bir kabine karkas yerleştirin ve% 70 alkol ile karkas traş yüzeyi davranın. </li><li> karın ortasındaki bir yarık oluşturmak için Steril bir bisturi bıçağını kullanarak. Steril cımbız kullanarak her sıçandan karaciğer, mezenterik lenf düğümleri, dalak ve ince bağırsak çıkarın. </li></ol> Bakteriyel Translokasyon 5. Analiz <ol><li> önceden tartılmış steril tüplere karaciğer, mezenterik lenf düğümleri ve dalak her bir örnek yerleştirilir ve tartılır. Bir numune ile bir boru ve ağırlıkça boş borunun ağırlığı arasındaki fark olarak numunenin ağırlığı hesaplanır. </li><li> 1:10 seyreltme elde etmek üzere tüpe steril PBS ekleyin (ağırlık / hacim) numune ve homojen birHomojen bir süspansiyon elde etmek için 21 steril bir cam doku homojenleştirici ile her bir örnek çer-. </li><li> Steril PBS Her numunenin seri dilüsyonları (10 -1 -4 10) konur. Plaka hemin (0.005 g / L) ve Vitamin K1 (0.01 gr / lt) plakalı MacConkey en yüzeyi ve% 5, kan agar ve Brucella, kan agar üzerine her bir doku tüm seyreltileri, 0.1 mi. </li><li> 37 o C 22, MacConkey en ve% 5 kanlı agar plakaları aerobik ve Brucella kan agar plakaları anaerobik koşullarda inkübe edin. </li><li> 24 saat sonra aerobik bakteri kolonileri sayın ve inkübasyon 48 saat, bir koloni sayacı kullandıktan sonra anaerobik bakteri kolonileri. bir doku gramı koloni oluşturan birim (CFU) sayısı sonuçlarını ifade eder. </li></ol> 6. Histolojik analiz <ol><li> Cerrahi işlem her sıçan ince bağırsak örnekleri çıkarın (- 4.2 4.1 adımlar). , Parafin gömmek Bouin Sabitleme örnekleri, Fixhematoksilen ve eozin standart prosedürler 23 kullanılarak 6 mikron bölümleri ve leke kesitler hazırlamak. </li><li> Her bir örnek (büyütme 100X) 24 intestinal villus ve toplam mukozal kalınlığı yüksekliğini ölçmek için yüksek çözünürlüklü mikroskop sistemi kullanın. Her bir sıçandan 4 örnekleri analiz eder ve her bir örnek, en az yirmi ölçümler yapmak. mikrometre sonuçları ifade edin. </li></ol> 7. Sitokin Deneyi <ol><li> IL-1 p ticari sıçan ELISA kitleri kullanın; IL-6; TNF-α, γ INF-, ve IL-10, üreticinin protokolüne uygun olarak, serum sitokin düzeylerinin ölçülmesi için. </li><li> İlgili kiti için standartlar kullanılarak test numunelerin her set için standart eğrileri oluşturmak. uygun standart eğri ile deneysel verilerle karşılaştırılması ile her numunedeki sitokinlerin düzeyini tanımlayın. </li></ol> 8. Lipopolisakkarit Deneyi <ol><li> uygun bir sıçan LPS ELISA kiti kullanılarak serumda LPS seviyesini analizÜreticinin protokolü. Standart eğri değerleri ile elde edilen değerlerin karşılaştırılması ile örnekleri LPS konsantrasyonunun tahmin edilmesi. </li></ol> Kan 9. Yüksek Çözünürlüklü Işık Mikroskopi <ol><li> Daha önce 25,26 açıklanan mikroskop sistemi kullanın. Canlı görüntüleri kaydetmek için bir mikroskop sistemi için taban ve video kamera ve bilgisayar 25 gibi titreşim izolasyonu platformu kullanın. Daha önce 27 açıklandığı gibi bir Richardson slayt kullanarak test görüntüleri kalibre edin. </li><li> Bir cam slayt, lamel, fotoğrafta Her bir sıçanın taze çekilmiş kan 7 ul yerleştirin ve her bir örnek (büyütme 1,700X) 72 × 53,3 mm 2 on resim çerçeveleri kaydedin. </li><li> gerçek zamanlı olarak yüksek çözünürlüklü direkt görüş optik görüntü sağlar yazılımı kullanarak veziküllerin konsantrasyonunu ölçün. Her deneysel koşul 28 20 görüntü kareleri minimum inceleyin. </li></ol> 10. İstatistikitikler <ol><li> ortalama ve standart sapma gibi tüm değerleri ifade eder. istatistiksel analiz ve grafik komplo gerçekleştirin. , Iki örnek t-testi ile analiz sonuçları istatistiksel anlamlılık tanımlamak için 0.05 anlamlılık düzeyini ayarlamak. </li></ol>

<ol><li>Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+function+in+the+heat-stressed+human%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular function in the heat-stressed human.</a> Acta Physiol. 199, 407-423 (2010).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gastrointestinal+permeability+in+exertional+heatstroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Sport+Sci.+Rev%22%5BJournal%5D)">Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke.</a> Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+heat+stress+on+the+porcine+small+intestine%3A+A+morphological+and+gene+expression+study%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A-Mol.+Integr.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study.</a> Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).</li>
<li>Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Frontiers+in+Thermoregulation+and+Exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Med%22%5BJournal%5D)">New Frontiers in Thermoregulation and Exercise.</a> Sports Med. 16, 163-167 (1993).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+gastrointestinal+barrier+dysfunction+and+its+inflammatory+effects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects.</a> J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).</li>
<li>Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gastrointestinal+system+-+An+essential+target+organ+of+the+athlete%27s+health+and+physical+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance.</a> Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).</li>
<li>Khan, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbes%2C+intestinal+inflammation+and+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroent%22%5BJournal%5D)">Microbes, intestinal inflammation and probiotics.</a> Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).</li>
<li>Quigley, E. M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prebiotics+and+Probiotics%3A+Their+Role+in+the+Management+of+Gastrointestinal+Disorders+in+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults.</a> Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).</li>
<li>Gore, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+secondary+prevention+effects+of+the+probiotics+Lactobacillus+paracasei+or+Bifidobacterium+lactis+on+early+infant+eczema%3A+randomized+controlled+trial+with+follow-up+until+age+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Allergy%22%5BJournal%5D)">Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years.</a> Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).</li>
<li>Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+probiotics+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr.+J%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, probiotics and diabetes.</a> Nutr. J. 13, (2014).</li>
<li>Eutamene, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+between+Lactobacillus+paracasei+and+its+bacterial+products+to+counteract+stress-induced+gut+permeability+and+sensitivity+increase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats.</a> J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).</li>
<li>Ait-Belgnaoui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+farciminis+treatment+attenuates+stress-induced+overexpression+of+Fos+protein+in+spinal+and+supraspinal+sites+after+colorectal+distension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).</li>
<li>Fujiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bacillus+subtilis+quorum-sensing+molecule+CSF+contributes+to+intestinal+Homeostasis+via+OCTN2%2C+a+host+cell+membrane+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter.</a> Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).</li>
<li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacillus+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiol. 28, 214-220 (2011).</li>
<li>Pinchuk, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+anti-Helicobacter+pylori+activity+of+the+probiotic+strain+Bacillus+subtilis+3+is+due+to+secretion+of+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Ch%22%5BJournal%5D)">In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics.</a> Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotics+against+Campylobacter+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Travel+Med%22%5BJournal%5D)">Probiotics against Campylobacter pathogens.</a> J. Travel Med. 4, 167-170 (1997).</li>
<li>Gracheva, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+the+new+bacterial+preparation+biosporin+in+treating+acute+intestinal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Zh+Mikrobiol+Epidemiol+Immunobiol%22%5BJournal%5D)">The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections.</a> Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).</li>
<li>Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Bacillus+probiotics+in+prevention+of+antibiotic-associated+diarrhoea%3A+a+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JMM+Case+Report%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial.</a> JMM Case Report. 1, (2014).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Methods+for+Storage+Stability+and+Release+of+Bacillus+Spores%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Prog%22%5BJournal%5D)">Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores.</a> Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).</li>
<li>Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVogel%2C+HG+%22eds+H.G.+Vogel+%26+W.H.+Vogel%22">eds H.G. Vogel & W.H. Vogel</a>. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).</li>
<li>Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+induces+the+translocation+of+cutaneous+and+gastrointestinal+microflora+to+secondary+lymphoid+organs+of+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice.</a> J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).</li>
<li>Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+commensal+microflora+by+toll-like+receptors+is+required+for+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis.</a> Cell. 118, 229-241 (2004).</li>
<li>Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+cytokine%2C+corticosterone%2C+and+tissue+injury+responses+in+mice+during+heat+strain+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).</li>
<li>Ribeiro, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+and+morphometric+study+of+intestinal+mucosa+in+rats+after+massive+intestinal+resection.+Influence+of+a+glutamine-enriched+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Hosp.+Cl%C3%ACn.+Fac.+Med.+S.+Paulo%22%5BJournal%5D)">Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet.</a> Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).</li>
<li>Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+90+nm+%28lambda%2F5%29+in+an+optical+transmission+microscope+with+an+annular+condenser%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser.</a> Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).</li>
<li>Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+administration+of+Bacillus+subtilis+strain+BSB3+can+prevent+heat+stress-related+adverse+effects+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats.</a> J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).</li>
<li>Richardson, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Test+slides%3A+Diatoms+to+divisions-What+are+you+looking+at%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Roy+Microsc+Soc%22%5BJournal%5D)">Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at.</a> Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).</li>
<li>Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+evaluation+of+vesicles+shed+by+rat+erythrocytes+at+elevated+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Therm+Biol%22%5BJournal%5D)">Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures.</a> J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).</li>
<li>Leon, L. R., Helwig, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+stroke%3A+Role+of+the+systemic+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response.</a> J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).</li>
<li>Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+Shock+Protein+70+as+a+Biomarker+of+Heat+Stress+in+a+Simulated+Hot+Cockpit%5BTitle%5D)+AND+%22Aviat+Space+Env+Med%22%5BJournal%5D)">Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit.</a> Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Ciddi sağlık koşullarında 29 yüksek sıcaklık sonuçlarına maruz kalmak. Önleme ve ısı stresi ile ilgili komplikasyonların erken teşhis hayati önem 30 taşımaktadır. sunulan protokol ısı stresi olumsuz etkilerin önlenmesi için çeşitli yaklaşımların etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilir. Bu protokol kapsamında kritik adımlar şunlardır: ısıl işlem prosedürü (45 o C, 25 dakika); toplama ve enterotoksin ile kirlenmesini önlemek için kan i...

Farklı stres faktörleri insan ve hayvan sağlığını etkiler. Sıcaklık, kronik, akut ve hatta ölümcül hastalıklara neden olan en stresli faktörlerden biridir1. Bağırsak morfolojisindeki değişiklikler ve ısı stresinden sonra bağırsak bariyeri bütünlüğünün kaybı birçok durumda belgelenmiştir2,3. Bu koruyucu bariyer, bağırsak bakterilerinin ve toksinlerinin, özellikle lipopolisakkaritlerin (LPS) lümenden iç dolaşıma4,5 translokasyonuna karşı savunmadan sorumludur. Bağırsak mikrobiyotasının stabilitesi, bağırsak bariyer fonksiyonunu, konağın bağışıklık tepkisini ve stres koşullarına toleransı önemli ölçüde etkiler6. Bu nedenle, bağırsak mikrobiyotasının modülasyonu, strese bağlı olumsuz etkilerin önlenmesi için yeni bir yaklaşım sağlayabilir. 
Yararlı bakteriler, ishal, inflamatuar bağırsak hastalığı, atopik dermatit, metabolik bozukluklar gibi çeşitli klinik durumların başarılı yönetimi için bağırsak mikrobiyotasını değiştirmek için umut verici bir strateji olarak kullanılmıştır7-10. Yararlı bakterilerin probiyotik etkileri, bağırsak sağlığını desteklemek için temel metabolitlerin üretimini, bağışıklık sisteminin uyarılmasını, laktoz toleransının teşvik edilmesini, epitel disfonksiyonunun restorasyonunu içerir. Probiyotikler in vitro ve hayvan modellerinde strese bağlı komplikasyonların önlenmesinde etkili olmuştur11,12. 
Araştırmacılar, Bacillus bakterilerine probiyotik olarak daha fazla dikkat ettiler çünkü bu bakteriler bağırsak homeostazınıdestekliyor 13 ve konakçı14 üzerinde faydalı etkileri var. Önceki verilerimiz, Bacillus probiyotiklerinin in vitro15,16 ve klinik çalışmalarda17,18 patojenlere karşı yüksek etkinliğini göstermiştir. Bu çalışmada, B. subtilis BSB3 suşunun ısı stresi sonrası komplikasyonlara karşı önleyici etkisini değerlendirmeyi amaçladık.

<table><tbody><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)</td> <td>Sigma-Aldrich, &nbsp;St. Louis, MO</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Etil Alkol&nbsp;</td><td>Pharmco ürünleri A.Ş. Brookfield, CT, ABD&nbsp;</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>VWR</td><td>97064-334</td><td></td></tr><tr><td>MacConkey agar plakaları</td><td>VWR</td><td>470180-742</td><td></td></tr><tr><td>%5 kanlı agar plakaları</td><td>VWR</td><td>89405-024</td><td></td></tr><tr>Hemin ve K Vitamini <td>VWR</td><td>89405-032</td><td></td>Bouin<td>'içeren Brucella kan agar plakası</td></tr><tr><td> s Fiksatif Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri, Hatfield, PA, ABD</td><td>15990</td><td></td></tr><tr><td>IL-10 Sıçan ELISA kiti</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, ABD</td><td>KRC0101</td><td></td></tr><tr><td>IL-1beta Sıçan ELISA Kiti</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, ABD</td><td>KRC0011</td><td></td></tr><tr><td>IL-6 Sıçan ELISA Kiti</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, ABD</td><td>KRC0061</td><td></td></tr><tr><td>INF-gama Sıçan ELISA Kiti</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, ABD</td><td></td><td></td>KRC4021</tr><tr><td>TNF-alfa Sıçan ELISA Kiti</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, ABD</td><td>KRC3011</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan LPS ELISA Kiti</td><td>NeoBioLab, MA, ABD</td><td>RL0275</td><td></td></tr><tr><td>Çevre Odası 6020-1</td><td>Caron, Marietta, OH, ABD</td><td>6020-1</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj ve nbsp;</td><td>Beckman Coulter, Indianapolis, IN, ABD</td><td>Optima L-90K</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Santrifüj</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Işık mikroskobu optik sistem</td><td>CitoViva Technology Inc., Auburn, AL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Koloni sayacı</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, ABD</td><td>RE-3325</td><td></td></tr><tr><td>Dondurucu</td><td>Haier, Brooklyn, NY, ABD</td><td>HCMO50LA</td><td></td></tr><tr><td>Ultra mikroplaka okuyucu</td><td>Bio-Tek Enstrüman, Winooski, VT, ABD</td><td>ELx 808</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Şerit Yıkayıcı</td><td>Bio-Tek Alet, Winooski, VT, ABD</td><td>ELx50</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler</td><td>Gilson, Pipetman, Fransa</td><td>P100, P200, P1000</td><td></td></tr><tr><td>C24 İnkübatör Çalkalayıcı</td><td>New Brunswick Scientific, Enfield, CT, ABD</td><td>Klasik C24</td><td></td></tr><tr><td>Sallanan Çalkalayıcı&nbsp;</td><td>Güvenilir Bilimsel, Inc., Nesbit, MS, ABD</td><td>55</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, ABD</td><td>875713</td><td>100 mm x 15 mm</td></tr><tr><td>SterilGard III Advance</td><td>The Baker Company, Sanford, ME, ABD</td><td>SG403</td><td></td></tr><tr><td>Kültür Yetiştirme Şişeleri</td><td>Corning Incorporated, Corning, NY, ABD</td><td>4995</td><td>PYREX 250 ml Erlenmeyer şişeleri</td></tr><tr><td>Optik Spektrometre Genesys 20</td><td>Termo Bilimsel, Waltham, MA, ABD.</td><td>4001</td><td></td></tr><tr><td>Sony DXC-33 Video kamera</td><td>Sony</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Richardson test slaydı</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimi, Hatfield, PA, ABD</td><td>80303</td><td></td></tr><tr><td>Millipore su arıtma sistemi</td><td>Millipore</td><td>Direct-Q</td><td></td></tr><tr><td>Image-Pro Plus yazılımı</td><td>Medya Sibernetik, MD, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Üçlü Işın Dengesi</td><td>OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doku Homojenizatör, Dounce</td><td>VWR</td><td>71000-518</td><td></td></tr></tbody></table>

isı Önlenmesi ile sıçanlarda olumsuz etkileri stres<em&gt; bacillus subtilis</em&gt; gerilme

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

Bu çalışma, sıcak stresine bağlı komplikasyonlar karşı Bacillus subtilis suşu koruyucu etkisini değerlendirmek için tasarlanmıştır. Otuz iki Sprague-Dawley fareleri, bu çalışmada kullanılmıştır. Hayvanlar oral B ile iki gün süreyle günde iki kez uygulandı subtilis BSB3 zorlanma veya PBS. Ertesi gün, son tedaviden sonra, her bir grup bölündü ve iki deney grubu (bir PBS ile muamele edilmiş ve bir B. subtilis ile muamele) 25 dakika süreyle 45 ° C de yerleştirildi. İki kontrol grubu, oda sıcaklığında 25 dakika süreyle kaldı. Tüm sıçanlara ötenazi yapıldı ve farklı parametrelerin tüm gruplarda analiz edildi. Isı stresinin olumsuz etkileri villus yüksekliği ve bağırsak epiteli toplam mukozal kalınlığının azalması ile kayıtlı; lümenden bakteri translokasyonu; Kandaki (LPS) seviyesi lipopolisakkaridinin ait eritrositlerin vezikülasyon ve yükseklik arttı. tedavinin koruyucu etkinliği ön tarafından değerlendirilirBu yan etkilerin giriflim. Protokol ısı stresi komplikasyonların önlenmesi için bakterilerle sıçanların oral tedavi için ayarlanmış, ancak bu protokol değiştirilebilir ve diğer uygulama yolları için ve farklı bileşiklerin analizi için kullanılabilir.

Isı stresi önce ve hemen sonrasında hayvanların ortalama vücut ısısı sırasıyla 36.7 ± 0.07 o C ve 40.3 ± 0.17 o C, (p &lt;0.05). Isı (Grup 3), maruziyeti villi yüksekliği önemli ölçüde inhibe toplam mukozal kalınlığı ile sonuçlanmıştır (Şekil 2, 3). ısı zararlı etkisinden stres korumalı bağırsak önce BSB3 suşu Oral uygulama. bağırsaktan bakteri translokasyonu bakteriyolojik mezenterik len...

Yararlı bakterilerle oral ön tedavi ile sıçanlarda ısı stresi etkilerinin önlenmesi için bir protokol tanımladık. Bu protokol, çeşitli uygulama yolları ve farklı bileşiklerin analizi için değiştirilebilir ve kullanılabilir.

Isı Önlenmesi ile Sıçanlarda Olumsuz Etkileri Stres<em&gt; Bacillus subtilis</em&gt; Gerilme

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

Bu deneyin genel amacı, B.subtilis BSB3 suşunun ısı stresi sonrası komplikasyonlara karşı önleyici etkisini değerlendirmektir. Bu yöntem, ısı stresinin olumsuz etkilerinin önlenmesine yönelik temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, ısı stresi komplikasyonlarını hafifletmeye yönelik farklı yaklaşımları değerlendirmek için kullanılabilmesidir.Bu prosedürü, laboratuvarımızdan araştırma görevlileri Ludmila Globa ve Oleg Pusovyy uygulamalı olarak gösterecekler. Başlamak için, besiyeri agar plağında gece boyunca büyütülmüş tek bir Bacillus subtilis BSB3 kolonisi ile başlayın.Bir erlene on mililitre besiyeri suyu (nutrient broth) inoküle edin. Kültürü 37 °C'de gece boyunca büyütün. Burada gösterilen tarife göre 500 mililitre sporülasyon besiyeri hazırlayın.Ardından 121 °C'de 20 dakika boyunca otoklavlayın. Aşağıdaki steril çözeltileri eklemeden önce besiyerinin 50 °C'ye soğumasını bekleyin. Hazırlanan besiyerini steril bir kabinde, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 40 °C'ye soğutun.Ve 20 adet steril petri kabının her birine 25 mililitre dökün. Besiyerinin gece boyunca katılaşmasına izin verin. Ardından, gece boyunca kültüre edilmiş 0,5 mililitre Baci

prevention-heat-stress-adverse-effects-rats-bacillus-subtilis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

DA sıçanlarda kronik relapsing deneysel otoimmün ensefalomyelit: Bu video, multipl skleroz bir hayvan modeli indüksiyonu ve klinik skorlama göstermektedir. Tüm sıçan omurilik ve tam Freund adjuvan içeren bir emülsiyon immunizing fareler tarafından uyarılan hastalık, insan hastalığına benzer klinik belirtiler sunar.

İndüksiyon ve Kronik Relaps Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Klinik Puanlama

Kaynak: Sorokulova, I., ve diğerleri. Bacillus subtilis Suşu ile Sıçanlarda Isı Stresi Olumsuz Etkilerinin Önlenmesi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, faydalı bakteriler veya fosfat tamponlu salin (PBS) ile ön işleme tabi tutulan ve bağırsak bariyeri bütünlüğünü değerlendirmek için ısı stresine maruz bırakılan sıçanları göstermektedir. Kontrol sıçanlarındaki çok sayıda koloninin aksine, tedavi edilen sıçanların karaciğerinden daha az bağırsak kaynaklı bakteri kolonisi, sağlam bir epitel bariyeri ve...

Isı Stresi Altındaki Sıçanlarda Yararlı Bakterilerin Bağırsak Mikrobiyal Translokasyonu Üzerine Etkisinin Değerlendirilmesi

Kaynak: Sorokulova, I. ve diğerleri. Bacillus subtilis Strain ile sıçanlarda ısı stresi olumsuz etkilerinin önlenmesi. J. Vis. Exp. (2016)Bu video, ısı stresine maruz kalan sıçanlarda Bacillus subtilis'in koruyucu etkilerini değerlendirmek için kullanılan histolojik ve kan mikroskopisi analizlerini sunmaktadır.

Isı stresli sıçanlarda Bacillus subtilis'in etkilerini değerlendirmek için histolojik ve hematolojik analizler

Bu videoda, bir fare modelinde eforlu sıcak çarpmasını (EHS) incelemek için adım adım bir protokol açıklıyoruz.

Eforlu Sıcak Çarpması Fare Modeli: Eforlu Sıcak Çarpmasının Altında Yatan Mekanizmaları İncelemek İçin Bir Protokol

Biz neden ve LPS enjeksiyon olabilir Sprague-Dawley sıçanlarda neden CMHs gelecekte CMHs patogenezinde üzerine araştırma araştırmalar kullanılan algılamak için bir protokol mevcut.

Alt akut serebral Microhemorrhages sıçanlarda Lipopolysaccharide enjeksiyonla indüklenen

Burada, protokolü ve metil-Seq, kronik stres pozlama ile ilişkili epigenetik değişiklikleri tanımlamak için bir fare modeli kullanarak bir epigenomic platform uygulanması açıklanmaktadır. Sonuçları sıçan metil-Seq platformu sıçanlarda stres maruz kaynaklanan metilasyonu farklılıklar tespit kapasitesine sahip olduğunu göstermektedir.

Stres pozlama ile ilişkili epigenetik değişiklikleri tanımlamak için bir fare metil-Seq Platform

Burada, nematod C. elegans hücresel proteotoksik stres yanıtları floresan transkripsiyonel muhabirlerin aktivasyonunu ölçerek ve fizyolojik strese duyarlılık belirterek karakterize.

C. Eleganlarda Fizyolojik Stres Tepkilerinin Ölçüleri

Protokol, elektrik çarpması gibi olumsuz dış uyaranlardan arındırılmış farelerde standartlaştırılmış, tekrarlanabilir, preklinik bir eforlu sıcak çarpması (EHS) modelinin geliştirilmesini açıklar. Model mekanistik, önleyici ve terapötik çalışmalar için bir platform sağlar.

Farelerde Preklinik Bir Eforel Isıl Vuruş Modeli

Burada, Bacillus cereus'un kolit üzerindeki olumlu etkilerini düzenlemede bağırsak mikrobiyotasının rolünü araştırmak için antibiyotik kaynaklı yalancı mikrop içermeyen dekstran sülfat sodyum kaynaklı kolit fare modelini oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Bacillus cereus Uygulamasının Kolit Üzerindeki Hafifletici Etkilerinin Bağırsak Mikrobiyota Modülasyonu ile Araştırılması

Bağırsak mikropları, konakçılarının sağlığını spesifik veya korunmuş mekanizmalar yoluyla olumlu veya olumsuz yönde etkileyebilir. Caenorhabditis elegans , bu tür mikropları taramak için uygun bir platformdur. Mevcut protokol, solucan sağlığı için bir vekil olarak kullanılan nematod stres direnci üzerindeki etki için 48 bakteri izolatının yüksek verimli taramasını açıklamaktadır.

Caenorhabditis elegans Health Üzerinde Etkisi Olan Mikrobiyal İzolatların Yüksek Verimli Taraması

Bu protokol, Moğol tıp teorisine dayanan depresyon için kronik öngörülemeyen hafif stres (CUMS) modelini ve davranışsal testleri doğrulama yöntemlerini ana hatlarıyla belirtir.

Moğol tıbbına dayalı Sıçanlarda Kronik Öngörülemeyen Hafif Stres

Öğrenin sıçanlarda ısı stresi komplikasyonlarına karşı Bacillus subtilis BSB3 ile önleyici tedavi yöntemini. Bu protokol farklı uygulama yolları ve bileşikler için uyarlanabilir.

Isı Önlenmesi ile Sıçanlarda Olumsuz Etkileri Stres

Daha fazla video keşfet