Name: Hayatta kalma Süre deneyinde Brachionus Rotiferler: Maternal Koşullarının Senkronizasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Öğrenin Brachionus rotiferlerinde hayatta kalma süresi ölçümü için maternal etkileri ortadan kaldıran senkronizasyon protokolü. Bu yöntem yaşlanma araştırmalarında yüksek istatistiksel güç sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz filme katkılarından dolayı George Jarvis, Martha Bock ve Bette Hecox-Lea, Deniz Biyoloji Laboratuvarı müteşekkiriz.

Medya 1. Hazırlık Not: kullan tuzluluk 16.5 ppt (PSU) yarı seyreltilmiş Brujewicz yapay deniz suyu. Diğer yapay deniz suyu, aynı zamanda sık sık kültür Brachionus rotiferler 25,26 için kullanılır. <ol><li> 454 mM NaCI, ekleme 26 mM MgCI2, 27 mM MgSO 4, 10 mM KCI, damıtılmış su, 10 mM CaCl2 4.5 L (nihai hacim 5 L) olacaktır. Alternatif olarak, deiyonize seyreltme suyu yerine distile su kullanın. Diğer tüm tuzlan çözüldükten sonra CaCl2 ekleyin. </li><li> 0.48 M NaHCO 3 stok çözelti (200x konsantrasyon) hazırlayın. Yukarıdaki çözeltiye bunun 25 ml ekleyin. NaHCO 3 nihai konsantrasyon 2.4 mM&#39;dir. </li><li> 0.4 M NaBr stok solüsyonu (500x konsantrasyon) hazırlayın. Yukarıdaki çözüm için 10 ml ekleyin. NaBr nihai konsantrasyonu 0.8 mM&#39;dir. damıtılmış su ile 5 litreye tamamlanır sağlayın. </li><li> 0.45 um membran filtre ile çözelti filtre.Kullanımdan önce, steril su ile iki kez seyreltilmiş (h / h). Not: Bir stok çözeltisi olarak Brujewicz yapay deniz suyu 2x konsantrasyonunu yapmak mümkündür. </li></ol> 2. Genel Kültür Koşullar <ol><li> Kültür laboratuar yükseltilmiş veya 20 ile 30 ° C arasında bir steril 100 ml çanak içinde yabani ele Rotiferler. Yüksek sıcaklıklar daha kısa ömürleri ve hızlandırılmış üreme sonuçlanır. Deneylerin kolaylık sağlamak için, 25 ° C ile. Rotifer yoğunluğu veya yapay deniz suyu hacmi burada büyük bir sorun değil. </li><li> Yapay deniz suyu 11 Kültür diyet mikroalg türleri. Snell ve ark bakın. (2014) Detaylar 11. Tipik haliyle, Tetraselmis tetrathele kullanımı (~ 2 x 10 5 hücre / ml 27,28), T. Suecica (~ 6 x 10 5 hücre / ml 25,29), ve Nannochloropsis oculata türü (~ 7 x 10 6 hücre / ml 30,31). diyet yosun beri (türler, kültür conditiyonları, biyokimyasal kompozisyonlar) önemli ölçüde tüm deney gruplarında mikroalgi aynı çok kullanırım, Brachionus rotifer yaşam süresini etkiler. </li><li> Beslenme ve (örneğin, 2 günde beslemek ve her hafta aşılamak) bazen medyayı değiştirerek bir toplu kültüründe rotifer bir stok nüfusu tutun. rotifer optimal koşullar olduğunda birçok yeni doğanlar ve 2-3 yumurta taşıyan yetişkinler görülebilir. Not: Deneysel rotifer elde etmek için alternatif bir yol dinlenme yumurta yumurtadan etmektir. Dinlenme yumurtalardan Rotiferler iyi senkronize olarak kabul ve onların ömrü amictic yumurta 11 yumurtadan rotifer önemli ölçüde farklı değildir vardır. Ancak, dinlenme yumurtadan rotiferler önce amictic yumurta daha üreme başlar. Böylece, dikkatli üreme özelliklerinin ölçümleri için gereklidir. </li></ol> Ön kültür ile Rotiferler 3. Senkronizasyon <ol><li> st tek bir rotifer seçinock nüfusu ve kültürü deneyleri için kullanılacak bir alt popülasyonu kurmak için 2.1-2.3 tarif edilmiştir. iki hafta içinde tipik olarak kültür. </li><li> alt nüfustan yumurta taşıyan rotifer toplayın (deney için kullanılacak bireylerin çift sayıda toplamak). Tek bir grup olarak kültür bunları (yoğunluk: ~ 50 birey / ml) ad libitum besleme altında taze ortam içinde 2.1-2.3 tarif edildiği gibi bir 6-yuvalı kültür plakasına. Koşullandırılmış ortam Brachionus rotifer 32,33 üreme fizyolojisini etkiler çünkü nüfus yoğunluğu kontrol eden önemlidir. </li><li> Yeni hazırlanan kültür ortamına yetişkinlerin ilk yumurtalardan yenidoğanlar aktarın. 2-3 nesil boyunca bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Hayatta kalma süresini ölçmek için belirli bir süre (örneğin, &lt;3 saat) içinde yumurtadan yenidoğanlar kullanın. , Inde birkaç kullanarak tekrarlanabilirlik kontrol çok imkansız olmasına rağmen, tek bir birey seçiminde olası bir önyargı önlemek içinsarkık alt popülasyonları. Not: rotifer genellikle bu koşul altında sadece eşeysiz üreme olarak, hiçbir erkek deney boyunca mevcut olduğundan emin olun. Erkekler yenidoğan daha küçüktür ve genellikle hızlı kadınlarda daha taşımak. Mictic kadın, belirli koşullar altında 29 amictic kadın farklı ömürleri vardır. </li></ol> Survival of Time 4. Ölçümler <ol><li> Plastik levha yerleştirin yenidoğan (yapay deniz suyu içeren her 1 ml tipik haliyle 24 ya da 48 oyuklu plakalar). </li><li> 24 saat aralıklarla, eğer daha yüksek bir sıcaklıkta (30 ° C&#39;nin altında OR) yeni hazırlanmış kültür ortamı ya da 12 saatlik aralıklarla rotifer aktarın. döl sayısını kaydetmek ve her bireyin ölü ya da diri olup olmadığı. Koronanın kirpikler hareketi tamamen durduğunda ölü olarak rotifer kaydedin. Not: Rotiferler genellikle kuyu yan yüzeyine yapışırlar. Suyun yumuşak pipetleme onları bulmak için yardımcı olur. rotifer bulunamadı veya ar değilsenize yanlışlıkla &quot;sansürlü&quot; olarak değil &quot;ölü&quot; olarak, bunları kayıt, pipetle zarar. </li><li> Deneysel rotifer aktif üreyen zaman yenidoğanlar çıkarın. Yenidoğanlar hızla büyümeye ve deneysel rotifer onları ayırmak için bazen zordur. </li></ol> 5. Veri Analizi <ol><li> Kaplan-Meier sağkalım eğrisi (Şekil 1 ve 2) X ekseninde Y ekseni ve zamanında kümülatif sağkalım oranı çizerek oluşturun. Bu yaşam en yaygın veri temsilidir. Hayatta kalma süresi 34 istatistiksel karşılaştırma için (aynı zamanda Mantel-Cox testi denir) non-parametrik log-rank testi kullanın. log-rank testi aynı zamanda JMP ve R. gibi diğer standart istatistik paket dahildir Not: Normal dağılım genellikle hayatta kalma verileri 35 tarafından karşılandı çünkü Student t-testi veya parametrik çoklu karşılaştırma ardından varyans (ANOVA) analizi kullanmayın. Ayrıca, bu metoDS dikkate sansür bireyleri yapmayız. hiçbir sansür veri olup olmadığını Mann-Whitney U testi kullanılabilir. </li></ol>

<ol><li>Wallace, R. L., Snell, T. W., Ricci, C., Nogrady, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWallace%2C+RL+%22Rotifera+Vol.1%3A+Biology%2C+ecology+and+systematics%22">Rotifera Vol.1: Biology, ecology and systematics</a>. , 2nd edn, SPB Academic Publishing. (2006).</li>
<li>Segers, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSegers%2C+H+%22Annotated+checklist+of+the+rotifers+%28Phylum+Rotifera%29%2C+with+notes+on+nomenclature%2C+taxonomy+and+distribution%22">Annotated checklist of the rotifers (Phylum Rotifera), with notes on nomenclature, taxonomy and distribution</a>. , Magnolia Press. Auckland. (2007).</li>
<li>Mark Welch, D. B., Meselson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+the+evolution+of+bdelloid+rotifers+without+sexual+reproduction+or+genetic+exchange%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence for the evolution of bdelloid rotifers without sexual reproduction or genetic exchange.</a> Science. 288 (5469), 1211-1215 (2000).</li>
<li>Suga, K., Mark Welch, D., Tanaka, Y., Sakakura, Y., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+expressed+sequence+tags+of+the+cyclically+parthenogenetic+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Analysis of expressed sequence tags of the cyclically parthenogenetic rotifer Brachionus plicatilis.</a> PLoS ONE. 2, e671(2007).</li>
<li>Denekamp, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+genes+associated+with+dormancy+in+the+monogonont+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Discovering genes associated with dormancy in the monogonont rotifer Brachionus plicatilis.</a> BMC Genomics. 10, 108(2009).</li>
<li>Lee, J. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence+analysis+of+genomic+DNA+%28680+Mb%29+by+GS-FLX-Titanium+sequencer+in+the+monogonont+rotifer%2C+Brachionus+ibericus%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Sequence analysis of genomic DNA (680 Mb) by GS-FLX-Titanium sequencer in the monogonont rotifer, Brachionus ibericus.</a> Hydrobiologia. 662 (1), 65-75 (2010).</li>
<li>Flot, J. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+evidence+for+ameiotic+evolution+in+the+bdelloid+rotifer+Adineta+vaga%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genomic evidence for ameiotic evolution in the bdelloid rotifer Adineta vaga.</a> Nature. 500 (7463), 453-457 (2013).</li>
<li>Dunn, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad+phylogenomic+sampling+improves+resolution+of+the+animal+tree+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Broad phylogenomic sampling improves resolution of the animal tree of life.</a> Nature. 452 (7188), 745-749 (2008).</li>
<li>Yoshinaga, T., Kaneko, G., Kinoshita, S., Tsukamoto, K., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+mechanisms+of+life+history+alterations+in+a+rotifer%3A+a+novel+approach+in+population+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+B+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The molecular mechanisms of life history alterations in a rotifer: a novel approach in population dynamics.</a> Comp. Biochem. Physiol. B Biochem. Mol. Biol. 136 (4), 715-722 (2003).</li>
<li>Dahms, H. -U., Hagiwara, A., Lee, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecotoxicology%2C+ecophysiology%2C+and+mechanistic+studies+with+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Ecotoxicology, ecophysiology, and mechanistic studies with rotifers.</a> Aquat. Toxicol. 101 (1), 1-12 (2011).</li>
<li>Snell, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotifers+as+models+for+the+biology+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Rotifers as models for the biology of aging.</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 84-95 (2014).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K., Gribble, K. E., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotifers+as+experimental+tools+for+investigating+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebr.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Rotifers as experimental tools for investigating aging.</a> Invertebr. Reprod. Dev. 59, Suppl 1. 5-10 (2015).</li>
<li>Kaneko, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+Mn-superoxide+dismutase+and+gene+expression+studies+in+dietary+restricted+Brachionus+plicatilis+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of Mn-superoxide dismutase and gene expression studies in dietary restricted Brachionus plicatilis rotifers.</a> Hydrobiologia. 546, 117-123 (2005).</li>
<li>Yoshinaga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-like+growth+factor+signaling+pathway+involved+in+regulating+longevity+of+rotifers%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Insulin-like growth factor signaling pathway involved in regulating longevity of rotifers.</a> Hydrobiologia. 546, 347-352 (2005).</li>
<li>Ozaki, Y., Kaneko, G., Yanagawa, Y., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+enhances+hypoxia+tolerance+in+association+with+the+increased+mRNA+levels+of+glycolytic+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction in the rotifer Brachionus plicatilis enhances hypoxia tolerance in association with the increased mRNA levels of glycolytic enzymes.</a> Hydrobiologia. 649 (1), 267-277 (2010).</li>
<li>Kailasam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+calorie+restriction+on+the+expression+of+manganese+superoxide+dismutase+and+catalase+under+oxidative+stress+conditions+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of calorie restriction on the expression of manganese superoxide dismutase and catalase under oxidative stress conditions in the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 77 (3), 403-409 (2011).</li>
<li>Garcìa-Garcìa, G., Sarma, S., Núñez-Orti, A. R., Nandini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+mixture+of+two+endocrine+disruptors+%28ethinylestradiol+and+levonorgestrel%29+on+selected+ecological+endpoints+of+Anuraeopsis+fissa+and+Brachionus+calyciflorus+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Effects of the mixture of two endocrine disruptors (ethinylestradiol and levonorgestrel) on selected ecological endpoints of Anuraeopsis fissa and Brachionus calyciflorus (Rotifera).</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 166-172 (2014).</li>
<li>Yang, J., Mu, Y., Dong, S., Jiang, Q., Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+expression+of+four+heat+shock+proteins+during+the+aging+process+in+Brachionus+calyciflorus+%28rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Changes in the expression of four heat shock proteins during the aging process in Brachionus calyciflorus (rotifera).</a> Cell Stress Chaperones. 19 (1), 33-52 (2014).</li>
<li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublethal+gamma+irradiation+affects+reproductive+impairment+and+elevates+antioxidant+enzyme+and+DNA+repair+activities+in+the+monogonont+rotifer+Brachionus+koreanus%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Sublethal gamma irradiation affects reproductive impairment and elevates antioxidant enzyme and DNA repair activities in the monogonont rotifer Brachionus koreanus.</a> Aquat. Toxicol. 155, 101-109 (2014).</li>
<li>Gribble, K. E., Jarvis, G., Bock, M., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+caloric+restriction+partially+rescues+the+deleterious+effects+of+advanced+maternal+age+on+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Maternal caloric restriction partially rescues the deleterious effects of advanced maternal age on offspring.</a> Aging Cell. 13 (4), 623-630 (2014).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+periodical+starvation+on+the+survival+of+offspring+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of periodical starvation on the survival of offspring in the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 67 (2), 373-374 (2001).</li>
<li>Kaneko, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction-induced+maternal+longevity+is+transmitted+to+their+daughters+in+a+rotifer%5BTitle%5D)+AND+%22Funct.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction-induced maternal longevity is transmitted to their daughters in a rotifer.</a> Funct. Ecol. 25 (1), 209-216 (2011).</li>
<li>Lansing, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transmissible%2C+cumulative%2C+and+reversible+factor+in+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">A transmissible, cumulative, and reversible factor in aging.</a> J. Gerontol. 2 (3), 228-239 (1947).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+periodical+starvation+on+the+life+history+of+Brachionus+plicatilis+O.+F.+M%C3%BCller+%28Rotifera%29%3A+a+possible+strategy+for+population+stability%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Mar.+Biol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Effect of periodical starvation on the life history of Brachionus plicatilis O. F. Müller (Rotifera): a possible strategy for population stability.</a> J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 253 (2), 253-260 (2000).</li>
<li>Gribble, K. E., Kaido, O., Jarvis, G., Mark Welch, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+intraspecific+variability+in+the+response+to+caloric+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Patterns of intraspecific variability in the response to caloric restriction.</a> Exp. Gerontol. 51, 28-37 (2014).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol+extends+lifespan+of+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29+and+protects+against+stressors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Glycerol extends lifespan of Brachionus manjavacas (Rotifera) and protects against stressors.</a> Exp. Gerontol. 57, 47-56 (2014).</li>
<li>Kim, H. -J., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+female+aging+on+the+morphology+and+hatchability+of+resting+eggs+in+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+M%C3%BCller%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Effect of female aging on the morphology and hatchability of resting eggs in the rotifer Brachionus plicatilis Müller.</a> Hydrobiologia. 662 (1), 107-111 (2011).</li>
<li>Kim, H. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-dependent+transcriptional+events+during+resting+egg+hatching+of+the+rotifer+Brachionus+manjavacas%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Genomics%22%5BJournal%5D)">Light-dependent transcriptional events during resting egg hatching of the rotifer Brachionus manjavacas.</a> Mar. Genomics. 20, 25-31 (2015).</li>
<li>Gribble, K. E., Welch, D. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life-span+extension+by+caloric+restriction+is+determined+by+type+and+level+of+food+reduction+and+by+reproductive+mode+in+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Life-span extension by caloric restriction is determined by type and level of food reduction and by reproductive mode in Brachionus manjavacas (Rotifera).</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (4), 349-358 (2013).</li>
<li>Kaneko, G., Kinoshita, S., Yoshinaga, T., Tsukamoto, K., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+expression+patterns+of+stress+protein+genes+during+population+growth+of+the+rotifer+Brachionus+plicatilis%5BTitle%5D)+AND+%22Fish.+Sci%22%5BJournal%5D)">Changes in expression patterns of stress protein genes during population growth of the rotifer Brachionus plicatilis.</a> Fish. Sci. 68 (6), 1317-1323 (2002).</li>
<li>Kim, H. J., Sawada, C., Hagiwara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+and+reproduction+of+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+species+complex+under+different+light+wavelengths+and+intensities%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Hydrobiol%22%5BJournal%5D)">Behavior and reproduction of the rotifer Brachionus plicatilis species complex under different light wavelengths and intensities.</a> Int. Rev. Hydrobiol. 99 (1-2), 151-156 (2014).</li>
<li>Yoshinaga, T., Hagiwara, A., Tsukamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+conditioned+media+on+the+asexual+reproduction+of+the+monogonont+rotifer+Brachionus+plicatilis+O.+F.+M%C3%BCller%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Effect of conditioned media on the asexual reproduction of the monogonont rotifer Brachionus plicatilis O. F. Müller.</a> Hydrobiologia. 412, 103-110 (1999).</li>
<li>Ohmori, F., Kaneko, G., Saito, T., Watabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+growth-promoting+protein+in+the+conditioned+media+from+the+rotifer+Brachionus+plicatilis+at+an+early+exponential+growth+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">A novel growth-promoting protein in the conditioned media from the rotifer Brachionus plicatilis at an early exponential growth phase.</a> Hydrobiologia. 667 (1), 101-117 (2011).</li>
<li>GraphPad Statistics Guide. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.graphpad.com/guides/prism/6/statistics/">http://www.graphpad.com/guides/prism/6/statistics/</a> (2015).</li>
<li>Collet, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCollet%2C+D+%22Modelling+Survival+Data+in+Medical+Research%22">Modelling Survival Data in Medical Research</a>. , 2nd edn, Chapman & Hall/CRC. 151-193 (1993).</li>
<li>Bouliotis, G., Billingham, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossing+survival+curves%3A+alternatives+to+the+log-rank+test%5BTitle%5D)+AND+%22Trials%22%5BJournal%5D)">Crossing survival curves: alternatives to the log-rank test.</a> Trials. 12, Suppl 1. A137(2011).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+expression+of+manganese+superoxide+dismutase%2C+copper+and+zinc+superoxide+dismutase+and+catalase+in+Brachionus+calyciflorus+during+the+aging+process%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Changes in expression of manganese superoxide dismutase, copper and zinc superoxide dismutase and catalase in Brachionus calyciflorus during the aging process.</a> PloS ONE. 8 (2), e57186(2013).</li>
<li>Snell, T. W., Johnston, R. K., Rabeneck, B., Zipperer, C., Teat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+inhibition+of+TOR+and+JNK+pathways+interacts+to+extend+the+lifespan+of+Brachionus+manjavacas+%28Rotifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Joint inhibition of TOR and JNK pathways interacts to extend the lifespan of Brachionus manjavacas (Rotifera).</a> Exp. Gerontol. 52, 55-69 (2014).</li>
<li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+nematode+Caenorhabditis-elegans+-+major+biological+and+environmental-factors+influencing+life-span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Ageing+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in nematode Caenorhabditis-elegans - major biological and environmental-factors influencing life-span.</a> Mech. Ageing Dev. 6 (6), 413-429 (1977).</li>
<li>Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+parental+age+effects+on+the+evolution+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">The role of parental age effects on the evolution of aging.</a> Evolution. 56 (5), 927-935 (2002).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Mevcut protokolü Brachionus rotiferler sağkalım süresini ölçmek için bir yöntem tarif eder. Kritik adım birkaç nesil boyunca rotifer koşulları eşitleme olduğunu. Deneysel rotifer iyi senkronize edildiğinde birkaç önceki çalışmalarda 18,24,37,38 belirtildiği gibi, tipik bir tip I sağkalım eğrisi çok az erken mortalite ile görülmektedir. onların hayatta kalma süresi standart sapmaları dolayısıyla yüksek istatistiksel güç sonuçlanan kötü senkronize rotifer göre daha küçük olur. Senkronizasyon da yaşam s...

Rotiferler filumunu Rotifera 1 oluşturduğu mikroskopik kozmopolit zooplankton (&lt;1 mm) &#39;dir. Bu yaklaşık 1000 somatik hücreler gibi karakteristik bir tekerlek gibi siliyer cihazından oluşan basit bir vücut düzeni hareket kabiliyeti ve besleme için kullanılan korona, adı vardır. Çoğu rotifer yaklaşık 1.600 ve 500 tür, sırasıyla 2 ihtiva sınıflar Monogononta veya bdelloidea aittir. Bdelloid rotifer zorunlu parthenogenesis 3 ile yeniden oluşturma sırasında Monogonont rotiferler genellikle hem eşeyli ve eşeysiz üreme evreleri (döngüsel parthenogenesis) var. Deneylerde, yüksek tekrarlanabilirliği sağlanır genetik olarak özdeş rotifer bireyler elde etmek mümkündür. Buna ek olarak, bu kadar kısa bir ömrü, kültür kolaylığı, genomik ve transkriptomik dizi verilerine 4-7 kullanılabilirliği ve uzak benzersiz bir filogenetik pozisyon gibi model organizmalar gibi birçok başka avantajları varrthropods ve nematodların 8. Rotifer Bu nedenle ekolojik, toksikolojik omurgasız modelleri vaat ve çalışmalar 9-12 yaşlanma vardır. Çevresel strese ya da kimyasallara maruz altında hayatta kalma süresi bu araştırma alanlarında 13-19 bir çok ölçülen parametredir. Bu annelerinin çevre koşullarına maruz olduğu rotiferler hayatta kalma süresini ölçme, ancak, dikkatli gereklidir. Yani, monogonont rotiferi Brachionus manjavacas olarak, yaşlı annelerden gelen kadın yavrular genç annelerden daha kısa bir ömrü var; Ancak, anne kalori kısıtlaması (CR) kısmen ileri anne yaşı 20 zararlı etkilerini dengeler. B. plicatilis, anne CR yavru uzun ömürlü, açlık altında uzun yaşam süresi ve antioksidan enzimler 21,22 gelişmiş ifadesi ile ilişkili yüksek oksidatif stres direnci sağlar. anne yaşı etkisiAyrıca bdelloid rotiferler 23 gözlenmiştir. Bu nedenle, deneysel rotifer koşulları dikkatlice sağkalım süresi ölçümleri önce birkaç nesil boyunca senkronize edilmelidir. Burada birkaç nesil boyunca kültür koşulları senkronizasyon aşağıdaki Brachionus rotifer sağkalım süresinin ölçümü için bir protokol sağlar. Aralıklı açlık (IF), rotiferler periyodik beslenir CR bir varyasyon nedeniyle uzun ömürlü 22,24 tarihinde IF tanınmış etkilerine senkronizasyon etkisini ortaya çıkarmak için uygulanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Wako</td><td>190-13921</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Wako</td><td>136-03995</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat</td><td>Wako</td><td>131-00427</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Wako</td><td>168-22111</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Wako</td><td>035-00455</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Wako</td><td>199-05985</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bromür</td><td>Wako</td><td>190-01515</td><td></td></tr><tr><td>Membran filtre (0.45 & mikro; m gözenek boyutu)</td><td>Millipore HAWP04700</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kültür plakası, 6 oyuklu, işlem görmemiş</td><td>Thomas Scientific</td><td>6902D01</td><td>Düz tabanlı</td></tr><tr><td>Kültür plakası, 48 oyuklu, işlem görmemiş</td><td>Thomas Scientific</td><td>6902D07</td><td>Düz tabanlı</td></tr><tr><td>Tetraselmis, Living</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>152610</td><td></td></tr><tr><td>PRISM 6</td><td>GraphPad Yazılım</td><td>Sürümü 6.0d</td><td></td></tr></tbody></table>

hayatta kalma süre deneyinde<em&gt; brachionus</em&gt; rotiferler: maternal koşullarının senkronizasyon

Measurement of Survival Time in Brachionus Rotifers: Synchronization of Maternal Conditions

Rotiferler, kısa ömür, kültür kolaylığı ve klonal kültürü mümkün kılan partenogenez gibi çeşitli avantajları nedeniyle ekotoksikolojik ve yaşlanma çalışmalarında model olarak kullanılan mikroskobik kozmopolit zooplanktonlardır. Bununla birlikte, anne yaşı ve anne beslenme koşullarından etkilendiği için hayatta kalma sürelerini ölçerken dikkatli olunmalıdır. Burada, birkaç nesil boyunca kültür koşullarının dikkatli bir şekilde senkronize edilmesini takiben Brachionus rotiferlerinde hayatta kalma süresinin güçlü ve tekrarlanabilir ölçümü için bir protokol sunuyoruz. Ampirik olarak, zayıf senkronizasyon erken mortalite ve sağkalım oranında kademeli bir azalma ile sonuçlanır, böylece zayıf istatistiksel güç ile sonuçlanır. Gerçekten de, bu tür koşullar altında, kalori kısıtlaması (CR), geçmiş ve mevcut çalışmalarda iyi senkronize rotifer numuneleri ile CR'nin neden olduğu uzun ömürlülük gösterilmiş olmasına rağmen, B. plicatilis'in ömrünü önemli ölçüde uzatamadı. Bu protokol muhtemelen meyve sineği Drosophila melanogaster ve nematod Caenorhabditis elegans dahil olmak üzere diğer omurgasız modelleri için yararlıdır, çünkü bu türlerde anne yaşı etkileri de bildirilmiştir.

Şekil 1 kötü senkronize popülasyonlar (iki çoğaltır dışarı) temsilcisi yaşam eğrilerini göstermektedir. Bu deneyde, rotiferler vardı ya beslenen günlük [ad libitum (AL) grubu] veya (grup IF) her gün. Medyan sağkalım sırasıyla gruplar AL ve IF 13 ve 18 gün idi. iyi IF rotifer ömrünü uzatır olduğu bilinmesine rağmen, bu deney AL ve gruplar IF ömürleri arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark tespit edemedi. Ampirik, erken ölüm ve hayatta kalma oranı ka...

Rotiferler, ekotoksikolojik ve yaşlanma çalışmalarında model olarak kullanılan mikroskobik zooplanktonlardır. Burada, Brachionus rotiferlerinde hayatta kalma süresinin güçlü ve tekrarlanabilir ölçümü için bir protokol sunuyoruz. Kültür koşullarının birkaç nesil boyunca senkronizasyonu özellikle önemlidir, çünkü anne durumu yavruların yaşam öyküsünü etkiler.

Hayatta kalma Süre deneyinde<em&gt; Brachionus</em&gt; Rotiferler: Maternal Koşullarının Senkronizasyon

Rotifers are microscopic cosmopolitan zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies due to their several advantages such as short ...

Bu prosedürün genel amacı, maternal nesillerin olası zararlı etkilerini bertaraf ederek Brachionus Rotiferlerinin hayatta kalma süresini doğru bir şekilde ölçmektir. Bu yöntem, yaşlanma araştırmalarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Rotiferlerin hayatta kalma süresini ölçmek için güvenilir bir yöntem sağlayarak. Bu tekniğin temel avantajı, tekrarlanabilir olması ve yüksek istatistiksel güce sahip olmasıdır. Başlamak için, 4.5 litre distile veya deiyonize seyreltme suyuna 454 millimolar sodyum klorür, 26 millimolar magnezyum klorür, 27 millimolar magnezyum sülfat, on millimolar potasyum klorür ve on millimolar kalsiyum klorür ekleyin.0.48 molar sodyum bikarbonat stok çözeltisi hazırlayın. Ve bunun 25 mililitresini yeni hazırlanmış olan tuz çözeltisine ekleyin. 0.4 molar sodyum bromür stok çözeltisi hazırlayın.Ardından, tuz çözeltisine bundan on mililitre ekleyin. Sonra, distile su ile tuz çözeltisini beş litreye tamamlayın. Ve çözeltiyi, 0.45 mikrometre filtre membranı kullanarak süzün.Laboratuvar ortamında yetiştirilen veya doğadan yakalanan rotiferleri kültüre etmek için, onları yapay deniz suyu içeren steril 100 mililitrelik bir behere yerleştirin. Ve 25 °C'de kültüre edin. Snell'in yöntemlerine uygun olarak, diyet mikroalg türlerini yapay deniz suyunda kültüre edin.Tüm deney gruplarında aynı mikroalg lotunun kullanıldığından emin olun. Rotiferlerin stok popülasyonunu, onları iki günde bir besleyerek ve besiyerini her hafta değiştirerek bir kesikli kültürde sürdürün.Rotiferler optimal koşullarda olduğunda, iki ila üç yumurta taşıyan birçok neonat ve yetişkin gözlemlenebilir. Ön kültür yoluyla rotiferleri senkronize etmek için, stok popülasyondan tek bir rotifer seçin. Ve bunu, az önce açıklandığı gibi yaklaşık iki hafta boyunca 100 mililitrelik bir beherde yapay deniz suyunda kültüre edin.İnkübasyonun ardından, alt popülasyondan yumurta taşıyan rotiferleri toplayın. Altı kuyucuklu bir plakanın kuyucuklarına mililitre başına yaklaşık 50 rotifer gelecek şekilde deniz suyu ekleyerek bunları tek bir kohort olarak kültüre edin ve ad libitum besleyin. Yumurtalar çatladığında, neonatları yeni hazırlanmış kültür ortamına aktarın.Yavruların kültürlenmesi ve aktarılması işlemini iki ila üç nesil boyunca tekrarlayın. Hayatta kalma süresini ölçmek için, üç saatlik bir zaman dilimi içinde yumurtadan çıkan yavruları, bir mililitre yapay deniz suyu içeren 24 veya 48 kuyucuklu plakaların kuyucuklarına yerleştirin. 12 veya 24 saatlik aralıklarla, rotiferleri yeni hazırlanmış kültür ortamına aktarın.Yavru sayısını ve her bir bireyin ölü mü yoksa canlı mı olduğunu kaydedin. Koronanın siliya hareketleri tamamen durduğunda rotifer ölü olarak kaydedilir. Deney rotiferleri aktif olarak ürediğinde, hızlı büyüdükleri ve bazen deney rotiferlerinden ayırt edilmeleri zor olduğu için neonatları ortamdan uzaklaştırın.Veri analizini metin protokolüne göre gerçekleştirin. Bu şekil, zayıf senkronize edilmiş rotifer popülasyonlarının iki tekrarından elde edilen sağkalım eğrilerini göstermektedir. A-L olarak gösterilen ad libitum beslenenler veya Aralıklı Oruç (I-F) olarak gösterilen gün aşırı beslenenler.İki grupta medyan sağkalım süresi sırasıyla 13 ve 18 gündü. Aralıklı orucun rotiferlerin yaşam süresini uzattığı iyi bilinse de, farklar istatistiksel olarak anlamlı değildi. Bu deneyde, rotifer koşulları optimaldi ve iyi şekilde senkronize edilmişti.Hayvanlar deneyin ilerleyen aşamalarına kadar hayatta kalma eğilimi göstermişlerdir. Medyan sağkalım süresi AL rotiferler için 13 gün, IF grupları için ise 20 gündür. Bu durum istatistiksel olarak anlamlıydı.Bu videoyu izledikten sonra, rotifer koşullarının nasıl senkronize edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu protokolün, model organizma ve yaşlanma araştırmaları kapsamında rotiferlerin katkısını artırmasını umuyoruz.

measurement-survival-time-brachionus-rotifers-synchronization

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu yazıda, UV öldürüldü bakteriyel gıda ile sağlam bir medya üzerinde muhafaza nematod ömrü ölçmek için genel bir protokol mevcut.

Ölçme Caenorhabditis elegans Katı Medya Ömrü

Bu videoda, gelişimsel olarak senkronize bir steril yetişkin C. elegans popülasyonu üretme yöntemini gösteriyoruz. Örnek protokol, canlı hayvanlarda oksijen tüketim oranlarını incelemek için solucanları senkronize eder.

Nematod Senkronizasyonu: Aynı Gelişim Aşamalarında Solucan Popülasyonları Elde Etmek İçin Bir Yöntem

Bu videoda, C. elegans'ın ömrünü ölçmek için geleneksel, plaka tabanlı bir yöntem açıklanmaktadır. Örnek protokol, RNAi ile tedavi edilen solucanların ömrünü ölçer.

Yaşam Süresi Analizi: C. elegans Uzun Ömürlülüğün Ölçülmesi

Burada, nematod Caenorhabditis elegans'ın embriyonik uzamasının erken ve geç aşamalarında meydana gelen morfojenik kusurları izlemek için özel olarak tasarlanmış protokolleri detaylandırıyoruz. Sonuç olarak, bu protokoller, bu fazları düzenleyen genleri tanımlamak ve embriyonun antero-arka ekseni boyunca diferansiyel gereksinimlerini karakterize etmek için tasarlanmıştır.

Roman Metrik Nematodu Embriyonik Uzama karakterize etmek<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Uzun vadeli çalışmalar evrim süreci ve adaptasyon mekanizmaları anlamak için gerekli. Genel olarak, bu çalışmalar araştırmacıların ömür boyu ötesinde taahhütleri gerektirir. Burada, güçlü bir yöntem büyük ölçüde doğal sistemlerinde boyuna verileri oluşturmak için state-of--art veri toplama gelişmeler açıklanmıştır.

Diriliş uyuyan Daphnia magna: Protokolü ve uygulamaları

Burada biz yineleme kümesi yöntemi, bir yaklaşım kantitatif ölçmek C. elegans ömrü/hayatta kalma ve healthspan yüksek üretilen iş ve sağlam bir şekilde böylece veri kalite ödün vermeden birçok koşullar tarama izin tanımlamak. Bu iletişim kuralı strateji detayları ve yineleme kümesi veri çözümlemesi için bir yazılım aracı sağlar.

Yineleme kümesi yöntemi: Bir yüksek-den geçerek yaklaşım kantitatif ölçü Caenorhabditis elegans ömrü

Mitokondrial solunum organizmalar hayatta kalmak için önemlidir; Bu nedenle, oksijen tüketim oranını mitokondrial sağlık mükemmel bir göstergesidir. Bu iletişim kuralı, Bazal ölçmek için piyasada bulunan bir respirometer nasıl kullanılacağını açıklar ve maksimal oksijen tüketimi oranlarında yaşa, sağlam ve serbestçe hareketli Caenorhabditis elegans.

Oksijen tüketimi oranlarında sağlam Caenorhabditis elegans ölçümü

Burada, nematod C. elegans hücresel proteotoksik stres yanıtları floresan transkripsiyonel muhabirlerin aktivasyonunu ölçerek ve fizyolojik strese duyarlılık belirterek karakterize.

C. Eleganlarda Fizyolojik Stres Tepkilerinin Ölçüleri

Caenorhabditis elegans, sağlık süresini, ömrünü ve strese karşı dayanıklılığı araştırmak için sağlam ve düşük maliyetli yöntemlerle mükemmel bir model sistem olarak hizmet eder.

Caenorhabditis elegans'ta Yaşam Süresini ve Sağlık Süresini Ölçmek için Düşük Maliyetli Yöntemlerin İncelenmesi

Burada, C. elegans model organizmasını kullanarak embriyonik canlılığı ve üretilen toplam embriyo sayısını (kuluçka) belirlemek için genel bir yöntem sunuyoruz.

Caenorhabditis elegans'ta embriyonik canlılık ve yavru büyüklüğünün ölçülmesi

Öğrenin Brachionus rotiferlerinde hayatta kalma süresi ölçümü için maternal etkileri ortadan kaldıran senkronizasyon protokolü. Bu yöntem yaşlanma araştırmalarında yüksek istatistiksel güç sağlar.

Hayatta kalma Süre deneyinde

Daha fazla video keşfet