Name: Metabolik fenotipleri farklı olarak sahip Olgunlaşmamış, Olgun ve tolerojenik Dendritik Hücrelerinin Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Öğrenin, monositlerden immatür, olgun ve tolerojenik dendritik hücreler üretmeyi. Bu yöntem, immünoloji araştırmaları ve aşı geliştirme için yüksek sayıda hücre elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Bilim, Teknoloji ve (KEK için) Araştırmaları Çekirdek Finansman Ajansı tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Jolles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paul+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Paul Langerhans.</a> J Clin Pathol. 55 (4), 243-24 (2002).</li>
<li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology%2C+quantitation%2C+tissue+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).</li>
<li>Steinman, R. M., Swanson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocytic+activity+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The endocytic activity of dendritic cells.</a> J Exp Med. 182 (2), 283-288 (1995).</li>
<li>Hemmi, H., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR+signalling+and+the+function+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Immunol+Allergy%22%5BJournal%5D)">TLR signalling and the function of dendritic cells.</a> Chem Immunol Allergy. 86, 120-135 (2005).</li>
<li>Mueller, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+maintaining+peripheral+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms maintaining peripheral tolerance.</a> Nat Immunol. 11 (1), 21-27 (2010).</li>
<li>Inaba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+phagocytosed+cellular+fragments+on+the+major+histocompatibility+complex+class+II+products+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of phagocytosed cellular fragments on the major histocompatibility complex class II products of dendritic cells.</a> J Exp Med. 188 (11), 2163-2173 (1998).</li>
<li>Caux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B70%2FB7-2+is+identical+to+CD86+and+is+the+major+functional+ligand+for+CD28+expressed+on+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">B70/B7-2 is identical to CD86 and is the major functional ligand for CD28 expressed on human dendritic cells.</a> J Exp Med. 180 (5), 1841-1847 (1994).</li>
<li>Paavonen, J., Lehtinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+human+papillomavirus+and+other+sexually+transmitted+agents+in+the+etiology+of+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Interactions between human papillomavirus and other sexually transmitted agents in the etiology of cervical cancer.</a> Curr Opin Infect Dis. 12 (1), 67-71 (1999).</li>
<li>Ohtani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+target+of+rapamycin+and+glycogen+synthase+kinase+3+differentially+regulate+lipopolysaccharide-induced+interleukin-12+production+in+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mammalian target of rapamycin and glycogen synthase kinase 3 differentially regulate lipopolysaccharide-induced interleukin-12 production in dendritic cells.</a> Blood. 112 (3), 635-643 (2008).</li>
<li>Wilde, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+in+renal+biopsies+of+patients+with+ANCA-associated+vasculitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells in renal biopsies of patients with ANCA-associated vasculitis.</a> Nephrol Dial Transplant. 24 (7), 2151-2156 (2009).</li>
<li>Al-Hello, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enterovirus+strain+isolated+from+diabetic+child+belongs+to+a+genetic+subcluster+of+echovirus+11%2C+but+is+also+neutralised+with+monotypic+antisera+to+coxsackievirus+A9%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">An enterovirus strain isolated from diabetic child belongs to a genetic subcluster of echovirus 11, but is also neutralised with monotypic antisera to coxsackievirus A9.</a> J Gen Virol. 89, 1949-1959 (2008).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nomenclature+of+monocytes+and+dendritic+cells+in+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood.</a> Blood. 116 (16), 74-80 (2010).</li>
<li>Osugi, Y., Vuckovic, S., Hart, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+blood+CD11c%28%2B%29+dendritic+cells+and+monocyte-derived+dendritic+cells+differ+in+their+ability+to+stimulate+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Myeloid blood CD11c(+) dendritic cells and monocyte-derived dendritic cells differ in their ability to stimulate T lymphocytes.</a> Blood. 100 (8), 2858-2866 (2002).</li>
<li>Reynolds, G., Haniffa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+Mouse+Mononuclear+Phagocyte+Networks%3A+A+Tale+of+Two+Species%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human and Mouse Mononuclear Phagocyte Networks: A Tale of Two Species.</a> Front Immunol. 6, (2015).</li>
<li>Jefford, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+comparison+of+DCs+generated+in+vivo+with+Flt3+ligand+or+in+vitro+from+blood+monocytes%3A+differential+regulation+of+function+by+specific+classes+of+physiologic+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli.</a> Blood. 102 (5), 1753-1763 (2003).</li>
<li>Menck, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+monocytes+by+double+gradient+centrifugation+and+their+differentiation+to+macrophages+in+teflon-coated+cell+culture+bags%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human monocytes by double gradient centrifugation and their differentiation to macrophages in teflon-coated cell culture bags.</a> J Vis Exp. (91), (2014).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+human+granulocyte+and+monocyte+isolation+procedures+on+functional+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Impact of human granulocyte and monocyte isolation procedures on functional studies.</a> Clin Vaccine Immunol. 19 (7), 1065-1074 (2012).</li>
<li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+protocols+for+surface+and+intracellular+antigen+analyses+of+neural+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry protocols for surface and intracellular antigen analyses of neural cell types.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Faresjo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+for+analysis+of+immune+markers+by+fluorochrome+%28Luminex%29+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide for analysis of immune markers by fluorochrome (Luminex) technique.</a> Methods Mol Biol. 1172, 87-96 (2014).</li>
<li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>Defawe, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+qualification+of+a+multiplex+bead+array+to+assess+cytokine+and+chemokine+production+by+vaccine-specific+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization and qualification of a multiplex bead array to assess cytokine and chemokine production by vaccine-specific cells.</a> J Immunol Methods. 382 (1-2), 117-128 (2012).</li>
<li>Nicholls, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profile+experiment+using+C2C12+myoblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells.</a> J Vis Exp. (46), (2010).</li>
<li>Chunharas, A., Pabunruang, W., Hongeng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+self-healing+Langerhans+cell+histiocytosis+with+pulmonary+involvement%3A+spontaneous+regression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Assoc+Thai%22%5BJournal%5D)">Congenital self-healing Langerhans cell histiocytosis with pulmonary involvement: spontaneous regression.</a> J Med Assoc Thai. 85, 1309-1313 (2002).</li>
<li>Bai, L., Feuerer, M., Beckhove, P., Umansky, V., Schirrmacher, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dendritic+cells+from+human+bone+marrow+mononuclear+cells%3A+advantages+for+clinical+application+in+comparison+to+peripheral+blood+monocyte+derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Generation of dendritic cells from human bone marrow mononuclear cells: advantages for clinical application in comparison to peripheral blood monocyte derived cells.</a> Int J Oncol. 20 (2), 247-253 (2002).</li>
<li>Felzmann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+enrichment+from+leukapharesis+products+for+the+generation+of+DCs+by+plastic+adherence%2C+or+by+positive+or+negative+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Monocyte enrichment from leukapharesis products for the generation of DCs by plastic adherence, or by positive or negative selection.</a> Cytotherapy. 5 (5), 391-398 (2003).</li>
<li>Berger, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+elutriation+of+monocytes+within+a+closed+system+%28Elutra%29+for+clinical-scale+generation+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient elutriation of monocytes within a closed system (Elutra) for clinical-scale generation of dendritic cells.</a> J Immunol Methods. 298 (1-2), 1-2 (2005).</li>
<li>Sallusto, F., Lanzavecchia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+soluble+antigen+by+cultured+human+dendritic+cells+is+maintained+by+granulocyte%2Fmacrophage+colony-stimulating+factor+plus+interleukin+4+and+downregulated+by+tumor+necrosis+factor+alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha.</a> J Exp Med. 179 (4), 1109-1118 (1994).</li>
<li>Pace, S. T., Gelman, B. B., Wong, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Langerhans+cell+histiocytosis+of+the+lacrimal+gland+in+an+adult%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Primary Langerhans cell histiocytosis of the lacrimal gland in an adult.</a> Can J Ophthalmol. 50 (3), 40-43 (2015).</li>
<li>Ravanfar, P., Wallace, J. S., Pace, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diaper+dermatitis%3A+a+review+and+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Diaper dermatitis: a review and update.</a> Curr Opin Pediatr. 24 (4), 472-479 (2012).</li>
<li>Gebhardt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+case+of+cutaneous+Rosai-Dorfman+disease+refractory+to+imatinib+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A case of cutaneous Rosai-Dorfman disease refractory to imatinib therapy.</a> Arch Dermatol. 145 (5), 571-574 (2009).</li>
<li>Vazquez, P., Robles, A. M., de Pablo, F., Hernandez-Sanchez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-neural+tyrosine+hydroxylase%2C+via+modulation+of+endocrine+pancreatic+precursors%2C+is+required+for+normal+development+of+beta+cells+in+the+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Non-neural tyrosine hydroxylase, via modulation of endocrine pancreatic precursors, is required for normal development of beta cells in the mouse pancreas.</a> Diabetologia. 57 (11), 2339-2347 (2014).</li>
<li>Pellacani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+melanoma+types+based+on+reflectance+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Distinct melanoma types based on reflectance confocal microscopy.</a> Exp Dermatol. 23 (6), 414-418 (2014).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+involvement+of+Langerhans+cell+histiocytosis+in+children--imaging+findings+of+computed+tomography%2C+magnetic+resonance+imaging+and+magnetic+resonance+cholangiopancreatography%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Radiol%22%5BJournal%5D)">Hepatic involvement of Langerhans cell histiocytosis in children--imaging findings of computed tomography, magnetic resonance imaging and magnetic resonance cholangiopancreatography.</a> Pediatr Radiol. 44 (6), 713-718 (2014).</li>
<li>Haustein, M., Terai, N., Pablik, J., Pillunat, L. E., Sommer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapy-resistant+swelling+of+the+upper+eyelid+in+childhood%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Therapy-resistant swelling of the upper eyelid in childhood.</a> Ophthalmologe. 111 (1), 53-57 (2014).</li>
<li>Haidinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+role+of+mammalian+target+of+rapamycin+in+human+dendritic+cell+function+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A versatile role of mammalian target of rapamycin in human dendritic cell function and differentiation.</a> J Immunol. 185 (7), 3919-3931 (2010).</li>
<li>Macedo, C., Turquist, H., Metes, D., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoregulatory+properties+of+rapamycin-conditioned+monocyte-derived+dendritic+cells+and+their+role+in+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Res%22%5BJournal%5D)">Immunoregulatory properties of rapamycin-conditioned monocyte-derived dendritic cells and their role in transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 16(2012).</li>
<li>Fischer, R., Turnquist, H. R., Taner, T., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+rapamycin+in+the+induction+of+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Exp+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Use of rapamycin in the induction of tolerogenic dendritic cells.</a> Handb Exp Pharmacol. 188 (188), 215-232 (2009).</li>
<li>Nicolette, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+for+active+immunotherapy%3A+optimizing+design+and+manufacture+in+order+to+develop+commercially+and+clinically+viable+products%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells for active immunotherapy: optimizing design and manufacture in order to develop commercially and clinically viable products.</a> Vaccine. 25, 47-60 (2007).</li>
<li>Han, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+3+clinical+dendritic+cell+maturation+protocols+containing+lipopolysaccharide+and+interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 3 clinical dendritic cell maturation protocols containing lipopolysaccharide and interferon-gamma.</a> J Immunother. 32 (4), 399-407 (2009).</li>
<li>Paananen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biological+analysis+of+echovirus+9+strain+isolated+from+a+diabetic+child%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biological analysis of echovirus 9 strain isolated from a diabetic child.</a> J Med Virol. 69 (4), 529-537 (2003).</li>
<li>HC, O. N., Wilson, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+with+in+vitro+production+of+dendritic+cells+using+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Limitations with in vitro production of dendritic cells using cytokines.</a> J Leukoc Biol. 75 (4), 600-603 (2004).</li>
<li>Mest, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-induced+insulin+secretion+is+potentiated+by+a+new+imidazoline+compound%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn+Schmiedebergs+Arch+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Glucose-induced insulin secretion is potentiated by a new imidazoline compound.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 364 (1), 47-52 (2001).</li>
<li>Puc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+activity+after+cold+preservation+of+pancreatic+islet+cells+treated+with+pefloxacin+%28PFX%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial activity after cold preservation of pancreatic islet cells treated with pefloxacin (PFX).</a> Ann Transplant. 3 (1), 38-41 (1998).</li>
<li>Alarcon, C., Serna, J., Perez-Villamil, B., de Pablo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+differentially+regulated+processing+of+proinsulin+in+developing+chick+pancreas%2C+liver+and+neuroretina%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Letters%22%5BJournal%5D)">Synthesis and differentially regulated processing of proinsulin in developing chick pancreas, liver and neuroretina.</a> FEBS Letters. 436 (3), 361-366 (1998).</li>
<li>Jekunen, A. P., Kairemo, K. J., Paavonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+Hand-Schuller-Christian+syndrome+by+a+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Imaging of Hand-Schuller-Christian syndrome by a monoclonal antibody.</a> Clin Nucl Med. 22 (11), 771-774 (1997).</li>
<li>Pearce, E. J., Everts, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell metabolism.</a> Nat Rev Immunol. 15 (1), 18-29 (2015).</li>
</ol>

Bu makalenin açık erişim ücretleri Agilent Technologies tarafından sağlanmıştır.

Bu çalışma, monositler olgunlaşmamış MoDC&#39;ler, tolerojenik MoDC&#39;ler ve olgun MoDC&#39;ler arasından oluşturmak için bir yöntemi tarif etmektedir. Bu protokol önemli adımlar aşağıdaki paragraflarda ayrıntılı olarak ele alınmaktadır. İnsan periferal kan ve bu protokol uygulanmalıdır insan kanı kullanım için genel önlemleri bir başlangıç ​​malzemesi olarak kullanılır dikkat etmek önemlidir. Insanlarda 24, kemik iliğinden DH&#39;leri elde etmek teknik olarak mümkün olmakla birlikte, periferal kanında bulunan hücrelerden in vitro DC farklılaşma nedeniyle kemik iliği ile karşılaştırıldığında periferal kan mevcudiyeti tercih edilir. Periferik kanda bulunan hücreler, hematopoietik CD34 + kök hücreleri ve monositler yaygın DH&#39;ler in vitro üretimi için kullanılır. Hematopoetik CD34 + hücreleri daha sonra Langerhans ayrılırlar CD1a + ve CD14 + alt elde etmek için, GM-CSF ve TNF-a ile birlikte kültürlenir kökhücreler ve dendritik hücreler gibi. Bunun aksine, monositlerin olgunlaşmamış MoDC&#39;ler oluşturmak için, GM-CSF ve IL-4 ile kültürlendi. Çeşitli protokoller periferik kandan monositler zenginleştirilmesi için kullanılır; örneğin, plastik tabaklar, ayırımı ve izolasyon kiti 25, 26 bağlılık, yapışma protokol avantajları hücreleri en az zarar ve nispeten Ancak saflık tehlikeye olabilir hücre maliyetli.; ve fazladan bir adım daha ileri deneyler için hücreleri ayırmak için gereklidir. Elutriasyon büyüklüğüne ve yoğunluğuna göre hücreleri ayıran bir tekniktir. ayırımı avantajları, hücre canlılığı ve monositler hali hazırda başka deneyler için kullanılabilir; Bununla birlikte bu teknik, bir elutriatörü kullanılabilirliği ve benzeri sedimentasyon parametreleri farklı hücre (T hücreleri ve monositler) ayırmak için yetersizlik ile sınırlıdır. Ticari olarak mevcut izolasyon kitleri ya olumlu seçmek için manyetik mikrobilyeleri kullanmak veyaolumsuz monositik nüfus seçin. İzole monositler (belirteçler ya da mikro-bağlı değildir) &quot;el değmemiş&quot; kalır gibi bazı protokoller negatif seçim kullanarak monosit izolasyon karşı önyargılı olan. Bu protokolde, CD14 boncuk PBMC&#39;lerden pozitif seçkin insan monositleri için kullanıldı. CD14 sitoplazmik alam ve CD14 antikorun bağlanma sinyal iletimini tetiklemez. Ayrıca, mikroboncuklarının farklılaşma sürecini aksatmayacak dolayısıyla kültürden sonra monositler ayırmak ve olacaktır. Buna ek olarak, CD14 En güçlü monositlerde ve zayıf nötrofil ve bazı miyeloid dendritik hücreler, diğer yöntemlerle 17 daha yüksek hücre saflıkta yalıtım sonuçları bu nedenle bu yöntem üzerinde ifade edilir. Kan monositler DC&#39;lere veya makrofajlar içine ayırt edilebilir ve monositlerin kaderi büyük ölçüde sitokin ortamına bağlıdır. Bu yazıda, MoDC&#39;ler (GM granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktörü eklenerek oluşturulan-CSF) Ve insan periferik kan monositleri İnterlökin 4 (IL-4). GM-CSF, monosit hayatta kalma ve IL-4 makrofaj farklılaşması üzerinde bir inhibisyon aktivitesi uyguladığı için gereklidir; ve monositler GM-SCSF ve IL-4 kombinatoryal ilaveli bağımsız sitokin 27 göre olgunlaşmamış MoDC&#39;ler daha yüksek bir yüzde verim. Periferal kan monositleri, 28, 29, 30, tümör nekroz faktörü alfa (TNF-α), interferon-alfa (IFN-α) ve interlökin 13 (IL-13) eklenerek MoDC&#39;ler üreten diğer protokoller vardır. GM-CSF ve IL-4 birleşmesiyle immünojenik veya tolerojenik MoDC&#39;ler ayrışmıştır ve Th1, Th2 veya Th17 teşvik MoDC&#39;ler olarak polarize plastik olgun olmayan DH&#39;ler oluşturur kabul edilen bir protokole 1990&#39;larda optimize edildi ve. Olgunlaşmamış MoDC&#39;ler vitamin D3 ve deksametazon ilavesiyle tolerojenik MoDC&#39;ler ayrılır. Örneğin tolerojenik DC&#39;ler oluşturmak için birkaç protokoller aracılığıyla vardırnükleer faktör-kappa B (NF-kB) önlenmesi, β-katenin aktivasyonu, D3 vitamini, Deksametason ve rapamisin 31, 32, 33, 34, 35, 9, 36, 37. Tek başına vitamin D3 ve deksametazon hem DH&#39;ler, tek tek ilaç kullanıldığında daha alloproliferation daha büyük bir bastırma vitamin D3 ve deksametazon sonucu kombinasyonu üzerinde tolerojenik etkisini sağlamak için rapor edilmiştir, ancak. Bu nedenle, bir tolerogenik DC&#39;lerin üretimi için, mevcut protokolü vitamin D3 ve deksametazon bir kombinasyonu için değiştirildi. Bu yöntem şu anda tedavi programı ile insan tolerojenik DC&#39;ler için bir model olarak kabul ediliyor. Yeniden D3 vitamini ve deksametazon kısa bir raf ömrüne sahip olduğunu not etmek de önemlidir. Bu protokol, lipopolisakkaritlerin (LPS) bir DH olgunlaşma teşvik edici olarak ilave edildi. Olgunlaşmamış MoDC&#39;ler pro-enflamatuar bir kokteyl ile olgunlaştırma indüklenebilir:(TNF-α), interlökin 1 p (IL-1β), interlökin 6 (IL-6) ve prostaglandin E2) veya pro-enflamatuar sitokinleri (TNF-α ve interferon y (IFN-Γ)). Pro-iltihabik bir kokteyl, yüksek ko-stimülatör ve gezici fonksiyonları olgun MoDC&#39;ler oluşturur fakat, IL-12, 38, nispeten düşük seviyelerde üretir. TNF-α ya da IFN-Γ başına sabit bir dendritik fenotipi 39 uyarabildiği değildir. LPS, Toll-benzeri reseptör 4 (TLR4) uyaran DH olgunlaşmasını indükleme, NF-kB ve mitojen ile aktive edilmiş protein kinazın (MAPK&#39;lar) aktivasyonunu aracılık eder. LPS ile indüklenen DH olgunlaşma DH olgunlaşma belirteçleri (CD83, CD86, HLA-DR), bir yukarı-regülasyonu gösterir ve aynı zamanda, IL-12p70 üretimi yol açtı. Buna ek olarak, bu adım daha ileri klinik kanser aşıları için olgun DC&#39;ler üretmek için TLR3 agonistleri ile LPS eşleştirmek için modifiye edilebilir. Bu yazıda, tolerojenik DCler LPS tedavisi üzerine olgunlaşma dirençli olduğu gösterilmiştir. Bu DC&#39;ler immünojenik değildir ve relea yok gibi yarı-olgunse pro-inflamatuar sitokinler 40. Bu protokolün sınırlamalar farklılaşma sürecinde yalan. süreç yüksek verimlilik analizleri içine adapte edilecek bir zorluk teşkil Gün 7 Gün 0 8 gün sürer. protokolde bir değişiklik farklılaşma sürecini kısaltmak henüz farklı devletler yaşayabilir DC&#39;lere yüksek sayıda elde etmek için gereklidir. İkincisi, DH&#39;ler bu protokol sitokinlerin ilave edilerek üretilen ve bu sitokinler uzun süre DC nüfus sürdürmek değil. Ayrıca, sitokinler konsantrasyonlarda in vivo çok daha yüksek kullanıldığı ve in vitro DC&#39;ler fizyolojik özdeş olmayan yolların yanlı gelişimine neden olabilir. DC öncüleri in vitro kültürler, örneğin in vivo 41 normal DC farklılaşması için çok önemli bir sitokin değildir GM-CSF, yanıt gösterilmiştir. Bununla birlikte, sitokin stimülasyonu geni için yararlı bir yöntem olabilirdeney için in vitro DC yüksek sayıda oranı. Gibi immünofloresan boyama gibi diğer analizlere bu protokol oluşturulan bu hücrelerin tabi akım sitometri yeteneği, allo reaksiyon çalışmaları ve metabolik çalışmalar bu yöntemin yararını artırır. Bunlar in vitro DC&#39;ler in vivo DC&#39;lere nadir numaraları ile yapmak daha önce zor DC geliştirme, olgunlaşma ve antijen sunum bilgisini geliştirmek için iyi bir model olarak hizmet vermektedir. Tolerans karşı immünolojik bağışıklık düzenleyen DCler yeteneği olanağına kanser ve otoimmün hastalıklar 42, 43, 44, 45 karşı terapötik çekici adaylar yapar. Bu protokol oluşturulan immünojenik DC&#39;ler bulaşıcı hastalıklara ve tümörlere karşı aşı etkinliğini arttırmak için kullanılabilir; tolerojenik DC&#39;ler istenmeyen T hücre yanıtları kontrol ve transplantasyon sonrası ret önlemek için kullanılabilir iken. karışıkdokunulmazlık ve hoşgörü arasındaki denge DC farklılaşma durumuna ilişkin son derece bağlıdır. DC farklılaşma çoklu sinyal yollar ve metabolik kader tarafından yönetilir koordineli bir hücresel bir programdır. DC Farklı farklılaşma durumları biyoenerjitik ve biyosentez ihtiyaçları farklıdır; dinlenme durumunda DCler ile karşılaştırıldığında, örneğin, aktive edilmiş DCler hayatta kalma ve taşıma için önemli bir daha enerjik metabolik uyarlamaları gerektirmektedir. O D3 vitamini, deksametason ve rapamisin tolerojenik DCler uyarabilme özellikleri için bilinen dikkat etmek önemlidir, DC metabolizmasını etkileme tarif edilmiştir. Bu yazıda, farklı farklılaşma devletler MoDC&#39;ler enerjik metabolizma dışı akı analizörleri kullanılarak karakterize edilmiştir ve tolerojenik MoDC&#39;ler yüksek metabolik plastisite ve LPS olgunlaşma bu plastisite azalma sergiledi. Katabolik metabolizmasını etkiler tolerojenik DC 46 işlevleriyle Anabolik metabolizması DC&#39;ler olgunlaşmasını destekler. DC&#39;lerBu protokol oluşturulan terapötik bağışıklık ve hoşgörüyü değiştirerek tuşunu basılı tutun DH&#39;lerin metabolik durumunu değiştirerek olup olmadığını değerlendirmek için kullanılabilir. Sonuç olarak, DCS &#39;immun fonksiyonları çalışmak için çok önemli olgunlaşmamış, tolerojenik ve olgun MoDC&#39;ler nesil için bir protokol sundu.

Jolles 1 tarafından başvurulan ve profesyonel antijen sunan hücreler 2 olarak tanınan 1973 yılında Ralph Steinman ve Zanvil Cohn tarafından karakterize edilen DC ilk on dokuzuncu yüzyılın sonunda Paul Langerhans (Langerhans hücreleri) tarafından tanımlanmıştır. DH&#39;ler periferik kanda ve (Langerhans hücrelerinin olarak mevcut) kaplama olarak ve etkinleştirme burun, akciğer, mide ve bağırsaklar astarları dış ortama maruz kalan dokularda özellikle bol miktarda vücut pek çok dokusunda bulunan onları dışsal antijenler karşılaşmaya. Olgunlaşmamış DC&#39;ler T hücrelerini 3 uyarmak için endositik kapasitesine sahip, ancak nispeten düşük kapasiteye sahiptir. Olgunlaşmamış DC&#39;ler çeşitli örüntü tanıma reseptörleri (PRR) yakalayan patojen ilişkili moleküler şekilleri (PAMPS) veya hasar ilişkili moleküler şekilleri (Damps) 4 ifade eder. Kendi kendine moleküller T hücresi unresponsivene neden olurlar aktive tehlike sinyalleri imünojenik DCler doğru olgunlaşmasını sürücüss ve apoptoz 5. Immünojenik DH&#39;ler MHC molekülleri ve yardımcı uyarıcı yüzey molekülleri ve tecrübesiz T hücreleri 6,7 kabiliyetleri upregülasyonu ile karakterize edilir. Olgunlaşmamış DC&#39;ler ayrıca D3 vitamini metaboliti 1a, 25 (O) 2 D3 ve bazı bağışıklık bastırıcı maddeler Interleukin-10 (IL-10) gibi, deksametazon ve 8-9 rapamisin karşılık olarak bir regülatör T oluşturan ya da tolerojenik durumuna doğru olgunlaşmış edilebilir. Tolerojenik DH&#39;ler yüzey reseptörleri ve ligandları ihtiva eden immüno reseptör tirosin bazlı inhibisyon motifleri (ITIMs) kendi ekspresyonu ile karakterize edilir. Tolerojenik DC&#39;lerde ILT aile üyeleri, ILT3 ve ILT4 içeren ITIMs sinyal iletim alloproliferation inhibe ve Foxp3 + Treg genişleme 10,11 sürücü. Tolerojenik DC&#39;lerin Bu benzersiz özellikleri in vivo olarak derin potens, nakledilen allojenik greft ve SUPPR dayanıklı tolerans yaratacak yani yetenek yolotoimmün hastalıkların gelişiminin ESS. Tolerojenik DH&#39;ler immün aktivasyon inhibisyonu işlev olgun polarize DClerin bir alt tipi, bu nedenle görülebilir. Plasmasitoid DC&#39;ler ve miyeloid DC&#39;lerin 12: Şu anda, insan periferik kan dendritik hücrelerin iki genel alt kümeleri vardır. Sirkülasyon DH&#39;ler insan kanında lökositlerin% 2&#39;den daha az nadir Oluşturulması ve bu da bağışıklık işlevlerini çalışma DH&#39;lerin uygun sayıda izole edilmesi için bir zorluk teşkil etmektedir. Bu sorunun üstesinden gelmek için, monosit farklılaşmış DCler dendritik hücre fonksiyonlarının araştırılmasında bir in vitro modeli olarak kullanılır. Bunlar in vitro DC&#39;ler in vivo DC&#39;lere karşılaştırıldığında benzer reseptörleri ve işlevlere sahiptir. In vivo DClerin ve in vitro oluşturulan monosit türevli DC&#39;lerin (MoDC&#39;ler) Ayrıntılı karşılaştırma diğer laboratuvarlar 13, 14, 15 ile incelenmiştir. Aynı zamanda, bu MoDC&#39;ler ve CD bildirilmektedir1c + DC&#39;ler antijen sunan ve T hücre fonksiyonunu 15 indükleyici eşdeğer idi. Bu yazıda, periferik kan monositlerinden olgunlaşmamış MoDC&#39;ler üreten ve daha sonra bağışıklık ve tolerojenik DC&#39;lere içine ayırt bir yöntem açıklanmaktadır. Bu monosit türevli dendritik hücreler (MoDC&#39;ler) yüzey belirteçleri, sitokin profili, immün düzenleyici ve metabolik Devletler ile karakterize edilir. Immünojenik ve tolerojenik dendritik hücreler allojenik T hücreleri veya düzenleyici T hücrelerinin, ya genişlemesi sonucu farklı sitokinler üretirler. Bu yazıda, sitokin profil multipleks teknolojisi kullanan sistemler ile yapılır. hücrelerin büyüme ortamına antikorun hareketsizleştirildiği renk kodlu boncuklar ile inkübe edildi ve kompakt bir analizör okunur. DH&#39;lerin metabolik durumları glikolitik yansıtan oksijen tüketim hızı, hücresel solunum bir göstergesi ve hücre dışı asitlenme hızı ölçmek dışı akı analizörleri kullanılarak analiz edilmektedirdendritik hücreler akı. Bu biyoenerjetiğin oranlarının ölçümü dendritik hücre gelişimi ve işlevi hayati olan hücresel metabolizma değişiklikleri izlemek için bir araç sağlar.

<table><tbody><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-03</td><td>PBMC izolasyon</td></tr><tr><td>Şırınga</td><td>Becton, Dickinson</td><td>302832</td><td>PBMC izolasyonu</td></tr><tr><td>1.5 ml santrifüj tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td>PBMC izolasyonu</td></tr><tr><td>15 ml falcon tüpü</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td>PBMC izolasyonu</td></tr><tr><td>50 ml falcon tüpü</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>PBMC izolasyonu</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td>PBMC izolasyonu</td></tr><tr><td>0.2 ve mikro; m filtre</td><td>Sartorius stedim biotech</td><td>17597</td><td>PBMC izolasyon</td></tr><tr><td>MAC kiti</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-201</td><td>Monosit zenginleştirme</td></tr><tr><td>MiniMACS Ayırıcı</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-102</td><td>Monosit zenginleştirme</td></tr><tr><td>Hücre kültürü sınıfı su</td><td>Invitrogen, Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>11875-093</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30070103</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>15140</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Su</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>10010-031</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>NEAA</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>11140-040</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>15575</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>15630-080</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Sodyum Piruvat</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>11360-070</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-868</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>IL-4</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-924</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>D3 Vitamini</td><td>Sigma</td><td>D1530</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>Sigma</td><td>D2915</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>l2755</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>tripan mavisi</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>15250-061</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>PerCP ile konjuge HLADR&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>307628</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>PE konjuge CD80</td><td>BD Biosciences</td><td>557227</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>PE konjuge CD83&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>556855</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>PE konjuge CD86&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>555665</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>APC ile konjuge CD11c</td><td>BD Biosciences</td><td>340544</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>PE konjuge CD14 (nbsp);</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-242</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>PE konjuge BDCA3&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-514</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>APC-konjuge ILT3&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>12-5139-73</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>İzotipi eşleşti PerCP- konjuge Mab</td><td>BioLegend</td><td>400250</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>İzotipi uyumlu PE- konjuge Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-835</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>İzotipi uyumlu APC- konjuge Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-836</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>BD LSR II Akış Sitometresi</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD LSR II&nbsp;</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>cytofix/cytoperm</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>APC/CY7-konjuge CD25</td><td>BD pharmingen</td><td>557753</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>PE/CY7-konjuge CD4</td><td>Biyoefsane</td><td>300512</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>PerCP ile konjuge CD3</td><td>Biyoefsane</td><td>300428</td><td>Sitometri</td></tr><tr><td>EasySep İnsan CD4+ T hücre zenginleştirme kiti</td><td>KÖK HÜCRE TEKNOLOJİLERİ</td><td>19052</td><td>Alloreaksiyon çalışması</td></tr><tr><td>EasySep mıknatısı&nbsp;</td><td>KÖK HÜCRE Teknolojileri</td><td>18000</td><td>Alloreaksiyon çalışması</td></tr><tr><td>Hücre İzi CFSE hücre proliferasyon kiti</td><td>Moleküler problar</td><td>C34554</td><td>Alloreaksiyon çalışması</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>14025092</td><td>Alloreaksiyon çalışması</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-konjuge FoxP3</td><td>BD Biosciences</td><td>560889</td><td></td></tr><tr><td>Milliplex MAP İnsan Sitokin / Kemokin manyetik boncuk paneli</td><td>Millipore</td><td>HCYTOMAG-60K</td><td>Sitokin analizi</td></tr><tr><td>5 ml Polistiren tüp</td><td>Falcon</td><td>352058</td><td>Sitokin analizi</td></tr><tr><td>Luminex Kılıf Sıvısı&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>SHEATHFLUID</td><td>Sitokin analizi</td></tr><tr><td>xPONENT yazılımı ile FLEXMAP 3D sistemi</td><td>Luminex Corporation</td><td>FLEXMAP 3D</td><td>Sitokin analizi</td></tr><tr><td>MitoTracker Kırmızı CMXRos</td><td>Hücre Sinyali</td><td>9082</td><td>Mitokondriyal aktivite</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td>Mitokondriyal aktivite</td></tr><tr><td>XF Test Ortamı (OCR)</td><td>Denizatı Biyobilim</td><td>102352-000</td><td>Metabolik</td></tr><tr><td>adaptasyon Glukoz&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8769</td><td>Metabolik adaptasyon</td></tr><tr><td>XF Temel Ortam (ECAR)</td> <td>Denizatı Biyobilimi</td><td>102353-100</td><td>Metabolik adaptasyon</td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Gibco, Yaşam Teknolojileri</td><td>25030-081</td><td>Metabolik adaptasyon</td></tr><tr><td>Kalibrantı Denizatı</td><td>Biyobilimi</td><td>100840-000 &nbsp;</td><td>Metabolik adaptasyon</td></tr><tr><td>XF Hücre Mito Stres kiti</td><td>Denizatı Biyobilim</td><td>103015-100</td><td>Metabolik adaptasyon</td></tr><tr><td>XF Glikoliz Stres kiti</td><td>Denizatı Biyobilim</td><td>103020-100</td><td>Metabolik adaptasyon</td></tr><tr><td>Denizatı&nbsp;</td><td>Denizatı Biyobilim</td><td>XFe96</td><td>Metabolik adaptasyon</td></tr></tbody></table>

metabolik fenotipleri farklı olarak sahip olgunlaşmamış, olgun ve tolerojenik dendritik hücrelerinin Üretimi

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Antijen spesifik olmayan doğuştan gelen bağışıklık sistemi ve antijene spesifik adaptif bağışıklık sistemi arasında karmaşık bir etkileşim immün yanıt ile sonuçlanır. Bağışıklık sistemi kendinden moleküllere tolerans korumak ve patojenlere karşı hızla tepki sabit bir dengedir. Dendritik hücreler (DC) uyarlayıcı bağışıklık sisteminin doğuştan gelen bağışıklık sistemi bağlantı ve kendine ile kendi-olmayan arasındaki uyumlu tepki dengesi güçlü bir profesyonel antijen sunan hücrelerdir. matürasyon sinyallerine bağlı olarak, olgun olmayan dendritik hücreler, seçici olarak immünojenik veya tolerojenik DH&#39;lere ayırt etmek için uyarılabilir. Immünojenik dendritik hücreler klonal genişleme için antijene özel T hücrelerinin proliferasyon sinyallerinin sağlanması; tolerojenik dendritik hücreler, antijene spesifik T-hücresi silinmesi veya düzenleyici T hücrelerinin klonal büyümesi ile tolerans düzenler ise. Sahip olduğu bu özelliği, dendritik hücreler, yüksek kanser ve otoimmün dise gibi terapötik maddeler arananases. Dendritik hücreler, in vitro olarak spesifik antijenlerle yüklendi ve imünojenik ve tolerojenik hem belirli bir bağışıklık tepkisi oluşturmak için, insan vücudu içine enjekte edilebilir. Bu çalışma yüzeyi işaretleyici ifade, fonksiyon ve metabolik fenotipleri farklı monositler, olgunlaşmamış monosit türevli dendritik hücreler (MoDC&#39;ler), tolerojenik ve olgun MoDC&#39;ler gelen in vitro oluşturmak için bir araç sunuyor.

Monosit Arıtma ve Dendritik Hücre Farklılaşması Monositler CD14 + olgun olmayan dendritik hücreleri elde etmek için, GM-CSF ve IL-4 varlığında tam ortam içinde pozitif seçim manyetik ayırma (Şekil 1 b) ve kültürlenmiş (ardından, periferal kan (Şekil 1A) yoğunluk santrifüj ile PBMC&#39;lerden saflaştırılmıştır Şekil 2A). Vitamin D3 ve deksametazon sonrası, GM-CSF ve IL-4 ilavesi tolerojenik MoDC&#39;ler (Şekil 2B), immatür MoDC&#39;ler farklılaşması ile sonuçlanmıştır. LPS olgunlaşması (Şekil 2D) direnç doğrulamak için LPS ile stimüle edildi MoDC&#39;ler (Şekil 2C) ve tolerojenik MoDC&#39;ler olgun olgunlaşmamış MoDC&#39;ler olgunlaşmasını indüklediği ilave edildi. Bu çalışmada kullanılan kan numuneleri mi Sağlıklı vericilerden elde edilenrazı olmak. MoDC Karakterizasyon Akış Sitometrisi ile Marker Karakterizasyonu Yüzey DC yüzey markerlerinin analizi, olgun MoDC&#39;ler LPS ile muamele tolerojenik MoDC&#39;ler, tolerojenik MoDC&#39;ler ve olgunlaşmamış MoDC&#39;ler (Şekil 3) ile karşılaştırıldığında matürasyon belirteçleri HLA-DR, CD83 ve CD86 arasında, en yüksek seviyelerini ifade olduğunu göstermiştir. Bu sonuçlar, LPS uyarımı şu olgunlaşmamış MoDC&#39;ler karşılaştırıldığında tolerojenik MoDC&#39;ler olgunlaşma dirençli olduğunu gösterdi. Buna ek olarak, bir tolerogenik MoDC&#39;ler LPS ile muamele edilmiş ve tolerojenik MoDC&#39;ler olgun ve olgun MoDC&#39;ler karşılaştırıldığında CD14, BDCA3 (CD141) ve immunoglobulin benzeri transkript (ILT) 3 artan ifadesi sergilemiştir. Burada üretilen tolerojenik MoDC&#39;ler önceki raporlarda 23 ile uyumludur. MoDC&#39;ler fonksiyonel karakterizasyonu olgunlaşması için uyarılan MoDC&#39;ler immünojenik olur ve CD4 + T-hücrelerinin çoğalmasını teşvik sitokinler bırakın. Bu eş-kültürlenen T-hücrelerinin çoğalmasının ölçülmesi ile, farklı MoDC alt tiplerinin immünojenikliğini değerlendirildi. CD4 + T hücreleri, düşük alloproliferation (Şekil 4A) ile gösterildiği gibi tolerojenik MoDC&#39;ler olgun MoDC&#39;ler karşılaştırıldığında zayıf imünojenik idi. Tolerojenik MoDC&#39;ler düşük IFN-y, CD4 + T-hücreleri (Şekil 4B) ile birlikte alloreaction ko-kültürlerde, düşük bir IL-12p40 ve yüksek IL-10 sitokin üretimi ile karakterize edilmektedir. Bundan başka, olgun MoDC&#39;ler arasında tolerojenik MoDC&#39;ler sayısının artırılması ko-kültürler neden allospesifik CD4 + T hücreleri, CD25, yüksek Foxp3 + regülatör T hücreleri (Şekil 4C) sıklığını artmıştır. <pclass = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within sayfa = &quot;1&quot;&gt; Mitokondriyal Aktivite Analizi Kırmızı CMXRos MoDC&#39;ler mitokondriyal membran potansiyeli seviyelerini analiz etmek için mitokondriyal aktiviteyi yansıtmak için kullanılır. Tolerojenik MoDC&#39;ler Diğer MoDC farklılaşmış alt tipi (Şekil 5A) ile karşılaştırıldığında daha yüksek bir mitokondriyal etkinliğe sahip olduğu gözlenmiştir. Daha sonra, mitokondriyal oksijen tüketim hızı (OCR) bir Bioanalyzer kullanarak farklı MoDC alt tipleri için değerlendirilir. OCR ölçümleri de dahil olmak üzere, ancak bazal solunum, yedek solunum kapasitesi, proton kaçak sigara mitokondriyal solunum bunlarla sınırlı olmamak bilgi veren, metabolik profile yüksek çözünürlüklü anlayışlar sağlar. OCR ölçümü strese cevap hücreleri yeteneğinin tayin edilmesi için bir araç sağlar. Hücreler metabolik arkaya üç farklı bileşiklerin ilave edilmesi ile altüst. İlk enjeksiyon Ol olanATP sentezini inhibe, elektron taşıma zinciri (ETC) karmaşık V inhibe igomycin (ATP çoğaltıcı). Bu adım ATP sentezi için tüketilen oksijen yüzdesini ve iç mitokondrial membran boyunca proton sızıntısı üstesinden gelmek için tüketilen oksijen yüzdesini ayırır. ikinci enjeksiyon olmadan, mitokondriyal zarından yerine mitokondriyal membran potansiyeli çöküşü enerji ve oksijen hızlı tüketimine yol açar Kompleksi V. proton kanalından hidrojen iyonları taşıyan ATP sentezini bozar FCCP (ETC hızlandırıcı) &#39;dir ATP&#39;nin nesil. FCCP tedavisi hücrelerinin fazlalık solunum kapasitesinin hesaplanması için de kullanılabilir. stres koşulları altında yedek solunum kapasitesinin korunması, hücre hayatta kalması için kritik önem taşır. Bu kapasite ETC katılan enzimlerin substrat kullanılabilirliği ve fonksiyonel kapasite gibi çeşitli faktörlere göre belirlenir Üçüncü enjeksiyon Rotenone bir YAPIM bir kombinasyonudurex I inhibitörü ve antimisin, Kompleks III inhibitörü. Bu kombinasyon mitokondriyal solunum kapanır ve OCR engelli mitokondriyal fonksiyon (Şekil 5C) bir sonucu olarak azalma görülmektedir. Tolerojenik MoDC&#39;ler olgun MoDC&#39;ler (Şekil 5D) daha yüksek bazal OCR düzeyleri görüntülenir. Buna ek olarak, tolerojenik, LPS tolerojenik ve olgunlaşmamış MoDC&#39;ler olgun MoDC&#39;ler (Şekil 5E) ile karşılaştırıldığında yedek solunum kapasitesi artış gösterdi. MoDC&#39;ler metabolik Karakterizasyonu Laktik asit ve protonların glikoliz sırasında hücrelerden salınan aldığından, hücre dışı asidifikasyon (ECAR) (Şekil 6B) hızının gerçek zamanlı analizini gerçekleştirerek MoDC&#39;ler glikolitik aktivitesi analiz edilmiştir. glükoz bulunan, tüm MoDC&#39;ler glikolitik oranı ile bazal aşamaya nazaran artmışOlgunlaşmamış MoDC&#39;ler (Şekil 6D) daha yüksek glikolitik oranı sergileyen olgun MoDC&#39;ler. Tolerojenik ve olgunlaşmamış MoDC&#39;ler LPS ile muamele MoDC&#39;ler (Şekil 6B) ile karşılaştırıldığında (glikoz mevcudiyetinde oligomycin neden olduğu) daha yüksek bir maksimum glikolizi sergilemiştir. Tolerojenik ve olgunlaşmamış MoDC&#39;ler glikolitik kapasite olgun MoDC&#39;ler (Şekil 6E) daha yüksek bulunmuştur. Yüksek glikolitik oranda aksine, glikolitik rezerv olgun MoDC&#39;ler (Şekil 6F) en düşük oldu. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig1.jpg" /> Şekil 1:. Periferik kan monosit saflaştırma (A) kan 25 mi dikkatle santrifüj işleminden önce 50 mi tüp başına Ficoll 15 ml üzerine katmanlı. PBMC yoğunluk santrifüj sonrası plazma altındaki bir katmanın altında konsantre edilir. (B) PBMC conj olan mikro boncuklar ile inkübe edilir<html> insan CD14 antikorları (izotipi: fare IgG2a) monoklonal ugated. CD14 + monositler izole etmek için bir Ayırıcı manyetik alan içine yerleştirilen bir kolona yüklendi ve daha sonra <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig1large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig2.jpg" /> Şekil 2: MoDC&#39;ler Morfolojik Karakterizasyonu. (A), GM-CSF ve IL-4, 200 ng / ml olgun MoDC&#39;ler oluşturmak için Gün 0, 4 ve 6 üzerinde saflaştırılmıştır CD14 + monositleri eklenir; ve (B), 100 nM D3 vitamini ve 5 günde, 10 nM deksametason ile uyarılmaya ek bir adım tolerojenik MoDC&#39;ler oluşturur. Olgunlaşmamış MoDC&#39;ler ve tolerojenik MoDC&#39;ler (C) elde MoDC&#39;ler olgun ve (D) LPS tolerojenik MoDC&#39;ler için 6. günde 1 ug / ml LPS ile stimüle edilir.ttps: //www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54128/54128fig3.jpg" /> Şekil 3:. Akım Sitometrisi tolerojenik yüzey belirteçleri HLA-DR, CD80, CD83, CD86, CD11, CD14, BDCA3 ve LT3 salgılanma düzeyleri (yeşil), LPS tolerojenik (siyah), olgunlaşmamış (kırmızı) ile yüzey İşaretleyici karakterizasyonu olgun (mavi) MoDC&#39;ler. Izotip kontrolleri gri renkle gösterilir. her hücre tipi için ayrı histogram fluorofor yoğunluğu ve üst üste X ekseni günlük karşı Y ekseni hücre sayısı ile işaretlenmiştir. Tüm histogramlar dört bağımsız deneyi temsil etmektedir. 10,4049 / jimmunol.1303316 (1 Haziran 2015): Bu rakam J Immunol 194 (11), 5174-5186, DOI gelen modifiye edilmiştir. Çoğaltılabilir ve telif hakkı izni ile yayınlanamaz. Copyright 2015 Amerikan DerneğiBağışıklık, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig3large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54128/54128fig4.jpg" /> Şekil 4: MoDC&#39;ler fonksiyonel karakterizasyonu. (A), bir tolerogenik artan sayıları ile birlikte kültür ile uyarılan CD4 + T-hücrelerinin alloproliferation frekans ölçümü (TOS, yeşil), LPS ile tolerojenik (L-tol, siyah), olgunlaşmamış (IMM; kırmızı) ve olgun (MAT ; mavi) MoDC&#39;ler. dört bağımsız deneyden elde edilen edilmiştir Dunnett çoklu karşılaştırma sonrası testi ile iki yönlü ANOVA ile analiz edilmiştir olgun MoDC&#39;ler karşı tüm MoDC&#39;ler arasında + SEM İstatistiksel farklılıklar anlamına gelir. IFN-y (sol panel), IL-12p40 (orta panel) ve IL (B) Sitokin analizi 10 (sağ bölmesindeHer iki tolerojenik (yeşil), olgunlaşmamış (kırmızı) veya olgun (mavi) MoDC&#39;ler sayısındaki artış ile birlikte kültürlenmiş, CD4 + T-hücreleri arasında alloreactions süpernatanların l). Veriler altı bağımsız deneyden elde edilen edilmiştir; ± SEM (C), CD4 + T-hücresi alloproliferation ve tolerojenik MoDC&#39;ler sayısının artması varlığında, olgun MoDC&#39;ler sahip ortak-kültür tarafından uyarılan düzenleyici T hücrelerinin genişlemesini anlamına gelir. Sol Y ekseninde, CD4 + T-hücresi çoğalmasının sıklığı. Sağ Y ekseninde, CD25, yüksek Foxp3 + proliferatif CD4 + T-hücreleri üzerinde geçirilen hücreler sıklığı. Veriler, üç bağımsız deneyden elde edilen edilmiştir; ± SEM Dunnett çoklu karşılaştırma sonrası testi ile tek yönlü ANOVA ile analiz edilmiştir tolerojenik MoDC&#39;ler yokluğu karşısında varlığı arasındaki istatistiksel farklılıkları anlamına gelir. (D) CD4 + T hücre alloproliferation (Sol) ve CD25highFoxP3 + hücrelerinin frekansı (Sağ) ko- tarafından uyarılan tolerojenik MoDC&#39;ler kültürOlgun MoDC&#39;ler artan sayıları varlığında gerçekleştirilebilir. Veriler iki, üç bağımsız deneyden elde edilen edilmiştir; olgun MoDC&#39;ler yokluğu Dunnett çoklu karşılaştırma sonrası testi ile iki yönlü ANOVA ile analiz edilmiştir karşı ± SEM varlığı arasında istatistiksel farklılıklar anlamına gelir. 10,4049 / jimmunol.1303316 (1 Haziran 2015): Bu rakam J Immunol 194 (11), 5174-5186, DOI gelen modifiye edilmiştir. Çoğaltılabilir ve immünolojistler bir telif hakkı izni. Copyright 2015 The American Association ile yayınlanamaz, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig4large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54128/54128fig5.jpg" /> Şekil 5: MoDC&#39;ler mitokondrial faaliyeti analizi. (A) MoDC&#39;ler mitokondriyal membran potansiyeli seviyeleri (Kırmızı CMXRos) f ile elde edilmiştirDüşük sitometrik analizi. Dört bağımsız deneyin verileri toplandı. ± SEM (B), gerçek zamanlı bir mitokondriyal solunumun şematik gösterimi ortalama. bazal solunum gelen ve oligomycin ilave (kompleks V inhibisyonu), FCCP (maksimal solunum indüksiyon) ve rotenone / A karışımı antimycin (elektron taşıma zinciri [ETC] önleme) sonra başlayan OCR analizi. Mitokondriyal SRC (maksimum solunum çıkarılır maksimal bazal) OCR eğriden elde edilir. (C), bir tolerogenik mitokondri OCR (pmol / dakika) (yeşil TOL) içinde Örnek kinetik çalışma, LPS tolerojenik (L-tol, siyah) , olgunlaşmamış (İBB, kırmızı) ve olgun (MAT, mavi) oligomycin sıralı ilavesini (OLIG) MoDC&#39;ler ve bazal solunum, FCCP ve rotenone / A (Rot-AA) antimycin. (D) OCR miktar kullanarak MoDC&#39;ler ( E) MoDC&#39;ler solunum kapasitesini yedek. Veriler beş bağımsız deneyden toplandı. Ortalama ± SE10,4049 / jimmunol.1303316 (1 Haziran 2015): M. Bu rakam J Immunol 194 (11), 5174-5186, DOI gelen modifiye edilmiştir. Çoğaltılabilir ve immünolojistler bir telif hakkı izni. Copyright 2015 The American Association ile yayınlanamaz, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig5large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/54128/54128fig6.jpg" /> Şekil 6: MoDC&#39;ler metabolik Karakterizasyonu. (A) gerçek zamanlı glikoliz şematik gösterimi. ECAR analizi (maksimum hücre glikoliz ve kompleks V inhibisyonuna neden olan) oligomycin hücreler glükoz (glikoliz indüksiyonu) ilave edilir glukoz içermeyen ortam içinde inkübe edildiği taban ECAR arasında değişir, ve son olarak da 2-deoksi-D- glikoz(Glikoliz inhibisyon). Glikolitik oranı (bazal ECAR için çıkarılır glikoliz indüksiyon), glikolitik kapasitesi (bazal ECAR için çıkarılır maksimal glikoliz), ve glikolitik rezerv (maksimal glikoliz glikoliz indüksiyon için çıkarılır) ECAR eğrisi elde edilir. (B) Temsilcisi kinetik çalışma glikoliz bağımlı tolerojenik içinde ECAR (mph / dk) (yeşil TOL), LPS tolerojenik (siyah L-TOL), olgunlaşmamış (kırmızı İBB), ve olgun (MAT, mavi) glikoz (glukozit) sıralı ekleme kullanarak MoDC&#39;ler, oligomycin (OLIG), ve 2-DG. (C) Barlar bazal ECAR seviyeleri (D) glikolitik hızı (E) glikolitik kapasite ve (F) MoDC&#39;ler glikolitik rezerv göstermektedir. Veriler, üç bağımsız deneyden elde edilen edilmiştir; 6 SEM. İstatistiksel farklılıklar Tukey çoklu karşılaştırma son test tek yönlü ANOVA ile analiz edilmiştir. 10,4049 / jimmunol: Bu rakam J Immunol 194 (11), 5174-5186, DOI modifiye edilmiş.1303316 (1 Haziran 2015). Çoğaltılabilir ve immünolojistler bir telif hakkı izni. Copyright 2015 The American Association ile yayınlanamaz, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig6large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Olgunlaşmamış dendritik hücreler, bağışıklık ve tolerans arasındaki dengeyi düzenlemek için seçici olarak tolerojenik veya olgun dendritik hücrelere farklılaştırılabilir. Bu çalışma, metabolik fenotiplerde farklılık gösteren olgunlaşmamış monosit türevli dendritik hücrelerden (moDC'ler), in vitro tolerojenik ve olgun moDC'lerden üretmek için bir araç sunmaktadır.

Metabolik fenotipleri farklı olarak sahip Olgunlaşmamış, Olgun ve tolerojenik Dendritik Hücrelerinin Üretimi

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Bu protokolün genel amacı, deney veya aşı geliştirme için monositlerden tolerojenik ve olgun dendritik hücreler üretmektir. Bu yöntem, dendritik hücrelerin gelişimini, olgunlaşmasını ve antijen sunumunu incelemek için bir model sağlayarak immünoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, deney için in vitro olarak yüksek sayıda dendritik hücrenin üretilmesini sağlamasıdır.Bir sitometre kullanarak canlı hücrelerin sayısını saymak için 20 mikrolitre önceden hazırlanmış periferik kan mononükleal hücresini veya PBMC hücre süspansiyonunu 20 mikrolitre tripan mavisi ile karıştırarak monosit zenginleştirmeye başlayın. Ardından, hücre süspansiyonunu santrifüjleyin. Süpernatanı tamamen aspire edin ve hücre peletini 10 ila yedinci hücre için 80 mikrolitre boyama tamponu konsantrasyonuna yeniden süspanse edin.Yedinci hücrelere 10 başına 20 mikrolitre CD-4 mikro boncuk ekleyin. İyice karıştırın ve hücreleri dört santigrat derecede 15 dakika inkübe edin. Hücreleri 10 ila yedinci hücre başına bir mililitre boyama tamponu ile yıkayın ve hücreleri santrifüjleyin.Süpernatanı tamamen aspire edin ve hücre peletini yeniden askıya alın. Toplam hücrelerin 10'da biri arasında en fazla iki kez orta boy bir sütun elde edin ve sütunu ayırıcının manyetik alanına yerleştirin. Ardından, sütunu 500 mikrolitre boyama tamponu ile durulayın.Hücre süspansiyonunu kolona pipetleyin ve kolondan geçen etiketsiz hücreleri 15 mililitrelik bir tüpte toplayın. Kolonun altındaki 15 mililitrelik yeni bir tüpü değiştirin ve kolonu 500 mikrolitre boyama tamponu ile üç kez yıkayın. Yıkamalar arasında yeni boyama tamponu eklemeden önce kolon haznesinin boş olduğundan emin olun.Sütunu ayırıcıdan çıkarın ve 15 mililitrelik yeni bir tüpe yerleştirin. Kolonun üzerine bir mililitre boyama tamponu pipetleyin ve pistonu kolona sıkıca iterek manyetik olarak etiketlenmiş hücreleri hemen yıkayın. Ardından, CD14 artı hücrelerinin saflığını artırmak için yeni bir sütunda illuded fraksiyonu kullanarak manyetik ayırma adımlarını tekrarlayın.Altı oyuklu plakada sıfır nokta üç ila sıfır nokta beş çarpı 10 ila altıncı IL-4 hücre kültürü ortamının konsantrasyonunda dört set CD14 artı monosit tohumlayın. Hücreleri, yüzde beş CO2 ile 37 santigrat derecede bir doku kültürü inkübatöründe inkübe edin. Dördüncü günde, kültürden ve santrifüjden 850 mikrolitre besiyerini çıkarın.Süpernatanı aspire edin ve peleti bir mililitre hücre kültürü ortamında yeniden süspanse edin. Hücre karışımını tekrar kültüre ekleyin. Beşinci günde, tolerojenik moDC'ler oluşturmak için setlerin bir litresi ila ikisi için bir mikrolitre D3 vitamini stoğu ve bir mikrolitre deksametazon stoğu ekleyin.Altıncı günde, tüm setlere mililitre GMCSF başına 200 nanogram ve mililitre IL-200 başına 4 nanogram ekleyin. Olgun moDC'ler oluşturmak için yalnızca GMCSF ve IL-4 ile muamele edilen setlerden birine mililitre LPS başına bir mikrogram ekleyin. LPS tolerojenik moDC'leri oluşturmak için bir tolerojenik moDC setine mililitre LPS başına bir mikrogram ekleyin.Son olarak, yedinci günde, kültür kabını PVS EDTA ile yıkayarak farklı moDC türlerini hasat edin. Olgunlaşmamış moDC'ler, sıfır, dört ve altıncı günlerde saflaştırılmış CD-14 artı monositlere GMCSF ve IL-4 eklenerek üretildi. GMCF ve IL-4 sonrası D3 vitamini ve deksametazon ilavesi, olgunlaşmamış moDC'lerin tolerojenik moDC'lere farklılaşmasına neden oldu.Olgunlaşmamış moDC'lerin olgun moDC'lere olgunlaşmasını indüklemek için LPS eklendi. Ve olgunlaşmaya karşı direnci doğrulamak için tolerojenik moDC'ler LPS ile uyarıldı. DC yüzey belirteçlerinin analizi, olgun moDC'lerin en yüksek olgunlaşma belirteçleri olan HLA-DR, CD80, CD83 ve CD86'yı ifade ettiğini ortaya koymuştur.Tersine, tolerojenik moDC'ler, olgunlaşmamış ve olgun moDC'lere kıyasla CD14, BDCA3 ve immünoglobulin benzeri transkriptlerin artan ekspresyonunu göstermiştir. Mitokondriyal aktiviteyi yansıtmak için kırmızı CMXRos kullanılarak, tolerojenik moDC'lerin diğer moDC farklılaşan alt tiplere kıyasla daha yüksek mitokondriyal aktiviteye sahip olduğu gözlendi. Geliştirilmesinden sonra bu teknik, immünoloji alanındaki araştırmacıların aşıların ve immünoterapinin geliştirilmesi için dendritik hücrelerdeki metabolik özellikleri keşfetmelerinin yolunu açtı.

generation-immature-mature-tolerogenic-dendritic-cells-with-differing

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video fare kemik iliği myeloid dendritik hücrelerin ayırt etmek için prosedür göstermektedir. İzolasyon fare tibia ve femur, ve kemik iliği işleme göstermiştir. Hücre fenotipi ve CpG IL-12 üretimi takiben olgunlaşma gösteren farklılaşma öncesi ve sonrası hücre morfolojisi gösteren resimler ve rakamlar gösterilmektedir.

Myeloid dendritik hücreler kemik iliği öncüleri Kültür

Dendritik hücreler tarafından ikincil lenfoid organlara Antijen sunumu T hücre aracılı adaptif immün yanıt başlatılması için çok önemlidir. Burada kemik iliği kültürü elde edilen fare dendritik hücreler, aktivasyon, 2-foton görüntüleme için etiketleme göstermektedir.

Kemik İliği Üretimi 2-foton Görüntüleme Kullanım murin Dendritik Hücreler Türetilmiş

Bu video, insan monositlerinden olgunlaşmamış, olgun ve tolerojenik dendritik hücrelerin veya DC'lerin oluşumunu göstermektedir. Monositlerin büyüme faktörleri ve sitokinlerle inkübasyonu, olgunlaşmamış DC'lerin üretimine yol açar. İmmün düzenleyici moleküllere yanıt olarak, olgunlaşmamış DC'ler tolerojenik ve olgun DC'lere farklılaşır.

Monositlerden Olgunlaşmamış, Olgun ve Tolerojenik Dendritik Hücrelerin Üretilmesi

Bu videoda, immünomodülatör bir farmakolojik ajan kullanarak dendritik hücreleri (DC'ler) tolerojenik DC'lere (TolDC'ler) dönüştürme yöntemi gösterilmektedir. Bu dönüşüm, CD4 + T hücreleri üzerindeki immünosüpresif etkileri yoluyla TolDC fonksiyonunun değerlendirilmesiyle doğrulanır.

İmmünomodülatör Farmakolojik Bir Ajanın Dendritik Hücreler ve CD4+ T Hücreleri Arasındaki Etkileşim Üzerine Etkisi

Tümör immünoterapide kullanım için otolog dendritik hücreler, çok sayıda (DC'ler) oluşturmak için en yaygın olarak kullanılan yöntem tarif edilmektedir. Gibi bir yöntem monositlerden DC'ler ayırt etmek için, IL-4 ve GM-CSF kullanır. Bu hastaya geri enjekte edilmeden önce olgunlaşmamış DC'lerin olgun ve daha sonra antijen ile yüklenir için uyarılır.

İmmünoterapi için Tümör Antijen-yüklü Olgun dendritik hücreler hazırlanması

Granülosit makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) ile kültürlenen kemik iliği hücreleri, makrofajlar ve dendritik hücreler (DC'ler) içeren heterojen bir kültür oluşturur. Bu yöntem, makrofajları GM-CSF kültüründeki DC'lerden ayırt etmek için MHCII ve hyaluronan (HA) bağlanmasının kullanılmasını vurgular. Bu kültürdeki makrofajlar, alveolar makrofajlarla birçok benzerliğe sahiptir.

Fare Kemik İliği itibaren Üretimi ve GM-CSF tanımlanması Türetilmiş Alveoler gibi makrofajlar ve dendritik hücrelerin

Burada biz belirlenmesi ve GM-CSF myeloid hücrelerin hücre yüksek hızlı sıralama kullanarak tahrik çok sayıda ayırma için bir yöntem sağlar. Beş ayrı nüfus (ortak miyeloid ataları, granülosit/makrofaj ataları, monosit, monosit kaynaklı makrofajlar ve monosit kaynaklı DCs) Ly6C ve CD115 ifade üzerinde göre tespit edilebilir.

Çok sayıda miyeloid ataları ve dendritik hücre öncüleri fare kemik iliği strateji sıralama bir roman hücre kullanarak gelen nesil

Burada, geliştirmek ve tolerogenic dendritik hücreler (TolDCs) karakterize ve onların immunotherapeutic yardımcı programı değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Geliştirme ve işlevsel fare Tolerogenic dendritik hücrelerin karakterizasyonu

Burada , in vitro DC farklılaşması için stabil nakavt hücre hatları elde etmek için shRNA'nın lentiviral transdüksiyonunu kullanarak dendritik hücrenin (DC) gelişiminde rol oynayan potansiyel transkripsiyon faktörlerini taramak için bir protokol sunuyoruz.

Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücre Hattı In vitrounda Kısa Saç Tokası RNA Aracılı Gen Knockdown ile Dendritik Hücre Gelişiminin İncelenmesi Çalışması

Bir sialidaz tedavisi kullanılarak izole edilmiş periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) de-sialillenmiş insan monosit türevli dendritik hücreler (mo-DC'ler) oluşturmak için benzersiz, kapsamlı bir protokol sunulmaktadır. Ayrıca, mo-DC'lerin fenotipik ve fonksiyonel karakterizasyonunu değerlendirmek ve sialidaz tedavisinin mo-DC'lerin olgunlaşma seviyesini nasıl iyileştirdiğini değerlendirmek için yöntemler açıklanmaktadır.

Farklı Sialillenmiş Fenotiplere Sahip Monosit Kaynaklı Dendritik Hücrelerin Üretimi

Farmakolojik ajanların naif monosit türevli dendritik hücrelerden in vitro olarak tolerojenik dendritik hücreler üretme kapasitesini değerlendirmek ve otolog düzenleyici T hücresi üretimi ile potansiyellerini doğrulamak için bir prosedür tanımladık.

İnsan CD14+ Monositlerinden Tolerojenik Dendritik Hücrelerin Üretilmesi için İmmünomodülatör Ajanları Test Etmek İçin Basit ve Etkili Bir Yöntem

Öğrenin, monositlerden immatür, olgun ve tolerojenik dendritik hücreler üretmeyi. Bu yöntem, immünoloji araştırmaları ve aşı geliştirme için yüksek sayıda hücre elde etmeyi sağlar.

Metabolik fenotipleri farklı olarak sahip Olgunlaşmamış, Olgun ve tolerojenik Dendritik Hücrelerinin Üretimi

Daha fazla video keşfet