Name: Bilinçli Sıçanlarda implantasyon ve Kablosuz Elektroretinogram Recording ve Görsel Uyarılmış Potansiyel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Öğrenin bilinçli sıçanlarda kablosuz telemetri probu implantasyonu ve elektroretinogram ile görsel uyarılmış potansiyel kaydı yapmayı. Bu yöntem anestezi etkileri olmadan retina ve görsel korteksten eşzamanlı sinyal ölçümü sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

JC, bu makalenin yazımında mali destek için Melbourne Üniversitesi'ndeki David Hay Memorial Fund'a teşekkür eder. Bu projenin finansmanı bir ARC Linkage hibe 100200129 (BVB, AJV, CTON) tarafından sağlandı.

Etik deyimi: Hayvan deneyleri Bilimsel Amaçlarla Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı (2013) Avustralya Kanunu&#39;na göre yapılmıştır. Hayvan Etik onay Hayvan Etik Kurulu, Melbourne Üniversitesi elde edilmiştir. maddeler, burada, sadece, olup tıp ve veterinerlik alanlarında kullanıma yöneliktir Laboratuvar deneyleri için bulunmaktadır. 1. hazırlanması Elektrotlar Not: Üç kanallı verici, aynı anda yapılacak 2 ERG 1 VEP kayıt sağlayan cerrahi implantasyon için kullanılır. Aktif üç üç aktif olmayan elektrotlar göz takmak için implantasyondan önce bir halka şekline önceden-moda olması gerekir. inaktif elektrotlar tam renkli kılıflar kaplı iken tanımlama amacıyla, imalatçı, yarı beyaz yarı renkli plastik kılıflar aktif elektrotlar kapalı etti. Toprak elektrodu (şeffaf plastik kılıf) dokunulmaz. tüm aktif ve pasif elektrikli İçingazeller davranış 1.1, 1.2, 1.3 ve 1.7 adımları tekrarlayın. <ol><li> İki ince uçlu pense ile çift sarmallı paslanmaz çelik elektrot halletmek. </li><li> Halka elektrot şekil kalan tek uzun düz iplikli bırakarak, paslanmaz çelik ipliklerini (ucundan yaklaşık 1 cm) birini Trim. </li><li> elektrodun ucunda düzgün bir halka oluşturur, geri kendisi ve büküm üzerine tek paslanmaz çelik teli katlayın. </li><li> ERG aktif elektrotlar moda için bu döngü ~ 0.2 - döngünün tabanı çevirerek çapı 0,5 mm (Burada anlatılan amaç için, her iki gözlerden ERG kaydetmek için bu şekilde iki aktif elektrotları şekil) ve ERG inaktif ve VEP elektrotlar köprüsü çapı -0.8 mm çapında (bu örnekte, bir aktif VEP elektrot ve üç aktif olmayan elektrotlar için bunu) sunuyor. </li><li> paslanmaz çelik vida (çapı 0,7 mm, uzunluk 3 mm) böylece elektrot vida başının dayanacak etrafında dairesel VEP aktif elektrot kanca. </li><li> Hooİkinci paslanmaz çelik vida (çapı 0,7 mm, uzunluk 3 mm) yaklaşık 3 inaktif elektrotlar (2 ERG, 1 VEP) k. </li><li> tahrişi azaltmak için iki paslanmaz çelik telin sivri uçları üzerinde ileri plastik kovan çekin. </li><li> yaklaşık 25 ° C &#39;de en fazla 10 saat boyunca% 2 glutaraldehid ıslatarak telemetri verici sterilize edin. Daha sonra, steril tuzlu su ile 3 kez verici yıkayın. </li></ol> 2. Verici İmplantasyon <ol><li> Hayvan hazırlanması <ol><li> % 70 etanol ile temizleyerek deney öncesinde cerrahi alan dezenfekte edin. Kullanmadan önce tüm cerrahi ekipman otoklavlamayın ve zaman değil ameliyat sırasında kullanımda Klorheksidin ekipman korumak. steril bir ortam sağlamak için, ameliyat sırasında cerrahi bir örtü ile hayvan örtün. Tüm Deneyciler cerrahi maske, steril eldiven ve önlük giymek emin olun. </li><li> 3 L / dk ve maintai bir akış hızında,% 2 izofluran - 1,5 anestezi nedenameliyat boyunca 2 L / dk&#39;da% 2 - 1.5 olarak ned. ayak parmakları arasında kas kıstırma üzerine bir pedal refleksinin yokluğu ile anestezi yeterli derinliği onaylayın. </li><li> sternum kasıktan yukarıdaki karın üzerinde 40 mm x 30 mm alan tıraş. </li><li> Gözleri, alnının üzerine posterior 30 mm x 20 mm alanı Tıraş ve kulaklara ön. </li><li> İki traş alanları dezenfekte edin. alın bölgesi için% 10 povidon-iyot üç kez (Cerrahi Teknologları Derneği tarafından belirlenen Uygulama Standardı ile uyumlu olmak, gözün yakın bölge için alkol bazlı antiseptik kullanımını önlemek) ile dezenfekte edin. karın üzerinde% 10 povidon iyot ve% 70 etanol ile dezenfekte edin. </li><li> Ek topikal anestezi için korneaya Proxymetacaine 1 damla uygulayın. </li><li> gözlerin kurumasını önlemek için korneaya karboksimetilselüloz sodyum 1 damla uygulanır. </li></ol></li><li> cerrahi implantasyon <ol><li> 10 mm kesi yapmakcerrahi neşter ile kulakları arasındaki dikey orta hat boyunca kafasına. </li><li> sternum altında orta hat boyunca deri tabakası ile karın üzerinde 5 mm kesi yapmak. </li><li> Tünel kafa kesi karın kesi 5 mm çaplı kanül deri altından. </li><li> kafasına karın kanül yoluyla vericinin elektrot tellerini (3 aktif ve 3 inaktif) besleyin. </li><li> Verici tabanı ile referans elektrot bırakın ve aseptik gazlı bez ile elektrot ucu kapsamaktadır. </li><li> aseptik gazlı bez ile elektrot uçları (3 aktif ve 3 inaktif) kapsamaktadır. </li><li> stereotaksik platforma sıçan başını sabitleyin. </li><li> cerrahi makas ile uzunluğu 30mm alnı kesi uzatın. </li><li> ~ 3 ve 9 saat - 2 sütür (0 3) gevşek cilt geri çekilmeden cerrahi alan Açığa. </li><li> Bregma, lambda ve orta hat sütür maruz sterilize gazlı bez kullanarak kafatası örten periost kazımak. </li&gt; <li> VEP aktif olarak kafatası yoluyla iki delik stereotaksik koordinatlarını (orta hat üzerinde bregma 5 mm rostral) ve inaktif (7 mm ventral orta hatta lateral 3 mm bregma). </li><li> Küçük bir tornavida premade deliklere derinlemesine ~ 1 mm ile kafatasına önceden bağlı paslanmaz çelik vidalarla (çap 0,7 mm, uzunluğu 3 mm) VEP aktif ve aktif olmayan elektrotlar takın. Bu altta yatan kortikal doku zarar vermeden kemiğe vida tutturur. </li><li> geçici olarak üst göz kapağı geri çekmek için 0 sütür - ERG aktif elektrotlar 8 kullanmak implant için. </li><li> Üstün konjunktival forniksten aracılığıyla gözün arkasından bir 16 G 21 kanül deri altına yerleştirin. </li><li> rehberlik İğneyi çıkarın. </li><li> Göz doğru alından kısaltılmış plastik kateter yoluyla aktif elektrot besleyin. Sonra plastik kateter çıkarın. </li><li> Elektronik işitme önlemek için, elektrot döngü geçirilir, - geçici bir sütür (0 8) kullanıngeri tünelin içine çekilerek gelen Trode. </li><li> 12 saat, limbusta arkasında 1 mm üstün konjonktiva üzerinde 0,5 mm kesi yapmak. Altta yatan sklera maruz künt diseksiyon kullanın. </li><li> Yarım skleral kalınlıkta limbusta hemen arkasında 0 sütür - 0 veya 9 - 8 implant. </li><li> ERG aktif elektrottan geçici dikiş çıkarın. </li><li> elektrot ucu sağlanması ardışık 3 knot bağlayarak yarım skleral kalınlık dikişine ERG aktif elektrot Anchor limbus yakındır. </li><li> (0 - - 9 0 8) 1 ila 2 kesintiye sütürler kullanılarak konjonktiva kapağını kapatın. konjonktiva tamamen konforunu arttırmak için ERG elektrodu kapsar emin olun. </li><li> gözkapağı geri çekilmeden dikiş çıkarın. </li><li> kontralateral göz için aynı işlemi tekrarlayın. </li><li> Tüm paslanmaz vida ve elektrot kabloları sabitlemek için kafatası üzerinde siyanoakrilat jeli uygulayın. Emin olun ERG aktif elektrotlar tr güvence önce çok sıkı çekti değilmümkün göz hareketleri. </li><li> 0 sütür - olmayan bir emilebilir 3 kullanılarak kafa yarayı kapatmak. </li><li> karın bölgesi ortaya çıkarmak için kemirgen döndürün. cerrahi makas ile linea alba boyunca 40 mm karın dermal kesi uzatmak. </li><li> İç karın boşluğuna maruz iç kas duvarından 35 mm kesi yapmak. </li><li> iki sütür (3 - 0) kullanarak hayvanın sağ taraf iç karın duvarına verici yapıyı ekleyin. karaciğer temastan kaçının. </li><li> Döngü Toprak elektrodu ve bir sütür (3 - 0) Bu durumda güvenli. Bu karın boşluğunda serbest yüzen yerleştirin. </li><li> sürekli sütür (- 0 3) kullanılarak Periton kapatın. </li><li> kesintiye dikişlerle (- 0 3) kullanarak cilt kesisi kapatın. </li></ol></li><li> Post-operatif bakım <ol><li> sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar hayvan izleyin. Ev hayvanları teker teker cerrahi sonrası. </li><li> carpr yönetmeofen deri altından 4 gün boyunca, günde bir kez analjezi (5 mg / kg) dir. </li><li> 7 gün sonrası ameliyat için içme suyuna profilaktik ağızdan antibiyotik (Enrofloxin, 5 mg / kg) ekleyin. </li><li> İlk 7 gün sonrası ameliyat için tahrişi azaltmak için cilt insizyonu sitelerine bir anti-inflamatuar merhem sürün. </li></ol></li></ol> Bilinçli Sıçanlarda 3. Davranış ERG ve VEP Kayıtlar <ol><li> Koyu önce ERG ve VEP kayıtları 12 saat boyunca hayvan adapte </li><li> Loş kırmızı aydınlatma (17.4 cd.m -2, λ max = 600 nm) altındaki tüm deneysel manipülasyonlar yapmak </li><li> topikal anestezi (% 0.5 Proxymetacaine) ve dilate (% 0.5 tropicamide) kornea düşer uygulayın. </li><li> özel yapılmış, açık süzgeç içine bilinçli kemirgen Kılavuzu. Not: Bu, plastik borunun uzunluğu 60 mm Me sabit genel çapı olan farklı büyüklükteki fareleri karşılamak için ayarlanabilir. Cihazın ön ucu kafası mo en aza indirmek için uca doğru daralmaktadırletle ve normal nefes sağlamak için delikler bulunmaktadır. Bu konik ön Ganzfeld kürenin açılışına uyum ve sıçan baş ve gözlerin istikrar sağlar. kemirgen süzgeç (3 ila 5 vesilelerle) ameliyattan önce acclimatized olduğunu unutmayın. </li><li> çanağın açıklık ile hizalanmış gözlü Ganzfeld kabın önünde kemirgen yerleştirin. </li><li> Vericinin ~ 5 cm mesafede bir mıknatıs geçirerek kalıcı verici açın. Verici alıcı bazında LED durum ışığı kontrol ederek üzerinde olduğundan emin olun. </li><li> Daha önce açıklandığı gibi 21 ışık enerjileri (yani -5,6 1,52 günlüğüne cd.sm -2) aralığında sinyal toplayın. Kısaca, parlak ışıklı enerjilerde sönük ışık seviyelerinde (~ 80 tekrarlar) ve daha az ortalama daha sinyalleri (~ 1 tekrarlama). Yavaş yavaş dimmest gelen parlak ışık seviyesine 1 180 saniye arasında interstimulus aralığı uzatmak. </li><li> ERG çubuk izole etmek içinve koni yanıtları ikiz flaş paradigma 8 kullanmaktadır. Örneğin, 1.52 log cd.sm iki yanıp söner -2-arasında 500 milisaniye arası uyaran aralığı ile başlatırlar. </li><li> Parlak ışıklı enerjilerde VEP sinyalleri, ortalama 20 tekrarlar kaydetmek için (yani, 1.52 log cd.sm -2, 5 sn arası uyaran aralığı). </li><li> ERG ve VEP Kayıtların 7, 10, 14, 21 ve 28 gün sonrası ameliyat yapmak, zamanla sinyal değişkenliği ile değerlendirilir implant stabilitesi, değerlendirmek. </li><li> ksilazin anestezi (12: 1 mg / kg) Deney döneminin ardından, ketamin sonra pentobarbiturate arasında intrakardiyak enjeksiyonu (1.5 ml / kg) ile sıçanları euthanize. </li></ol>

<ol><li>Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrishman%2C+LJ+%22Origins+of+the+Electroretinogram%22">Origins of the Electroretinogram</a>. , The MIT Press. (2006).</li>
<li>Granit, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+components+of+the+retinal+action+potential+in+mammals+and+their+relation+to+the+discharge+in+the+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve.</a> J Physiol. 77, 207-239 (1933).</li>
<li>Brown, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+eclectroretinogram%3A+its+components+and+their+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">The eclectroretinogram: its components and their origins.</a> Vision Res. 8, 633-677 (1968).</li>
<li>Brown, K. T., Murakami, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+Form+of+the+Early+Receptor+Potential+of+the+Monkey+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Biphasic Form of the Early Receptor Potential of the Monkey Retina.</a> Nature. 204, 739-740 (1964).</li>
<li>Kline, R. P., Ripps, H., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+b-wave+currents+in+the+skate+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of b-wave currents in the skate retina.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 75, 5727-5731 (1978).</li>
<li>Krasowski, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propofol+and+other+intravenous+anesthetics+have+sites+of+action+on+the+gamma-aminobutyric+acid+type+A+receptor+distinct+from+that+for+isoflurane%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Propofol and other intravenous anesthetics have sites of action on the gamma-aminobutyric acid type A receptor distinct from that for isoflurane.</a> Mol Pharmacol. 53, 530-538 (1998).</li>
<li>Stockton, R. A., Slaughter, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B-wave+of+the+electroretinogram.+A+reflection+of+ON+bipolar+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Physiol%22%5BJournal%5D)">B-wave of the electroretinogram. A reflection of ON bipolar cell activity.</a> J Gen Physiol. 93, 101-122 (1989).</li>
<li>Nixon, P. J., Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+cone+responses+to+rat+electroretinograms%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Experiment+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The contribution of cone responses to rat electroretinograms.</a> Clin Experiment Ophthalmol. 29, 193-196 (2001).</li>
<li>Weinstein, G. W., Odom, J. V., Cavender, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visually+evoked+potentials+and+electroretinography+in+neurologic+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Clin%22%5BJournal%5D)">Visually evoked potentials and electroretinography in neurologic evaluation.</a> Neurol Clin. 9, 225-242 (1991).</li>
<li>Sand, T., Kvaloy, M. B., Wader, T., Hovdal, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evoked+potential+tests+in+clinical+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Tidsskr+Nor+Laegeforen%22%5BJournal%5D)">Evoked potential tests in clinical diagnosis.</a> Tidsskr Nor Laegeforen. 133, 960-965 (2013).</li>
<li>Brankack, J., Schober, W., Klingberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+laminar+distribution+of+flash+evoked+potentials+in+cortical+areas+17+and+18+b+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hirnforsch%22%5BJournal%5D)">Different laminar distribution of flash evoked potentials in cortical areas 17 and 18 b of freely moving rats.</a> J Hirnforsch. 31, 525-533 (1990).</li>
<li>Creel, D., Dustman, R. E., Beck, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensity+of+flash+illumination+and+the+visually+evoked+potential+of+rats%2C+guinea+pigs+and+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Intensity of flash illumination and the visually evoked potential of rats, guinea pigs and cats.</a> Vision Res. 14, 725-729 (1974).</li>
<li>Herr, D. W., Boyes, W. K., Dyer, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+flash-evoked+potential+peak+N160+amplitude%3A+modulation+by+relative+flash+intensity%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Rat flash-evoked potential peak N160 amplitude: modulation by relative flash intensity.</a> Physiol Behav. 49, 355-365 (1991).</li>
<li>Guarino, I., Loizzo, S., Lopez, L., Fadda, A., Loizzo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chronic+implant+to+record+electroretinogram%2C+visual+evoked+potentials+and+oscillatory+potentials+in+awake%2C+freely+moving+rats+for+pharmacological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">A chronic implant to record electroretinogram, visual evoked potentials and oscillatory potentials in awake, freely moving rats for pharmacological studies.</a> Neural Plast. 11, 241-250 (2004).</li>
<li>Szabo-Salfay, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electroretinogram+and+visual+evoked+potential+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">The electroretinogram and visual evoked potential of freely moving rats.</a> Brain Res Bull. 56, 7-14 (2001).</li>
<li>Valjakka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reflection+of+retinal+light+response+information+onto+the+superior+colliculus+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The reflection of retinal light response information onto the superior colliculus in the rat.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 245, 1199-1210 (2007).</li>
<li>Lapray, D., Bergeler, J., Dupont, E., Thews, O., Luhmann, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+miniature+telemetric+system+for+recording+EEG+activity+in+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel miniature telemetric system for recording EEG activity in freely moving rats.</a> J Neurosci Methods. 168, 119-126 (2008).</li>
<li>Lim, K., Burke, S. L., Armitage, J. A., Head, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+blood+pressure+and+sympathetic+activity+of+rabbits+in+their+home+cage+and+the+laboratory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of blood pressure and sympathetic activity of rabbits in their home cage and the laboratory environment.</a> Exp Physiol. 97, 1263-1271 (2012).</li>
<li>Nguyen, C. T., Brain, P., Ivarsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+activity+analyses+for+improved+accuracy+and+sensitivity+of+drug+detection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparing activity analyses for improved accuracy and sensitivity of drug detection.</a> J Neurosci Methods. 204, 374-378 (2012).</li>
<li>Ivarsson, M., Paterson, L. M., Hutson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antidepressants+and+REM+sleep+in+Wistar-Kyoto+and+Sprague-Dawley+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Antidepressants and REM sleep in Wistar-Kyoto and Sprague-Dawley rats.</a> Eur J Pharmacol. 522, 63-71 (2005).</li>
<li>He, Z., Bui, B. V., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rate+of+functional+recovery+from+acute+IOP+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The rate of functional recovery from acute IOP elevation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 4872-4880 (2006).</li>
<li>Lamb, T. D., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+account+of+the+activation+steps+involved+in+phototransduction+in+amphibian+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">A quantitative account of the activation steps involved in phototransduction in amphibian photoreceptors.</a> J Physiol. 449, 719-758 (1992).</li>
<li>Hood, D. C., Birch, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+phototransduction+in+retinitis+pigmentosa%3A+estimation+and+interpretation+of+parameters+derived+from+the+rod+a-wave%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Rod phototransduction in retinitis pigmentosa: estimation and interpretation of parameters derived from the rod a-wave.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 35, 2948-2961 (1994).</li>
<li>Charng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conscious+wireless+electroretinogram+and+visual+evoked+potentials+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Onez%22%5BJournal%5D)">Conscious wireless electroretinogram and visual evoked potentials in rats.</a> PLoS Onez. 8, e74172(2013).</li>
<li>Galambos, R., Szabo-Salfay, O., Szatmari, E., Szilagyi, N., Juhasz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+modifies+retinal+ganglion+cell+responses+in+the+normal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Sleep modifies retinal ganglion cell responses in the normal rat.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 2083-2088 (2001).</li>
<li>Meeren, H. K., Van Luijtelaar, E. L., Coenen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+and+thalamic+visual+evoked+potentials+during+sleep-wake+states+and+spike-wave+discharges+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Cortical and thalamic visual evoked potentials during sleep-wake states and spike-wave discharges in the rat.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 108, 306-319 (1998).</li>
<li>Nair, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+common+anesthetics+on+eye+movement+and+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Effects of common anesthetics on eye movement and electroretinogram.</a> Doc Ophthalmol. 122, 163-176 (2011).</li>
<li>Amouzadeh, H. R., Sangiah, S., Qualls, C. W. Jr, Cowell, R. L., Mauromoustakos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xylazine-induced+pulmonary+edema+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Xylazine-induced pulmonary edema in rats.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 108, 417-427 (1991).</li>
<li>Charng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+electrophysiology+is+a+viable+preclinical+biomarker+for+drug+penetrance+into+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Retinal electrophysiology is a viable preclinical biomarker for drug penetrance into the central nervous system.</a> J Ophthalmol. , (2016).</li>
</ol>

RG ve RF, bu araştırmanın ticari fon sağlayıcısının (Pfizer Neusentis ve Pfizer Global Research) çalışanlarıdır. MI, bu araştırma sırasında Pfizer Global Research'ün bir çalışanıydı ve şu anda Proteostasis Therapeutics'in (Cambridge, ABD) bir çalışanıdır.

Bağlı görme elektrofizyoloji minimal invaziv doğası gereği, insan hastalarda ERG ve VEP kayıtları bilinçli koşullar altında yürütülen ve sadece elektrot yerleştirme için topikal anestezik kullanımını gerektirir. Buna karşılık, hayvan modellerinde görsel elektrofizyoloji geleneksel gönüllü göz ve vücut hareketlerini ortadan kaldırarak istikrarlı elektrot yerleştirme sağlamak için genel anestezi altında yapılır. Bizim önceki yayın 24 ve diğerleri 25-27 tarafından gösterildiği gibi Ancak, yaygın olara...

ERG ve VEP sırasıyla laboratuvar ve klinikte hem de retina ve görme yollarının bütünlüğünü değerlendirmek için in vivo araçları minimal invaziv bulunmaktadır. Tam saha ERG retina yolu 1,2 farklı hücre sınıflarını temsil eden her elemanı ile, farklı bileşenler ayrılabilir bir karakteristik dalga biçimi verir. Klasik tam saha ERG dalga fotoreseptör etkinlik sonrası ışığa maruz 2-4 temsil ettiği gösterilmiştir ilk negatif yamaç (a-dalgası) oluşur. A-dalgası orta retina, ağırlıklı olarak ON-bipolar hücreleri 5-7 elektriksel aktivitesini yansıtan önemli bir pozitif dalga (b-dalgası) tarafından takip edilmektedir. Ayrıca, bir çubuk yanıtları 8&#39;den koni izole etmek aydınlık enerji ve inter-uyaran-aralığı değişebilir. Flaş VEP retina ışık uyarısına yanıt olarak görsel korteks ve beyin sapı elektrik potansiyelleri temsil9,10. Bu dalga retino-geniculo-striate yolunun 11-13 ve sıçanlarda 11,13 çeşitli V1 lamina yapılan kortikal işleme temsil geç bileşenin nöronların aktivitesini yansıtan erken bileşeni ile, erken ve geç bileşenlerine ayrılabilir. Bu nedenle, ERG ve VEP eşzamanlı ölçümü görsel yolunda yer alan yapıların kapsamlı değerlendirmesini verir. Şu anda, hayvanlarda elektrofizyoloji kaydetmek için, anestezi elektrot dengeli yerleştirme sağlamak için kullanılır. Orada bilinçli sıçanlarda 14-16 yılında ERG ve VEP&#39;in ölçmek için girişimleri olmuştu ancak bu çalışmalar hantal olabilir ve hayvan hareketlerini ve doğal davranışlarını 17 kısıtlayarak hayvan strese yol açabilir kablolu kurulum, istihdam var. Geliştirilmiş minyatür ve pil ömrü gibi kablosuz teknolojisindeki son gelişmeler sayesinde, ERG An için telemetri yaklaşımını uygulamak artık mümkünKablolu kayıtları ve uzun vadeli canlılığı artırmak ilişkili stres azalan d VEP kaydı. Telemetri prob tamamen içselleştirilmiş kararlı implantasyonları kronik sıcaklık, kan basıncı 18, aktivite 19 izlenmesi yanı sıra elektroensefalografi 20 başarılı olduğu kanıtlanmış. teknolojisindeki ilerlemeler bu tür kronik çalışmalar için platformun programı artan tekrarlanabilirlik ve bilinçli kayıtların istikrar ile yardımcı olacaktır.

<table><tbody><tr><td>Biyoamplifikatör</td><td>ADInstruments</td><td>ML 135</td><td>ERG ve VEP sinyallerini güçlendirir</td></tr><tr><td>Karboksimetilselüloz sodyum %1.0</td> <td>Alerji</td><td>CAS 0009000-11-7</td><td>Ameliyat sırasında kornea hidrasyonunu koruyun</td></tr><tr><td>Carprofen %0.5</td> <td>Pfizer Hayvan Sağlığı Grubu</td><td>CAS 53716-49-7</td><td>Sıvı ikmali için enjekte edilebilir salin ile verilen ameliyat sonrası analjezi</td></tr><tr><td>Klorheksadin %</td><td>0.5Orion Laboratuvarları</td><td>27411, 80085</td><td>Cerrahi aletin dezenfeksiyonu</td></tr><tr><td>Siyanoakrilat jel aktivatörü</td><td>RS bileşenleri</td><td>473-439</td><td>Siyanoakrilat jeli hızla kurutur</td></tr><tr><td>Siyanokrilat jel ve nbsp;</td><td>RS bileşenleri</td><td>473-423</td><td>Paslanmaz vidaları kafatasına sabitleyin</td></tr><tr><td>Diş çapağı</td><td>Storz Instruments, Bausch ve Lomb</td><td>E0824A</td><td>VEP vidalarını implante etmek için her yarım küre üzerinde kafatasında küçük bir delik açmak için ~ 0,7 mm çapında minyatür matkap</td></tr><tr><td>kafası Matkap</td><td>Bosch</td><td>Dremel 300 serisi</td><td>Trepanning için otomatik matkap</td></tr><tr><td>Enrofloksin</td><td>Troy Laboratuvarları</td><td></td><td>Profilaktik antibiyotik sonrası Surgey</td></tr><tr><td>Ganzfeld entegre küre</td><td>Fotometrik Çözümler Uluslararası</td><td></td><td>Özel tasarlanmış ışık stimülatörü: 36 mm çap, 13 cm açıklık boyutu</td></tr><tr><td>Gazlı bez çubukları</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd</td><td>57-100B</td><td>Ameliyat sırasında cerrahi insizyonu ve açıkta kalan kafatası yüzeyini kurutur</td></tr><tr><td>İzofluran %99,9</td> <td>Abbott Avustralasya Ticaret A.Ş</td>. <td>CAS 26675-46-7</td><td>Özel Adı: Isoflo (TM) İnhalasyon anestezisi. VEP elektrot implant cerrahisi için oksijen gazı ile karıştırılmış farmasötik dereceli inhalasyon anestezik</td></tr><tr><td>Kenacomb merhem</td><td>Aspen Pharma Pty Ltd</td><td></td><td>Ameliyat sonrası cilt tahrişini ve kaşıntıyı azaltmak için</td></tr><tr><td>Luxeon LEDs</td><td>Phillips Lighting Co.</td><td></td><td>Işık stimülasyonu için, yirmi adet 5 W ve bir adet 1 W LED, Scope yazılımı tarafından kontrol</td></tr> edilir <tr><td>İğne (makrocerrahi)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501959</td><td>Karın ve baş cerrahisinin dikilmesi için, 3 - 0 dikiş, göz iğnesi, kesici kenar 5/16 daire ile kullanılır Boyut 1, 15 mm</td></tr><tr><td>İğne tutucu (makrocerrahi)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500224</td><td>Karın ve kafa cerrahisi</td></tr> <tr><td>sırasında iğne tutmak içinİğne tutucu (mikrocerrahi)</td><td>World Precision Instruments</td><td>555419NT</td><td>Oküler cerrahi sırasında iğneyi tutmak için</td></tr><tr><td>Optiva kateter</td><td>Smiths Medical International LTD</td><td>16 veya 21 G</td><td>Kafatasından konjonktivaya kadar kornea aktif elektrotları kılavuz</td></tr><tr><td>Povidone iyot %10</td> <td>Sanofi-Aventis</td><td>CAS 25655-41-8</td><td>Tescilli adı: Betadine, Traşlı cildi ameliyata hazırlamak için antiseptik %10, 500 ml</td></tr><tr><td>Powerlab veri toplama sistemi</td><td>ADInstruments</td><td>ML 785</td> Telemetri veri dönüştürücüsü Proxymetacaine 0.5% ile <td>eşleştirilmiş telemetri vericisinden sinyal alın</td></tr><tr><td></td><td>.</td><td>CAS 5875-06-9</td><td>Topikal oküler analjezi</td></tr><tr><td>Kısıtlayıcı</td><td>cutom yapıldı</td><td></td><td>Tutucunun önü, kafa hareketini en aza indirmek için koniktir, uzunluk farklı sıçan uzunluğuna uyacak şekilde ayarlanabilir, toplam çap 60 mm'dir.</td></tr><tr><td>Scapel bıçağı</td><td>R.G. Medical Supplies</td><td>SNSM0206</td><td>Cerrahi insizyon için</td></tr><tr><td>Makas (makrocerrahi)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501225</td><td>abodmen ve kafa için doku kesmek için</td></tr><tr><td>Makas (mikrocerrahi)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501232</td><td>Elektrot bağlantısı için konjonktivayı incelemek için</td></tr><tr><td>Kapsam Yazılım</td><td>Cihazları</td><td>sürüm 3.7.6</td><td>ADI Powerlab sistemi aracılığıyla uyarıyı eş zamanlı olarak tetikler ve cerrahi</td></tr><tr>bölgelerden<td>Tıraş Makinesi</td><td>Oster</td><td>Golden A5</td><td>Tıraş kürkü</td></tr><tr><td>verileri toplar Paslanmaz makara vidaları&nbsp;</td><td>MicroFasteners</td><td>L001.003CS304</td><td>0,7 mm mil çapı, 3 mm uzunluk&nbsp;</td></tr><tr><td>Stereotaksik çerçeve</td><td>David Kopf</td><td>Model 900</td><td>Kafatasındaki implantasyon işaretlerini bulmak için küçük bir hayvan stereotaksik alet</td></tr><tr><td>Cerrahi örtü</td><td>Hayati Tıbbi Malzemeler</td><td>GM29-612EE</td><td>Ameliyat sırasında steril ortam sağlayın</td></tr><tr><td>Sütür (makrocerrahi)</td><td>Ninbo tıbbi iğneler</td><td>Karın ve baş cerrahisi dikmek için 3-0, steril ipek örgülü, 60 cm</td><td></td></tr><tr><td>Dikiş iğnesi ( mikrocerrahi)</td> <td>Oküler cerrahi için Ninbo tıbbi iğneler</td><td>8-0 veya 9-0</td><td>, skleraya elektrot dikme ve konjonktival yaranın kapatılması, naylon sütür, 3/8 daire 1 ve kez; 5, 30 cm</td></tr><tr><td>Telemetri veri dönüştürücüsü&nbsp;</td><td>DataSciences International</td><td>R08</td>, <td>telemetri sinyalinin veri toplama yazılımı ile arayüz oluşturmasına izin verir</td></tr><tr><td>Telemetri Veri Değişim Matrisi</td><td>DataSciences International</td><td></td><td>Vericilerden veri toplar, alıcıyla eşleştirir</td></tr><tr><td>Telemetri veri alıcısı</td><td>DataSciences International</td><td>RPC-1</td><td>Vericiden telemetri verilerini alır</td></tr><tr><td>Telemetri vericisi</td><td>DataSciences Uluslararası</td><td>F50-EEE</td><td>3 kanallı telemetri vericisi</td></tr><tr><td>Tropicamide %0,5</td> <td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td></td><td>İris genişlemesi</td></tr><tr><td>Cımbız (makrocerrahi)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500092</td><td>Karın ve kafa cerrahisi sırasında dokuları manipüle</td></tr> etmek <tr><td>Cımbız (mikrocerrahi)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500342</td><td>Oküler cerrahi sırasında dokuları manipüle</td></tr></tbody></table> edin

bilinçli sıçanlarda implantasyon ve kablosuz elektroretinogram recording ve görsel uyarılmış potansiyel

Implantation and Recording of Wireless Electroretinogram and Visual Evoked Potential in Conscious Rats

tam saha elektroretinogram (ERG) ve görsel uyarılmış potansiyel (VEP) laboratuar ve klinik ortamlarda hem de retinal ve görsel yolu bütünlüğünü değerlendirmek için yararlı araçlardır. Şu anda, preklinik ERG ve VEP ölçümleri kararlı elektrot yerleşimleri sağlamak amacıyla anestezi ile yapılmaktadır. Bununla birlikte, anestezinin çok varlığı, normal fizyolojik tepkileri kontamine gösterilmiştir. Bu anestezi boşa aşmak için, bilinçli sıçanlarda ERG ve VEP&#39;in tahlil için yeni bir platform oluşturmayı. Elektrotlar cerrahi ERG tahlil ve epidural VEP&#39;in ölçmek için görsel korteks over göz alt conjunctivally implante edilir. genlik ve hassasiyet bir dizi / zamanlama parametreleri ışık enerjileri artırmayı ERG ve VEP hem deneye tabi tutulur. ERG ve VEP sinyallerinin en az 4 hafta sonrası cerrahi implantasyon için istikrarlı ve tekrarlanabilir olduğu gösterilmiştir. anestezi olmadan ERG ve VEP sinyalleri kaydetmek için bu yeteneği klinik öncesi s boşaetting klinik verilere üstün çeviri sağlamak gerekir.

Fotoreseptör tepkisi Kuzu ve Pugh modeline dayalı, her bir hayvan için üst 2 ışıklı enerjilerin (1.20, 1.52 log csm -2) de ERG cevabının ilk inen bacak ön kenarına gecikmiş bir Gauss uydurma analiz edilir 22 Hood ve Birch 23 tarafından formüle edilmiştir. Bu formül, bir genlik ve duyarlılık parametresi, (Şekil 1C ve 1D sırasıyla,) döndürür. Bir hiperbolik fonksiyonu da bir genliğe ve hassasiyet parametresi (Şekil ...

Biz kayıtları anestezi karıştırıcıların olmadan yapılan insan durumuna daha benzerdir gözün (Elektroretinogram) ve bilinçli sıçanlarda beyin (görsel uyarılmış potansiyel), görsel elektrofizyolojik sinyaller ölçmek için cerrahi implantasyon ve Kayıt işlemleri göstermektedir.

Bilinçli Sıçanlarda implantasyon ve Kablosuz Elektroretinogram Recording ve Görsel Uyarılmış Potansiyel

The full-field electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are useful tools to assess retinal and visual pathway integrity in both ...

Bu prosedürün genel amacı, kablosuz telemetri problarının cerrahi implantasyonunu takiben bilinçli ERG ve VEP sinyallerini ölçmektir. Bu teknik, nörobilim alanındaki temel soruların, örneğin nöronların hem sağlıklı koşullar hem de hastalık durumunda genel anestezinin sınırlamaları olmadan nasıl davrandığı gibi soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, bilinçli hayvanlarda retina ve görsel korteks için elektrofizyolojinin eş zamanlı olarak kaydedilmesine olanak tanımasıdır.Bu prosedüre başlamak için elektrotları bir mikroskop altında hazırlayın. Bunun için, çift sarmallı paslanmaz çelik bir elektrodu iki adet ince uçlu pense ile çözün. Paslanmaz çelik tellerden birini ucundan yaklaşık bir santimetre mesafeden kesin; halka elektrodu şekillendirmek için tek bir uzun ve düz tel bırakın.Ardından, tekli paslanmaz çelik teli kendi üzerine katlayın ve elektrot ucunda pürüzsüz bir halka oluşturacak şekilde bükün. Sonra, halkanın tabanını bükerek 0,2 ila 0,5 mm çapında bir daire oluşturup bir ERG aktif elektrot şekillendirin. İki ERG inaktif ve bir VEP inaktif elektrot için halka çapını 0,8 mm yapın.Bu örnekte, bir adet aktif ERG ve üç adet inaktif elektrot hazı

implantation-recording-wireless-electroretinogram-visual-evoked

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Bu video, retina sağlığını ve görsel yol bütünlüğünü incelemek için bir sıçan modelinin hazırlanışını göstermektedir. Görsel uyarılmış potansiyel ve elektroretinografi referansı ve aktif elektrotlar sıçana bağlanır, ardından eşit retinal aydınlatma için platformu Ganzfeld çanağının önünde sıçan ile hizalar ve dış paraziti önlemek için Faraday kafesi kapatılır.

Bir Elektrofizyoloji Kurulumu Kullanarak Görsel Yol Bütünlüğünü Değerlendirmek için Bir Sıçan Modeli Hazırlama

Bu video, anestezi uygulanmış bir sıçanın birden fazla bölgeden beyin aktivitesinin elektrofizyolojik kayıtları için hazırlanmasına yönelik ayrıntılı prosedürü göstermektedir. Kafatasına erişmek için kafa derisi kesilir ve elektrotları yerleştirmek ve sabitlemek için kesin yerlerde delikler açılır. Tungsten mikrotel elektrotlar daha sonra verileri kaydetmek için hedeflenen konuma yerleştirilir.

Sıçanlarda Birden Fazla Bölgeden Beyin Aktivitelerinin İn Vivo Elektrofizyolojik Kayıtları

Video, çok kanallı sinir ağlarını kaydetmek ve uyarmak için bir sıçan beynine kablosuz çift yönlü çok kanallı bir elektrot ünitesi implante etme prosedürünü göstermektedir.

Bir Sıçan Beynine Kablosuz Çift Yönlü Mikroelektrot Sistemi Yerleştirilmesi

Bu video, ışık uyaranlarına yanıt olarak beynin görsel korteksinden gelen elektrik sinyallerini kaydeden önceden implante edilmiş kafatası elektrotları ile karanlığa uyarlanmış, anestezi uygulanmış bir sıçanda görsel uyarılmış potansiyelleri veya VEP'leri ölçme sürecini göstermektedir.

Bir Sıçan Modelinde Kafatası Elektrotları aracılığıyla Görsel Uyarılmış Potansiyellerin Kaydedilmesi

Bu video, gerçek zamanlı nöbet tespiti için anestezi uygulanmış bir sıçana kafa üstü elektrot sistemi yerleştirme yöntemini göstermektedir. Prosedür, stimülasyon ve kayıt elektrotlarının yerleştirilmesini, diş çimentosu ile sabitlenmesini ve başa takılan bir amplifikatöre bağlanmasını içerir.

Gerçek Zamanlı Nöbet Tespiti için Bir Sıçan Modeline Kafa Üstü Elektrot Sisteminin İmplante Edilmesi

Bu video, bilinçli bir sıçanda elektroretinogram (ERG) ve görsel uyarılmış potansiyelin (VEP) nasıl kaydedileceğini gösterir. Cerrahi olarak implante edilen elektrotlara sahip sıçan önce karanlığa adapte edilir. Dilatasyon damlaları uygulandıktan sonra, hayvan bir kısıtlayıcıya yerleştirilir ve bir Ganzfeld kasesine yerleştirilir. ERG ve VEP sinyalleri daha sonra kaydedilir.

Bir Sıçanda Elektroretinogram ve Görsel Uyarılmış Potansiyelin Kaydedilmesi

Video, nöbet ile indüklenen sıçan yavrularından elektroensefalogram (EEG) sinyallerinin kaydını göstermektedir. Bir veri toplama sistemine bağlı elektrotlarla implante edilmiş serbestçe hareket eden bir yavru alın. Epileptik nöbetleri indüklemek için bir nörotoksin uygulanır ve ortaya çıkan elektriksel patlama aktivitesi EEG sinyali kullanılarak izlenir.

Serbest Hareket Eden Sıçan Yavrularında Elektroensefalografi ile İndüklenen Nöbetlerin Kaydedilmesi

Optik sinirde lisolesitin mikroenjeksiyonu kullanılarak fokal demiyelinizasyon indüklenir. Görsel uyarılmış potansiyeller, in vivo olarak görsel yol boyunca sinyal iletimini incelemek için görsel korteks üzerine implante edilen kafatası elektrotları aracılığıyla kaydedilir. Bu protokolde elektrot implantasyonu ve optik sinir mikroenjeksiyonunun altında yatan cerrahi prosedürler detaylandırılır.

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

Bu protokol, anestezi uygulanmış sıçanlarda elektroretinogram ve görsel uyarılmış potansiyellerin eş zamanlı ölçümünü tanımlar.

Elektroretinografi Eşzamanlı Kayıt ve Anestezi Sıçanlar Görsel Uyarılmış Potansiyeller

Bir kablosuz fareler serbestçe davranışlar içinde stimülasyon ve çok kanallı sinirsel kayıtları için çift yönlü sistemi tanıttı. Hafif ve küçük, böylece animal´s davranış repertuar üzerinde en az etkiye sistemidir. Ayrıca, bu çift yönlü sistem beyin harekete geçirmek desen ve davranışı arasındaki nedensel ilişkileri değerlendirmek için gelişmiş bir araç sağlar.

Kablosuz, Vivo içinde kayıt ve fareler serbestçe davranışlar içinde sinirsel aktivite uyarılması için çift yönlü arayüzü

Öğrenin bilinçli sıçanlarda kablosuz telemetri probu implantasyonu ve elektroretinogram ile görsel uyarılmış potansiyel kaydı yapmayı. Bu yöntem anestezi etkileri olmadan retina ve görsel korteksten eşzamanlı sinyal ölçümü sağlar.

Bilinçli Sıçanlarda implantasyon ve Kablosuz Elektroretinogram Recording ve Görsel Uyarılmış Potansiyel

Daha fazla video keşfet