Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Bu protokolün genel amacı, sırasıyla akut veya subakut arka bacak iskemisini indüklemek için fare femoral arterine sütürlerin veya ameroid konstriktörlerin yerleştirilmesiyle insan periferik arter hastalığını modellemektir. Periferik arter hastalığı önemli bir klinik problemdir ve hayvan modellerini kullanan bu teknikler, insan hastalığını daha iyi temsil etmek için geliştirilmiştir. Bu tekniklerin temel avantajı, ekstremite iskemisinin şiddetinin ve başlangıç zamanının araştırmacı tarafından kontrol edilebilmesidir.

Prosedürü, laboratuvarımdan bir teknisyen olan Mike Padgett uygulamalı olarak gösterecek. Prosedürden bir ila iki gün önce, ayak parmağı sıkıştırmasına tepki vermediğinden emin olarak farenin tamamen sedatize olduğunu doğrulayın ve göz merhemi uygulayın. Ardından, her iki arka ekstremitedeki tüyleri tıraş etmek için küçük bir elektrikli düzeltici kullanın.

Tüm tüyler kısaltıldıktan sonra, önceden ısıtılmış tüy dökücü krem uygulayın. Bir dakika sonra, kremi nemlendirilmiş bir gazlı bezle nazikçe silerek temizleyin. Ardından fareyi, sternal rekumbensi koruyabilecek duruma gelene kadar kağıt havluyla döşenmiş boş bir iyileşme kafesine yerleştirin.

Ameliyat günü, tamamen sedate edilmiş fareyi sırt üstü pozisyonda bir Technic stereo diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin ve her iki bacağını cerrahi bantla sabitleyin. Sıcaklık kontrollü bir ısıtma pedi kullanılıyorsa, sıcaklık probunu takın ve probu cerrahi platformun tabanına cerrahi bantla sabitleyin. Ardından, cerrahi alanı temizlemek için dönüşümlü olarak üç adet povidon iyot ve alkol mendili kullanın ve hayvanı, insizyon bölgesinde delik bulunan steril bir cerrahi örtü ile örtün.

Bir skalpel kullanarak, dizden abdomene doğru medial uyluğun merkez hattı boyunca ilk insizyonu yapın. Ardından, insizyonu yaklaşık bir santimetreye kadar uzatmak için ince makas kullanın. Pens yardımıyla, inguinal yağ dokusunu örten membranı açığa çıkarmak için insizyonu genişletin.

Ardından, kapalı pens yardımıyla membranı delerek yağ dokusu ile abdomen arasındaki boşluğa girin. Yağ dokusunu abdominal kaslardan ayırmak ve nörovasküler demeti açığa çıkarmak için pens üzerindeki baskıyı nazikçe bırakın. Nörovasküler demetin diseksiyonundan önce, ana kan damarlarının ve dallarının doğru şekilde tanımlanması kritik önem taşır.

Konstriktörlerin konumundaki veya ligasyon bölgelerindeki varyasyonlar, iskeminin şiddetini önemli ölçüde değiştirebilir ve sonuçlarda ciddi bir değişkenliğe yol açabilir. İnsizyonun içine bir ekartör yerleştirin ve lateral sirkumfleks femoral arterin hemen proksimalinde bulunan proksimal ameroid konstriktör bölgesini açığa çıkarmak için abdominal dokuyu hayvanın başına doğru çekin. Ardından, cerrahi alanı genişletmek için insizyonun distal kısmına bir medial ve bir lateral ekartör yerleştirerek inguinal yağ dokusunu ayağa doğru ve cerrahi bölgeden uzağa çekin.

Femoral arterin proksimal ve yüzeysel kaudal dalları kolaylıkla gözlemlenebilmelidir. Lateral sirkumfleks femoral arter, kaudal dalların yaklaşık beş milimetre proksimalinde yer alır ve membran tarafından örtülmüş olabilir. Şimdi, bir pensetin ucunu damarları birbirine bağlayan membranın altına nazikçe kaydırarak ucun 1/2'sini ven ile arter arasına yerleştirin.

Ardından forsepsi kapatın ve membranı nazikçe yırtarak ayırın. Membranın tamamı kaldırıldığında, kapalı forsepsin ucunu ven ile arter arasına yerleştirin ve damarlar arasında bir boşluk oluşturmak için forseps üzerindeki baskıyı serbest bırakın. Subakut ekstremite iskemisi için, damarı nörovasküler demetten izole etmek amacıyla forseps ucunu femoral arterin altına kaydırın.

Kapatıcının kenarını tutmak için ikinci bir açılı pens seti kullanın ve kapatıcıyı femoral arterin altına doğru yönlendirin. Ardından arteri kapatıcı yuvasına yerleştirin. Sonrasında, distal kapatıcıyı femoral arter üzerinde, arterin popliteal ve safen arterlere ayrıldığı noktanın hemen proksimaline konumlandırın ve femoral arteri kapatıcı yuvasına yerleştirin.

Akut ekstremite iskemisi için, proksimal konstriktör ile aynı pozisyonda arterin altına 7-0 bir sütür geçirin ve arteri ligatize edin. Ardından, birincinin yaklaşık bir milimetre distaline ikinci bir ligatür bağlayın ve iki ligatür arasından arteri kesmek için yaylı makas kullanın. Distal arteriyel transeksiyon için ligatürleri, femoral arterin popliteal ve safen arterlere ayrıldığı noktanın hemen proksimaline, aralarında yaklaşık bir milimetre olacak şekilde yerleştirin.

Ardından insizyonu kesikli five-0 vicryl sütürlerle kapatın ve fareyi, bir lazer doppler perfüzyon görüntüleyicinin altındaki 37 °C'lik ısıtma pedine yerleştirin. Şimdi görüntüleyiciyi açın ve görüntü yakalama yazılımını başlatın. Tarayıcı kurulum penceresini açmak için Yeni Tek Görüntü simgesine tıklayın; tarama boyutunu geniş, tarama hızını ise piksel başına dört milisaniye olarak ayarlayın.

Tarama Alanı birimleri panelindeki X ve Y değerlerini uygun değerlerle değiştirin, ardından Video ve Mesafe sekmesine tıklayın ve her iki arka ekstremiteyi tarama alanı içine yerleştirin. Otomatik Mesafe düğmesine tıklayın, ardından Denek Detayları penceresini açmak için İleri düğmesine tıklayın ve denek bilgilerini girin. Tarama penceresine geçmek için İleri düğmesine tıklayın.

Ardından, Confirm or Override Scan Distance iletişim kutusunu açmak için Start Measurement düğmesine tıklayın ve tarama işlemini başlatmak için OK seçeneğine tıklayın. Tarama tamamlandığında, fareyi tam olarak iyileşene kadar izleme yapılan boş bir iyileşme kafesine taşıyın. Hayvan çalışmalarının doğasında bulunan varyasyonlara ek olarak; vücut sıcaklığı ve hayvanın pozisyonu dahil diğer faktörler, lazer doppler perfüzyon görüntülemede değişkenliğe neden olabilir.

Subakut arka ekstremite iskemi modeli, belirli bir parti içinde geniş farklılıklar gösterebilen ameroid konstriktörlerin kalitesine bağlıdır. Cerrahi işlemin etkilerini göstermek ve ameliyat sonrası bazal bir perfüzyon seviyesi belirlemek için, hayvan hala anestezili iken prosedürden hemen sonra lazer doppler perfüzyon görüntülemesi gerçekleştirilmelidir. Akut ekstremite iskemisinin indüksiyonundan sonra arka ekstremite perfüzyonunun tamamen kaybolduğu gözlemlenmelidir; buna karşın, subakut modeldeki ameroid konstriktör yerleşiminden sonra tipik olarak perfüzyonda sadece hafif bir azalma gözlemlenir.

Bu prosedürler, insan periferik arter hastalığının bir modeli olarak farede, farklı derecelerdeki iskeminin vasküler yeniden şekillenme ve iskelet kası rejenerasyonu üzerindeki etkilerinin araştırılmasına olanak tanır. Uzmanlaşıldığında, doğru şekilde uygulandıkları takdirde bu prosedürler yaklaşık 15 dakika içinde tamamlanabilir. Bu cerrahi işlemleri gerçekleştirirken, hayvanın vücut sıcaklığının ve anestezinin yeterliliğinin sürekli olarak izlenmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir.

Ligatürlerin veya konstriktörlerin yerleşimi ayarlanarak, iskemiik hasarın şiddeti değiştirilebilir; bu durum, hayvanın genetik arka planına veya kardiyovasküler risk faktörlerinin varlığına bağlı olarak önemli bir değişken olabilir. Bu videoyu izledikten sonra, farede hem akut hem de subakut arka ekstremite iskemisinin nasıl indükleneceği ve prosedürün uygun sonuçlanmasını ve tekrarlanabilirliğini sağlamak için vasküler anatominin nasıl tanımlanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.