Name: Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Keşfedin farelerde akut ve subakut arka ayak iskemi yöntemlerini, ameroid konstriktörler kullanarak kontrollü arteriyel oklüzyon sağlayan bu protokol ile. Damar biyolojisi ve anjiyogenez araştırmaları için güvenilir bir hayvan modeli sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, CDK'ya R21HL118661, R56HL124444 ve R01HL124444 NIH hibeleri ve JMM'ye R00HL103797 ve R01HL125695 NIH hibeleri ile desteklenmiştir.

Bütün hayvan deneyleri Duke Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir protokole göre gerçekleştirilmiştir. her iki cinsten kullanılabilmesine rağmen çalışma bilimsel bir amaç için belirtildiği gibi erkek fareler, bu çalışmada kullanılmıştır. 1. Epilasyon <ol><li> 37 ° C&#39;de ayarlanmış bir kapalı ısıtma yastığı ve izofluran sürekli akışına bağlı bir roket ucu konisi bağlantı oluşan bir ameliyat öncesi hazırlama alanı kurmak anestezinin indüksiyonu öncesinde. </li><li> Anestezi indüksiyon odasında fare yerleştirin. % 3 - 1 ile 1 L / dk ve izofluran O 2 debimetre ayarlayın. Not: Anestezi, tipik olarak% 2 izofluran ile 25 g fare indüklenir. </li><li> yavaşça odasına sallanan ve bir düzeltilmesi refleksi eksikliği gözlemleyerek farenin teşvik yanıtını kontrol edin. </li><li> Açılış öncesinde izofluran temizlemek için O 2 ile odasına yıkayın. Hızla ısıtma p için fareyi hareket ettirinreklam ve roket ucu konisi yoluyla izofluran bağlayın. </li><li> % 1.5 izofluran ayarlayın. Pedal refleks (ayak tutam) tarafından uyaran yanıtını kontrol edin. </li><li> Ameliyat sırasında kurumasını önlemek için her iki göze liberal oftalmik yağ sürün. </li><li> küçük bir elektrik düzeltici kullanarak her iki arka bacaklarda saç tıraş. Cildi laserasyon yaralanmasıdır önlemek için tıraş sırasında gergin cildi tutun. </li><li> Önceden ısıtılmış epilasyon kremi uygulayın ve 1 dakika boyunca bekletin. Yavaşça nemlendirilmiş gazlı bez kullanılarak silin. </li><li> daha sonra cerrahi işlem için, izofluran kapatın ve kafes yatak aspire olmayan fare sağlamak için boş bir kağıt havlu kaplı kurtarma kafesine fareyi hareket ettirin. sternal yatma koruyabilmiştir kadar hayvan izleyin. Aksi takdirde, cerrahi masaya fareyi hareket ettirin. NOT: Epilasyon işlemi cildi tahriş ve perfüzyon ölçümleri etkileyebilir. p önce hayvanın saçlarını çıkardıktan sonra 2 gün, 1 - beklenmesi tavsiye edilirBir ameliyat öncesi perfüzyon taraması erforming veya ameliyat gerçekleştirmek. </li></ol> 2. Ön-Cerrahi Hazırlık <ol><li> Bu işlem sırasında aşağıdaki araçları kullanın; küçük düz cerrahi makas, 2 ince uçlu açılı forseps, küçük Graefe forseps, iğne sürücü forseps, 3 retraktörleri, küçük yaylı makas ve ince uçlu pamuklu çubuk. </li><li> Ameliyat başlamadan önce bir otoklav kullanarak tüm araçları sterilize edin. En fazla 5 hayvanlar için, her cerrahi işlem öncesi ve arasında sıcak boncuk sterilizatör kullanın. 5 daha büyük gruplar ameliyatlar için ek cerrahi alet paketleri sterilize edin. </li><li> kapalı ısıtma yastığı ve izofluran port oluşan steril cerrahi alanında hazırlayın. 10 Stereo diseksiyon mikroskobu altında tüm çalışmaları gerçekleştirmek. </li><li> Anestezisi ve adımları 1.5 1.1 de tarif edildiği gibi fare hazırlamak. </li><li> Fare tamamen uyuşturulmuş olup olmadığını kontrol edin ve cerrahi masaya bir yatar pozisyonda içine yerleştirin. Cerrahi bant kullanarak iki bacak sabitleyin. &lt;/ Li&gt; <li> sıcaklık kontrollü ısıtma yastığı kullanılarak, sıcaklık probu takmak ve yanlışlıkla işlem sırasında çıkardı olmayacak emin olmak için cerrahi bant kullanarak cerrahi platformunun tabanına sabitleyin. </li><li> 3 alternatif povidon-iyot ve alkol mendil kullanarak kesi sitesine temizleyin. Steril cerrahi örtü ile hayvan örtün ve kesi sitesine ortaya çıkarmak için bir delik. </li></ol> Bacak İskemi 3. İndüksiyon <ol><li> Karın doğru diz çalışan, medial uyluk merkezi boyunca bir başlangıç ​​kesi yapmak ve ince makas (Şekil 1A) ile yaklaşık 1 cm kesi uzatmak için bir neşter kullanın. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig1.jpg" /> Şekil 1. Cerrahi Alan ve Fare Arka ayağın İskemi Cerrahisi Damar Anatomik Merkezi. (A) Dış görünümyatar pozisyonda bir fare hindlimb. Yumurtadan çizgi düzgün hindlimb iskemi işlemleri gerçekleştirmek için kesi sitesini gösterir. Proksimal fare hindlimb damarsal (B) Görünüm. Femoral arter (FA) yakın ucu, inguinal ligamanın (IL) altından çıkar. FA uzak ucu popliteal arter (PA) ve safen arter (SA) ayrılmasından yer almaktadır. FA kapalı ana teminat arterler lateral sirkumfleks femoral arter (LCFA), proksimal kaudal femoral arter (PCFA) ve yüzeysel kaudal epigastrik arter (SCEA) bulunmaktadır. femoral ven (FV) FA bitişik çalışır ve venöz şube büyük arter dalları paralel görülebilir. Yıldız (*)., AMEROID konstriktör- veya bitişik harfler yerleştirme için yakın ve uzak siteleri göstermek subakut veya akut iskemi kaynaklı olacak bağlı olarak <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig1large.jpg" target="_blank">, lütfen cli</a>Bu rakamın büyük halini görmek için buraya ck. <ol start="2"><li> forseps kullanarak, kesi açın ve kasık yağ dokusu (IFT) kapsayan membran maruz kalmaktadır. </li><li> delmek IFT ve karın arasındaki ayrılık içine zarından, kapalı forseps kullanma. Yavaşça altında nörovasküler demet açığa karın kaslarının gelen IFT ayırmak için forseps üzerindeki baskıyı bırakın. Önemli anatomik (Şekil 1B) olarak proksimal ve yüzeysel kaudal şube gözlemleyin. </li><li> Retractor takın ve proksimal AMEROID yılanı veya ligasyon sitesi, lateral sirkumfleks femoral arter (Şekil 1B) sadece proksimal maruz proksimal karın dokusu çekin. Lateral sirkumfleks arter proksimal ve yüzeysel kaudal arterlere yaklaşık 5 mm proksimal yatıyor. <ol><li> , Kesi distal parçası haline iki retraktörler, bir medial ve lateral birini eklemek distale uzak IFT çekmeyecerrahi alan cerrahi alanında genişletmek için. </li></ol></li><li> nörovasküler demet kaplayan en dıştaki zar kaldırmak için iki ince forseps kullanın. Yavaşça onları birbirine bağlayan zarının altında forseps ucu kayma, ven ve arter arasındaki ince forseps ucu yarısını yerleştirin. forseps kapatın ve hafifçe membran yırtın. </li><li> ven ve arter arasında kapalı forseps ucunu yerleştirin ve forseps üzerindeki baskıyı bırakarak aralarında bir boşluk oluşturun. arter ve sinir arasında bir boşluk oluşturmak için bu tekniği tekrarlayın. </li><li> Subakut ekstremite iskemi, proksimal femoral arter (Şekil 2) bir AMEROID yılanı yerleştirin. <ol><li> Proksimal AMEROID yılanı yüklemek için, nörovasküler demet onu izole etmek femoral arter altında bir forseps ucunu kaydırın. kavrama yılanının kenarına angled- forseps ikinci bir set kullanın ve femoral arter altında rehberlik. </li><li> s içine femoral arter Layyılanının lot. Popliteal arter ve safen arter (Şekil 2) içine femoral arter çatallanma hemen proksimal konumlandırma, uzak yılanının için tekrarlayın. </li></ol></li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig2.jpg" /> AMEROID konstriktör- ve ligatürler Şekil 2. Yerleştirme. Subakut hindlimb iskemi ikna etmek için femoral arter üzerine yerleştirilen iki AMEROID konstriktör- (A) örneği. Proksimal yılanı lateral sirkumfleks femoral arter (LCFA) sadece yakın yerleştirilir. Distal constrictor popliteal (PA) ve safen arterler (SA) çatallanma sadece yakın yerleştirilir. Konstriktör- arter sağlamak için yukarı bakacak yuva düzgün yılanının içinde ayarlanır ile yüklenir. Akut hindlimb iskemi ikna etmek için femoral arter bitişik harfler (B) örneği. Ligatures (sarı oklar) onlar paneli (B) konstriktör- konumunu kanadını şekilde yerleştirilir ve femoral arter iki bitişik harfler (yıldız) her set arasında transeksiyon edilir. Bar, 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="8"><li> Akut ekstremite iskemi, bağlanır ve proksimal femoral arter transect. <ol><li> femoral arter transect için, iplik 7 - yakın yılanının pozisyonuna sadece proksimal arter Ç dikiş ve düğüm (Adım 3.7). İlk 1 mm distalinde bir ikinci bitişik harfleri kravat. </li><li> İki bitişik harfler arasındaki arter transect için yaylı makas kullanın. distal arteryel transeksiyonu için, popliteal arter ve safen arter içine femoral arter çatallanma ayrı, sadece yaklaşık 1 mm yaklaşık iki bitişik harfler yerleştirerek ancak yüzeysel Caud distal olmasını sağlamak, bu adımları yineleyinal epigastrik arter (Şekil 1) </li></ol></li><li> O Vicryl sütürler - kesi kapatın kullanarak 5 kesildi. </li></ol> 4. Perfüzyon Görüntüleme <ol><li> Lazer Doppler perfüzyon kamera (LDPI) altında ayarlanmış 37 ° C ısıtma pedi için fareyi hareket ettirin ve izofluran kaynağına bir roket ucu konisi yoluyla bağlayın. herhangi bir sıcaklık izleme mevcuttur, fare, 37 ° C &#39;ye kadar ısınmaya için, 5 dakika izin verir. </li><li> kamera açın ve görüntü yakalama yazılımı başlatmak. </li><li> &#39;Tarayıcı Ayarları&#39; penceresini açmak için &#39;Yeni Tek Resim&#39; simgesini tıklayın. &#39;4 ms / piksel&#39; ile &#39;Büyük&#39; ​​ve &#39;Tarama Hızı&#39; ile &#39;Tarama Boyutu&#39; olarak ayarlayın. &#39;Tarama Alanı (adet)&#39; bölmesinde x ve y değerlerini değiştirerek tarama alanını ayarlayın. </li><li> video beslemesini görüntülemek için &#39;Video ve Distance&#39; sekmesini tıklayın ve kırmızı çizgileriyle de gösterildiği tarama alanına sığdırmak için fareyi düzenlemek. kalibre etmek &#39;Otomatik Mesafe tıklayınkonuya lazer mesafe. &#39;Konu Detayları&#39; penceresini açmak için &#39;Next&#39; tıklayın. </li><li> konu bilgi ve ilgili yorumlarınızı girin. tarama penceresine geçmek için &#39;İleri&#39; düğmesine tıklayın. </li><li> &#39;Onayla veya Scan Distance geçersiz kıl&#39; açmak iletişim için &#39;Başlat Ölçülmesine&#39; düğmesine tıklayın. Tarama mesafe onaylamak için &#39;OK&#39; tıklayın. Tarama alanının büyüklüğüne bağlı olarak 8 dakika - tarama işlemi başlayacak ve 4 aday gözlemleyin. </li><li> Tarama işlemi tamamlandıktan sonra, &#39;Farklı Kaydet&#39; penceresini gözlemleyin. Dosyayı adlandırın ve kaydedin. </li><li> izofluran kapatın ve boş bir kurtarma kafesine fareyi ve hayvan sternum yatma koruyabilmiştir kadar izler. diğer farelerin bir kafesin içine anestezi kurtarma fare koymayın. </li><li> Görüntü analiz yazılımı açın. &#39;Aç&#39; simgesine tıklayın ve gidin ve analiz için görüntü dosyasını açın. Dosya penceresinde, akı gözlemlemek,fare fotoğraf ve renkli görüntüler. </li><li> akı resmin üzerine ilgi alanları (ROI) bölgesini işaretlemek için, &#39;Show ROI&#39; simgesini tıklayın. Sonraki &#39;Ekle Poligon&#39; düğmesini tıklayın ve ROI çizmek için cerrahi olmayan uzuv imleci sürükleyin. şekli kapatmak için sağ tıklatın. Seç tekrar &#39;Poligon Ekle&#39; ve cerrahi uzuv etrafında eşleşen ROI çizin. </li><li> &#39;Görüntü ROI İstatistik Sonuçları (PU)&#39; penceresi açmak için &#39;İstatistikler&#39; simgesini tıklayın. &#39;Akı%&#39; sütununda akı yüzde farkını dikkate alınmalıdır. NOT: referans olarak görev yapacak çekilen ilk ROI. NOT: Her bir sonraki perfüzyon sintigrafisi öncesinde fare uyutmak için Bölüm 1&#39;de özetlenen adımları izleyin ve adım görüntüye 4.11 4.1 hayvan olarak. </li></ol>

<ol><li>Criqui, M. H., Aboyans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).</li>
<li>Thukkani, A. K., Kinlay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+intervention+for+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Endovascular intervention for peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).</li>
<li>Vartanian, S. M., Conte, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+intervention+for+peripheral+arterial+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Surgical intervention for peripheral arterial disease.</a> Circ. Res. 116, 1614-1628 (2015).</li>
<li>Bonaca, M. P., Creager, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+treatment+and+current+management+of+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Pharmacological treatment and current management of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1579-1598 (2015).</li>
<li>Conte, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+rationale+of+the+PREVENT+III+clinical+trial%3A+edifoligide+for+the+prevention+of+infrainguinal+vein+graft+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Vasc+Endovascular+Surg%22%5BJournal%5D)">Design and rationale of the PREVENT III clinical trial: edifoligide for the prevention of infrainguinal vein graft failure.</a> Vasc Endovascular Surg. 39, 15-23 (2005).</li>
<li>Pomposelli, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decade+of+experience+with+dorsalis+pedis+artery+bypass%3A+analysis+of+outcome+in+more+than+1000+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">A decade of experience with dorsalis pedis artery bypass: analysis of outcome in more than 1000 cases.</a> J. Vasc. Surg. 37, 307-315 (2003).</li>
<li>Willigendael, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smoking+and+the+patency+of+lower+extremity+bypass+grafts%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Smoking and the patency of lower extremity bypass grafts: a meta-analysis.</a> J. Vasc. Surg. 42, 67-74 (2005).</li>
<li>Schillinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balloon+angioplasty+versus+implantation+of+nitinol+stents+in+the+superficial+femoral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Balloon angioplasty versus implantation of nitinol stents in the superficial femoral artery.</a> N. Engl. J. Med. 354, 1879-1888 (2006).</li>
<li>Marmagkiolis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((12-month+primary+patency+rates+of+contemporary+endovascular+device+therapy+for+femoro-popliteal+occlusive+disease+in+6%2C024+patients%3A+beyond+balloon+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Catheter.+Cardiovasc.+Interv%22%5BJournal%5D)">12-month primary patency rates of contemporary endovascular device therapy for femoro-popliteal occlusive disease in 6,024 patients: beyond balloon angioplasty.</a> Catheter. Cardiovasc. Interv. 84, 555-564 (2014).</li>
<li>Rosenfield, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trial+of+a+Paclitaxel-Coated+Balloon+for+Femoropopliteal+Artery+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Trial of a Paclitaxel-Coated Balloon for Femoropopliteal Artery Disease.</a> N. Engl. J. Med. 373, 145-153 (2015).</li>
<li>Tepe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-coated+balloon+versus+standard+percutaneous+transluminal+angioplasty+for+the+treatment+of+superficial+femoral+and+popliteal+peripheral+artery+disease%3A+12-month+results+from+the+IN.PACT+SFA+randomized+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Drug-coated balloon versus standard percutaneous transluminal angioplasty for the treatment of superficial femoral and popliteal peripheral artery disease: 12-month results from the IN.PACT SFA randomized trial.</a> Circulation. 131, 495-502 (2015).</li>
<li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of angiogenesis.</a> Am. J. Pathol. 152, 1667-1679 (1998).</li>
<li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine model of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li>
<li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
<li>Rivard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+impairment+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Age-dependent impairment of angiogenesis.</a> Circulation. 99, 111-120 (1999).</li>
<li>Hazarika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+angiogenesis+after+hindlimb+ischemia+in+type+2+diabetes+mellitus%3A+differential+regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1+and+soluble+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Impaired angiogenesis after hindlimb ischemia in type 2 diabetes mellitus: differential regulation of vascular endothelial growth factor receptor 1 and soluble vascular endothelial growth factor receptor 1.</a> Circ. Res. 101, 948-956 (2007).</li>
<li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+collateral+vessel+development+associated+with+reduced+expression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+ApoE-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Impaired collateral vessel development associated with reduced expression of vascular endothelial growth factor in ApoE-/- mice.</a> Circulation. 99, 3188-3198 (1999).</li>
<li>Tang, G. L., Chang, D. S., Sarkar, R., Wang, R., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+gradual+or+acute+arterial+occlusion+on+skeletal+muscle+blood+flow%2C+arteriogenesis%2C+and+inflammation+in+rat+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">The effect of gradual or acute arterial occlusion on skeletal muscle blood flow, arteriogenesis, and inflammation in rat hindlimb ischemia.</a> J. Vasc. Surg. 41, 312-320 (2005).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+mechanism+regulating+blood+flow+recovery+in+acute+versus+gradual+femoral+artery+occlusion+are+distinct+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular mechanism regulating blood flow recovery in acute versus gradual femoral artery occlusion are distinct in the mouse.</a> J. Vasc. Surg. 48, 1546-1558 (2008).</li>
<li>Litvak, J., Siderides, L. E., Vineberg, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+experimental+production+of+coronary+artery+insufficiency+and+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">The experimental production of coronary artery insufficiency and occlusion.</a> Am. Heart J. 53, 505-518 (1957).</li>
<li>Bredee, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+ameroid+constrictor.+Preliminary+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">An improved ameroid constrictor. Preliminary communication.</a> J. Surg. Res. 9, 107-112 (1969).</li>
<li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subacute+limb+ischemia+induces+skeletal+muscle+injury+in+genetically+susceptible+mice+independent+of+vascular+density%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Subacute limb ischemia induces skeletal muscle injury in genetically susceptible mice independent of vascular density.</a> J. Vasc. Surg. , (2015).</li>
<li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Vasc.+Endovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 40, 796-803 (2010).</li>
<li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+arterial+anatomy+of+the+murine+hindlimb%3A+functional+role+in+the+design+and+understanding+of+ischemia+models%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models.</a> PloS one. 8, e84047(2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Belki de bu prosedürde en zorlu aşama femoral venden femoral arter ayrılmasıdır. büyük çaplı ve arterin kıyasla femoral ven daha ince duvarları delmek karşı duyarlılığının artırılması ve cerrahi manipülasyon sırasında yırtılma. ven kesintiye olasılığı PBS ile nemlendirilmiş steril bez kullanarak nemli yara tutarak azaltılabilir. Tüm forseps, keskinleştirilmiş hizalanır ve damar ve çevre dokular hassas işleme izin vermek için aralarında serbest olmasını sağlamak için de önemlidir. Kanama durana kadar meydana kanama durum...

Periferik arter hastalığı (PAH), gelişmiş ülkelerde 1 kardiyovasküler morbidite ve mortalitenin önde gelen nedenidir. Elde edilen egzersiz veya dinlenme ağrısı ve bazen bacak amputasyon gerektiren ülser ve kangren iyileşmeyen ile ekstremite iskemi neden periferik arterlerin aterosklerotik tıkanması PAD sonuçları. Esasen etkili medikal tedaviler 4 mevcut olarak PAD hedefleyen terapiler, öncelikle endovasküler 2 veya cerrahi revaskülarizasyon 3 yöneliktir. Baypas greft bazı toplumlarda (örneğin, sigara içen kadınlar, sigara safen ven greft) 6,7 kötüdür 5 (5 yıl içinde% 50 kadar) yüksek başarısızlık fiyat bilgisi Ne yazık ki, revaskülarizasyon, genellikle sınırlı fayda sağlar. Böyle anjiyoplasti ve stent olarak Endovasküler yaklaşımlar, aynı zamanda (1 yıl içinde% 50 fazla) yüksek restenoz oranları tehlikeye edilir, i özellikleilaç salınımlı balonlar ve stentler kullanımı biraz 9-11 sonuçlar alınmasını sağlamıştır rağmen n, hastalık 8 Femoropopliteal. PAD için yeni tedaviler geliştirmek için güvenilir insan hastalığı yeniden hayvan modelleri geliştirmek için gereklidir. Bugüne kadar, PAD en yaygın model en çok farelerde 12,13 gerçekleştirilir arka bacak iskemisi modeli (HLI) &#39;dir. en yaygın belirtisi, model proksimal ve distal femoral arter cerrahi ligasyonu gerektirir ve müdahil yan dalları kan akımı ve akut ekstremite iskemi indüksiyon tıkanması ile sonuçlanan geminin eksizyonu ile izledi. HLI periferik ekstremite kas dokusunda anjiyojenik ve arteriyojenik tepkiler ve bu tepkilerin çeşitli terapiler (örneğin, ilaçlar, gen aktarım, kök hücreler) etkilerini incelemek amacıyla öncelikle kullanılır olmuştur. Daha yakın zamanlarda, bizim grup iskelet kas hücrelerinin rolünü incelemek için bu modeli kullandı in tepki iskemi ve sonuçları 14 genetik farkların etkilerini ekstremite için. HLI modeli mevcut iskemi damar ve kas yanıtları genetik (yani, doğal suş) 15 bağlıdır anlayış, yaş 16 ve diyabet 17 de dahil olmak üzere, diğer hastalıklar veya ateroskleroz ile ilgili koşullar, varlığını veya yokluğunu kolaylaştırmıştır hiperkolesterolemi 18. Ancak, geleneksel HLI modelinin önemli bir zayıflık insan PAD periferal arterlerde tıkayıcı aterosklerotik lezyonların kademeli gelişmenin bir sonucu olarak kronik iskemi neden halbuki, akut ekstremite iskemisi 12,13 modeli olmasıdır. Bu zayıflığı aşmak için bir girişim, Tang ve arkadaşları başlangıçta AMEROID konstriktör- 19 kullanılarak kademeli femoral arter tıkanıklığı bir fare modeli, ve daha sonra d aynı grup geliştirdiBenzer bir fare modeli 20 eveloped. AMEROID konstriktör- kronik miyokardiyal iskemi 21,22 bir köpek modelinde 1950&#39;lerde ilk açıklanmıştır. Bu cihazlar, genellikle kazein, higroskopik bir malzemeden bir iç tabaka saran bir dış metal manşon, ve bir arter etrafına yerleştirilen zaman çevre dokulardan nemi emer onlar yavaş yavaş damar tıkanıklığı neden olur. Modelin bunların modifikasyonda, Yang ve ark., Proksimal ve cerrahi ligasyon sitelerinin benzer yerlerde distal femoral arter hem konstriktör- yerleştirilir ve geleneksel modelde olduğu gibi, femoral arter yan dalları bağlanmıştır. Ameliyat sonrası 5 hafta ve daha az kas nekrozu 20 - Akut HLI karşılaştırıldığında, AMEROID konstriktör kaynaklı iskeminin enflamatuar ve kesilme baskısı bağımlı gen alt ekspresyonu, düşük kan akışı geri 4 sonuçlandı. Bu gözlemlere dayanarak, bu kademeli arter tıkanıklığı P bir model olabilir hissedildiinsan hastalığı için daha uygun AD. Özellikle, ilk çalışmada, AMEROID konstriktör kaynaklı iskeminin etkileri yalnızca işemi kaynaklı kas nekroz 15 göreceli olarak dirençli olan, C57BL / 6 fareleri 19 incelendi. Son zamanlarda daha yavaş iskemi modelinde değişik ve daha iskemi, hassas BALB / C fare türünde 23 etkilerini inceledi. Modelin ilk tezahürü olarak, proksimal ve distal femoral arter hem konstriktör- yerleştirilen ancak bozulmamış tüm yan dalları bıraktı. İkinci, daha hafif değişiklik, biz sadece proksimal femoral arter tek bir yılanı yerleştirilir ve yine bozulmamış arterin tüm yan braches bıraktı. Bu modele göre, her iki modifikasyon, biz, bu BALB / c fareleri, ancak C57BL / 6 fareleri bulunan benzer kan akışını ve vasküler yoğunluğa sahip olmasına rağmen önemli bir kas nekrozunu gösterilir. Önceki çalışmamızda 14 benzer şekilde, bu bulgular o bacak kası gösterdiYaralanma sadece kan akımı etkisinde, ancak kısmen genetik yapılarına bağlı olduğu değildir. Ayrıca, biz ekstremite kan akımı böylece modeli birden fazla &#39;subakut&#39; yerine kademeli ekstremite iskemi gibi görünüyor, 3 gün içinde nadir düştü bulundu. Bu önceki çalışmalara göre, arka bacak iskemisi uyarılması için tek bir yöntem, her durumda uygun olmayabilir açıkça görülmektedir. Koşullarında (örneğin, genetik farklılıkları ve varlığı ya da ko-morbid koşullar yokluğunda) etkisi damar ve iskelet kas özel cevapları, çeşitli araştırmacılar bulabilir için gerekli kronik olup ve / veya en iyi şekilde arka bacak iskemisi şiddetini değiştirmek için kendi amaçlarına uygun. Ayrıca, model önceki tariflerde tipik haliyle tekniğin güvenilir arası Araştırmacı tekrarlanabilirliği kolaylaştırmak için uygun bir anatomik yerler yoktu. Bu yazıda, fare akut veya subakut ya hindlimb iskemi uyarılması için yöntemleraçıklanmaktadır ve hassas anatomik oluşumlar bulunur.

<table><tbody><tr><td>Dumont #5/45 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-35</td><td>Dumoxel</td></tr><tr><td>Dumont Stil 5 Mini Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11200-14</td><td>Inox</td></tr><tr><td>Ekstra İnce Bonn Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>7 - 0 İpek Sütür</td><td>Sharpoint</td><td>DA-2527N</td><td></td></tr><tr><td>5 - 0 Kaplamalı Vicryl</td><td>Sütür Ethicon</td><td>J463G</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11053-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Yaylı</td><td>Makas Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Yapay Gözyaşı</td><td>Merhem Rugby Laboratuvarları</td><td>0536-6550-91</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Bant</td><td>3M</td><td>1530-0</td><td></td></tr><tr><td>İnce Pamuklu Çubuklar</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>Physitemp</td><td>TCAT-2DF</td><td></td></tr><tr><td>Ameroid</td><td>Araştırma Cihazları SW</td><td>MMC-0.25 x 1.00-SS</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak Boncuk Sterilizatörü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Deltafaz İzotermal Ped</td><td>Braintree Scientific</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>İğne Sürücüsü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Moor LDPI</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDI2</td><td></td></tr><tr><td>moorLDI Ölçüm yazılımı</td><td>Moor Instruments</td><td>v. 6.0</td><td></td></tr><tr><td>Tüy Dökücü Krem</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

akut ve subakut fare arka ayağın İskemi yöntemleri

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Periferik arter hastalığı (PAH) güvenilir bu hastalık için yeni tedavilerin geliştirilmesi için gerekli olan insan hastalığı yeniden kardiyovasküler morbidite ve gelişmiş ülkelerde ölüm ve hayvan modellerinde önde gelen nedenidir. Fare hindlimb iskemi modeli yaygın olarak bu amaçla kullanılmaktadır, ancak femoral arter ligasyonu ile akut ekstremite iskemisi uyaran standart bir uygulama iskemi vasküler ve iskelet kas dokusu yanıtları incelemek için araştırmacıların yeteneğini tehlikeye, önemli doku nekrozuna neden olabilir . Femoral arter ligasyonu için alternatif bir yaklaşım AMEROID konstriktör- kullanımı yoluyla yavaş yavaş femoral arter oklüzyonu meydana gelmesidir. daha yavaş, sub-akut iskemi ile sonuçlanır - 3 gün, femoral arter ligasyonu siteleri ile aynı ya da farklı yerlerde femoral arter etrafına yerleştirildiğinde, bu cihazlar üzerinde 1 arter tıkanması. Bu w, daha az önemli iskelet kası doku nekrozuna nedenhich daha yakından insan PAD görülen yanıtları taklit edebilir. genetik altyapı etkiler hem akut ve subakut iskemi modellerinde çıktıları, çünkü fare suşu dikkate en iyi modeli seçiminde önemlidir çalışılmaktadır. Bu yazıda fare subakut veya akut hindlimb iskemi ikna etmek için uygun prosedür ve fare femoral arter üzerinde bitişik harfler veya AMEROID konstriktör- anatomik yerleşimi anlatılır.

Fare arka bacak damar sistemini uygun şekilde tanımlanması, burada açıklandığı gibi, subakut ve akut arka bacak iskemisi uyarılması için teknikler tekrarlanabilirliği sağlamak için çok önemlidir. Hayvan çalışmalarında kalıcı sapması, ilave olarak, diğer faktörler anestezi Çeşidi, hayvan pozisyonu (sırtüstü vs eğilimli) ve vücut sıcaklığına (bakınız Şekil 3) de dahil olmak üzere, lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI) değişkenliği neden olabilir. Buna ek olar...

Farede arka bacak iskemisinin cerrahi indüksiyonu, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, ancak bu, belirgin iskemiye bağlı doku nekrozu gösteren bazı akraba fare suşlarında tehlikeye girer. Kademeli arteriyel oklüzyonun indüksiyonu yoluyla bu sorunu aşmak için ameroid büzücüler kullanarak subakut ekstremite iskemisini indüklemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

Bu protokolün genel amacı, sırasıyla akut veya subakut arka bacak iskemisini indüklemek için fare femoral arterine sütürlerin veya ameroid konstriktörlerin yerleştirilmesiyle insan periferik arter hastalığını modellemektir. Periferik arter hastalığı önemli bir klinik problemdir ve hayvan modellerini kullanan bu teknikler, insan hastalığını daha iyi temsil etmek için geliştirilmiştir. Bu tekniklerin temel avantajı, ekstremite iskemisinin şiddetinin ve başlangıç zamanının araştırmacı tarafından kontrol edilebilmesidir.Prosedürü, laboratuvarımdan bir teknisyen olan Mike Padgett uygulamalı olarak gösterecek. Prosedürden bir ila iki gün önce, ayak parmağı sıkıştırmasına tepki vermediğinden emin olarak farenin tamamen sedatize olduğunu doğrulayın ve göz merhemi uygulayın. Ardından, her iki arka ekstremitedeki tüyleri tıraş etmek için küçük bir elektrikli düzeltici kullanın.Tüm tüyler kısaltıldıktan sonra, önceden ısıtılmış tüy dökücü krem uygulayın. Bir dakika sonra, kremi nemlendirilmiş bir gazlı bezle nazikçe silerek temizleyin. Ardından fareyi, sternal rekumbensi koruyabilecek duruma gelene kadar kağıt havluyla döşenmiş boş bir iyileşme kafesine yerleştirin.Ameliyat günü, tamamen seda

methods-for-acute-and-subacute-murine-hindlimb-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için Microfil ile İskemik arka ayaklarında ve damarları bir Perfüzyon için osmotik İlaç Taşıyıcı

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Burada tarlada bu tekniğin standardizasyonu teşvik etmek mortalite olmadan tekrarlanabilir yaralanma ile sonuçlanan farelerde bağırsak iskemi-reperfüzyon ayrıntılı prosedürü açıklar. Bağırsak iskemi-reperfüzyon hasarının Bu model yaralanma ve yenilenme hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Burada, anjiogenik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için fonksiyonel, histolojik ve moleküler testlerin bir pil tarafından izlenen kritik bir hindekstremite iskemi deneysel modeli sunulmuştur.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Burada, fare arkalığındaki kan akışını ölçmek için Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme tekniğini ve gerekli kontrolleri gösteren bir protokol sunuyoruz.

Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

Bu protokol, FVB farelerde arka bacak kangrenini indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz, klinik olarak ilgili bir periferik arter hastalığı modelini tanımlamaktadır. İntrakardiyak DiI perfüzyonu daha sonra ayak yastığı vaskülatürünün yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu görüntülenmesi için kullanılır.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Keşfedin farelerde akut ve subakut arka ayak iskemi yöntemlerini, ameroid konstriktörler kullanarak kontrollü arteriyel oklüzyon sağlayan bu protokol ile. Damar biyolojisi ve anjiyogenez araştırmaları için güvenilir bir hayvan modeli sunar.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Daha fazla video keşfet