Fibula Sinir Yaralanması Yöntem: Güvenilir Testi tanımak ve Test O Tamir Nöromüsküler Junctions Faktörleri

Bu periferik sinir yaralanması yönteminin genel amacı, farelerde rejenere nöromüsküler kavşakları güvenilir bir şekilde incelemektir. Bu yöntem, rejenere nöromüsküler kavşaklarla ilişkili moleküler, hücresel ve fonksiyonel değişiklikleri tanımlamamıza yardımcı olacaktır. Bu prosedürün temel avantajı, nöromüsküler kavşak rejenerasyon hızının, büyük ölçüde miyojenik değişikliklerin yokluğunda deney grupları arasında güvenilir bir şekilde karşılaştırılabilmesidir.

Prosedürü göstermek, laboratuvarımda bir tıp öğrencisi olan William Dalkin olacak. Prosedüre başlamadan önce, cerrahi bölgeyi, tahtayı ve aletleri temizlemek için %80 etanol kullanın, ardından Povidon-iyot ile dezenfeksiyon yapın. Ardından, fareyi cerrahi tahtanın üzerine yerleştirin ve ayak parmağınızın sıkışmasına yanıt verilmediğini onaylayın.

Kısıtlamalar içindeki uzuvları, hedef arka bacak anatomik olarak doğal bir pozisyonda olacak şekilde hizalayın ve diz eklemleri iç veya dış rotasyon olmadan hafifçe uzatılmış hale getirin. Daha sonra, hayvanı cerrahi bir mikroskop altına aktarın ve kemikli diz eklemi ve tibialis anterior ile gastroknemius kasları arasındaki çıkıntı objektiften görünene kadar tahtayı ayarlayın. Bir neşter ve forseps kullanarak, ortak fibula sinirinin altta yatan seyrine dik olarak, deriden yaklaşık üç santimetrelik bir kesi yapın.

Biceps femoris ve vastus lateralis kaslarını açığa çıkaran yüzeysel fasya boyunca insizyona devam edin, ardından kasları ayırmak için bağlantı yapan derin fasya boyunca bir ila iki santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra, ortak fibular siniri ortaya çıkarmak için pazı femoris kasını kaudal olarak geri çekmek için mekanik ekartörler kullanın. Gastroknemius kasının lateral başının tendonu ile kesişimi bulunana kadar siniri proksimal olarak izleyin.

Ardından, uçları gastroknemius tendonunun yan sınırına paralel olarak hizalayan siniri kavramak için ince bir forseps kullanın ve ortak fibula sinirini ezmek için beş saniye boyunca sabit, konsantre bir basınç uygulayın. Forsepsleri elyafa dik tutarak, forsepsin ucunun hemen arkasındaki alanla dokuyu kavrayın ve tendonun sınırı boyunca sinirin temiz, doğrusal bir şekilde ezilmesi için sıkı ama hafif bir baskı uygulayın. Dokunun tamamen ezildiğini doğrulamak için siniri cerrahi mikroskop aracılığıyla görsel olarak inceleyin.

Sinir, yaralanma bölgesinde yarı saydam görünecektir. Periferik aksonlarda floresan proteinleri eksprese eden fareler kullanılırsa, floresan yaralanma bölgesinden kaybolacaktır. Sinir yeterince hasar görmüşse, ekartörleri çıkarın ve kasları anatomik pozisyonlarında yeniden hizalayın.

Ardından, kesi bölgesini bir ila üç basit kesintili dikişle kapatmak için 6-0 ipek dikişler kullanın ve fareyi tamamen iyileşene kadar izlemeli temiz bir kafeste bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Sinirin ince bir forseps kullanılarak beş saniye boyunca sıkıştırılması, YFP'nin yaralanma bölgesinden kaybolmasına neden olur. Epinöryum bitişik kalır ve aksonların orijinal hedeflerine kesin olarak yenilenmesi için bir kanal görevi görür.

70 günlük dişi farelerde, sinir hasarı, ezilmeden dört gün sonra nöronal soma distalindeki tüm aksonal segmentlerin dejenerasyonuna neden olmak için yeterlidir. Ezilmeden yedi gün sonra, sinir uçları boşalan post-sinaptik bölgeleri aktif olarak yeniden işgal ediyor. 12. günde, sinir uçları pre-sinaptik bölgelere farklılaşmaya devam eder ve nöromüsküler kavşaklar tamamen yeniden inerve olur.

Aynı süre boyunca denerve edilen fareler arasında çok az değişkenlik vardır, bu da fibula sinir ezilmesinin aynı yaş ve cinsiyetteki hayvanlar arasındaki kasların yeniden inhalasyonunu karşılaştırmak için bir test olarak kullanılabileceğini göstermektedir. Beklendiği gibi, kas liflerini yeniden inertledikleri için alfa motor aksonlarında bir dizi değişiklik meydana gelir. Aksonal büyüme konileri, post-sinaptik bölgelerle temas ettikçe genişler ve dallanır, post-sinapsın belirli bölgeleri üzerinde büyür ve aksonal uçların post-sinaptik bölgelerle neredeyse tamamen yan yana gelmesiyle sonuçlanır.

Kantitatif PCR ile gösterildiği gibi, nöromüsküler bileşke ile ilişkili genler denervasyonu takiben artar ve nöromüsküler kavşaklar yeniden ininerve edildikçe azalır. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 15 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, zaman ayırmayı, tüm yapıları görselleştirmeyi ve tam bir ezilme elde edilip edilmediğini iki kez kontrol etmeyi unutmamak önemlidir.

Bu prosedürü takiben, hangi genlerin yukarı veya aşağı regüle edildiğine dair ek soruları yanıtlamak için QPCR gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir. Geliştirildikten sonra bu teknik, nörobiyoloji alanındaki araştırmacıların farelerde sinaptik rejenerasyonları keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, farelerde nöromüsküler kavşak reinervasyon oranlarını incelemek için fibular sinir ezilmesinin nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.