Name: Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-17T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 27 s
Description: Keşfedin dimetilnitrosamin ile sıçanlarda karaciğer fibrozisi modeli oluşturma yöntemini. Bu model, anti-fibrotik ajanların etkinliğini değerlendirmek ve karaciğer hastalığı mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, Singapur Eğitim Bakanlığı'nın MOE2010-IF-1-025 numaralı hibe desteğini kabul etmektedir.

Tüm hayvan deneyleri Uygulamalı Bilimler Yüksekokulu, Temasek Polytechnic hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından onaylandı. DMN 1. Hazırlık <ol><li> Pipet 200 DMN&#39;nin ul (1 ug / ml stok çözelti) ve enjeksiyon için 10 mg / ml DMN çözelti hazırlamak için PBS 19.8 ml ekleyin. Not: DMN kanserojen. Hayvan enjeksiyonları DMN hazırlamak ve gerçekleştirmek için bir davlumbaz kullanın. </li></ol> DMN 2. intraperitoneal enjeksiyon <ol><li> 200 g - 150 ortalama ağırlığı erkek sıçan kullanın. Deneyin başlamasından önce 7 gün - 4 sıçan alıştırıldı. </li><li> 12 saat ışık ve 12 saat karanlık çevrimi ile 22 ± 1 ° C, oda sıcaklığında fareleri koruyun. Sıçan yemi ve su ad libitum sağlamak. </li><li> günlük yiyecek ve su alımı ölçün. vücut ağırlığı haftalık ölçün. </li><li> 10 mg / kg vücut ağırlığı dozunda bağlı olarak, her bir sıçan için DMN miktarını hesaplayın. 25 gauge iğne t 1 ml şırınga kullanıno şırıngaya DMN solüsyonu hesaplanan hacmi çizin. </li><li> Periton içine enjekte 21 sıçan kısıtlamaktadır. </li><li> Sıçan düzgün ölçülü beraber, karın sağ alt kadranda içine iğne tanıtmak karın boşluğunda iğnenin doğru yerleştirilmesi için kontrol edin ve yavaş yavaş DMN çözüm enjekte etmek (hiçbir şey aspire edilmelidir) şırınga pistonu geri çekin. </li><li> DMN dozu edildiğinde, yavaş yavaş iğneyi çek ve kesici kutusu içine atın. </li><li> 4 hafta boyunca haftada 3 gün üst üste DMN intraperitoneal gerçekleştirin. Her gün aynı anda enjeksiyon yönetmek. enjeksiyon haftanın başlangıcında vücut ağırlığına göre dozaj yeniden hesaplar. </li><li> Biyokimyasal parametreleri ölçmek için kuyruk ven haftalık kan toplayın: alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) 22. </li><li> ticari bir Vet kullanarak Tedbir serum ALT ve ASTDeney Kimya Analiz. </li></ol> 3. Brüt Sınav ve Karaciğer Hasat <ol><li> 100 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda pentobarbital intraperitonal enjeksiyonu ile sıçanlarda öldürülür. kalp atışı eksikliği denetleyerek ölümü sağlayın. </li><li> Otopsisi için hazırlayın ve karın yukarı bakacak şekilde sırt yatma diseksiyon karta Parkinson ve ark., 23 yerleştirin ölü fareler tarafından tarif edildiği gibi hayvan durumunu değerlendirmek. </li><li> Dezenfekte ve% 70 etanol ile cildi nemlendirmek. </li><li> makas kullanarak, cilde çene anüs ventrum tam uzunlukta insizyon ve cildi yansıtmaktadır. makasla, karın iç organ maruz, kılıç şeklinde kıkırdak anüs karın duvarı insizyon. </li><li> Herhangi bir anormallik olup olmadığını kontrol etmek yerinde karın organları inceleyin. herhangi bir renk, boyut değişiklikleri, organların yerini ve periton boşluğu içinde sıvı varlığını unutmayın. Muayene etmekorganların tutarlılığı ve herhangi bir koku varlığı not edin. </li><li> makas ve forseps kullanarak, kendi bağ ve ekleri tüm karaciğer Free teşrih. <ol><li> o diyaframa bağlı olduğu hilusunda başlayın ve tüm ekleri karaciğer lobları serbest çalışmak. Dikkatle tüm bağ ve kan damarlarını kesti. </li></ol></li><li> petri üzerine karaciğer aktarın ve karaciğer tartın. </li><li> 5 mm karaciğer lobları kalın kesitler - Bir neşter kullanılarak, 2 kesti. Tutarlılık için, hep aynı karaciğer lobunda numune alır. Tespiti için sağ yan lob kalınlığında bir kama% 10 tamponlu formalin içine lobe.Immediately yer kenarından 24 yaklaşık 1 cm yaklaşık 5 mm çapında al. formalin hacmine doku 01:10 ya da daha fazla olduğundan emin olun. </li><li> diğer çalışmalar için gerekirse hasat ve hemen bu noktada karaciğer lobu (sıvı azot kullanılarak) bölümlerini dondurma. tutarlılık için aynı karaciğer lob (3.8), numune gelince. </li></ol><ol><li> 24 saat en az% 10 tamponlu formalin karaciğer örnekleri saptamak. </li><li> Tespit edildikten sonra, karaciğer Döşeme kasetler içine yerleştirin ve otomatik doku işlemci sepet içine yerleştirin. </li><li> % 10 tamponlu formalin içeren ilk istasyonu kasetleri ile sepet yerleştirin. Emin olun kasetler tamamen su altında. döngüsü başlar dek en fazla 12 saat boyunca bu odada kalabilir. </li><li> (% 50,% 70,% 90,% 100 (2 istasyon), iksilen (2 istasyon) ve sıvı parafin konsantrasyonlarda etanol: aşağıdaki çözümleri içeren istasyonlardan ile 1 saat için her kasetleri döndürmek için doku işlemci program 2 istasyon). </li><li> gömme istasyonunun balmumu banyosu içine karaciğer örnekleri aktarın. gömme makinesi, en az bir saat önce açık olduğundan emin olun. </li><li> Kullanılarak önceden ısıtılmış kıskaçlar (65 ° C), W her kaseti çıkarmakgömme makinesinin sıcak plaka (65 ° C) üzerine balta banyo ve yer. paslanmaz çelik taban kalıbına sıvı parafin yeterli miktarının tevzi yarısı dolu kadar (65 ° C önceden ısıtılmış). kalıbın içine kasetinden karaciğer bölümünü aktarın. numune kesme yüzeyi ile yerleştirilir emin olun kalıbın altındaki düz (mikroskobik incelenmesi gereken). </li><li> , Sıvı parafin ile tamamen kalıp doldurun üst boş kaseti montaj ve en az 30 dakika soğumasını gömme makinenin 4 ° C plaka üzerine kalıp yerleştirin. </li><li> balmumu soğutulur ve katılaşmış olup olmadığını kontrol edin, ve kalıptan parafin blok kaldırın. Blok kolayca dışarı pop ve sopa veya çatlak olmamalıdır. Bu durumda, blok eritmek ve bu adımı tekrarlayın. katılaşır kez parafin blok kesitli olabilir. Bloklar yıllar boyunca oda sıcaklığında saklanabilir. </li><li> balmumu tabakasının kadar 10 mikron kalınlığında mikrotom ve bölüme parafin blok yerleştiringömülü karaciğer dokusu görünür olması için yeterli kaldırılır. </li><li> 5 mikron kalınlığında kesmek için mikrotom ayarı değiştirin. Forseps kullanarak, kenarında tutarak iyi olarak kesilmiş bölümü almak ve dikkatli bir şekilde 40 ° C&#39;lik bir sıcaklıkta su banyosunda bölümü yüzer. </li><li> Yavaşça yüzen bölümünün altında temiz bir cam slayt yerleştirin ve cam slayt yüzeyine kaldırın. gece boyunca 37 ° C&#39;de sıcak bir slayt üzerine slayt yerleştirin. </li></ol> 5. Masson Trikrom Boyası <ol><li> aşağıdaki gibi lekeleri uygulamadan önce, balmumu kaldırmak ve dokuları rehydrate slaytlar tedavi: <ol><li> 5 dakika boyunca ksilen bölümleri daldırın. 2x tekrarlayın. </li><li> 3 dakika boyunca% 100 etanol içinde bölümleri bırakın. 1x tekrarlayın. </li><li> % 90,% 80 ve% 70: 1 dakika etanol, aşağıdaki Çözeltilerin her bölümleri bırakın. </li></ol></li><li> slayt üzerinde herhangi bir mevcut etanol kaldırmak için musluk suyu altında slayt durulayın. </li><li> çekirdeği leke 10 dakika Demir Hematoksilen slaytlar daldırın. </li><li> slayt aşırı leke çıkarmak için su ile slaytlar durulayın. </li><li> sitoplazma leke 2 dakika süreyle Biebrich Scarlet-Asit fuksin slaytlar daldırın. </li><li> Su ile slaytlar durulayın. </li><li> Anilin mavisi alımını teşvik etmek 10 dakika Fosfotungstik / fosfomolibdik asit solüsyonundan slaytlar yerleştirin. Kullanım 2 tur sonra Fosfotungstik / fosfomolibdik asit solüsyonundan değiştirin. </li><li> kolajen elyafları leke, 10 dakika boyunca anilin mavi çözelti slaytlar yerleştirin. </li><li> Su ile aşırı leke durulayın ve farklılaşma slayt rengi daha narin ve şeffaf kılmak için gerçekleşmesine izin 1 dakika süreyle% 1 asetik asit çözeltisi slaytlar yerleştirin. </li><li> Su ile slaytlar durulayın ve doku bölümleri kurutmak geçin. aşağıdaki gibi dehidrasyon adımlar şunlardır: </li><li> Aşağıdaki conce olarak, 10 saniye her zaman için arka arkaya slaytlar daldırınetanol ntrations:% 70,% 80,% 95 ve% 100. </li><li> % 100 etanol içinde 30 sn için slaytlar bırakın. 1x tekrarlayın. </li><li> 5 dakika her kaldırmak için etanol için ksilen 3 istasyonları aracılığıyla slaytlar durulayın. </li><li> Montaj medya (örneğin, DPX mountant) ile numune üzerine bir cam kapak kayma monte edin ve kurumaya bırakın. Not: DPX, çabuk kurur leke korur ve doku bölümü koruyan bir sentetik reçine olduğunu. </li></ol> Karaciğer Masson diken Lekeli Bölümleri 6. Fibrozis Puanlama <ol><li> Bir veteriner patolog var 25 puan fibrozis göre fibrozis şiddetini değerlendirmek. fibrozis puanlama bir kör şekilde bağımsız iki veya üç patolog tarafından yapılırsa Optimum olurdu. Böyle bir senaryoda, puanlama herhangi farklılıkları sıralamak için tartışma ve grup gözden geçirdikten sonra bir final skoru elde edin. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Gol </td><td> Açıklama </td></tr><tr><td> 0 </td><td> hiçbir fibrozis </td></tr><tr><td> 1 </td><td> ile veya kısa fibröz septa olmadan bazı portal alanlarda fibröz genişleme, </td></tr><tr><td> 2 </td><td> ile veya kısa fibröz septa olmaksızın en portal alanlarda fibröz genişleme, </td></tr><tr><td> 3 </td><td> En portal alanlarda fibröz genişleme, portal arada portal (PP) köprüleme </td></tr><tr><td> 4 </td><td> merkezi (PC işaretli köprüleme ((PP Portala portal) yanı sıra portal portal alanlarda fibröz genişleme) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Ara sıra nodüller (tamamlanmamış siroz) ile (PP ve / veya PC) köprü İşaretli </td></tr><tr><td> 6 </td><td> Siroz, olası veya kesin </td></tr></tbody></table> Tablo 1: Fibrozis Masson diken Lekeli Karaciğer Bölümler 25 Okuma için kullanılır Skoru.

<ol><li>Magee, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxic+liver+injury%3B+the+metabolism+of+dimethylnitrosamine%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Toxic liver injury; the metabolism of dimethylnitrosamine.</a> Biochem J. 64 (4), 676-682 (1956).</li>
<li>Pritchard, D. J., Butler, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis-the+mechanism+of+cell+death+in+dimethylnitrosamine-induced+hepatotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis-the mechanism of cell death in dimethylnitrosamine-induced hepatotoxicity.</a> J Pathol. 158 (3), 253-260 (1989).</li>
<li>Madden, J. W., Gertman, P. M., Peacock, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dimethylnitrosamine-induced+hepatic+cirrhosis%3A+a+new+canine+model+of+an+ancient+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Dimethylnitrosamine-induced hepatic cirrhosis: a new canine model of an ancient human disease.</a> Surgery. 68 (1), 260-267 (1970).</li>
<li>Jenkins, S. A., Grandison, A., Baxter, J. N., Day, D. W., Taylor, I., Shields, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dimethylnitrosamine-induced+model+of+cirrhosis+and+portal+hypertension+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">A dimethylnitrosamine-induced model of cirrhosis and portal hypertension in the rat.</a> J Hepatol. 1 (5), 489-499 (1985).</li>
<li>Jézéquel, A. M., Mancini, R., Rinaldesi, M. L., Macarri, G., Venturini, C., Orlandi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+morphological+study+of+the+early+stages+of+hepatic+fibrosis+induced+by+low+doses+of+dimethylnitrosamine+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">A morphological study of the early stages of hepatic fibrosis induced by low doses of dimethylnitrosamine in the rat.</a> J Hepatol. 5 (2), 174-181 (1987).</li>
<li>George, J., Chandrakasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characteristics+of+dimethylnitrosamine+induced+fibrotic+liver+collagen%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%2C+Protein+Struct+Mol+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Molecular characteristics of dimethylnitrosamine induced fibrotic liver collagen.</a> Biochim Biophys Acta, Protein Struct Mol Enzymol. 1292 (2), 215-222 (1996).</li>
<li>Winwood, P. J., Arthur, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cells%3A+their+activation+and+role+in+animal+models+of+liver+injury+and+human+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Kupffer cells: their activation and role in animal models of liver injury and human liver disease.</a> Semin Liver Dis. 13 (1), 50-59 (1993).</li>
<li>Nakamura, T., Sakata, R., Ueno, T., Sata, M., Ueno, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+transforming+growth+factor%CE%B2+prevents+progression+of+liver+fibrosis+and+enhances+hepatocyte+regeneration+in+dimethylnitrosamine-treated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of transforming growth factorβ prevents progression of liver fibrosis and enhances hepatocyte regeneration in dimethylnitrosamine-treated rats.</a> Hepatology. 32 (2), 247-255 (2000).</li>
<li>Shek, F. W., Benyon, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+can+transforming+growth+factor+beta+be+targeted+usefully+to+combat+liver+fibrosis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">How can transforming growth factor beta be targeted usefully to combat liver fibrosis?</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. 16 (2), 123-126 (2004).</li>
<li>Wang, J. H., Shin, J. W., Son, J. Y., Cho, J. H., Son, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifibrotic+effects+of+CGX%2C+a+traditional+herbal+formula%2C+and+its+mechanisms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antifibrotic effects of CGX, a traditional herbal formula, and its mechanisms in rats.</a> J Ethnopharmacol. 127 (2), 534-542 (2010).</li>
<li>Su, L. J., Hsu, S. L., Yang, J. S., Tseng, H. H., Huang, S. F., Huang, C. Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+profiling+of+dimethylnitrosamine-induced+liver+fibrosis%3A+from+pathological+and+biochemical+data+to+microarray+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Expr%22%5BJournal%5D)">Global gene expression profiling of dimethylnitrosamine-induced liver fibrosis: from pathological and biochemical data to microarray analysis.</a> Gene Expr. 13 (2), 107-132 (2006).</li>
<li>Müller, A., Machnik, F., Zimmermann, T., Schubert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioacetamide-induced+cirrhosis-like+liver+lesions+in+rats+usefulness+and+reliability+of+this+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Thioacetamide-induced cirrhosis-like liver lesions in rats usefulness and reliability of this animal model.</a> Exp Pathol. 34 (4), 229-236 (1988).</li>
<li>Martinez-Hernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hepatic+extracellular+matrix.+II.+Electron+immunohistochemical+studies+in+rats+with+CCl4-induced+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">The hepatic extracellular matrix. II. Electron immunohistochemical studies in rats with CCl4-induced cirrhosis.</a> Lab Invest. 53 (2), 
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3894794">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3894794</a> 166-186 (1985).</li>
<li>Pritchard, M. T., Apte, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+to+Study+Liver+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Models to Study Liver Regeneration.</a> Liver Regeneration. , 15-40 (2015).</li>
<li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+bile+duct+obstruction%3A+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li>
<li>Marques, T. G., Chaib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+experimental+models+for+inducing+hepatic+cirrhosis+by+bile+duct+ligation+and+carbon+tetrachloride+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cir+Bras%22%5BJournal%5D)">Review of experimental models for inducing hepatic cirrhosis by bile duct ligation and carbon tetrachloride injection.</a> Acta Cir Bras. 27 (8), 589-594 (2012).</li>
<li>Wasser, S., Tan, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+hepatic+fibrosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Acad+Med+Singapore%22%5BJournal%5D)">Experimental models of hepatic fibrosis in the rat.</a> Ann Acad Med Singapore. 28 (1), 109-111 (1999).</li>
<li>George, J., Chandrakasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+abnormalities+during+the+progression+of+hepatic+fibrosis+induced+by+dimethylnitrosamine%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">Biochemical abnormalities during the progression of hepatic fibrosis induced by dimethylnitrosamine.</a> Clin Biochem. 33 (7), 563-570 (2000).</li>
<li>Shimizu, I., Ma, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Sho-saiko-to%2C+a+Japanese+herbal+medicine%2C+on+hepatic+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Effects of Sho-saiko-to, a Japanese herbal medicine, on hepatic fibrosis in rats.</a> Hepatology. 29 (1), 149-160 (1999).</li>
<li>Wang, Y., Gao, J., Zhang, D., Zhang, J., Ma, J., Jiang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+antifibrotic+effects+of+sorafenib+on+hepatic+stellate+cells+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">New insights into the antifibrotic effects of sorafenib on hepatic stellate cells and liver fibrosis.</a> J Hepatol. 53 (1), 132-144 (2010).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li>
<li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+Blood+from+the+Lateral+Tail+Vein+of+the+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat.</a> J Vis Exp. (99), (2015).</li>
<li>Parkinson, C. M., O'Brien, A., Albers, T. M., Simon, M. A., Clifford, C. B., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+Necropsy+and+Selected+Tissue+and+Sample+Collection+in+Rats+and+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice.</a> J Vis Exp. (54), (2011).</li>
<li>Ruehl-Fehlert, C., Kittel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (2-3), 91-106 (2003).</li>
<li>Ishak, K., Baptista, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+grading+and+staging+of+chronic+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Histological grading and staging of chronic hepatitis.</a> J Hepatol. 22 (6), 696-699 (1995).</li>
<li>Sant'Anna, L. B., Sant'Anna, N., Parolini, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+computer+assisted+image+analysis+for+identifying+and+quantifying+liver+fibrosis+in+a+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comput+Interdiscip+Sci%22%5BJournal%5D)">Application of computer assisted image analysis for identifying and quantifying liver fibrosis in a experimental model.</a> J Comput Interdiscip Sci. 2 (2), 139-148 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Biz karaciğer fibroz bir hayvan modeli yapmak ve karaciğer fibroz şiddetini değerlendirmek için bir yöntem tanımlanmıştır. DMN doğru doz teslim ve haftalık intraperitoneal enjeksiyon programa uymak önemlidir. Deneme ilerledikçe, o fareler tartmak ve DMN enjeksiyonları her hafta başında dozu yeniden hesaplamak için çok önemlidir. DMN toksik ve duman kabinesinde ele alınması gereken unutmayın. Biz de duman kabinede intraperitoneal gerçekleştirin. Tekrarlanan enjeksiyonlar ihtiyacı ile, enjeksiyon doğru kısıtlama ve teknik...

DMN güçlü bir karaciğere özgü bir toksindir. Sıçanların karaciğerlerinde yaralanmasına neden olan metabolizma, doku dağılımı ve yetenek Magee 1 tarafından rapor edildi ve apoptoz ile hepatosit hasarı ve hücre ölümü mekanizması Pritchard ve Butler 2 tarafından tarif edilmiştir. Bu bileşiğin aralıklı idaresi için köpekler ve fareler 3,4 karaciğer fibrozu indüklediği rapor edilmiştir. mekanizmaları ve karaciğer fibroz morfolojik değişiklikler yaygın bu modeli kullanarak incelenmiştir. Sıçan kullanarak erken çalışmalarda, DMN ile 3 haftalık tedavi steatoz 5 olmadan mikronodüler siroz ardından sentrilobuler hemorajik nekroz üretti. Erken fibrozis olduğu gösterilmiştir, oluşan kollajen daha fazla çapraz tip I 6 daha belirgin olmak tip III bağlantılı idi. Diğer nedenler ile ortak olarak, DMN kaynaklı fibrotik değişiklikler Kupffer hücrelerinde bir artış ile ilişkili olduğunu; i ikamet karaciğer makrofajlarn sinüzoidlerinde. Bu hücreler miyofibroblastlar içine morph ve fibrozis 7 birincil sorundur hücre dışı matriks aşırı miktarda üretir. Hücresel sinyal açısından, Nakamura ve ark., TGF-β karaciğer fibrozu 8 ilerlemesinde önemli bir rol oynadığını göstermiştir. Özel olarak, TGF-β sinyalini inhibe etmek için bir tepe bölümü kesik tip II TGF-β reseptörünü sentezleyen bir adenovirüs kullanılan. kontrol grubuna kıyasla bu sıçanlarda karaciğer fibroz olağanüstü DMN tedavisi sırasında durduruldu. Diğer çalışmalar TGF-ß bastırılması karaciğer fibroz gelişimi 9,10 azaltılmasına yol açtığını doğruladı. Model, aynı zamanda anti-fibrotik tedavi 11 ilaç hedefleri olarak kullanılabilecek diğer fibroz belirteçleri ve proteinleri belirlemek için genel bir gen profili çalışmada kullanılmıştır. Diğer kimyasal maddeler arasında tiyoasetamid (TAA) ve C karaciğer fibrozu uyarılması için kullanılanarbon tetraklorür (CCl4). TAA sıçanlarda ve daha sonra fareler 12 birinci kullanıldı. Bu modelin avantajları şunlardır: Kimyasal yönetim kolaylığı suyu, karakteristik mikronodüler siroz ve biyokimyasal değişiklikler ile modelin tekrarlanabilirliği içme. sakıncaları şunlardır: karaciğer fibrozu için 3 aylık uzun süre geliştirmek ve karaciğer fibrozis indüksiyonu için moleküler mekanizmasının anlaşılması eksikliği için. CCl4 gelince, kullanımı aşağıdaki nedenlerle azalmıştır: insan karaciğer hastalığı taklit değil, ozon tabakası üzerinde zararlı etkileri vardır hayvanlara acı ve sıkıntı neden olur, insanlar için çok toksiktir ve kullanımı konusunda ek önlemler gerektirir ve bertaraf 13,14. Karaciğer sirozu için deneysel bir model olarak (cerrahi müdahale ile) Uzun süreli safra kanalı tıkanıklığı ilk Kountouras ve ark., 15 tarafından rapor edilmiştir. Bu yöntem, insan ve hayvanlar için toksik olan. However geliştirilmesi karaciğer fibrozu için gerekli süre arasında değişir. Marques ve arkadaşları. 16 ile 30 raporların bir yorum, karaciğer fibroz geliştirmek için ameliyattan sonra dört hafta yedi gün sürdü bulundu. açıklanan patolojik değişiklikler insan kronik safra fibrozis taklit ve model bu alanda ilgilenen araştırmacılar için daha uygun olacaktır. Özetle, 4 hafta boyunca farede DMN sabit bir doz aralıklı idaresi, insan hastalığı taklit karaciğer fibrozu üretir. Uygulanan farelerde karaciğer hasarı ve parankimal fibrozis 4,17 progresif gelişim gösterirler. Hastalığın ilerlemesi ve şiddeti belirli zaman noktalarında kan örneklerinin veya hayvanların kurban aracılığıyla izlenebilir ve etkisi 18 derece tekrarlanabilir. Böylece modeli genel olarak, karaciğer fibrozu ve siroz mekanizmaları incelemek için ve potansiyel anti-fibrotik maddeler 10,19,20 taranması için kullanılmıştır.

<table><tbody><tr><td>Dimetilnitrozamin</td><td>Wako</td><td>147-03781</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Sinopharm</td><td>kimyasalları F63257009</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Ksilen</td><td>Fisher</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Masson trikom boyaları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anilin Mavi</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td> <td># 42755</td><td></td></tr><tr><td>Asit Fuschin Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>RT42685</td><td></td></tr><tr><td>Kızıl Kırmızı</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td> <td># 26905</td><td></td></tr><tr><td>Fosfotungstik Asit Hidrat</td><td>ALFA AESAR</td><td>ALFA40116.4</td><td></td></tr><tr><td>Fosfomolibdik Asit</td><td>Hidrat Sigma SG</td><td>221856-25G</td><td></td></tr><tr><td>Weigert Demir Hematoksilyn</td><td>Merck</td><td>1.15973.0002</td><td></td></tr><tr><td>DPX Montaj Ortamı</td><td>Merck</td><td>HX066873</td><td></td></tr><tr><td>Doku işlemcisi</td><td>Leica</td><td>Leica TP 1020</td><td></td></tr><tr><td>Gömme makinesi</td><td>Sakura</td><td>&nbsp; Sakura Doku Tek TEC5 Gömme Sistemi</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Leica</td><td>Leica RM 2235</td><td></td></tr><tr><td>Veteriner Test Analizörü</td><td>Idexx</td><td>Vet Test 8008</td><td></td></tr></tbody></table>

rat dimethylnitrosamine başlatılan karaciğer fibrozis modeli

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Dört eski bir hafta altı, erkek Wistar sıçanlar karaciğer fibrozis hayvan modelleri üretmek için kullanıldı. işlem, haftada üç gün boyunca intraperitonal olarak verilen 10 mg / kg dimethylnitrosamine (DMN) verilmesinden sonra dört hafta gerektirir. DMN bilinen hepatoxin ve kanserojen olduğu gibi intraperitonal enjeksiyon davlumbaz yapıldı. modeli birçok avantajı vardır. İlk olarak, karaciğer değişiklikleri ardışık olarak veya ilgi konusu özel aşamalarında incelenebilir. İkinci olarak, karaciğer hastalığı aşaması serum alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) enzim ölçümü ile takip edilebilir. Üçüncü olarak, farklı aşamalarda karaciğer hasarının şiddeti Masson diken lekeli karaciğer dokularının histolojik inceleme ardından belirlenen zaman noktalarında hayvanların kurban tarafından teyit edilebilir. DMN dört haftalık dozajlama sonrasında tipik fibroz skoru 5 Ishak ölçekte 6 etmektir. Model sürekli olarak yeniden olabilir ve olmuşturyaygın potansiyel anti-fibrotik ajanların etkinliğini değerlendirmek için kullanılır.

DMN tedavi sıçanlar kilo ve karıştırdı saç kaplama ile daha az şiddetli olur. DMN tedavi edilmiş sıçanların ortalama vücut ağırlıklarında önemli bir kayıp vardır; İlk tespit sonra 2 DMN tedavi haftalar ve bu fark DMN tedavisi (Şekil 1a) sonra, 3 ve 4. haftalar boyunca kalır. Sıçanlar ardışık hafta boyunca DMN aldıkça, karaciğer hasarı daha küçük hale gelmesine neden olur. Karaciğer indeksi; hangi nihai vücut ağırlığı, karaciğer ağırlığının yüzde DMN tedavi edilen sıçanla...

Sıçanlarda karaciğer fibrozunun bir hayvan modelini üretmek ve karaciğerin histolojik incelemesi ile fibroz derecesini değerlendirmek için bir yöntem açıklıyoruz. Model, karaciğer hastalığının gelişimini incelemek ve potansiyel anti-fibrotik ajanların etkinliğini test etmek için kullanılabilir.

Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Bu prosedürün genel amacı, potansiyel anti-fibrotik ajanların etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilecek bir karaciğer fibrozisi hayvan modeli oluşturmaktır. Bu hayvan modeli, karaciğerdeki fibrozisin doğası ve gelişimi ile anti-fibrotik ajanların fibrotik süreci nasıl azalttığına dair temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Ayrıca, bu model, insan karaciğer hastalığının erken evreden geç evre fibrozise kadar olan karmaşık fizyolojik süreçlerini taklit eder ve hastalığın ilgi duyulan herhangi bir noktasında incelenebilir.Bu yöntemde yeni olan kişilerin iş akışını planlamaları gerekir çünkü den-glis-nov hayvan modeli en az beş hafta sürer. Karaciğer hasat edildikten sonra, özellikle boyanmış kesitlerin patolog tarafından incelenmeye hazır hale gelmesi için işlem süreci bir veya iki hafta gerektirir. DMN, bir stoktan PBS içinde 10 mg/mL konsantrasyona seyreltilmelidir.Bu dilüsyonu gerçekleştirirken, madde kanserojen olduğu için mutlaka bir çeker ocak içinde çalışın. Deney için 150 ile 200 gram arasında ağırlıkta erkek Wistar sıçanları seçin. Sıçanları en az dört gün boyunca normal iklime sahip bir barınma tesisinde adapte edin.Yem ve suyu ad libitum sağlayın ve günlük

the-dimethylnitrosamine-induced-liver-fibrosis-model-in-the-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Safra akışının bozulması, karakteristik zamana bağlı morfolojik değişiklikler dizisi ile ciddi inflamatuar kolestatik karaciğer hasarına neden olur. Burada, farelerde ortak safra kanalının cerrahi ligasyonu için 21 ila 28 gün sonra güçlü bir fibrotik yanıt indüklemeye izin veren bir protokol sunuyoruz.

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

Aşırı ekstraselüler matriks proteinlerinin birikmesi ile sürekli fibroz siroza yol açar. Alkol kötüye kullanımı, ciddi karaciğer hastalığının ana nedenlerinden biridir. Alkolün neden olduğu yaralanma üzerine hepatosit rejenerasyonunu teşvik etme mekanizmalarını ve stratejilerini incelemek için etanolün neden olduğu bir zebra balığı fibrotik karaciğer modeli oluşturduk.

Zebra balığı bir Etanol kaynaklı Fibrotik Karaciğer Modelinin Geliştirilmesi progenitör hücre-aracılı Hepatosit Rejenerasyon Eğitim

Burada bir Kolin eksikliği ve ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet yedirerek, kronik karaciğer hasarı farelerde ikna etmek için kullanılan genel yöntem açıklanmaktadır. Sağlık izleme, karaciğer perfüzyon, yalıtım ve koruma göstermektedir. Altı hafta bir zaman ders karaciğer hasarı, pathohistology, fibrozis, enflamatuar ve karaciğer progenitör hücre yanıt hakkında bilgilendirebilir.

Fare Kolin eksikliği, Ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet kronik karaciğer yaralanma modeli

Biz bir non-invaziv multimodal bleomycin Çift Kişilik boğaza korumak tarafından indüklenen fare akciğer fibrozis modelinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı yaklaşım Imaging tanımlamak.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Bu çalışmada, Crohn fibrozisi ile karşılaştırılabilir patofizyoloji sergileyen TNBS aracılı intestinal fibrozisin ayrıntılı bir prosedürünü açıklıyoruz. Biz de rapamisin bağırsak fibrozis üzerinde inhibitör etkileri kolaylaştırılan ışığında bu yaklaşımı tartışmak.

TNBS Aracılı Intestinal Fibrozis Gelişimi ve Rapamisin Inhibitör Etkilerinin Değerlendirilmesi Üzerine Mekanistik Bakış

Mevcut çalışmada geliştirilen akut karaciğer yetmezliği hayvan modeli potansiyel tedavilerin incelenmesi için uygun bir alternatif sunuyor. Mevcut model, fiziksel ve ilaca bağlı hepatik yaralanmanın kombine etkisini kullanır ve yeni tedavilerin potansiyelini incelemek için uygun bir zaman penceresi sağlar.

%70 Parsiyel Hepatektomi ve Asetaminofen birleştirerek Akut Karaciğer Yetmezliği Bir Sıçan Modeli Nin Üretimi

Bu protokol farelerden canlı hassas kesilmiş karaciğer dilimleri üretimi için basit ve güvenilir bir yöntem sağlar. Ex vivo doku örnekleri laboratuvar doku kültürü koşullarında birden fazla gün boyunca muhafaza edilebilir, karaciğer patobiyolojisi incelemek için esnek bir model sağlayan.

Karaciğer Biyolojisi Ex Vivo Modeli olarak Murine Precision-Cut Karaciğer Dilimleri

Biliyer atrezinin (BA) virüs kaynaklı karaciğer fibrozis mekanik çalışması için uygun bir hayvan modeli ve gelecekteki BA tedavileri için bir platform sağlayan kronik karaciğer fibrozisinin fare modelini oluşturduk.

Biliyer atrezi çalışması için kronik karaciğer fibrozisinin bir fare modeli

Burada, pulmoner fibrozis (PF-PH) sıçan modeli ile ilişkili pulmoner arteriyel hipertansiyonun hava yoluna bleomisin enjeksiyonu ile indüklenmesi yöntemi tanıtılmıştır. Ayrıca bu hayvan modelini doğrulamak için adım adım bir yaklaşım sunuyoruz.

Pulmoner Fibrozis ile İlişkili Pulmoner Arteriyel Hipertansiyonun Bir Sıçan Modelinin Oluşturulması ve Doğrulanması

Metabolik disfonksiyon, hepatik gen ekspresyonu değişiklikleri ve ileri fibroz evre 3'e ilerleyen fibroz dahil olmak üzere insan MASLD'ye benzeyen karaciğer histopatolojik değişiklikleri ile metabolik disfonksiyonla ilişkili steatotik karaciğer hastalığının (MASLD) fare modeli. Bu model MASLD patofizyolojisi çalışmalarında ve yeni tedavilerin klinik öncesi çalışmalarında kullanılabilir.

Fibrozisli Metabolik Disfonksiyonla İlişkili Steatotik Karaciğer Hastalığının Fare Modeli

Keşfedin dimetilnitrosamin ile sıçanlarda karaciğer fibrozisi modeli oluşturma yöntemini. Bu model, anti-fibrotik ajanların etkinliğini değerlendirmek ve karaciğer hastalığı mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli

Daha fazla video keşfet