Name: Kronik Amiloid beta Oligomer İnfüzyon bir hayvan Modelinde Nörodejenerasyon Osmotik Pompalar ile Antikor Tedavisi infüzyon ile giderilir (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Öğrenin amiloid beta oligomer toksisitesini hayvan modelinde in vivo araştırma yöntemini. Bu cerrahi teknik, Alzheimer hastalığında nörodejenerasyon mekanizmalarını ve immünoterapi tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Hayvan tesisinden Caroline Bouchard'a fare çalışması için teşekkür ederiz. A.S., J.A. De Sève yüksek lisans bursuna ve B.P., Université de Montréal'den bir COPSE bursuna sahiptir. Bu çalışma, FRQS-Pfizer'den JB'ye atfedilen hibeler ve Hôpital du Sacré-Coeur de Montréal Araştırma Merkezi'nden başlangıç fonları ile finanse edilmiştir.

Etik bildirimi: Bu proje için hayvan protokolü Hayvan Bakımı Kanada Konseyi kurallarına uygun Hôpital du Sacre-Coeur de Montréal Hayvan Bakım Komitesi onay aldı. Stereotaksik Cerrahi öncesi 1. Kateter Hazırlık <ol><li> Ozmotik pompalar ile birlikte kanül bağlamak için kullanılacak PE50 kateter (6 cm uzunluğunda) kesme (Şekil 1A bakınız). yapay serebrospinal akışkan (CSF) sahip PE50 kateterler doldurun ve kateter her iki ucu sızdırmaz. kullanılana kadar 4 ° C &#39;de kateter tutun. </li></ol> STEREOTAKSİ tarafından 2. Kanül İmplantasyonu <ol><li> steril şartlarda ameliyat. otoklav tüm cerrahi aletler ve malzemeler sterilize edin. stereotaksik aparatı ve iyice çalışma alanı temizleyin ve bir% 70 etanol çözeltisi ile dezenfekte. Bir cerrahi maske, saç kaputu ve steril eldiven giyin.</li><li> periton boşluğu içine (ip) ketamin ve ksilazin (100 mg / kg ve 10 mg / kg, sırası ile) enjekte edilerek sıçan anestezisi. nazik bir ayak tutam sonra hareketi kontrol ederek anestezi onaylayın. </li><li> en az 30 dakika önce cerrahi deri altından (sc) anestezi uygulandı-hayvana, bir steroid olmayan anti-enflamatuvar bir ilaç (1 mg / kg kadar meloksikam) enjekte edilir. </li><li> makası kullanarak hayvanın kafasını Tıraş ve bir klorheksidin glukonat solüsyonu% 2 ve izopropil alkol% 2 ile üç kez cildi dezenfekte edin. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner oftalmik merhem sürün. </li><li> kulak çubukları ile bir stereotaksik çerçeve üzerinde hayvan yerleştirin. stereotaksik çerçeve sahibi koluna bir kanül düzeltmek. Enjekte (sc) başın üstünde bir lokal anestezik madde (bupivakain (1.5 mg / kg) ve lidokain (1.5 mg / kg). Anestezi% 3 izofluran teslim burun konisi koyarak bütün prosedür sırasında korur. Bütününü cerrahi alan olmalıdırkapalı dökümlü, ama daha iyi tekniği göstermek için burada yapılmadı. </li><li> Bir neşter ile başın üstünde 3 cm bir kesi yapmak. açık kafatası bırakmak kesi yaklaşık 4 kelepçelerini takın. Yuvarlak uçlu makas kullanılarak, hayvanın kürek kemikleri arasında derinin altına bir cep (2 x 2 cm 2) yapmak. </li><li> Bir bıçak ile kafatası periosta kazıyın. Kanama varsa kafatası üzerinde bir gazlı bez uygulayın. </li><li> kafatası, düz ve iyi stereotaksik çerçeve üzerinde hizalanmış olduğundan emin olun. kafatası düz olduğundan emin olmak için, yükseklik bregma ve lambda koordinatları kontrol edin. referans noktası olarak kullanılacak bregma koordinatlarını alır. </li><li> Hipokampus bilateral implante edilecek iki kılavuz kanül koordinatlarını hesaplamak, bregma başlayarak (ön-arka: - 0.42 cm; mediyolateral: 0.30 cm ±; dorsoventral: - 0.28 cm Paxinos ve Watson sıçan beyin atlası göre) 29 . belirtmekBir işaretleyici ile kanülün konumu. </li><li> Her iki kanül implantasyon noktasında kafatasında bir delik (0,5 mm) delin. yaklaşık 5 mm üzerinde ve bu puanın altına Matkap diğer iki delik diş çimento uygularken kanül pekiştireceğiz vidaları yerleştirin. </li><li> Daha önce bir neşter ile aCSF ile dolu kateterin bir ucunu kesin ve kanül açısı kolunda takın. diş çimento ile ilk kanül sabitleyin. İkinci kanül pozisyon etrafında diş çimento koyarak kaçının. </li><li> 2 diş çimento kurumaya bırakın - 3 dakika, daha sonra ilk kanül tutucu kolunu kaldırmak ve bunun ikinci kanül düzeltin. Tekrarlayın 2.11 ve 2.12 adımları. Her iki kılavuz kanül üzerinde kukla kanül koyun. kukla ve kılavuz kanül doku infiltrasyonu ve kanül engelleme önlemek için aynı uzunlukta olduğundan emin olun. </li><li> Daha önce hayvanın kürek kemikleri arasında yapılan cebinde her iki kateter serbest ucunu takın. kelepçeleri çıkartın ve cilde dikişdikiş ipliği 4-0. NOT: Üst kılavuz kanül yaklaşan Aβo infüzyon için erişilebilir olması gerekir. </li><li> stereotaksik çerçeve hayvan çıkarın ve kafesine geri koyun. Hayvan uyanır kadar ameliyat sonrası iyileşme döneminde, bir ısıtma suyu battaniye kafes yerleştirin. Gerekirse sıçan ısıdan uzak hareket böylece kafes yastığı kısmen olmalıdır. sternal yatma korumak için yeterli bilinç kavuşur kadar sürekli hayvan izleyin. </li><li> yakın izlemedeki 10 gün boyunca ameliyat kurtarmak için hayvan tesisine sıçan dönün. NOT: Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin. Meloksikam (1 mg / kg) ağrı tedavisinde cerrahi sonraki iki gün günde bir kez verilir. </li></ol> 3. Osmotik Pompa Montaj <ol><li> ve kontrol IgG1, bir gün montajdan önce, 6E10 antikoru (100 ul 1 mg / ml) ile ozmotik pompalar dolguantikoru (1 mg / ml; 100 ul) steril koşullar altında üreticinin talimatlarına göre yöntem. pompaları etkinleştirmeye gece boyunca 37 ° C&#39;de steril damıtılmış su içinde pompalar tutun. </li><li> ozmotik pompalar (7 gün boyunca 0.5 ul / saat) yüklemek için izofluran% 3 ile sıçan anestezisi. kürek kemikleri arasında Tıraş ve bir klorheksidin glukonat solüsyonu% 2 ve izopropil alkol% 2 ile cildi dezenfekte edin. kılavuz kanül bağlı PE50 kateterler bulmak için kürek kemikleri arasında bir neşter ile 2 cm bir kesi yapmak. </li><li> Bir neşter ile diş çimento içeren PE50 kateter ucunu kesin. PE50 kateteri ozmotik pompalar bağlayın ve bağlantıyı sabitlemek için pompa ve kateter kavşakta bazı diş çimento ekleyin. </li><li> Bir dikiş ipliği 4-0 sıkıca cilde dikiş. ısıtma suyu yastığı kafeste hayvan geri koyun. Bir izofluran anestezisi (yaklaşık 5 dakika) hızla hayvan uyanmak gözlemleyin. NOT: Ameliyat beğenme alırximately 5 ile 10 dakika. </li></ol> 4. Aβo Uyanık olarak İnfüzyonları ve Serbestçe Hareketli Sıçanlar <ol><li> Daha önce rapor edildiği gibi Aβo çözeltisi (0.2 ug / ul) hazırlayın. 28,30 Aβo enfüzyon önce oda sıcaklığında 1 st için dinamik ve kendiliğinden agrega izin verin. </li><li> bir infüzyon pompası iki 10 ul şırınga takın. Steril damıtık su 5 ul şırınga doldurun. Bir neşter ile uzunluğu yaklaşık 60 cm iki PE50 kateterleri kesin. 1 ml&#39;lik şırınga ve 21G iğneler kullanılarak steril distile su ile her iki kateterler doldurun. </li><li> Kateterin bir ucunda 1 ml şırınga ve Devam Et Hamilton şırınga diğer ucunu. 1 ml&#39;lik şırınga çıkarın ve kateter içinde herhangi bir hava kabarcığı olup olmadığını kontrol edin. </li><li> PE50 kateter sonunda iç kanül yerleştirin. Hamilton şırınga ul arasında 1&#39;e kadar steril distile su kullanılarak PE50 kateter bağlı iç kanül doldurun. p tarafından bir hava kabarcığı olun2 ul kadar pistonları geri ulling. </li><li> yukarı pipetleme ve bağlılık en az bir ucu kullanarak aşağı Aβo çözüm karıştırın. Karıştırma sırasında kabarcıklar oluşturan kaçının. 3.5 ul kadar pistonlar geri çekerek Aβo çözeltisi 1.5 ul hem iç kanül doldurun. </li><li> önce ve her iki kateter yapılan hava kabarcığı sonra işaretleyici ile çizgiler yapmak. Bu devam eden bir infüzyon bir kontrol noktası olarak hizmet vermektedir. infüzyon için, infüzyon pompası yakın kafesi getirmek ve kapağı çıkarın. </li><li> Bir sokulmayla sıçan yerleştirin ve sıkıca sıçan başını hareketsiz olan boynuna sokulmayla kolunu kazıyın. iki kılavuz kanül gelen kukla kanül çıkarın. Daha önce kılavuz kanül hazırlanan iç kanül yerleştirin. tam yerleştiğinden ve kılavuz kanül tabanına iyi sabit olduğundan emin olun. </li><li> sokulmayla gelen sıçan bırakın ve çekişme stres sınırlamak için kendi kafesine geri koyun. kateterler toget bükmeden sağlamak için yakından takipOnu ve infüzyon düzgün yapılır. </li><li> infüzyon pompası açın. 0.1 ul / dk (10 dk) bir hızda Aβo çözeltisi 1 ul enjekte edilir. infüzyon sırasında, 2.5 ul 3.5 ul şırınga pistonu hareket olduğunu kontrol edin ve her iki PE50 kateter hava kabarcığı sürekli hareket ettiğini. </li><li> Aβo çözeltisinin etkili bir difüzyon izin vermek için infüzyon sonra başka bir 5 dakika için yerinde iç kanül bırakın. enjekte çözüm reflü önlemek için, iç kanül ve şapkalı kılavuz kanül kaldırmak için geri sokulmayla sıçan getirin. sadece kanül açısı kolu önce durdurmak kukla kanül kullanın. kafesine hayvan dönün. </li><li> 6 ardışık gün boyunca günde bir kez Aβo infüzyon tekrarlayın. boyunları vurularak hayvan Euthanize. </li></ol>

<ol><li>Hardy, J. A., Higgins, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+the+amyloid+cascade+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: the amyloid cascade hypothesis.</a> Science. 256, 184-185 (1992).</li>
<li>Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+comprehensive+theory+for+Alzheimer%27s+disease.+Hypothesis%3A+Alzheimer%27s+disease+is+caused+by+the+cerebral+accumulation+and+cytotoxicity+of+amyloid+beta-protein%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Toward a comprehensive theory for Alzheimer's disease. Hypothesis: Alzheimer's disease is caused by the cerebral accumulation and cytotoxicity of amyloid beta-protein.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 924, 17-25 (2000).</li>
<li>Terry, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+basis+of+cognitive+alterations+in+Alzheimer%27s+disease%3A+synapse+loss+is+the+major+correlate+of+cognitive+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Physical basis of cognitive alterations in Alzheimer's disease: synapse loss is the major correlate of cognitive impairment.</a> Ann. Neurol. 30, 572-580 (1991).</li>
<li>Giannakopoulos, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tangle+and+neuron+numbers%2C+but+not+amyloid+load%2C+predict+cognitive+status+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Tangle and neuron numbers, but not amyloid load, predict cognitive status in Alzheimer's disease.</a> Neurology. 60, 1495-1500 (2003).</li>
<li>Price, J. L., Morris, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tangles+and+plaques+in+nondemented+aging+and+%22preclinical%22+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Tangles and plaques in nondemented aging and "preclinical" Alzheimer's disease.</a> Ann. Neurol. 45, 358-368 (1999).</li>
<li>Reiman, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrillar+amyloid-beta+burden+in+cognitively+normal+people+at+3+levels+of+genetic+risk+for+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Fibrillar amyloid-beta burden in cognitively normal people at 3 levels of genetic risk for Alzheimer's disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 6820-6825 (2009).</li>
<li>Aizenstein, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequent+amyloid+deposition+without+significant+cognitive+impairment+among+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Frequent amyloid deposition without significant cognitive impairment among the elderly.</a> Arch. Neurol. 65, 1509-1517 (2008).</li>
<li>Mc Donald, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+presence+of+sodium+dodecyl+sulphate-stable+Abeta+dimers+is+strongly+associated+with+Alzheimer-type+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The presence of sodium dodecyl sulphate-stable Abeta dimers is strongly associated with Alzheimer-type dementia.</a> Brain. 133, 1328-1341 (2010).</li>
<li>Tomic, J. L., Pensalfini, A., Head, E., Glabe, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+fibrillar+oligomer+levels+are+elevated+in+Alzheimer%27s+disease+brain+and+correlate+with+cognitive+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Soluble fibrillar oligomer levels are elevated in Alzheimer's disease brain and correlate with cognitive dysfunction.</a> Neurobiol. Dis. 35, 352-358 (2009).</li>
<li>Naslund, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+elevated+levels+of+amyloid+beta-peptide+in+the+brain+and+cognitive+decline%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Correlation between elevated levels of amyloid beta-peptide in the brain and cognitive decline.</a> JAMA. 283, 1571-1577 (2000).</li>
<li>Hardy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+double+trouble%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Amyloid double trouble.</a> Nat. Genet. 38, 11-12 (2006).</li>
<li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+beta-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 101-112 (2007).</li>
<li>McLean, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+pool+of+Abeta+amyloid+as+a+determinant+of+severity+of+neurodegeneration+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Soluble pool of Abeta amyloid as a determinant of severity of neurodegeneration in Alzheimer's disease.</a> Ann. Neurol. 46, 860-866 (1999).</li>
<li>Hepler, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solution+state+characterization+of+amyloid+beta-derived+diffusible+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Solution state characterization of amyloid beta-derived diffusible ligands.</a> Biochemistry. 45, 15157-15167 (2006).</li>
<li>Martins, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipids+revert+inert+Abeta+amyloid+fibrils+to+neurotoxic+protofibrils+that+affect+learning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Lipids revert inert Abeta amyloid fibrils to neurotoxic protofibrils that affect learning in mice.</a> EMBO J. 27, 224-233 (2008).</li>
<li>Lesne, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+specific+amyloid-beta+protein+assembly+in+the+brain+impairs+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory.</a> Nature. 440, 352-357 (2006).</li>
<li>Hung, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-beta+peptide+%28Abeta%29+neurotoxicity+is+modulated+by+the+rate+of+peptide+aggregation%3A+Abeta+dimers+and+trimers+correlate+with+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Amyloid-beta peptide (Abeta) neurotoxicity is modulated by the rate of peptide aggregation: Abeta dimers and trimers correlate with neurotoxicity.</a> J. Neurosci. 28, 11950-11958 (2008).</li>
<li>Ono, K., Condron, M. M., Teplow, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-neurotoxicity+relationships+of+amyloid+beta-protein+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Structure-neurotoxicity relationships of amyloid beta-protein oligomers.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 14745-14750 (2009).</li>
<li>Lambert, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusible%2C+nonfibrillar+ligands+derived+from+Abeta1-42+are+potent+central+nervous+system+neurotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95, 6448-6453 (1998).</li>
<li>Shankar, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-beta+protein+dimers+isolated+directly+from+Alzheimer%27s+brains+impair+synaptic+plasticity+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory.</a> Nat. Med. 14, 837-842 (2008).</li>
<li>Shankar, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+oligomers+of+the+Alzheimer+amyloid-beta+protein+induce+reversible+synapse+loss+by+modulating+an+NMDA-type+glutamate+receptor-dependent+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Natural oligomers of the Alzheimer amyloid-beta protein induce reversible synapse loss by modulating an NMDA-type glutamate receptor-dependent signaling pathway.</a> J. Neurosci. 27, 2866-2875 (2007).</li>
<li>Cleary, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+oligomers+of+the+amyloid-beta+protein+specifically+disrupt+cognitive+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Natural oligomers of the amyloid-beta protein specifically disrupt cognitive function.</a> Nat. Neurosci. 8, 79-84 (2005).</li>
<li>Townsend, M., Shankar, G. M., Mehta, T., Walsh, D. M., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+secreted+oligomers+of+amyloid+beta-protein+on+hippocampal+synaptic+plasticity%3A+a+potent+role+for+trimers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of secreted oligomers of amyloid beta-protein on hippocampal synaptic plasticity: a potent role for trimers.</a> J. Physiol. 572, 477-492 (2006).</li>
<li>Gomez-Isla, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+loss+of+layer+II+entorhinal+cortex+neurons+occurs+in+very+mild+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Profound loss of layer II entorhinal cortex neurons occurs in very mild Alzheimer's disease.</a> J. Neurosci. 16, 4491-4500 (1996).</li>
<li>DeKosky, S. T., Scheff, S. W., Styren, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+correlates+of+cognition+in+dementia%3A+quantification+and+assessment+of+synapse+change%5BTitle%5D)+AND+%22Neurodegeneration%22%5BJournal%5D)">Structural correlates of cognition in dementia: quantification and assessment of synapse change.</a> Neurodegeneration. 5, 417-421 (1996).</li>
<li>Brouillette, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effects+of+Soluble+Abeta+Oligomers+on+Neurodegeneration+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Des%22%5BJournal%5D)">The Effects of Soluble Abeta Oligomers on Neurodegeneration in Alzheimer's Disease.</a> Curr. Pharm. Des. 20, 2506-2519 (2014).</li>
<li>Brouillette, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxicity+and+memory+deficits+induced+by+soluble+low-molecular-weight+amyloid-beta1-42+oligomers+are+revealed+in+vivo+by+using+a+novel+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurotoxicity and memory deficits induced by soluble low-molecular-weight amyloid-beta1-42 oligomers are revealed in vivo by using a novel animal model.</a> J. Neurosci. 32, 7852-7861 (2012).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+rat+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The rat brain in stereotaxic coordinates</a>. , Academic Press. New York. Fourth edition (1998).</li>
<li>Broersen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+and+biocompatible+preparation+of+aggregate-free+amyloid+beta+peptide+for+biophysical+and+biological+studies+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PEDS%22%5BJournal%5D)">A standardized and biocompatible preparation of aggregate-free amyloid beta peptide for biophysical and biological studies of Alzheimer's disease.</a> PEDS. 24, 743-750 (2011).</li>
<li>Thakker, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebroventricular+amyloid-beta+antibodies+reduce+cerebral+amyloid+angiopathy+and+associated+micro-hemorrhages+in+aged+Tg2576+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Intracerebroventricular amyloid-beta antibodies reduce cerebral amyloid angiopathy and associated micro-hemorrhages in aged Tg2576 mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 4501-4506 (2009).</li>
<li>Papon, M. A., Whittington, R. A., El-Khoury, N. B., Planel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+and+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease and anesthesia.</a> Front. Neurosci. 4, 272(2011).</li>
<li>Le Freche, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tau+phosphorylation+and+sevoflurane+anesthesia%3A+an+association+to+postoperative+cognitive+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Tau phosphorylation and sevoflurane anesthesia: an association to postoperative cognitive impairment.</a> Anesthesiology. 116, 779-787 (2012).</li>
</ol>

Bu video-makalenin yayınlanması ALZET Osmotik Pompalar tarafından desteklenmektedir.

özel dikkat gereklidir, bu protokol kapsamında kritik adımlar vardır. kanül implante zaman, ikinci kanül delik engelleme önlemek için çok sıvı diş çimento koymaktan kaçınmak. Tahrişe ve olası bir enflamatuar tepkiyi önlemek için pompaya bağlı P50 kateterin serbest ucunda diş çimento yerleştirilmesi önemlidir. stereotaksik cerrahi gün, kanül engellenmesini önlemek için kılavuz kanül olarak aynı uzunlukta kukla kanül kullanın. Ancak, kurduktan sonra pompalar kanül açısı kolu hipokampus için pompa çözümün doğru infüzyon izin önce durdurmak kısa kukla kanül kullanın. yakından Aβo infüzyon Monitör ve kateter yapılan hava kabarcığı infüzyon sırasında sürekli hareket olduğundan emin olun. Her zaman enjekte kanül tamamen infüzyon sırasında kılavuz kanül takılı olduğundan emin olun. Sorun karşılaşma Aβ infüzyon sırasında iseIç kanül bloke olmadığından emin olun. Böyle bir durumda, iç kanül yoluyla steril distile su yıkayın. kılavuz kanül engellenirse, kılavuz kanül içine iç kanül açın. Aksi takdirde yukarı ve aşağı iç kanül taşıyın. sokulmayla içinde çekişme özellikle ilk gününde, sıçanlar için stresli olabilir. hayvan stresi azaltmak için, biz işlemek ve stereotaksik ameliyat öncesi sokulmayla için sıçan alıştırmak için önerilir. Birçok avantajı bu romanı atfedilen ve in vivo yaklaşımı esnek olabilir. Gerçekten de, Aβo doğası doğru infüzyonundan önce bir kontrol edilebilir enjekte edilir ve Aβ preparatlar değişik türü (beyin türevli Aβ çözeltiler vs örneğin sentetik için) bunların in vivo nörotoksisiteyi değerlendirmek için enjekte edilebilir. Bu model aynı zamanda, çeşitli ol Aβ türleri (örneğin, monomer, düşük-mekanizmalar ve yüksek molekül ağırlığı araştırmak için kullanılabilirigomers, Ap protofibrillerinin) in vivo olarak nörotoksik etkileri olabilir ve immünoterapi gibi tedaviler beyinde bunların zararlı etkilerini karşı nasıl. Infüzyon uyanık, serbestçe hareket eden hayvanlar gerçekleştirmek beri daha önceki çalışmalarda gösterildiği gibi, anestezik ajanların ve sinyal yolları üzerinde Aβo solüsyonu arasında karıştırıcı etkileri vardır. Özgürce hayvan hareketli 32,33 İnfüzyonları olan da davranış testi ile uyumlu herhangi bir zaman önce ve infüzyon sonrası. Aβo ve pompa montaj enfüzyonları yaşlanma sırasında Aβo etkisini ve tedaviler belirlemek için farklı yaşlardaki hayvanda yapılabilir. nörodejenerasyon infüzyon bölgesine yakın gerçekleştiğinden, sinaps ve nöronal kaybın farklıdır ve lokalize beyin bölgelerinde indüklenebilir. Teminat Aβo infüzyonu ve kontrol (araç veya karıştırmak Aβ) aynı hayvan içinde herhangi bir değişiklik için kontrol sağlar. Bunun aksine, Aβo veya kontrol Solutions sağ taraflı enjekte edilmiş ve davranış görevleri hayvanların test Örneğin, hipokampus bırakılabilir. Aβo ve tedavi İnfüzyon eş zamanlı olarak yapılan ya da alternatif tedavi Aβ birikimi sonra etkili olup olmadığını değerlendirmek için Aβo infüzyondan sonra monte edilebilir pompaları edilebilir. Aβo intraserebroventriküler infüzyon yaparken burada açıklanan aynı protokol de kullanılabilir. hücre içi sinyal yollarının üzerinde Aβo etkisi öncesi ve makul kısa bir zaman dilimi içinde nöronal kaybından sonra değerlendirilebilir. Aβ infüzyon dozu ve sayısı da daha çok ya da daha az ciddi Aβ patojenik elde etmek üzere ayarlanabilir. çok yönlü olmasına rağmen, bu tekniğin bazı sınırlamalar vardır. Kanül implantasyon ameliyatı takip eden ilk birkaç gün içinde doku ve nöro mekanik bozulması üretir. Bu nedenle, Aβo INFU başlamadan önce ameliyat sonrası en az bir hafta beklemek gereklidirsion ve bu olaylar dikkate almak uygun kontroller (araç veya inaktif karıştırmak Aβ enjeksiyonu) ekleyin. Ayrıca, Aβo sadece küçük bir hacmi, solüsyonun difüzyon sınırlama infüze edilebilir. ozmotik pompalar Aβ kaynaklı nörodejenerasyonu önlemek için tasarlanmış ajanlar klinik öncesi doğrulama için uygun ve özel dağıtım yöntemi temsil eder. 6E10 antikoru ile immünoterapi önce, beyinde 31 Aβ birikimi azalttığı gösterilmiştir beri biz yeni in vivo yaklaşım doğrulamak için bir proof-of-concept olarak 6E10 antikoru kullanılmıştır. Bu modelde ozmotik pompalar kullanılır artık klinik öncesi AD hastalarında Aβo birikmesini ve nörotoksisite önleyebilecek yeni hastalık modifiye tedavilerin geliştirilmesi için kullanılabilir.

Başlangıçta beyinde çözünmeyen Aβ türlerin bu birikimi AD patogenezinde merkezi oldu önerilmiştir. 1,2 Ancak, amiloid plaklar da yaşlı bazı bilişsel normal algılanır. 3-7 plak yeminli ve bilişsel bozukluklar arasındaki mevcut zayıf korelasyon üstesinden gelmek için AD, son raporlar, bu nörotoksisite çok dinamik öne sürüldü olduğu hastaların klinik durumu ile çok daha iyi. 8-14 Aβ oligomerization süreci yana ilişkili hastalığın başlangıcında toksik çözünür Aβo varlığını göstermiştir Bunun yerine oligomerin yalnızca belirli bir tipte çeşitli Aβo indüklenir. 14-16 birçok çalışma Aβo sinaps ve nöronal kaybın önce sinaps bozukluklarını başlatabilir göstermiştir için, 17-24 mevcut teoriler Aβ ilgili tedavi etkili olabileceğini ortaya koymaktadır klinik çalışmalarda şimdiye kadar test olarak değil ileriki aşamalarında daha erken AD. AD patogenezinde biri damgasını özelliği bellek açıkları klinik düzeyde saptanabilir olunca, lokalize beyin bölgelerinin görülen hastalığın geç evrelerinde gözlenen masif ve yaygın hücre ölümü ve önemli sinaps ve nöronal kayıptır. Entorhinal korteks kıvrımlarının (AK) (DG) çıkıntı perforant yolu AD erken başlangıcında belirgin rahatsız edilir. 25,26 AD prodromal devlet esnasında hafif kognitif bozukluk (MCI) belirgin önemli hücre ölümünü olduğunda DG sinaptik kayıp gibi AT saptanır. 25,26 Kanıt büyük bir gövde erken AD çözünür Aβo toksik eylemi kesin olarak belirlemiş olmasına rağmen, 8-14 Aβo kaynaklı nörodejenerasyon nöronal kültür veya Organotipik beyin kesit kültürü gözlenen hayvan modellerinde çoğaltmak daha zor olmuştur. 27 transgenik AD çoğu A aşırı ifade modelleriβ amiloid plaklar, Tau hiperfosforizasyon&#39;un, sinaptik eksikliği ve bellek kusuru var. 27 Bununla birlikte, bu modeller AD hastalarının hipokampus gözlenen modelleme hücre ölümü daha az başarılı olmuştur. Bu teknik sorunları aşmak için biz çözünür Aβo intraserebral infüzyon dayalı bir model geliştirdi. Biz çözünür Aβo hipokampal infüzyon kademeli nöron kaybı ve Tau hiperfosforizasyon&#39;un, MS bellek düşüş ile ilişkili iki patolojik işaretlerinden neden tekrarladı önce bildirmiştir. 28 Burada, özel Aβo eşzamanlı infüzyon için tasarım kanül kullanılarak AD tedavileri test etmek için yeni bir yöntem gösteriyor ve ozmotik pompalar ile Aβo antikoru (6E10) sürekli infüzyon. Ozmotik pompalar doğrudan Aβo enfüzyon yerinde in vivo Aβo kaynaklı nörodejenerasyona karşı bir antikor (ya da diğer bileşiklerin) etkinliğini test etmek için özel bir yol sağlar. Bu nedenle, bu repr pompalarkatı bir proof-of-concept AD potansiyel terapötik ajanların etki mekanizmaları ile ilgili kurmak için kullanışlı bir araç ESENT. son raporlar AD erken dönemlerinde çözünür Aβo kritik etkisini işaret beri, Aβo yöneliktir birçok tedavi aslında akademik ve farmasötik laboratuarlar tarafından test edilmektedir. Bu yeni bir hayvan modeli, erken AD gözlenen sinaptik ve nöronal kaybın taklit sağlar ve ozmotik pompalar Aβo infüzyon yerinde özel olarak, sürekli işleme maddeleri aşılamak için kullanılır. Önceden demans hastalarında denemeler başlatmak üzere araştırmacılar istendiğinde hastaları hafif-orta son birkaç yıldır test edilen AD tedavilerin tekrarlayan başarısızlıkları Aβo bolca birikir ve geriye dönüşümsüz beyin hasarı oluşturmak için başlamadan önce. Bu bağlamda, çökelmesini ve Aβo dolayısıyla nörotoksisiteyi önlemek yeni bileşikler test klinik öncesi hastalarda ilgi çekici olabilir.

<table><tbody><tr><td>Yapay Beyin Omurilik Sıvısı (aCSF)</td><td>Harvard Aparatı</td><td>59-7316</td><td></td></tr><tr><td>PE 50 Kateter ince duvarlı</td><td>Plastikler bir</td><td>C232CT</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin Hidroklorür (100 mg / ml)</td> <td>Biyoniş</td><td>1989529</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin Hidroklorür (100 mg / ml)</td> <td>Bimeda</td><td>8XYL004C</td><td></td></tr><tr><td>Meloksikam (5 mg / ml)</td> <td>Norbrook</td><td>215670I01</td><td></td></tr><tr>%<td>2 klorheksidin glukonat ve %2 izopropil alkol çözeltisi</td> <td>Carefusion</td><td>260100C</td><td></td></tr><tr><td>Lidokain Hidroklorür</td><td>Alveda Pharma</td><td>0122AG01</td><td></td></tr><tr><td>Bupivakain Hidroklorür</td><td>Hospira</td><td>1559</td><td></td></tr><tr><td>oftalmik merhem</td><td>Baussh ve Lomb inc.</td><td></td><td></td>2125706</tr><tr><td>stereotaksik çerçeve</td><td>Çalmak</td><td>51600</td><td></td></tr><tr><td>stereotaksik kanül tutucu kol</td><td>Harvard Aparatı</td><td>72-4837</td><td></td></tr><tr><td>Matkap</td><td>Dremel</td><td>8050-N/18</td><td></td></tr><tr><td>Kılavuz Kanül</td><td>Plastikler bir adet</td><td>326OPG/spc</td><td></td></tr><tr><td>Enjeksiyon Kanülü</td><td>Plastikler bir adet</td><td>C315I/spc</td><td></td></tr><tr><td>Kukla Kanül</td><td>Plastik bir</td><td>C315DC / spc</td><td></td></tr><tr><td>Sütür iplik kaplı vicryl rapide 4-0</td><td>Ethicon</td><td>VR2297</td><td></td></tr><tr><td>Dental Akrilik Çimento</td><td>Harvard Aparatı</td><td>72-6906</td><td></td></tr><tr><td>Vidalar</td><td>JI Morris Company</td><td>P0090CE125</td><td></td></tr><tr><td>6E10 antikoru (fare IgG1 izotipi)&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>803003</td><td></td></tr><tr><td>Fare IgG1 izotip kontrol antikoru</td><td>Abcam</td><td>AB18447</td><td></td></tr><tr><td>Alzet ozmotik pompalar modeli 1007D</td><td>Durect şirketi</td><td>290</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Baxter</td><td>CA2L9100</td><td></td></tr><tr><td>Amiloid-beta 1-42 & nbsp;</td><td>rPeptide</td><td>A-1163-1</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırınga (10 & mikro; l)</td> <td>Fisher Scientique 14815279</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnfüzyon Şırınga Pompası CMA 402</td><td>Harvard Aparatı</td><td>CMA8003110</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 1 ml</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>İğnesi 21 G</td><td>Terumo</td><td>NN-2125R</td><td></td></tr><tr><td>Snuggle</td><td>Lomir Biyomedikal</td><td>RTS04</td><td></td></tr></tbody></table>

kronik amiloid beta oligomer İnfüzyon bir hayvan modelinde nörodejenerasyon osmotik pompalar ile antikor tedavisi infüzyon ile giderilir

Neurodegeneration in an Animal Model of Chronic Amyloid-beta Oligomer Infusion Is Counteracted by Antibody Treatment Infused with Osmotic Pumps

(Gerçekler ve olaylarla ilgili hafıza) hipokampus bağımlı açık bellek düşüş Alzheimer hastalığı (AH) erken klinik belirti biridir. İyi sinaps kaybı ve ardından gelen nörodejenerasyon AD bellek bozuklukları için en iyi göstergesi olduğu bilinmektedir. Son çalışmalar klinik semptomlar belirgin hale gelmeden önce yaklaşık 10 ila 15 yr insan beyninde birikmeye başlar çözünür amiloid beta oligomerler (Aβo) nörotoksik rolünü vurguladı. Birçok rapor çözünür Aβo AD modelleri ve insanlarda hafıza açıkları ile ilişkili olduğunu göstermektedir. nöronal ve beyin kesit kültürlerinde görülen Aβo kaynaklı nörodejeneratif hastalıklar, birçok hayvan modellerinde çoğaltmak daha zor olmuştur. Burada gösterilen tekrarlanan Aβo infüzyon modeli bu sorunu aşmak ve yeni hastalık modifiye tedaviler geliştirmek için iki önemli etki ele izin: Erken AD teşhis etmek için biyolojik belirteçler tanımlamak ve moleküler mekanizmalarını belirlemeklog mekanizmaları AD başlangıcında Aβo indüklenen hafıza kaybı destek. çözünebilir Aβo agrega nispeten hızlı olarak hastaların klinik durumu ile zayıf korelasyon çözünmeyen Aβ fibrilleri için, çözünebilir Aβo taze hazırlanmış ve hipokampus belirgin hücre ölümünü üretilmesi için, altı gün boyunca günde bir kez enjekte edilir. Biz özel Aβo eşzamanlı haşlama ve ozmotik pompalar kullanılarak hipokampus Aβo antikoru (6E10) sürekli infüzyon için tasarım kanül kullanılır. In vivo yönteminde yenilikçi Bu şimdi ön-demans hastalarında Aβo birikmesini ve nörotoksisite engelleyebilecek yeni bir AD tedavilerin etkinliği gösterildi klinik öncesi çalışmalarda kullanılabilir.

Aβo nörotoksik etkisi, kanülün implante Long-Evans sıçanlarda araştırılmıştır hipokampus DG. Çözünür Aβo altı ardışık gün boyunca her gün enjekte edildi. Biz özel Aβo eşzamanlı haşlama ve ozmotik pompalar (Şekil 1A) kullanarak hipokampus içinde 6E10 veya kontrol IgG1 antikorunun sürekli infüzyon için tasarım kanül kullanılır. immünohistokimya sıçanlar anestezi yapıldı için,% 0.9 NaCl ile transkardiyal perfüze ve beyinleri, 24 saat boyunca 48 saat ve% 15 sukroz çözeltisi% 4 paraformaldehit solüsyonunda daldırılmış. Yüzer koronal kesit (40 um), 1 saat boyunca% 1 keçi serumu bloke 30 dakika boyunca% 0.3 H2O 2 ile muamele edilmiş ve bir anti-pan-Aβ antikor ile 4 ° C&#39;de gece boyunca inkübe edildi. Bölümler antikor uygulamadan önce 3 dakika% 70 formik asit ile muamele edildi. Tespit ABC kompleksi ve bir 0 kullanılarak gerçekleştirilmiştir.% 05 3,3-diaminobenzidin çözeltisi. Bölümler tolüen 5 dakika inkübe jelatin kaplı cam suyu alınmış slaytlar, hava ile kurutuldu, 2 saat, (30, 70, 95, ve% 100 alkol), üzerine monte edilmiş ve kaplandı. kresil violet lekelemesi için, bölümler,% 0.5 kresil violet solüsyonu içinde 10 dakika inkübe edildi, toluen, 5 dakika daldırılır 1 renkten% 0.5 asetik asit solüsyonu içinde dakika, (70, 95, ve% 100 alkol), kuluçkalanmış ve kaplanmıştır cam lamel. Burada sunulan sonuçlar, bu birikimi ile ilişkili infüzyon sitenin yakınında dg içinde Aβo birikimi ve hücre ölümüne göstermektedir. Biz düzey Aβo ölçüde 6E10 antikoru tedavisi (Şekil 1B) tarafından azaldığını buldular. İşaretli nörodejenerasyon Aβo enjekte etme yeri yakınlarında gözlendi ve 6E10 antikoru tedavisi (Şekil 1B) zayıflatılmıştır. Bu sonuçlar, DG gözlenen Aβo birikimi ile tutarlıdırBurada gösterilen 6E10 antikoru immüno- amiloid birikiminin farelerde tekrar Aβo infüzyonları takip. 28 nolu bir transgenik AD fare modelinde yapılan bir rapor ile uyumludur. 31 <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54215/54215fig1.jpg" /> Aβo İnfüzyon sırasında ikili kanülle Animal Şekil 1. Resim Aβo bir çözeltisi. (0.2 ug / ul; 1 ul), iç hortuma bağlanmış PE50 kateterler kullanılarak (6 gün boyunca günde bir kez) uyanık ve serbest hareket eden sıçanlarda enjekte edilmiştir kanülleri içine yerleştirildi. Kontrol (CTL) IgG1 veya 6E10 antikoru ile tedavi hayvanın kürek kemikleri arasında deri altından bulunan ozmotik pompalar kullanılarak Aβo infüzyon yerinde doğrudan infüze edildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54215/54215fig1large.jpg" target="_blank">Th büyük halini görmek için tıklayınız</a>rakamdır. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54215/54215fig2.jpg" /> . CTL (IgG1) ile 6 ardışık gün boyunca günde bir kez enjekte ve tedavi edildi ya da 6E10 antikoru; Aβo Biriktirme Bağlı Şekil 2. nöronal Kaybı 6E10 Antikor Tedavisi A, Aβo (1 ul / ul 0.2 ug) tarafından zayıflatılmış olan hücre kaybını gösteren cresyl menekşe ile infüzyon ozmotik pompalar kullanılarak. B, hemen yanındaki kanül yerleştirilmesi için bir bölüme dg içinde Aβo temsilcisi birikimi ve temsili boyama sitesi. Ölçek çubukları: 50 mikron (n = 4) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54215/54215fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Aβo'nun etkilerini in vivo olarak incelemek için, Aβo'nun nörotoksik etkisine karşı koymak için ozmotik pompalar kullanarak hipokampusta sürekli Aβo antikoru (6E10) infüzyonu ile birlikte çözünür Aβo'nun tekrarlanan hipokampal infüzyonlarına dayanan bir model geliştirdik.

Kronik Amiloid beta Oligomer İnfüzyon bir hayvan Modelinde Nörodejenerasyon Osmotik Pompalar ile Antikor Tedavisi infüzyon ile giderilir

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It ...

Bu cerrahi müdahalenin genel amacı, tedavilerin amiloid beta oligomer toksisitesi üzerindeki etkisini in vivo olarak test etmektir. Bu yöntem, bir hayvan modelinde amiloid beta oligomerin nörotoksik etkisini hedefleyen yeni tedavilerin bulunması gibi, Alzheimer hastalığı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, amiloid beta oligomerlerin in vivo olarak nörotoksik etkileri nasıl indüklediği mekanizmasını araştırmak için kullanılabilmesidir.Ve immünoterapi gibi bizim tedavimiz de beyin üzerindeki zararlı etkiyi tersine çevirebilir. Prosedürü, laboratuvarımdan teknisyen Chloe Provost gerçekleştirecek. Kanül implantasyon işlemine başlamak için öncelikle PE50 kateterlerini altı santimetre uzunluğunda kesin.Ardından, kateterleri yapay beyin omurilik sıvısı ile doldurun. Kateterlerin her iki ucunu bir ısı mühürleme makinesi ile kapatın. Her iki uca diş hekimi çimentosu ekleyin.Sıçanlar onaylanmış bir yönteme göre anestezi altına alındıktan sonra, parmak ucuna hafifçe sıkıştırarak hareket kontrolü ile anestezinin gerçekleştiği teyit edilmelidir. Ardından, anestezi altındaki hayvana steroidal olmayan anti-inflamatuar bir ilaç enjekte edin. Hayvanın baş kısmı tıraş makinesiyle tıraş edildikten sonra, cilt %2 klorheksidin glukonat ve %2 izopropil alkol çözeltisi ile dezenfekte edilmelidir.Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere veteriner oftalmik pomad uygulayın. Şimdi, kulak barlarını kullanarak hayvanı stereotaksik çerçeveye yerleştirin. Bir kanülü stereotaksik çerçevenin tutucu koluna sabitleyin.Lokal anestezik bir ajan enjekte edip başın üst kısmında üç santimetrelik bir bistüri insizyonu yaptıktan sonra, kafatasını açıkta bırakmak için insizyon çevresine dört adet klemps yerleştirin. Ardından, hayvanın kürek kemikleri arasındaki deri altına yuvarlak uçlu bir makas kullanarak ikiye iki santimetrelik kare bir cep oluşturun. Tekrar baş bölgesine dönerek, kafatasının periostumunu bir bıçakla kazıyın.Kanama meydana gelirse kafatasına bir gazlı bez uygulayın. Şimdi, kafatasının stereotaksik çerçeve üzerinde düz ve iyi hizalanmış olduğunu doğrulamak için lambda ve bregma noktalarındaki yükseklik koordinatlarını kontrol edin. Referans noktası olarak kullanılacak olan bregma koordinatlarını kaydedin.İki kılavuz kanülün doğru bilateral yerleşimi için koordinatlar hesaplandıktan sonra, her iki kanülün implantasyon noktasında kafatasına 0,5 milimetrelik bir delik açın. Dental siman uygulanırken kanülleri sabitleyecek vidaları yerleştirmek için bu noktaların yaklaşık beş milimetre üzerine ve altına üç delik daha açın. Ardından, önceden aCSF ile doldurulmuş kateterin bir ucunu makasla kesin ve kanülün açılı koluna yerleştirin.İlk kanülü dental siman ile sabitleyin. İkinci kanülün yerleştirileceği bölgenin çevresine dental siman sürmemeye dikkat edilmelidir. Dental simanın iki ila üç dakika boyunca kurumasına izin verdikten sonra, tutucu kolu birinci kanülden çıkarın ve uçları düzeltilmiş ikinci kanülü kolun içine yerleştirin.İkinci kanülü dental siman ile sabitleyin. Ardından, her iki kılavuz kanüle dummy kanül yerleştirin. Her iki kateterin boşta kalan ucunu, hayvanın kürek kemikleri arasında önceden oluşturulan cebe yerleştirin.Klempleri çıkarın ve ardından cildi 4-0 sütür ile dikin. Kanül çevresine daha fazla dental siman ekleyin. Hayvanı stereotaksik düzeneğinden çıkarın ve temiz bir kafes içindeki ısıtıcı pedin üzerine yerleştirin.Hayvan, sternal rekümbans pozisyonunu koruyacak kadar bilinci yerine gelene kadar sürekli olarak izleyin. Ardından, cerrahi işlem sonrası iyileşmesi için yakın takip altında 10 gün boyunca barınma odasına geri götürün. Yerleştirme işleminden bir gün önce, osmotik pompaları üretici talimatlarına göre 6E10 antikoru veya kontrol IgG1 antikoru ile doldurun.Pompalara aktive olmaları için steril distile su yerleştirin ve gece boyunca 37 °C'de tutun. Sıçan %3 isofluran ile anestezi edildikten ve kürek kemikleri arası tıraşlandıktan sonra, cildi %2 klorheksidin glukonat ve %2 izopropil alkol çözeltisi ile dezenfekte edin. Kürek kemikleri arasında neşter ile iki santimetrelik bir insizyon yaptıktan sonra, kılavuz kanüle bağlı PE50 kateterleri tespit edin.Ardından, dental çimento içeren PE50 kateterlerin uçlarını bir bisturi ile kesin. Ozmotik pompaları PE50 kateterlere bağlayın ve bağlantıyı sabitlemek için pompa ile kateter birleşim yerine bir miktar dental çimento ekleyin. Son olarak, cildi 4-0 sütürlerle sıkıca dikin.Hayvanı sıcak bir ısıtıcı ped üzerindeki kafesine geri koyun ve izofluran anestezisinden uyanma sürecini takip edin. Amiloid beta oligomer çözeltisini daha önce rapor edildiği şekilde hazırladıktan sonra, infüzyondan önce çözeltinin oda sıcaklığında bir saat boyunca dinamik ve spontane olarak agregasyon yapmasına izin verin. Ardından, her bir şırıngayı beş µL steril distile su ile doldurun.Ardından, bir skalpel yardımıyla iki adet PE50 kateteri yaklaşık 60 santimetre uzunluğunda kesin. Her iki kateteri steril distile su ile doldurmak için 21 gauge iğneler takılmış iki adet bir mililitrelik şırınga kullanın. Bir mililitrelik şırıngalar her bir kateterin bir ucunda takılı kalırken, boşta kalan uçları Hamilton şırıngalarına bağlayın.Bir mililitrelik şırıngaları çıkarın ve kateterlerde hava kabarcığı olmadığından emin olun. Dahili kanülü PE50 kateterlerin ucuna yerleştirin. Her bir dahili kanülü bir mikrolitreye kadar doldurmak için Hamilton şırıngaları kullanın, ardından pistonu iki mikrolitre işaretine geri çekerek bir hava kabarcığı oluşturun.Şimdi, düşük yapışma özelliğine sahip bir uç kullanarak pipetleme yoluyla amiloid beta oligomer çözeltisini karıştırın. Karıştırma sırasında kabarcık oluşmasını önleyin. Ardından, pistonları 3,5 µL seviyesine çekerek her iki iç kanülü 1,5 µL amiloid beta oligomer çözeltisi ile doldurun.Ardından, her iki kateterde de hava kabarcığının öncesine ve sonrasına işaretler koyun. Bu, devam eden infüzyon için bir kontrol noktası görevi görür. Uyanık sıçaganı güvenli bir tutuşla kavrayın ve başını sabitleyin.Kukla kanülü iki kılavuz kanülden çıkarın, ardından önceden hazırlanmış iç kanülü kılavuz kanüle yerleştirin. Kanüllerin tamamen yerleştirildiğini ve kılavuz kanülün tabanına iyice sabitlendiğini doğrulayın. Şimdi, sıçanı tutuş aparatından serbest bırakın ve tutma stresini sınırlamak için kafesine geri koyun.İnfüzyon pompasını açın ve 0,1 µL/dakika hızında bir mikrolitre amiloid beta oligomer çözeltisi enjekte edin. İnfüzyon sırasında, şırınga pistonunun 3,5 µL'den 2,5 µL'ye hareket ettiğini ve her iki PE50 kateterindeki hava kabarcıklarının sürekli olarak hareket ettiğini kontrol edin. Kateterlerin birbirine dolanmadığından emin olmak için sıçanı kontrol edin.Amyloid beta oligomer solüsyonunun etkili bir şekilde yayılmasını sağlamak için infüzyondan sonra iç kanülü beş dakika daha yerinde bırakın. İnfüzyon sonrası, sıçanı tekrar kavrama tutuşuna (snuggle hold) getirin ve enjekte edilen solüsyonun geri akışını önlemek için iç kanülü ve kapaklı kılavuz kanülü çıkarın. Kılavuz kanülün açılı kolunun hemen öncesinde duracak şekilde dummy kanülü yerleştirin.Son olarak, hayvanı kafesine geri koyun. Burada sunulan sonuçlar, infüzyon bölgesine yakın dentate gyrus'ta amiloid beta oligomerlerinin depozisyonunu ve bu birikimle ilişkili hücre ölümünü göstermektedir. Amiloid beta oligomerlerinin seviyesi, anti-A-beta antikoru ile yapılan immün boyamanın ortaya çıkardığı üzere, 6E10 antikoru tedavisiyle önemli ölçüde azaltılmıştır.Cresyl violet boyamasında görüldüğü üzere, A-beta-O enjeksiyon bölgesinin yakınında belirgin nörodejenerasyon gözlemlenmiş ve bu durum 6E10 antikor tedavisiyle hafifletilmiştir. Uygulama üzerinde uzmanlaşıldığında, kanül implantasyonu uygun şekilde gerçekleştirilirse 30 dakika içinde tamamlanabilir. Ozmotik pompa kurulumu yaklaşık 10 dakika, amiloid beta enjeksiyonu ise yaklaşık 15 dakika sürer.Bu prosedürü uygularken, ilk kanülü yerleştirirken ikinci kanülün konumunun etrafına dental siman sürmemeye dikkat etmek önemlidir. Ayrıca, iç kanülü kılavuz kanüle yerleştirmeden önce hayvanın sakinleşmesini bekleyin. Bu videoyu izledikten sonra, amiloid beta oligomerlerini infüze etmek ve immünoterapi gibi Alzheimer hastalığı tedavilerini test etmek amacıyla kanül ve ozmotik pompaların nasıl implante edileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız.

neurodegeneration-an-animal-model-chronic-amyloid-beta-oligomer

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Alzheimer hastalığının bir özelliği Aβ yükseklik.

Β-amiloid Oligomerik hazırlanması 1-42</subHipokampal Dilimleri Sinaptik Plastisite değer düşüklüğü> İndüksiyon

Bu video, amiloid-beta (Aβ) peptide özgü antikorların bir sıçanın hipokampusuna sürekli infüzyonu için bir tekniği göstermektedir. Çalışma, oligomerler ve antikorlar arasındaki etkileşimleri incelemek için sıçan hipokampüsüne çözünür Aβ oligomerlerinin (Aβo) infüzyonu ile birlikte Aβ peptide özgü antikorların kontrollü bir infüzyonu için iki taraflı bir kanül sisteminin implante edilmesini kullanır.

Aβ Peptit Spesifik Antikorların ve Aβ Oligomerlerinin Sıçan Hipokampusuna Kontrollü İnfüzyonu

Bu video, Alzheimer hastalığının bir fare modelini oluşturmak için amiloid beta'nın dentat girusa kesin stereotaksik infüzyonunu göstermektedir. Amiloid beta proteinlerinin doğru koordinat tayini ve kontrollü iletimi, nöronal bozulmaya neden olur, hafıza işlemeyi bozar ve Alzheimer hastalığının gelişimine katkıda bulunur.

Bir Alzheimer Hastalığı Modeli için Amiloid-Beta Proteinlerinin Doğrudan Stereotaksik Beyin İnfüzyonu

Kaynak: }Maiti, P. et. al.,. Doğal Polifenol Kurkumin Kullanılarak Beyin Dokusundaki Amiloid Plaklarının Etiketlenmesi ve Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm.  (2019){{}}Bu video, immünoetiketleme ve kurkumin boyama kullanılarak beyin dokusu kesitlerindeki amiloid-beta plaklarının görüntüleme prosedürünü göstermektedir. İmmünolojik etiketleme, amiloid-beta için özgüllük sağlarken, kurkumin, β yaprak açısından zengin fibrilleri seçici olarak bağlayarak görselleştirmeyi geliştirir. Kırmızı ve yeşil...

Beyin Dokusu Kesitlerindeki Amiloid-Beta Plaklarının İmmünolojik Etiketleme ve Kurkumin Boyama ile Görüntülenmesi

Ya bir kateterin yerleştirilmesi ya da farelerde sağ yan ventrikül içine, bir bolus enjeksiyonu gerçekleştirerek merkezi sinir sistemi ilaçları hedeflemek için bir yöntem açıklanmaktadır. Biz antisens oligonükleotidler teslim odaklanmıştır. Bu teknik, diğer ilaçlara ve sıçanlara, kolaylıkla adapte edilebilir.

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Biz solucan amylopathies yönlerini incelemek için yöntemler...

Bir<em&gt; Caenorhabditis elegans</emAmylopathy Çalışmaları&gt; Model Sistemi

Burada, amiloid-beta'nın doğrudan stereotaksik beyin infüzyonu için bir protokol sunuyoruz. Bu metodoloji, amiloid-beta'nın beyin nöronları üzerindeki kısa vadeli etkilerini ele almak için alternatif bir in vivo fare modeli sağlar.

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

Amiloid-β (Aβ) hayvan modeli tanımlanmış bir miktar ve Aβ parçalarının türlerinin yönetimini sağlayan ve her çalışma grubu içinde bireysel farklılıkları azaltır -injected. Bu protokol, normal farelerde Alzheimer-benzeri davranış bozukluğu üretimini sağlayan, stereotaktik araçlar olmaksızın Aβ intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonu anlatılmaktadır.

Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Alzheimer hastalığı, kemirgen modellerinde mononükleer fagositler tarafından serebral amiloid-β (Aβ) fagositoz silikon modelleme (q3DISM) nicel 3D için bir yöntem geliştirdi. Bu yöntem, in vivo olarak hemen her fagositik olayın kantitatif için genelleştirilebilir.

kantitatif 3D Siliko Modelleme (q3DISM)

Bu iletişim kuralı bir sentetik peptid vitro üzerinden Aβ reaksiyonlar hazırlamak için ve göreli Aβ oligomer miktarda analiz kurutma bir nokta tarafından değerlendirmek için açıklar.

A11-pozitif β-amiloid Oligomer hazırlama ve değerlendirme sistemini kullanarak Dot Blot Analizi

Bu protokol, hücreleri hareketsiz etmek için aljinat hızlı fiziksel jelleşme tarafından bir hücre kapsülleme yöntemi gösterilmektedir. Elde edilen mikroboncuk zaman içinde amiloid-β kontrollü ve sürekli salgılanmasını sağlar ve salgılanan amiloid-β in vitro ve in vivo modellerde etkilerini incelemek için kullanılabilir.

Alzheimer hastalığının modellenmesi için amiloid-β-salgıcı alginat Mikroboncuk imalatı

Öğrenin amiloid beta oligomer toksisitesini hayvan modelinde in vivo araştırma yöntemini. Bu cerrahi teknik, Alzheimer hastalığında nörodejenerasyon mekanizmalarını ve immünoterapi tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için kullanılır.

Kronik Amiloid beta Oligomer İnfüzyon bir hayvan Modelinde Nörodejenerasyon Osmotik Pompalar ile Antikor Tedavisi infüzyon ile giderilir (Video) | JoVE Journal

Kronik Amiloid beta Oligomer İnfüzyon bir hayvan Modelinde Nörodejenerasyon Osmotik Pompalar ile Antikor Tedavisi infüzyon ile giderilir

Daha fazla video keşfet