Name: Tek kohort Kolonileri ve İşçi arıların Hormon Tedavisi hazırlanması Rolü ve / veya Endokrin Sistemi Fizyolojisi İlişkili Analiz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Öğrenin tek kohort arı kolonileri hazırlama ve işçi arılarda gençlik hormonu ile ekdizon tedavisi uygulama yöntemini. Bu teknik, arı fizyolojisi ve davranışları arasındaki ilişkiyi incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Japonya Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan (MEXT) Bilimsel Araştırma Hibesi (B) ve Yenilikçi Alanlarda Bilimsel Araştırma Hibe Yardımı 'Sistem Moleküler Etolojisi' ile desteklenmiştir. T.U., Japonya Genç Bilim İnsanları için Bilimi Teşvik Derneği'nden bir Hibe Yardımı aldı.

Tek kohort Kolonileri 1. Hazırlık <ol><li> Üç balarısı kolonilerinin iki tek-kohort koloniler oluşturmak ve yeni ortaya çıkan işçilerin yeterli sayıda elde etmek için hazırlayın. <ol><li> peteklerde şapkalı periferik hücrelerde bazı pupa kahverengi gözleri ve cımbız kullanarak şapkalı tarak açarak bir pigmentli manikür olup olmadığını kontrol edin. Bu pupa periferik tarak hücrelerinde varsa, bütün peteklerde pupa çoğu yaklaşık 1-3 gün içinde ortaya çıkacaktır. </li><li> Daha sonra, tüm yapışık yetişkin arıların bir fırça ile temizlendikten sonra bu pupa içeren petekleri toplamak ve koloniler arasında değişkenliği en aza indirmek için üç koloniler tarakları karıştırın. </li></ol></li><li> boş kovanı kutusunda toplanır tarak yerleştirin ve nemli koşullar altında 33 ° C (&gt;% 60 nispi nem) inkübe edilir. Toplanan tarak 3 gün (koloni başına 3.000 işçi) üzerinden yaklaşık 6.000 yeni ortaya çıkan işçileri toplayın. </li><li> worke miktarını belirlemekBeş yeni ortaya işçi ağırlığına göre RS rastgele unmanipulated koloniler toplanmıştır. <ol><li> rastgele tartı makineleri kullanarak unmanipulated koloniler toplanan beş yeni ortaya çıkan işçileri tartılır. Not: Beş yeni çıkan işçilerin ağırlığı genellikle 500-600 mg olduğunu. </li><li> Beş yeni ortaya çıkan işçilerin ortalama ağırlığı ile toplanan işçilerin ağırlığı bölünmesiyle tarafından toplanan işçilerin miktarını tahmin edin. </li></ol></li><li> su bazlı afiş boya işaretlerini kullanarak yaklaşık 1.800 işçi (koloni başına 900 işçi) ve thoraces boya işaretleri uygulayın. Not: Yıkanabilir işaretleyici boya uygulamak için kullanılan Malzemelerin Tablo listelenir. </li><li> İki tarak, bir tarak içeren bal ve korunmuş gıdalar gibi polen ve yumurta döşeme kraliçe tarafından başka bir boş tarak içeren yeni bir kovan kutusuna bir kraliçe ve yaklaşık 3.000 0-2 gün eski işçilerin tanıtmak. bal ve polen fr içeren tarağı toplamakom tüm yapışık arıların sonra başka unmanipulated koloni kaldırılır. Not: Nükleer kovan kutusunun (küçük ölçekli kovanı kutusu) kullanılması tavsiye edilir. </li><li> Tek kohort koloniler oluşturduktan sonra 6 ila 8 gün boya işaretleri ile hemşire arılar ve erken silaj toplayın. <ol><li> , Hemşire arıları toplamak kuluçka dikkat çekmek için tarak hücrelere başlarını koymak işçileri almak için. Birçok yavru ve yetişkin işçilerin ihtiva tarak gelen hemşire arıları toplamak için cımbız kullanın. Not: Adım 1.7&#39;de açıklandığı gibi disseke zaman toplanan işçilerin HPGler geliştirilmesi halinde, bu işçilerin hemşire arılar olarak tanımlanır. cımbız ile thoraces tutan tarak işçileri almak için tavsiye edilir. </li><li> silaj toplamak için, kendi arka ayakları üzerinde polen yükleri ile kendi kovanlarına geri işçileri yakalamak için bir böcek net kullanabilirsiniz. Not: Adım 1.7&#39;de açıklandığı gibi disseke zaman yakalanan işçilerin HPGler büzülmüş görünüyorsa, bu işçiler toplayıcılar olarak tanımlanmaktadır. </li></ol></li><li> clasüç gruba, &#39;Gelişmiş&#39;, &#39;Intermediate&#39; içine HPG yoğunlaştıracaktır ve stereomikroskop altında diseksiyon tarafından &#39;Büzüşük&#39;. <ol><li> Arılar sinek ya da yürüyemiyorum kadar 10-15 dakika buzdolabında bir böcek kafes içinde 10-15 arılar anestezisi. Daha sonra, buz üzerine arılar taşımak ve 5 dakika boyunca buz üzerinde anestezi doldurun. Not: anestezi elde etmek için toplam 15-20 dakika sürer. Anestezi süresi kısalır gerekiyorsa, bir kafes içinde arıların sayısı kafes başına 1-3 arılar için azaltılmalıdır. </li><li> makas ve cımbız ile vücuttan kafa teşrih. iğneler ile bir Petri kabı üzerine yerleştirilen diş mumu üzerine kafa sabitleyin. kafa düzeltmek için anten üsleri İki işaretçilerine yerleştirin. Böcek tuzlu su (130 mM NaCI, 5 mM KCI, 1 mM CaCl2) sabit kafaları bekletin. </li><li> binoküler mikroskop altında ince cımbız kullanarak baş ve cerrahi bıçak manikür ön yönünü çıkarın. Not: HPGler kolay C çıkarılmasından sonra baş bulunabiliruticle. HPG baş beynin etrafında var olan bir botryoid organdır. </li><li> manikür altında beyaz bir zar doku trakeal doku çıkarın. Sonra, yavaş yavaş cımbız ile çekerek baş HPGler incelemek. </li><li> &#39;Gelişmiş&#39; gibi büyük ve yuvarlak asinüs ile HPGler sınıflandırır. &#39;Büzüşük&#39; gibi küçük ve bozuk asinüs ile HPGler sınıflandırır. HPGler &#39;Intermediate&#39; olarak ne &#39;geliştirildi&#39; ne de &#39;Büzüşük&#39; tekabül sınıflandırır. Not: HPG devletlerin bu üç sınıf Şekil 2&#39;de gösterilmiştir göstermektedir Temsilcisi fotoğraf. </li><li> Konu &#39;geliştirilen&#39; ve RNA ekstraksiyonu için &#39;Büzüşük&#39; HPGler sırasıyla ve hemşire arılar ve toplayıcılar (bölüm 4) arasındaki HPGler gen ifadesini karşılaştırın hemşire arı HPGler &#39;ve&#39; silaj makina HPGler &#39;. </li></ol></li></ol> 20E 2. Enjeksiyon <ol><li> descr gibi tipik kolonilerden hemşire arıları toplamakprosedür 1.6.1 anlatılagelmiştir. Not: Arılar yetiştirilen olacak gibi HPGler bu arılar incelenebilir edilemez. </li><li> Bir buzdolabı (buz ile ilgili) &#39;de 4 ° C&#39; de arı anestezisi. Not: anestezi elde etmek için yaklaşık 30 dakika sürer. Anestezi süresi kısalır ise, kafes içinde arıların sayısı kafes başına 1-3 arılar için azaltılmalıdır. </li><li> cımbız kullanarak, Petri kabı üzerine yerleştirilen diş mumu üzerinde arı hareketsiz. </li><li> Bir cam iğne çektirmenin kullanarak kalibre kılcal mikropipet yapılan bir enjeksiyon ucu kullanarak başın ön yüzünde içine 20E solüsyonu 1 ul enjekte edilir. <ol><li> Etanol böcek tuzlu su içinde (130 mM NaCI, 5 mM KCI, 1 mM CaCl2) karışımı 20E çözülür (1: 4) 2.5 ug / ml. </li><li> Bir lastik tüp enjeksiyon ucu bağlayın ve tüpün karşı tarafında sarı bir mikropipet ucu bağlayın. </li><li> Bir, bir mikropipet kullanarak parafilm üzerindeki 20E solüsyonu 1 ul koyun ağızda sarı mikropipet ucu tutunenjeksiyon ucu içine çözümü çizmek d. </li><li> antenlerin taban içine enjeksiyon ucu takın ve sarı mikropipet ucu ile üfleyerek çözüm enjekte. Not: Bu adımda gösterilen Protokol Örnek enjeksiyon yöntemi, ancak otomatik enjeksiyon makinesinin kullanımı 20 gerekli güvenliği için tavsiye edilir. </li></ol></li><li> Arka 1 veya 3 gün boyunca karanlık ve nemli koşullarda (&gt;% 60 bağıl nem) altında 33-36 ° C&#39;de böcek kafeslerde enjekte arılar (ideal sıcaklık 35 ° C). Tedarik bal-su karışımı (1: 1) arılara. Gerekirse, enjeksiyondan sonra arılar hayatta sayılır. </li></ol> Methopiren 3. Uygulama <ol><li> tüm yapışık yetişkin arıların bir fırça ile çıkarıldıktan sonra tipik kolonilerden pupa ihtiva taraklar toplayın. 33-36 ° C&#39;de tarakları inkübe 1 gün öncesine kadar için nemli ortamlarda (&gt;% 60 bağıl nem) (ideal sıcaklık 35 ° C). </li><li&gt; toplanmış kovanlardan gelen yeni ortaya çıkan arıların toplayın ve tek kohort koloniler hazırlamak için protokol açıklandığı gibi posteri boya kullanarak thoraces boya işaretleri geçerlidir. kendi kolonilerine işaretli arıları dönün. </li><li> 6 gün sonra, koloniler (6 gün eski) boyalı işçileri toplamak. cımbız ile thoraces tutarak tarak boyalı işçileri Pick up. </li><li> prosedür 2.2 olarak (buz ile ilgili) bir buzdolabı içinde 4 ° C&#39;de arılar anestezisi. cımbız kullanarak, bir Petri tabağına konmuş diş mumu arıların hareketsiz bir mikropipet kullanılarak başlarına asetonda çözündürüldü metopiren çözeltisi (50-250 mg / ml) 1-5 ul geçerlidir. aseton dirençli olan bir filtre ucu kullanın. Not: Aseton ölüme yol açan arılar üzerinde zararlı etkileri olabilir. arı yüksek mortalite gözlenirse, en az 1 ul aseton hacmi azaltılması önerilir. </li><li> Arka 33-36 ° C (ideal bir ton böcek kafeslerde arılaremperature karanlık ve nemli koşullar altında 7 gün süreyle 35 ° C) (&gt;% 60 nispi nem) &#39;dir. Tedarik bal-su karışımı (1: 1) arılara. Gerekirse, topik uygulamadan sonra arı kalan sayısı. Not: Bu yazıda, hayatta kalan arılar 7 gün uygulama (Tablo 3) sonra sayılır. </li></ol> 4. RNA ekstraksiyonu ve kantitatif RT-PCR <ol><li> Arılar uyutmak ve 1.7.4&#39;e adımları 1.7.1 açıklandığı gibi HPGler teşrih. </li><li> kullanılıncaya kadar -80 ° C&#39;de kuru buz ve mağaza bir mikrosantrifüj tüp disseke HPGler toplayın. </li><li> Protein denatürasyonu için reaktif 400 ul ekle. Not: bu madde (Malzeme Tablo) ticari olarak mevcuttur. </li><li> Bir mikrosantrifüj tüp içinde uygun bir homojenizasyon havan tokmağı ile elektrikli karıştırıcı bir el kullanarak HPG dokuları homojenize. kırmak için buz ve lize doku hücreleri üzerinde 1 dakika boyunca yaklaşık 300 rpm&#39;lik bir dönme hızında homojenize edilir. (Malzeme Tablo). </li><li> 80 ul kloroform ekleyin ve iyice karıştırın. Oda sıcaklığında 5 dakika süreyle inkübe edilir. </li><li> 4 ° C&#39;de 15 dakika boyunca 14.170 x g&#39;de mikrosantrifüj tüpleri santrifüjleyin. yeni bir tüpe sulu faz transfer. izopropanol ve 1 ul glikojen (5 mg / ml) eşit hacim. En az 20 dakika boyunca -20 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 14.170 x g&#39;de mikrosantrifüj tüpleri santrifüj ve supernatant çıkarın. </li><li> pelet% 75 etanol içinde 400 ul ilave edin ve iyice karıştırın, 4 ° C&#39;de 15 dakika boyunca 14.170 x g&#39;de mikrosantrifüj tüpleri santrifüj ve supernatant çıkarın. bir kez daha bu işlemleri tekrarlayın. </li><li> 5-10 dakika boyunca pelet hava kuru ve daha sonra 10 mL RNaz içermeyen su içinde çözülür. Not: pelet tam kuruma suyun RNA pellet çözünmez neden olabilir. Bu nedenle, hafif ıslak topak için uyguneritme. </li><li> NanoDrop veya benzeri gibi bir spektrofotometre kullanılarak RNA konsantrasyonu ölçümü. </li><li> Herhangi bir bulaşık genomik DNA&#39;yı, 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edilerek DNase 2.0 U toplam RNA 500 ng tedavi edin. </li><li> Ters-transkribe DNase I ile tedavi edilen RNA, 200 ng ve ticari olarak temin edilebilen kitler kullanılarak gerçek zamanlı PCR yapmak ve gene-özel tetikleyiciler (mrjp2 (Malzemeler ve Reaktifler Tablo l&#39;de liste), 5&#39;-AAATGGTCGCTCAAAATGACAGA-3 &#39;, ve 5 &#39;-ATTCATCCTTTACAGGTTTGTTGC-3&#39;, Hbg3 5&#39;-TACCTGGCTTCGTGTCAAC-3 &#39;ve 5&#39;-ATCTTCGGTTTCCCTAGAGAATG-3&#39;). aşağıdaki gibi PCR gerçekleştirin: [95 ° C x 30 sn + (95 ° C x 5 saniye + 60 ° C x 15 saniye + 72 ° C x 20 sn) 45-55 döngüleri x]. </li><li> Uzama faktörü 1α-F2 (EF1α˗F2) ya da ribozomal proteini 49 (rp49) 9,16,21,22 bu ile transkript miktarı normalize. Bu genler güvenilir kontrol gr vardırMah-PCR ile HPGler gen ifadesini analiz etmek için enes. </li><li> İstatistiksel yazılımı kullanarak iki deney gruplarında (hemşire arılar vs erken toplayıcılar, kontrol arılar vs 20E-tedavi arılar ve kontrol arılar vs methopiren tedavi edilen arı) arasında önemli farklılıklar tespit etmek için iki kuyruklu t-testi yapın. Not: F-testi varyans homojenliğini kabul durumunda, Student t-testi kullanılır. Değilse, Welch t-testi kullanılır. </li></ol>

<ol><li>Wilson, E. O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWilson%2C+EO+%22The+insect+societies%22">The insect societies</a>. , Harvard university press. (1971).</li>
<li>Winston, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWinston%2C+ML+%22The+biology+of+the+honey+bee%22">The biology of the honey bee</a>. , Harvard university press. (1987).</li>
<li>Lindauer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ein+Beitrag+zur+Frage+der+Arbeitsteilung+im+Bienenstaat%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+vergleichende+Physiologie%22%5BJournal%5D)">Ein Beitrag zur Frage der Arbeitsteilung im Bienenstaat.</a> Zeitschrift für vergleichende Physiologie. 34 (4), 299-345 (1952).</li>
<li>Sakagami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Untersuchungen+uber+die+Arbeitsteilung+in+einen+Zwergvolk+der+Honigbienen.+Beitrage+zur+Biologie+des+Bienenvolkes%2C+Apis+mellifera+L%5BTitle%5D)+AND+%22I.+Jap+J+Zool%22%5BJournal%5D)">Untersuchungen uber die Arbeitsteilung in einen Zwergvolk der Honigbienen. Beitrage zur Biologie des Bienenvolkes, Apis mellifera L.</a> I. Jap J Zool. 11, 117-185 (1953).</li>
<li>Kubo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+the+expression+of+hypopharyngeal-gland+proteins+of+the+worker+honeybees+%28Apis+mellifera+L.%29+with+age+and%2For+role%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Change in the expression of hypopharyngeal-gland proteins of the worker honeybees (Apis mellifera L.) with age and/or role.</a> J Biochem. 119 (2), 291-295 (1996).</li>
<li>Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+the+mode+of+gene+expression+of+the+hypopharyngeal+gland+cells+with+an+age-dependent+role+change+of+the+worker+honeybee+Apis+mellifera+L%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Change in the mode of gene expression of the hypopharyngeal gland cells with an age-dependent role change of the worker honeybee Apis mellifera L.</a> Eur J Biochem. 249 (3), 797-802 (1997).</li>
<li>Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+amylase+and+glucose+oxidase+in+the+hypopharyngeal+gland+with+an+age-dependent+role+change+of+the+worker+honeybee+%28Apis+mellifera+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Expression of amylase and glucose oxidase in the hypopharyngeal gland with an age-dependent role change of the worker honeybee (Apis mellifera L).</a> Eur J Biochem. 265 (1), 127-133 (1999).</li>
<li>Ohashi, K., Sawata, M., Takeuchi, H., Natori, S., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+of+cDNA+and+analysis+of+expression+of+the+gene+for+alpha-glucosidase+from+the+hypopharyngeal+gland+of+the+honeybee+Apis+mellifera+L%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning of cDNA and analysis of expression of the gene for alpha-glucosidase from the hypopharyngeal gland of the honeybee Apis mellifera L.</a> Biochem Biophys Res Commun. 221 (2), 380-385 (1996).</li>
<li>Ueno, T., Nakaoka, T., Takeuchi, H., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+gene+expression+in+the+hypopharyngeal+glands+of+worker+honeybees+%28Apis+mellifera+L.%29+associated+with+an+age-dependent+role+change%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog+Sci%22%5BJournal%5D)">Differential gene expression in the hypopharyngeal glands of worker honeybees (Apis mellifera L.) associated with an age-dependent role change.</a> Zoolog Sci. 26 (8), 557-563 (2009).</li>
<li>Robinson, G. E., Page, R. E., Strambi, C., Strambi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal+and+genetic+control+of+behavioral+integration+in+honey+bee+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hormonal and genetic control of behavioral integration in honey bee colonies.</a> Science. 246 (4926), 109-112 (1989).</li>
<li>Sullivan, J. P., Fahrbach, S. E., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Juvenile+hormone+paces+behavioral+development+in+the+adult+worker+honey+bee%5BTitle%5D)+AND+%22Horm+Behav%22%5BJournal%5D)">Juvenile hormone paces behavioral development in the adult worker honey bee.</a> Horm Behav. 37 (1), 1-14 (2000).</li>
<li>Ben-Shahar, Y., Robichon, A., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+gene+action+across+different+time+scales+on+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Influence of gene action across different time scales on behavior.</a> Science. 296 (5568), 741-744 (2002).</li>
<li>Lehman, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Division+of+labor+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera%29%3A+the+role+of+tyramine+beta-hydroxylase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Division of labor in the honey bee (Apis mellifera): the role of tyramine beta-hydroxylase.</a> J Exp Biol. 209 (Pt 14), 2774-2784 (2006).</li>
<li>Mutti, N. S., Wang, Y., Kaftanoglu, O., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bee+PTEN--description%2C+developmental+knockdown%2C+and+tissue-specific+expression+of+splice-variants+correlated+with+alternative+social+phenotypes%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Honey bee PTEN--description, developmental knockdown, and tissue-specific expression of splice-variants correlated with alternative social phenotypes).</a> PLoS One. 6 (7), e22195(2011).</li>
<li>Whitfield, C. W., Cziko, A. M., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiles+in+the+brain+predict+behavior+in+individual+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiles in the brain predict behavior in individual honey bees.</a> Science. 302 (5643), 296-299 (2003).</li>
<li>Ueno, T., Takeuchi, H., Kawasaki, K., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+Gene+Expression+Profiles+of+the+Hypopharyngeal+Gland+of+Worker+Honeybees+in+Association+with+Worker+Behavior+and+Hormonal+Factors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in the Gene Expression Profiles of the Hypopharyngeal Gland of Worker Honeybees in Association with Worker Behavior and Hormonal Factors.</a> PLoS One. 10 (6), e0130206(2015).</li>
<li>Paul, R. K., Takeuchi, H., Matsuo, Y., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+of+ecdysteroid-regulated+gene+E74+of+the+honeybee+in+ovary+and+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene expression of ecdysteroid-regulated gene E74 of the honeybee in ovary and brain.</a> Insect Mol Biol. 14 (1), 9-15 (2005).</li>
<li>Takeuchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+gene%2C+Mblk-1%2C+that+encodes+a+putative+transcription+factor+expressed+preferentially+in+the+large-type+Kenyon+cells+of+the+honeybee+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel gene, Mblk-1, that encodes a putative transcription factor expressed preferentially in the large-type Kenyon cells of the honeybee brain.</a> Insect Mol Biol. 10 (5), 487-494 (2001).</li>
<li>Takeuchi, H., Paul, R. K., Matsuzaka, E., Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EcR-A+expression+in+the+brain+and+ovary+of+the+honeybee+%28Apis+mellifera+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog+Sci%22%5BJournal%5D)">EcR-A expression in the brain and ovary of the honeybee (Apis mellifera L).</a> Zoolog Sci. 24 (6), 596-603 (2007).</li>
<li>Yamane, T., Miyatake, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+female+mating+receptivity+and+activation+of+oviposition+in+two+Callosobruchus+species+due+to+injection+of+biogenic+amines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Reduced female mating receptivity and activation of oviposition in two Callosobruchus species due to injection of biogenic amines.</a> Journal of Insect Physiology. 56 (3), 271-276 (2010).</li>
<li>Ben-Shahar, Y., Leung, H. T., Pak, W. L., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cGMP-dependent+changes+in+phototaxis%3A+a+possible+role+for+the+foraging+gene+in+honey+bee+division+of+labor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">cGMP-dependent changes in phototaxis: a possible role for the foraging gene in honey bee division of labor.</a> J Exp Biol. 206 (Pt 14), 2507-2515 (2003).</li>
<li>Danforth, B. N., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elongation+factor-1+alpha+occurs+as+two+copies+in+bees%3A+implications+for+phylogenetic+analysis+of+EF-1+alpha+sequences+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Evol%22%5BJournal%5D)">Elongation factor-1 alpha occurs as two copies in bees: implications for phylogenetic analysis of EF-1 alpha sequences in insects.</a> Mol Biol Evol. 15 (3), 225-235 (1998).</li>
<li>Pandey, A., Bloch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Juvenile+hormone+and+ecdysteroids+as+major+regulators+of+brain+and+behavior+in+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Juvenile hormone and ecdysteroids as major regulators of brain and behavior in bees.</a> Current Opinion in Insect Science. 12, 26-37 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Tek kohort koloniler hazırlanması Burada işçi arıların rolü kayması ile ilişkili HPG fizyolojisi analizi için tek kohort koloniler hazırlamak için önceki çalışmamızda 16 kullanılan protokol nitelendirdi. Prosedürler 1.6-1.7 ve Şekil 2&#39;de açıklanan kriterleri karşılayıp Hemşire arılar ve erken silaj tek kohort koloniler (Tablo 1) gözlendi. HPG sınıflandırılması referans olarak devletler Şekil 2&#39;de fotoğraf yararlı olacaktır...

Avrupa bal arısı, Apis mellifera, son derece örgütlü bir toplumda 1 ile eusocial böcek olduğunu. İşçi bal arıları (emek kast) koloni etkinliğini sürdürmek için çeşitli görevler yapan ve bu görevleri emek 2-4 yaşa bağlı bölümü olarak adlandırılır eclosion sonra işçi bal arısı yaşına göre değişir. Genç işçiler (&lt;13 gün) yaşlı işçiler ise, arı sütü (hemşire arılar) salgılayarak kovandaki yavru özen (&gt; 15 gün) kovanı (silaj) 2-4 dışındaki nektar ve polen toplamak. İşçilerin fizyolojisi bu rol kayması ile birlikte değişir. Örneğin, hipofaringeal bezleri (HPGler) işlevi, 2,5 kazarak için hemşirelik rol kayması ile birlikte egzokrin kafasında bulunan bezleri, değişiklikleri eşleştirilmiş. Hemşire arı HPGler ağırlıklı arı sütünün en önemli bileşenleri olan büyük arı sütü proteinleri sentezler. Öte yandan, toplayıcı HPGler ağırlıklıglukoz ve fruktoz halinde sakaroz dönüştürerek bal içine nektar işlemek için, bu tür α-glukosidaz III olarak karbonhidrat metabolize edici enzimleri, sentez. Daha önceki çalışmalar ortaya koydu rolü kayması 6-9 içinde α-glukozidaz III değişiklikleri kodlayan önemli bir arı sütü protein ve Hbg3 kodlayan mrjp2 ekspresyonu. HPGler dahil işçi dokularda fizyolojik değişiklikler, rol kayması veya işçilerin yaş ile ilişkili olup olmadığını belirlemek için, tek kohort hazırlamak için gibi, bir arı kolonisinin nüfusu kompozisyonunu işlemek için yararlı olacaktır koloniler hangi neredeyse aynı yaştaki işçiler farklı görevleri 10,11 gerçekleştirin. Robinson ve ark. (1989), tek bir kohort koloni 10 oluşturulması için bir yöntem açıklamıştır. Tek kohort koloniler başlangıçta bir kraliçe ve 0-2 gün eski işçileri kapsar. Birkaç gün koloniler kurduktan sonra, alm işçileriAynı yaşta ost farklı görevler üstlenecek. Diğer işçiler her zamankinden daha erken toplayıcı görevleri gerçekleştirmek ve böylece erken silaj denir oysa Bazı işçiler, tipik koloniler olarak hemşirelik görevleri gerçekleştirmek. Hemşire arılar ve erken toplayıcılar arasındaki gen ifadesi karşılaştırmaları işçi dokuların 12-16 rolü ile ilişkili fizyolojisi hakkında yararlı bilgiler sağlayacaktır. Burada, HPGler 16 rol ve / veya yaşa bağlı fizyoloji analizi için tek bir kohort koloniler hazırlamak için detaylı bir protokol açıklar. Ayrıca kısa bir süre HPG fizyolojisi değerlendirmek için niceliksel ters kopyalama-polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile mrjp2 ve Hbg3 gen ekspresyonunu incelemek için açıklanmıştır. Tek kohort kolonilerinde işçi fizyolojisi analizine ek olarak, endokrin sistemin incelenmesi rol ilişkili işçi fizyolojisi düzenleyici mekanizmaların analiz etmek için önemlidir. kullanımları bilinmektedir Jüvenil hormon (JH),Böcek larvaları &#39;statükonun&#39; hormon gibi wn, işçi bal arılarının 11 kazarak için hemşirelik rolü kayması hızlandırır. Ayrıca, metamorfoz sırasında tüy dökümü hormonu olarak bilinen ekdison, mantar organları işçi beynin 17-19 daha yüksek bir merkezi ifade edilir ekdison sinyal molekülleri kodlayan genlerin olarak rol kayması dahil olabilir. Bu nedenle, biz de HPG fizyolojisi üzerindeki endokrin sistemin etkisinin analizi (ifadesi için ayrıntılı ekdisonla aktif formudur 20E işçileri tedavi önceki çalışmamızda 16 kullanılan protokol, ve methopiren, bir JH analog tanımlamak mrjp2 ve Hbg3).

<table><tbody><tr><td>UNIPOSCA</td><td>Mitsubishi kalem</td><td>PC-5M</td><td>İşaretlerin arılara uygulanması için işaretleyici kalem&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>20-hidroksiekdison</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H5142</td><td></td></tr><tr><td>Metopren</td><td>Sigma Aldrich</td><td>33375</td><td></td></tr><tr><td>Üreme vakası böcek</td><td>IRIS OHYAMA</td><td>CP-SS</td><td></td></tr><tr><td>Elektromotion karıştırıcı ve nbsp;</td><td>ISO</td><td>23M-R25</td><td>doku homojenizasyonu</td></tr><tr><td>TRIZol Reaktifi</td><td>Invitrogen</td><td>15596-026</td><td>, toplam RNA ekstraksiyonu için reaktif</td></tr>, <tr><td>DNaz I&nbsp;</td><td>Takara</td><td>2270A</td><td></td></tr><tr><td>PrimeScript RT reaktif kiti</td><td>Takara</td><td>RR037A</td><td>ters transkripsiyon reaktifi</td></tr><tr><td>SYBR Premix ExTaq II</td><td>Takara</td><td>RR820A</td><td>gerçek zamanlı PCR</td></tr><tr><td>LightCycle 1.2 Cihazı</td> için reaktif <td>Roche</td><td>12011468001,</td><td>gerçek zamanlı PCR</td></tr><tr><td>LightCycle Kılcal Damarları (20&mu; l)</td> <td>Roche</td><td>,</td><td>gerçek zamanlı PCR için materyali</td> 4929292001</tr></tbody></table>

tek kohort kolonileri ve İşçi arıların hormon tedavisi hazırlanması rolü ve / veya endokrin sistemi fizyolojisi İlişkili analiz

Preparation of Single-cohort Colonies and Hormone Treatment of Worker Honeybees to Analyze Physiology Associated with Role and/or Endocrine System

Bal arısı işçileri, koloni faaliyetinin sürdürülmesi ile ilgili çeşitli görevlerde bulunurlar. İşçilerin görevleri yaşlarına göre değişmektedir (yaşa bağlı iş bölümü). Genç işçiler kuluçka (hemşire arılar) emzirmekle meşgulken, yaşlı işçiler nektar ve polen (toplayıcılar) için yiyecek aramakla meşguldür. İşçilerin fizyolojisi bu rol değişimiyle bağlantılı olarak değişir. Örneğin, hipofaringeal bezlerin (HPG'ler) ana işlevi, ana arı sütü proteinlerinin (MRJP'ler) salgılanmasından karbonhidrat metabolize edici enzimlerin salgılanmasına kadar değişir. Tipik kolonilerde işçiler yaşlandıkça işçi görevleri değiştiğinden, yaşlanma ile meydana gelen fizyolojik değişiklikleri rol kayması ile meydana gelenlerden ayırt etmek zordur. HPG'ler de dahil olmak üzere işçi dokularındaki fizyolojik değişiklikleri rol kayması ile bağlantılı olarak incelemek için, hemen hemen aynı yaştaki işçilerin farklı görevleri yerine getirdiği tek kohort kolonileri hazırlayarak bal arısı koloni popülasyonunu manipüle etmek faydalı olacaktır. Burada, bu analiz için tek kohort kolonileri hazırlamak için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz. Tek kohort koloni hazırlığından altı ila sekiz gün sonra, yiyecek arama görevlerini normalden daha erken gerçekleştiren erken gelişmiş toplayıcılar kolonide ortaya çıkar. Temsili sonuçlar, HPG gen ekspresyonunda role ilişkili değişiklikleri gösterdi ve bu da role ilişkili HPG fonksiyonunu düşündürdü. Koloni popülasyonunu manipüle etmenin yanı sıra, endokrin sistemin analizi, rolle ilişkili fizyolojiyi araştırmak için önemlidir. Burada ayrıca, aktif bir ekdison formu olan 20-hidroksiekdison (20E) ve bir gençlik hormonu analoğu olan metopren ile işçileri tedavi etmek için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz. Tedavi edilen arıların hayatta kalma oranı, HPG'lerdeki gen ekspresyonunu incelemek için yeterliydi. 20E ve / veya metopren tedavisine yanıt olarak gen ekspresyonu değişiklikleri gözlendi, bu da hormon tedavilerinin HPG'lerin fizyolojik değişikliklerine neden olduğunu düşündürdü. Burada tarif edilen hormon tedavisi protokolü, işçi fizyolojisi üzerindeki hormonal etkilerin incelenmesi için uygundur.

Tek kohort koloniler hazırlanması için mFLINT Şekil 1A&#39;da gösterilmiştir. Koleksiyonu örnek tek kohort koloniler hazırlamaktan deneylerin Zaman kurs Şekil 1B gösterilmiştir. Hemşirelik davranış veya toplayıcı davranış için davranışsal kriterleri karşılayıp işçiler tek kohort koloniler toplanmıştır ve HPG gelişme bu işçilerin tahmin edilmiştir Tablo 1 üç gruba HPG gelişme sınıflandırılmasını göstermektedir.; boyutuna göre &#39;gelişti...

Burada tek kohort bal arısı kolonilerinin hazırlanması için detaylı protokol açıklar - rol ilişkili işçi fizyolojisi analiz etmek için kullanışlı bir araç. Biz de işçi davranışı ve / veya fizyoloji düzenlenmesinde bu hormonların katılımını değerlendirmek jüvenil hormon ve ekdisonla işçileri tedavisi için ayrıntılı protokoller açıklanmaktadır.

Tek kohort Kolonileri ve İşçi arıların Hormon Tedavisi hazırlanması Rolü ve / veya Endokrin Sistemi Fizyolojisi İlişkili Analiz

Honeybee workers are engaged in various tasks related to maintaining colony activity. The tasks of the workers change according to their age (age-related ...

Bu prosedürlerin genel amacı, işçi arıların fizyolojisini, işçilerin rolleri ve endokrin sistemlerinin durumuyla ilişkili olarak incelemektir. İşçi davranışı analizleri için yaygın olarak kullanılan bu yöntem, aynı zamanda fizyoloji ile işçi arıların rolleri arasındaki ilişkiye dair temel soruların yanıtlanmasına da yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, uygulanmasının nispeten kolay olmasıdır.İki tek kohort koloni oluşturmak için, üç standart koloni ile başlayın ve bu üç koloninin her birinden yeni çıkan işçi arıları toplayın. Cımbız kullanarak, kapalı periferik hücrelerde kahverengi gözleri ve pigmente kütikülleri olan pupaların görünümü için kolonileri düzenli olarak inceleyin. Pupalar bulunduğunda, çoğunluğu önümüzdeki birkaç gün içinde çıkacaktır.Ardından yetişkinleri taraklardan fırçalayarak temizleyin ve tarakları koloniden çıkarın. Üç koloninin her birinden birer adet tarağı boş bir çekirdek kovan kutusuna yerleştirin. Bu şekilde iki kovan kutusu oluşturun ve bunları 33 °C sıcaklıkta, en az %60 bağıl nemde inkübe edin. Sonraki üç gün boyunca, her yeni kovan kutusundan yaklaşık 3.000 yeni çıkan işçi arı toplayın.Her koleksiyondaki arı sayısını yaklaşık olarak belirle

preparation-single-cohort-colonies-hormone-treatment-worker-honeybees

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz sistemik ilaç uygulama tarafından bal arıları iştahlı bir koku alma klima paradigma (Apis mellifera) bir davranış farmakoloji yöntemi nasıl uygulanacağını göstermektedir. Bu yöntem, soruşturma mekanizmalarının altında yatan basit ve güvenilir bir şekilde öğrenme ve bellek oluşumu sağlar.

Bal arısı burnumun Extension Tepki Klasik Koşullanma Davranış Farmakoloji ( Apis mellifera)

Bu protokol, biz aynı anda bal arıları iki gen (çift gen demonte) bastırmak iki strateji açıklar. Sonra bal arısı tat algısı çift gen demonte etkisini incelemek için burnumun uzantısı yanıt (PER) testi nasıl kullanılacağı mevcut.

Bal Arısı RNAi-aracılı Çift Gen demonte ve tat Algı Ölçüm (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

Bal arısı işçiler, yaşlanma sosyal davranışları ziyade kronolojik yaşına bağlıdır. Burada çok farklı yaşlanma desenleri ile işçi-tipleri elde edilmiş ve hücresel yaşlanma için analiz edilebilir göstermek.

, Yavaşlatıldı Hızlandırılmış ve Ters Honey Bee Model Yaşlanma ile Örneklerin Alınması

Bal arısı (Apis mellifera) için geliştirilen Proboscis Extension Response (PER) koşullandırma protokolü, birçok böcek türünde birkaç farklı öğrenme mekanizmasını incelemek için ekolojik olarak ilgili ve kolayca ölçülebilir bir araç sağlar.

Bir burnumun Extension Tepki Böcekler Davranış Plastisitesi incelenmesi için protokol: Basic, Biyomedikal Uygulama ve Tarımsal Araştırma

Bumble arı kovanlarını içinde mikrobiyal konsorsiyumlar zenginleştirmek ve polen arı larvaları için korumak. Laboratuvar ve deneyler, alan bazlı ile birlikte sonraki nesil sıralama kullanarak bu el yazması mantar ilacı artıkları polen microbiome ve koloni demografi, sonuçta koloni için önde gelen alter varsayımını sınamak için kullanılan iletişim kurallarını açıklar kaybı.

Ampirik, Metagenomic ve bilgisayar teknikleri mekanizma hangi mantar ilaçları uzlaşma arı sağlık ile aydınlatmak

Bu yazının serbest uçan arılar için basit non-invaziv yöntemler yanı sıra ölçülü arıların kesin lokalize tedavi izin daha invaziv varyantları da dahil olmak üzere, bal arıları için farmakolojik ajanların uygulanması için çeşitli protokoller açıklanır.

Ölçülü ve Serbest uçan Bal Arısı Nörofarmakolojik Manipülasyon,<em&gt; Apis mellifera</em

Burada sunduğumuz   Bir metot, bireysel bir bal arısı ve arı koloni hem pestisit kirlenmiş gıda yem için. Yöntem basit larva diyet in vivo besleme yoluyla ve aynı zamanda arı kovanı koloni doğal koşuluyla bağımsız bal arıları üzerinde pestisit etkisi değerlendirilmektedir.

Koloni Düzeyde Bireysel olan Bal Arısı Kalkınma Çevre Kimyasalların Etkisinin Değerlendirilmesi

Tarım ilaçları sublethal doz koloniler sadece periyodik veya görsel yöntemlerle tespit etmek zordur bir şekilde etkileyebilir. Toplam yetişkin arı kitle, ölçmek için yöntemleri damızlık ve gıda kaynakları yığınlar ve kovan parçaları tartı, kare fotoğraf çekimi ve sensörler, yükleme tarafından sağlanmaktadır. Veri analizi de ele.

Bal arıları üzerinde Sublethal pestisit pozlama koloni düzeyi etkilerinin izlenmesi

Çiçekli bitkiler mantar ilacı spreyler yalnız arı polen kaynaklı fungisit kalıntılarının yüksek konsantrasyonları maruz bırakabilir. Laboratuvar tabanlı deneyler vitroiçeren kullanarak-yetiştirilen arı larvaları, bu çalışmada mantar ilacı tedavi polen ana bilgisayar ve ev sahibi olmayan bitkilerden elde edilen tüketen etkileşimli etkilerini inceler.

Vitro Yalnız arı yetiştirme: larva Risk faktörleri değerlendirmek için bir araç

Burada iki protokolü tanımlıyoruz: birincisi, bal arısı pupalarını çıkarmak için bir yöntem de dahil olmak üzere, büyük miktarlarda bal arısı zarfsız virüs parçacıklarını yaymak, çıkarmak, saflaştırmak ve ölçmek ve ikincisi, yüksek oranda tekrarlanabilir, yüksek verimli bir kafes biyotahlili kullanarak viral enfeksiyonun etkilerini test etmek.

Bal Arılarının Oral Enfeksiyonu için Virüs Bakımından Zenginleştirilmiş İnokulum Hazırlanması (Apis mellifera)

Bu protokol, bal arısı kraliçelerini ve işçi bakıcılarını kontrollü, laboratuvar ortamında tarımsal kimyasallara maruz bırakmak ve ilgili yanıtlarını dikkatle izlemek için yöntemler belirleyerek tarımsal kimyasalların bal arısı (Apis mellifera) üremesini nasıl etkilediğinin anlaşılmasını geliştirmek için geliştirilmiştir.

ÇiftLeşme Bal Arısı Kraliçeleri için Tarımsal Kimyasal Riskin Değerlendirilmesi

Öğrenin tek kohort arı kolonileri hazırlama ve işçi arılarda gençlik hormonu ile ekdizon tedavisi uygulama yöntemini. Bu teknik, arı fizyolojisi ve davranışları arasındaki ilişkiyi incelemek için kullanılır.

Tek kohort Kolonileri ve İşçi arıların Hormon Tedavisi hazırlanması Rolü ve / veya Endokrin Sistemi Fizyolojisi İlişkili Analiz

Daha fazla video keşfet