Name: Kapak Silecek Area izlenim Sitoloji (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Öğrenin, göz kapağı kenarlarından epitel hücreleri toplama ve görüntüleme yöntemiyle oküler yüzeydeki sürtünme etkilerini değerlendirmeyi. Bu teknik, kuru göz ve kontakt lens rahatsızlıklarını anlamak için basit ve minimal invaziv bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Kapak sileceği konusunda içgörü ve uzmanlık sağlayan ve bu araştırmaya büyük ölçüde yardımcı olan meslektaşımız Dr. Jalaiah Varikooty'ye teşekkür ederiz.

Etik deyimi: Ön insan denekler hücreleri toplamak için, aydınlatılmış onam ve etik onayı alınmalıdır. 1. Leke hazırlayın NOT: Deney günü boya hazırlayın. <ol><li> 15 ml santrifüj tüpü içinde 2.5 ml fosfat tamponlu tuz (PBS) ile 5 ul Etidyum (veya 4 uM) ve 5 ul Calcein AM (veya 4 uM) ilave et; karıştırın. kullanılana kadar oda sıcaklığında hafif ve deposundan korumak için alüminyum folyo ile sarılır. </li></ol> 2. Toplama Hücreler <ol><li> kendi paketinden hücre kültürü ekler çıkarın ve her göz kapağı numune alınacak için etiket. kalıcı bir kalem kullanarak zar plastik tutucu tarafında hücre toplama Mark yönelimi. Davranış IC geçmesi bölgenin uygun sağlığını onaylamak için orta büyütme (yaklaşık 20X) Lambanın denetim yarık. </li><li> ea alt konjunktival kesesine topikal anestezi (% 0.5 proparacaine hidroklorür) bir damla dağıtınch göz ve gözleri korumak için katılımcıyı talimat bir dakika süreyle kapattı. </li><li> Evert üst göz kapağı ve kirpik tarafından yerinde tutun; kapak silecek alanı ile herhangi bir temastan kaçının. İsteğe bağlı: İkincil araştırmacı yardım Bu adımı gerçekleştirmek gerekebilir. </li><li> minimal basınç ile kapak silecek bölgenin orta kısmında dik olarak membran uygulayın. </li><li> 5 saniye - 3 yerine membran tutun. iletişim alanında saydam hale membran gözlemleyin. Bu noktada, hafifçe membran kaldırmak ve yerine geri &quot;çevirmek&quot; için katılımcının kapağını izin verir. </li><li> Derhal kurumasını önlemek için, örnek PBS bir damla uygulanır. Membran saydam dönecek ve bu kurumayı belirttiği gibi, herhangi bir zamanda opak dönmemelidir. İkincil araştırmacı örneklerinin işlenmesi (bölüm 3) ile hemen devam var. </li><li> konjonktiva bütünlüğünü sağlamak için nihai göz kontrolü yapıyoruz. oküler yağlayıcılar koyun ve katılımcıyı talimatanestetik etki kapalı giyer kadar gözlerini ovuşturarak önlemek için (yakl. 15 dk). </li></ol> 3. Örnek İşleme <ol><li> mikro-makas kullanılarak, dikey hücresi ile toplama ortasından ikiye (alt analizler her biri için bir adet yarım) membran kesti. plastik tutucu ayırmak için bir membran yarısının dış kenarı boyunca kesme; membran kendi üzerine kat etmemesini sağlamak da dahil olmak üzere membran üzerinde toplanan hücreleri ile etkileşimi önlemek. </li><li> tamamen sahibinden ayrılmakta önce cımbız kullanarak membran sabitleyin. % 95 (h / h) ihtiva eden bir 500 ul ihtiva eden ve (Bölüm 4.2) işleme önce 2 saat, en fazla 20 dakika içinde en az düzeltmek için terk etiketli 2 ml santrifüj tüpüne yer membran. </li><li> (Bölüm 3.2&#39;de anlatıldığı gibi) ve derhal bölüm 4.1 ile devam membran hemen ayrı ikinci yarısı. </li></ol> 4. Numune Boyama <ol><li> Immunocytochemical Boyama <ol><li> Dikkatle toplama yüzü aşağı bakacak şekilde 35 mm cam alt kültür çanak membran yerleştirin; Membran düz olduğundan emin olun. </li><li> Pipet zara bölüm 1 monte İmmünositokimyasal leke kompozisyon 20 ul. Örnek bukleler kadar, dikkatle kenarlarını bastırarak membran düzleştirmek için tek kullanımlık pipet uçları kullanın. Hücre toplama alanları ile temastan kaçının. </li><li> Yavaşça cam kapak slip ile membran kapak. Numunenin gereksiz hareketini önlemek. Kapaklı çanak Kapak ve kenarlarda laboratuvar film ile kapatın. çanak (üstte ve altta) ve numunenin görünürlük şeffaflık engellemeyin. laboratuar işaretleyici ile etiketleyin. </li><li> Hemen görüntüleme (bölüm 5.1) ile devam, sonra membran diğer yarısı sitolojik boyama ile devam etmek için bölüm 4.2 dönün. </li></ol></li><li> sitolojik Boyama <ol><li> Yavaş yavaş yavaş tüp u damıtılmış su, 500 ul ekleyerek membran hidratbölüm 3.4 tespiti için sed. pipet içine aspire içeriği defalarca sonra içeriğini kaldırmak, karıştırın. </li><li> damıtılmış su, 500 ul ekle. Birkaç saniye için ayakta Izin, sonra çıkarın. Alcian blue 500 ul ilave edin ve 3 dakika boyunca bırakın. leke çıkarın ve 3 ardışık 500 ul damıtılmış su durular veya sıvı berrak durular kadar gerçekleştirin. </li><li> Hematoksilen 1. leke 500 ul ekleyin ve 3 dakika bekletin. leke çıkarın ve üç ardışık 500 ul distile su durulama gerçekleştirmek veya sıvı berrak durular kadar. berrak bir sıvı aspire (bölüm 4.2.1 tersini) kurutmak. </li><li> Papanicolaou RG-6 leke 500 ul ekleyin ve 3 dakika bekletin. leke çıkarın ve bir 500 ul% 95 (v / v) etanol durulama gerçekleştirin. </li><li> Papanicolaou EA-65 boyasının 500 ul ekleyin ve 3 dakika bekletin. leke çıkarın ve 3 ardışık 500 ul% 95 yerine (v / v) etanol durular. </li><li> Tam üç ardışık 500 ul% 100 etanol durulama kullanarak kurutmak. TWE kullanarakezers, çözeltiden örneği kaldırmak; dokunaklı hücre toplama alanları kaçının. </li><li> cam slayt membran yerleştirin; Bu hücre toplama hattı sağlamak paralel veya görüntüleme sırasında daha kolay uyum için marjını slayt dik olarak ayrılmaktadır. </li><li> % 100 etanol bir damla uygulayın ve cam slip ile kaplayın. Hemen görüntüleme (bölüm 5.2) ile devam edin. </li></ol></li></ol> 5. Numune Görüntüleme <ol><li> Görüntüleme Floresan İmmünositokimyasal Renklendiriciler <ol><li> Bir görüntü elde etme yazılımı çalıştıran bir bilgisayara bağlı bir dijital renkli kamera ile donatılmış bir konfokal lazer tarama mikroskobu (CLSM) 11 veya floresan mikroskop 12, kullanın. örnekler kültür tabaklarına içinde bulunan kısmi olarak, bir inverted mikroskop gerekli olabilir. </li><li> Etidyum homodimer-1 (DNA&#39;nın mevcudiyetinde 528/617 nm örn / Em maxima) ve kalsein AM absorpsiyon ve emisyon spektrumu (494/517 nm e göre olan mikroskop 11,12 ayarlamax / Em maxima). </li><li> (Örneğin, 2.5X objektif) mikroskop düşük büyütme seçin ve dijital görüntüleme sistemini aktive; bilgisayar ekranında görüntülenen örnek gözlemlemek. </li><li> ilgi hücresel özellikleri için örnek olup olmadığını kontrol edin. </li><li> İstenilen mikroskop büyütme seçin ve görüntüleme yazılımı kullanarak görüntüleri kazanır. </li><li> Yerli mikroskop dosya biçiminde veya sıkıştırılmamış bir dosya biçiminde (örneğin, * .raw, * .tiff) ya dosyaları kaydedin. </li></ol></li><li> Görüntüleme Sitolojik Lekeleri <ol><li> Bir görüntü elde etme yazılımı çalıştıran bir bilgisayara bağlı bir dijital renkli kamera ile donatılmış herhangi bir filtre standart bir laboratuvar parlak alan mikroskobu, kullanın. </li><li> Yeri ve mikroskop sahnede (adım 4.2.8 itibaren) kilit cam slayt. gerektiği gibi tüm görüntüleme işlem boyunca,% 100 etanol ile örnek rehidrate. </li><li> (Örneğin, 2.5X objektif) mikroskop düşük büyütme seçin ve inci etkinleştirmekE dijital görüntüleme sistemi; bilgisayar ekranında görüntülenen örnek gözlemlemek. </li><li> Emin olun hücre toplama mikroskop sahne kontrolü X veya Y ekseni ya uyumludur. kapak kayma kaldırarak ve bir pipet veya cımbız kullanarak örnek çevirerek, gerekirse ayarlayın. </li><li> görüntüleme yazılımı, en düşük mikroskop büyütme ile tüm numunenin yakalama resim (ler) kullanma. </li><li> Orta mikroskop büyütme geçin (örneğin, 10 - 20X objektif) ve mikroskop ışık kaynağı ve yazılım görüntüleme parametrelerinin (pozlama, kontrast, beyaz dengesi, vs.) ayarlayabilir ve onların otomatik yazılım ölçüm devre dışı bırakın. ileride kullanmak için bu ayarları kaydedin. </li><li> Tarama (örneğin, sol üst ve hücre koleksiyonu sağ alt köşelerinde) başlangıç ​​ve bitiş noktalarını belirleyin. </li><li> görüntüleme yazılımı, başlangıç ​​ve bitiş noktaları içinde tüm hücre toplama alanının yakalama resim (ler) kullanma. % 20 yan-yana ve üst-to-alt üst üste betw sağlamaktüm bitişik görüntüleri een. </li><li> Yerli mikroskop dosya biçimini veya sıkıştırılmamış dosya biçimi (örneğin, * .raw, * .tiff) kullanarak dosyaları kaydedin. </li><li> (Örneğin, Adobe Photoshop Elements) seçim otomatik dikiş yazılımını kullanarak nihai panoramik görüntü oluşturun. Son görüntüde otomatik dikiş doğruluğunu onaylamak için adım 5.2.5 alınan referans görüntüleri) kullanın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Barbato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+variation+in+spontaneous+eye-blink+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Psychiatry+Res%22%5BJournal%5D)">Diurnal variation in spontaneous eye-blink rate.</a> Psychiatry Res. 93, 145-151 (2000).</li>
<li>Korb, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lid-Wiper+Epitheliopathy+and+Dry-Eye+Symptoms+in+Contact+Lens+Wearers%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%26+Contact+Lens%22%5BJournal%5D)">Lid-Wiper Epitheliopathy and Dry-Eye Symptoms in Contact Lens Wearers.</a> Eye & Contact Lens. 28, 211-216 (2002).</li>
<li>Dumbleton, K., Woods, C. A., Jones, L. W., Fonn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+contemporary+contact+lenses+on+contact+lens+discontinuation%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%26+Contact+Lens%22%5BJournal%5D)">The impact of contemporary contact lenses on contact lens discontinuation.</a> Eye & Contact Lens. 39, 93-99 (2013).</li>
<li>Roba, M., Duncan, E., Hill, G., Spencer, N., Tosatti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Friction+measurements+on+contact+lenses+in+their+operating+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Tribol+Lett%22%5BJournal%5D)">Friction measurements on contact lenses in their operating environment.</a> Tribol Lett. 44, 387-397 (2011).</li>
<li>Sickenberger, W., Pult, H., Sickenberger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIPCOF+and+contact+lens+wearers%3A+a+new+tool+to+forecast+subjective+dryness+and+degree+of+comfort+of+contact+lens+wearers%5BTitle%5D)+AND+%22Contactologia%22%5BJournal%5D)">LIPCOF and contact lens wearers: a new tool to forecast subjective dryness and degree of comfort of contact lens wearers.</a> Contactologia. 22, 74-79 (2000).</li>
<li>Pult, H., Purslow, C., Berry, M., Murphy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+tests+for+successful+contact+lens+wear%3A+relationship+and+predictive+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Optom+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical tests for successful contact lens wear: relationship and predictive potential.</a> Optom Vis Sci. 85, E924-E929 (2008).</li>
<li>Doughty, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+features+of+cells+along+Marx%27s+line+of+the+marginal+conjunctiva+of+the+human+eyelid%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Optom%22%5BJournal%5D)">Morphological features of cells along Marx's line of the marginal conjunctiva of the human eyelid.</a> Clin Exp Optom. 96, 76-84 (2013).</li>
<li>Jalbert, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+human+lid+margin+epithelium+using+impression+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalm%22%5BJournal%5D)">Assessing the human lid margin epithelium using impression cytology.</a> Acta Ophthalm. 90, e547-e552 (2012).</li>
<li>Nelson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impression+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Impression cytology.</a> Cornea. 7, 71-81 (1988).</li>
<li>Egbert, P. R., Lauber, S., Maurice, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+conjunctival+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A simple conjunctival biopsy.</a> Am J Ophthalmol. 84, 798-801 (1977).</li>
<li>Wilson, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWilson%2C+T+%22Confocal+microscopy%22">Confocal microscopy</a>. , Academic Press. London. 1-64 (1990).</li>
<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248, 73-76 (1990).</li>
<li>Tomlins, P., Roy, P., Curnow, J., Rauz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+EyePRIM+Device+for+Conjunctival+Impression+for+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalm+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Assessment of the EyePRIM Device for Conjunctival Impression for Flow Cytometry.</a> Invest Ophthalm Vis Sci. 54, 5430-5430 (2013).</li>
<li>Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lid+margin+is+an+underestimated+structure+for+preservation+of+ocular+surface+health+and+development+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Proj+Dry+Eye+Syn%22%5BJournal%5D)">The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease.</a> Res Proj Dry Eye Syn. 45, 108-122 (2010).</li>
<li>Knop, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lid+wiper+and+muco-cutaneous+junction+anatomy+of+the+human+eyelid+margins%3A+an+in+vivo+confocal+and+histological+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">The lid wiper and muco-cutaneous junction anatomy of the human eyelid margins: an in vivo confocal and histological study.</a> J Anat. 218, 449-461 (2011).</li>
<li>Christensen, J. A., Skaarland, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+and+cell+area+measurements+in+the+cytological+evaluation+of+pleural+effusions%3A+a+study+of+subjective+assessments+and+morphometric+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Diag+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Nuclear and cell area measurements in the cytological evaluation of pleural effusions: a study of subjective assessments and morphometric measurements.</a> Diag Cytopathol. 3, 50-54 (1987).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak ilgili bir finansmanı veya çatışması yoktur.

Gösterim sitoloji genellikle karışık selüloz ester membranlar kullanılarak, konjonktivada üzerinde gerçekleştirilir. Numuneler, dökme malzeme levhalar boyutta kesilir sterilize forseps kullanılarak konjunktival yüzeye uygulanan ve kaldırılır. Aynı membran malzeme kullanarak, bir piston kontrollü IC cihaz son zamanlarda uygulamalar 13 arasında tutarlı bir baskı bulber konjonktiva yüzey geometrisini maç ve korumak için tasarlanmıştır. Bu yaklaşımlar bölge silecek dar, belirgin kavisli kapağı verimsizdir <strong...

2 mm dar konjonktiva bölge göz küre karşı - insan üst göz kapağı sadece 1 ile 10,000 yanıp her gün yaklaşık 1 yürütür. Yanıp sırasında silme hareketi nedeniyle, göz kapağı kenarında bu bölümü &quot;kapak silecek&quot; bölgesini 2 olarak adlandırılmıştır. Sürtünme yüzünden dünya üzerinde silme kapak, alışılmış kırpma sırasında bu bölgede yüksek olduğu varsayılmaktadır. Bu göz konfor önemli bir rol oynayabilir. Kontakt lens özellikle deneyim göz rahatsızlık kullananlar ve bu mercek 3 giymek durdurması için birincil nedenlerinden biridir. Bir kontakt lens göze yerleştirildiğinde, lens materyali ve göz yüzeyi arasındaki sürtünme katsayısı 4 değiştirme gösterilmiştir. Kuruluk belirtileri bu değiştirilmiş sürtünme 2,5,6 ilişkili olabileceğini gösteren kanıtlar vardır. Bu ilişki aynı zamanda klinik olarak gözlemlenebilir olayların yansıması olabilir, özellikle kapak wiepitelyopati (LWE) da denilen üst kapak marjı boyama (ULMS) 6 başına. LWE oküler irritasyon erken bir belirtisi ve kuru göz hastalığı için potansiyel bir belirleyicisidir. Bu görülen üst ve alt kapak kenarında bölgelerinin önemli bir boyama ile ölçülür. Bu derecelendirme sistemi 2 ve klinik geçerliliği (yani öznel belirtiler ile korelasyon) tartışma halen iken, göz rahatsızlığı, hem doktorlar ve bilim adamları için bir bilmece kalır ve en önemlisi, hastalar için bir rahatsızlık. To-date, küçük kapak silecek alanının 7 (alt), hücresel anatomi ve fizyoloji klinik-alakalı varyasyonları hakkında bilinmektedir ve sadece tek bir rapor sitolojik yöntemler 8 kullanmaktadır. Gösterim sitoloji (IC) bir zar 9,10 uygulanması ile bulber veya tarsal konjonktiva epitel yüzeyinden hücreleri toplamak için 40 yıldır istihdam edilmiştir. çıkarılması üzerine, yapışan hücreler c geçmesiytological boyama ve mikroskopik görüntü. Nedeniyle kapak silecek bölgedeki anatomik ve hücresel farklılıkları, bu teknik optimizasyon gerektirir.

<table><tbody><tr><td>Alcian Mavisi, %3'te %1 Asetik Asit</td><td>Sigma</td><td>B8438-250ML</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen, Solungaç 1</td><td>Sigma</td><td>GHS116-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Papanicolaou boyası, OG-6</td><td>Sigma</td><td>HT40116-500 ml</td><td></td></tr><tr><td>Papanicolaou boyası, Modifiye EA</td><td>Sigma</td><td>HT40232-1L</td><td></td></tr><tr><td>Canlı/Ölü Canlılık/Sitotoksisite Kiti</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>L-3224</td><td>etidyum homodimer-1 ve Calcein boyaları</td></tr><tr><td>Alcaine (% 0.5 proparakain hidroklorür)</td> içerir <td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millicell Hücre Kültürü Eki, 12&nbsp; mm, hidrofilik PTFE, 0.4&nbsp; &mikro; m</td><td>EMD Kırlangıç</td><td>PICM01250&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Cam Alt Tabaklar</td><td>MatTek Corporation</td><td>P35G-0-20-C</td><td></td></tr></tbody></table>

kapak silecek area izlenim sitoloji

Impression Cytology of the Lid Wiper Area

İç göz kapağının kapak sileceği (LW) alanının hücresel anatomisi hakkında az sayıda rapor mevcuttur ve sadece bir rapor sitolojik yöntemlerden yararlanır. Bu çalışmada, izlenim sitolojisi (IC) kullanılarak LW bölgesinden hücrelerin toplanması, boyanması ve görüntülenmesi için bir yöntemin optimizasyonu anlatılmıştır. Hücreler, hidrofilik politetrafloroetilen (PTFE) membranlar kullanılarak insan deneklerin üst göz kapağının iç yüzeyinden toplanır ve kadeh hücrelerinin, müsinlerin, hücre çekirdeklerinin ve çeşitli derecelerde ön ve para-keratinizasyonun varlığını ortaya çıkarmak için sitolojik boyalarla boyanır. İmmünositokimyasal boyalar, konfokal taramalı lazer mikroskobu kullanılarak hücre esteraz aktivitesini ve bozulmuş hücre zarlarını gösterir. Her numune için 100'e kadar mikroskobik dijital görüntü yakalanır ve tüm IC aralığının yüksek çözünürlüklü, büyük ölçekli bir görüntüsüne birleştirilir. LW alanındaki hücresel morfolojileri ve metabolik aktiviteyi tanımlamak için uygun, daha önce bildirilenden daha yüksek bir IC duyarlılığı gösteriyoruz. Bildiğimiz kadarıyla, bu floresan boya seçimi, LW IC membranlarını görüntülemek için ilk kez kullanıldı. Bu protokol, kontakt lens kullanıcılarının veya kuru göz veya kapak silecek epiteliyopatisi olan hastaların hücresel özelliklerinin değerlendirilmesi gibi LW alanının belgelenmemiş ayrıntılarını ortaya çıkarmak için gelecekteki çalışmalarda etkili olacaktır.

plastik tutucu üzerine yayılmış hücre kültürü membran kapak silecek konjonktiva epitel hücrelerinin el toplanması için uygun bir araçtır. Bu yöntem genellikle hazırlamak ve IC membranlar işlemek için kullanılan ek sterilize aletler için gereğini ortadan kaldırır. 1 hücre kültürü eki kullanarak kapak silecek alanının IC tasvir Şekil. Biz yeni bir moda kapak silecek alanından epitel hücreleri karakterize etmek için birbirini tamamlayan iki farklı boyama pr...

İnsan deneklerin iç göz kapağı kenarının konjonktivasından hücreleri topladık, boyadık ve görüntüledik. Bu yöntem, hücre morfolojisini ve metabolik aktiviteyi karakterize ederek, kuru göz ve oküler yüzeyler arasındaki sürtünmenin oküler rahatsızlığı algılamada oynayabileceği rol hakkındaki anlayışımızı daha da geliştirebilir.

Kapak Silecek Area izlenim Sitoloji

Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The ...

Bu prosedürün genel amacı, oküler yüzeydeki sürtünmenin etkilerini değerlendirmek için göz kapağı kenarlarından epitel hücreleri toplamak, bunları işlemek ve görselleştirmektir. Bu yöntem, özellikle kuru göz ve kontak lensle ilişkili rahatsızlığı olan hastalarda, oküler rahatsızlığa dair temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajları; nispeten basit, hızlı, minimal invaziv olması ve oküler epitel hücreleri üzerindeki sürtünme etkilerini değerlendirmek için kullanılabilmesidir.Membran insertlerini paketlerinden çıkararak başlayın. Kalıcı bir markör kullanarak, her bir örnek alınacak göz kapağı için insertleri etiketleyin ve membran plastik tutucusunun yan tarafına hücre toplama yönünü işaretleyin. Ardından, her gözün alt konjonktiva kesesine bir damla topikal anestezik damlatın ve katılımcıya her iki gözünü bir dakika boyunca kapalı tutmasını söyleyin.Ardından, göz kapağı kenarına temas etmekten kaçınarak, her bir üst göz kapağını kirpiklerinden tutarak dışa doğru kıvırın ve ekim membranını göz kapağı silici bölgesinin merkezine dik bir şekilde hafifçe uygulayın. Üç ila beş saniye sonra membranı dikkatlice çıkarın ve göz kapağının eski konumuna dönme

impression-cytology-of-the-lid-wiper-area

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Burada açıklanan protokol, tam montajlı bir retinal preparatın yapısal değerlendirmesi içindir. Bu, doku diseksiyonunun tanımlarını, hidrofilize politetrafloroetilen (PTFE) membran ekine montajı, floresan işaretleyicilerle bolus yüklemesini ve hücresel ve sinaptik bileşenlerin immünohistokimyasal analizi için karbodiimid ve paraformaldehit ile fiksasyonun karşılaştırılmasını içerir.

Görüntüleme ve İmmünhistokimyanın için Retina Wholemount Hazırlık için optimize edilmiş Protokolü

Yüksek çözünürlüklü diferansiyel girişim kontrast (DIC) mikroskopi kullanılarak, fare beyin ventriküller içinde yer alan hareketli ependim kirpikler dayak bir ex vivo gözlem canlı görüntüleme ile gösterilmiştir. teknik, özel bir siliyer atan frekansının kayıt ve dayak açısı aynı zamanda bunların hücre içi kalsiyum salınım ilerleme hızı özellikleri sağlar.

Fare Beyin lateral ventrikül Ependimal Cilia Canlı Görüntüleme

Bu çalışmada, ayrıntılı bir ışık mikroskobik tekniği, ultrastrüktürel analiz için bir elektron mikroskobik yöntemle birlikte CPEC kirpiklerin ex vivo hareketinin gerçek zamanlı gözlemi ve analizi için optimize edilmiştir.

Koroid Pleksus Epitel Hücreleri Silier Hareketi Gözlem<em&gt; Ex Vivo</em

Maruz kalan normal oküler yüzey kornea ve konjonktivadan oluşur. Konjunktiva içerisinde epitel hücreleri, goblet hücreleri ve immün hücreler bulunur. Burada, non-invaziv bir izlenim sitolojisi yöntemi, konjonktivadaki bağışıklık hücrelerini analiz etmek için bir impresyon sitolojisi cihazı ve akış sitometrisi kullanılarak tarif edilmiştir.

Conjunktiva&#39;dan Hücreleri İzole Etmek ve Fenotip Hedeflemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Yöntem

PCD tanısı için başarılı ve yüksek kaliteli siliyer fonksiyonel analizi garanti etmek için, solunum epitel örneklemesi ve işlenmesi için hassas ve dikkatli bir yöntem şarttır. COVID-19 pandemisi sırasında PCD tanı hizmeti vermeye devam etmek için, siliyer videomikroskopi protokolü uygun enfeksiyon kontrol önlemlerini içerecek şekilde güncellenmiştir.

Dijital Yüksek Hızlı Siliyer Videomikroskopi Kullanarak Burun Fırçalama Örneklemesi ve İşleme – COVID-19 Pandemisine Adaptasyon

Oküler yüzey iltihabı oküler yüzey dokularına zarar verir ve gözün hayati fonksiyonlarını tehlikeye atar. Mevcut protokol, oküler inflamasyonu indüklemek ve Meibomian bezi disfonksiyonunun (MGD) bir fare modelinde tehlikeye atılmış dokuları toplamak için bir yöntemi açıklamaktadır.

Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması

Bu yazıda kemirgenlerde oküler mikrodiseksiyon için bir protokol sunulmaktadır. İşlem, göz küresinin niktitasyon zarı (yani üçüncü göz kapağı) ile birlikte enükleasyonunu içerir. Bunu daha sonra arka ve ön göz kapaklarının ayrılması izler.

Kemirgen Gözün Mikrodiseksiyonu

Bu protokol, karmaşık hücreden hücreye interdigitasyonları ve membran mimarisini incelemek için periferik, olgun ve nükleer göz merceği fiber hücrelerini immünofloresan boyama için hazırlama yöntemlerini açıklar.

Göz Merceğinin Korteks ve Çekirdeğinden Demetlerin ve Tek Fiber Hücrelerin Hazırlanması ve İmmünofloresan Boyanması

Mevcut protokoller, oküler lensteki periferik yapıların görüntü niceleme yöntemleriyle görselleştirilmesi için yeni tam montajlı görüntülemeyi tanımlamaktadır. Bu protokoller, lens mikro ölçekli yapıları ile lens gelişimi/işlevi arasındaki ilişkiyi daha iyi anlamak için yapılan çalışmalarda kullanılabilir.

Periferik lens yapısını, hücre morfolojisini ve organizasyonunu görselleştirmek ve ölçmek için tam montajlı görüntüleme

Burada, mukoza zarı pemfigoidini tanımlamak için konjonktival biyopsinin alınması ve işlenmesi için bir protokol sunuyoruz.

Mukoza Membranı Pemfigoid Tanısı için Konjonktival Biyopsi ve Direkt İmmünofloresan Tekniği

Bu makale, kuru göz tanı ve tedavisinde in vivo konfokal mikroskopinin işleyişini ve etkisini göstermekte ve gelecekteki araştırmalara temel oluşturmak için in vivo konfokal mikroskopinin uygulama ve sonuçlarını araştırmaktadır.

İn vivo Kuru Göz Tanı ve Tedavisinde Konfokal Mikroskopi: Görüntüleme Protokolleri ve Yorumlamaya Odaklanma

Öğrenin, göz kapağı kenarlarından epitel hücreleri toplama ve görüntüleme yöntemiyle oküler yüzeydeki sürtünme etkilerini değerlendirmeyi. Bu teknik, kuru göz ve kontakt lens rahatsızlıklarını anlamak için basit ve minimal invaziv bir yaklaşım sunar.

Kapak Silecek Area izlenim Sitoloji

Daha fazla video keşfet