Name: Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Öğrenin farelerde orta serebral arter tıkanıklığı ve reperfüzyon modelini inme araştırmaları için. Longa yöntemi yüksek sağkalım oranı ve güvenilir iskemi üretimi sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü, Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü (NIH ve NHLBI; HL125572-01A1) ve LSUHSC-S, F.N.E. Gavins'e başlangıç fonu.

video bildirilen Bu protokol ve deneyler LSUHSC-S Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve NIH kurallarına uygundur bulundu. Not: Erkek C57BL / 25 ağırlığında 6 fareleri - 29 g Bu çalışmada kullanılmıştır. farenin tek havalandırılmış kafeslerde, 12 saat aydınlık / karanlık döngüsü altında, suya serbest erişim ile standart bir yiyecek topağı diyet ile beslendi. Prosedür steril teknikler (örneğin, steril eldiven, steril aletleri) kullanılarak steril koşullar altında yapılacaktır. 1. Ön cerrahi Hazırlıklar <ol><li> Ketamin (150 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) bir kombinasyonu kullanılarak anestezi neden intraperitonal (ip) enjekte edilmiştir. anestezi sağlanır kez 5 dakika ve her 10 dakikada - başlangıçta ayak tutam her 3 ile anestezi derinliği izleyin. hayvan anestezi altında iken, kuruluğunu önlemek için steril göz merhem yönetmek. ketamin başlangıç ​​dozu / xylazine genellikle ab sürer30-40 dakika dışarı. ayak tutam hayvanın tepki ile teyit edildiği, gerektiğinde ilave bir doz olarak uygulanabilir. </li><li> sıcaklık ayarlı ısı mat bir yatar pozisyonda fareler yerleştirin ve bir rektal sonda kullanılarak doğrulanmış olan 36.5 ± 0.1 ° C, vücut ısısını korumak. </li><li> boyun Tıraş ve% 70 etil alkol ile cilt dezenfekte edin. </li></ol> MCA 2. Oklüzyon (Şekil 1) <ol><li> İris düz makas kullanarak bir orta hat boyun kesi yapmak ve damarları açığa çıkarmak için yumuşak dokuları (retraktörler kullanarak) geri çekin. </li><li> vagus siniri zarar vermeden Dumont forseps kullanılarak çevreleyen dokudan CCA ve ECA teşrih. </li><li> 6-0 ipek kullanılarak CCA etrafında gevşek bir düğüm atarak geçici bir dikiş yapın. </li><li> ECA etrafında kalıcı bir dikiş ve sıkıca damarları (CCA çatallanma distal) bağlanarak kendisine uzanan küçük gemilere olun. </li><li> Bir dikiş aro yapınCCA çatallanma ECA proksimal und. </li><li> internal karotis arter (ICA) ve pterygopalatine arter (KİK) etrafında bir mikrovasküler klip yerleştirin. </li><li> yaylı makas diseksiyon mikro kullanarak ECA küçük bir kesi yapmak ve 180 mikron silikon uçlu monofilament yerleştirin. filamanın kolay manipülasyon için mümkün olduğunca kalıcı sütür kesme yakın olun. </li><li> takılı filament ile ECA etrafında geçici sütür sıkın ve mikrovasküler klibi çıkarın. </li><li> Kalıcı, distal sütür ve yaylı makas diseksiyon mikro kullanarak filamanın giriş noktası arasındaki ECA kesti. </li><li> MCA içinde - (CCA çatallanma ötesinde 10 mikron. Yaklaşık 9) direnç hissedene kadar ICA aracılığıyla filamanın Kılavuzu. NOT: filamanın çoğunluğu hala görünür iken çok fazla direnç hissedilir durumunda, Filament PPA girmiş olabilir. Bu durumda, yavaşça irin, çatallanma geri filamanın çekmeileri ICA kullanarak Dumont forseps içine h ve ICA görüntülenebilir kadar filamanın ilerlemek. </li></ol> 3. reperfüzyon <ol><li> 30 dakikalık oklüzyon döneminden sonra, yavaşça geri çekerek Dumont forseps kullanarak filamanın kaldırmak ve ECA açık ucundan etrafında dikiş sabitleyin. </li><li> dikkatle CCA ile sürdürülür Dumont forseps ve kan akışını kullanarak bitişik harfleri gevşeterek CCA etrafında geçici dikiş çıkarın. </li><li> Sürekli cerrahi sütür ile kesi kapatın. cilt kapatılması ya sürekli veya kesintili dikiş ile gerçekleştirilebilir. Cilt zımba da kabul edilebilir bir yöntemdir. </li><li> hacim ikmal olarak ve analjezik karprofen ile tuzlu subkutan 1 ml ile fareler enjekte (5 mg / Kg, sc) cerrahi prosedür, ek ağrı kesici geri hunched dahil gerekli işaret İşaretler, ungroomed ceket ağrı ve rahatsızlık giderilmesi için, azalmış aktivite anormalpostür ve iştah azalması. </li><li> sıcaklık kontrolörü kullanarak düzenlenmiş bir ısı lambası kullanarak ısıtılmış 30 ° C kafeste anestezi kurtarma boyunca fareler gözlemlemek ve yeme teşvik etmek için kafesin katta bir petri püresi chow yerleştirin. fareler reperfüzyon döneminde kafes başına bir yer olacaktır. </li></ol> 4. Sham Cerrahisi <ol><li> monofilament ekleme olmadan aynı prosedüre tabi fareler. </li></ol> 5. Post-operatif nörolojik değerlere göre (Tablo 1, Şekil 2) <ol><li> Nörolojik Genel değerlendiren 18 maddelik skorlama sistemi kullanılarak uygun reperfüzyon döneminden sonra fareler değerlendirmek; Motor; Duyusal; Propriyosepsiyon. Daha yüksek nörolojik puan nörolojik fonksiyonu azalmış karşılık gelir. NOT: yürümek tepkisiz ve yapamaz değerlendirilecektir Fareler ötenazi olacaktır. insani ötanazi için diğer kriterler% 20&#39;den fazla bir ağırlık kaybı içerir, solunum diCerrahi alanı çevresinde stres ve enfeksiyon. Bir CO2 odası servikal dislokasyon ya torakotomi olacak ölüm onaylamak için ötanazi ve fiziksel yöntem için kullanılır. </li></ol> Ölçüm Beyin Enfarktüs Hacminin 6. (Şekil 3) <ol><li> anestezi sağlandıktan sonra 5 dakika ve her 10 dakika - ketamin (150 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg), ilk ayak tutam her 3 ile anestezi ip monitör derinliği enjekte bir kombinasyonu kullanılarak anesteziye neden. </li><li> Bir yatar pozisyonda fareler yerleştirin ve iris düz makas kullanarak periton ardından boyun karın cildi kesti. </li><li> Dumont forseps kullanarak sternum yukarı kaldırın ve kalp maruz kaburga kesti. </li><li> kalbi açığa sol ve hemostat iki çift kullanarak göğüs sağ tarafını açın. </li><li> Sol ventrikül içine bir 5 ml şırıngaya bağlanmış bir 26 G iğne takın ve sağ atriyum kesilmiş. Oda sıcaklığı normal serum fizyolojik veya Phospa serpmekte tamponlu tuz (PBS) Sıvı berrak hale gelinceye kadar (çoğunlukla 3-5 dakika). </li><li> iris düz makas ve Dumont forseps kullanarak dikkatli bir şekilde beyin uzak kafatası çıkarın. </li><li> koku ampuller ve beyin matriks içinde uyacak şekilde bir jilet kullanarak beyincik kesti. Hatta segmentler halinde beyin dilim için bu matrisi kullanın. serin doku tutmak için kullanımdan önce matrisi Chill. matriks içine beyin yerleştirin ve buz üzerinde ayarlayın. </li><li> İki Jilet kullanarak 2 mm koronal kesimleri içine beyin dilimleyin. üstten 2 mm başlayan bir jilet kullanarak ilk kesim olun ve yerine bu jilet bırakın. İlk arkasında kesilmiş başka bir 2 mm yapın. Ekli doku ile ilk jilet çıkarın. Tüm doku dilimlenmiş kadar bu işlemi tekrarlayın. NOT: 4 olmalıdır - Bittiğinde 5 segmentleri. </li><li> Daha sonra sığ bir su banyosu içine yerleştirilir% 2 2,3,5-triphenyltetrazalium klorür (TTC) içeren 24 oyuklu plaka segmentleri yerleştirin20 dakika T 37 ° C. Tek bir kuyuya her kesimi yerleştirme onlar kesildi sırayla onları tutmaya yardımcı olur. TTC çözüm tamamen doku segmentlerini kapsayan emin olun. 10 dakika tüm dilimleri üzerinde açtıktan sonra. </li><li> Yeni 24-kuyulu plakanın kuyularına% 10 formalin küçük bir miktar ve kesilmiş sırayla Bu plaka segmentleri aktarın. </li><li> (NIH 1.57 Görüntü Yazılımı) 6 bilgisayara segmentleri tarayın ve ImageJ analiz yazılımı kullanılarak tüm beyin dilim 6 bir yüzdesi olarak infarkt analiz. <ol><li> Bir alan ölçümü oluşturmak için enfarkte alanı özetlemektedir. Sonraki alanı belirlemek için tüm taraf yarımküre ölçün. kontralateral yarımkürenin alanına göre infarkt alanını bölün ve enfarktüs hacmini belirlemek için 100 ile çarpın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2014+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129 (3), e28-e292 (2014).</li>
<li>Marks, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patients+with+acute+stroke+trated+with+intravenous+tPS+3-6+hours+after+stroke+onset%3A+correlations+between+MR+angiography+findings+and+perfusion-+and+diffusion-weighted+imaging+in+the+DEFUSE+study%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Patients with acute stroke trated with intravenous tPS 3-6 hours after stroke onset: correlations between MR angiography findings and perfusion- and diffusion-weighted imaging in the DEFUSE study.</a> Radiology. 249 (2), 614-623 (2008).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%2C+I%3A+a+new+experimnetal+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimnetal model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. (8), 1-8 (1986).</li>
<li>Smith, H. K., Russell, J. M., Granger, D. N., Gavins, F. N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+differences+between+two+classical+surgical+approaches+for+middle+cerebral+artery+occlusion-induced+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Meth%22%5BJournal%5D)">Critical differences between two classical surgical approaches for middle cerebral artery occlusion-induced stroke in mice.</a> J Neurosci Meth. 249, 99-105 (2015).</li>
<li>Gavins, F. N., Dalli, J., Flower, R. J., Granger, D. N., Perretti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+annexin+1+counter-regulatory+circuit+affords+protection+in+the+mouse+brain+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Activation of the annexin 1 counter-regulatory circuit affords protection in the mouse brain microcirculation.</a> FASEB J. 21 (8), 1751-1758 (2007).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atorvastain+induction+of+VEGF+and+BDNF+promotes+brain+plasticity+after+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Atorvastain induction of VEGF and BDNF promotes brain plasticity after stroke in mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 25 (2), 281-290 (2005).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrastriatal+transplantation+of+bone+marrow+nonhematopoietic+cells+improves+functional+recovery+after+stroke+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Intrastriatal transplantation of bone marrow nonhematopoietic cells improves functional recovery after stroke in adult mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 20 (9), 1311-1319 (2000).</li>
<li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+systemic+immune+alterations+after+murine+focal+ischemia%3B+the+immunodepression+versus+immunomodulation%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The spectrum of systemic immune alterations after murine focal ischemia; the immunodepression versus immunomodulation.</a> Stroke. 40 (8), 2849-2858 (2009).</li>
<li>Beckmann, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+magnetic+resonance+angiography+non-invasively+reveals+mouse+strain+differences+in+the+cerebrovascular+anatomy+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Magn+Reson+Med%22%5BJournal%5D)">High resolution magnetic resonance angiography non-invasively reveals mouse strain differences in the cerebrovascular anatomy in vivo.</a> Magn Reson Med. 44 (2), 252-258 (2000).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13 (4), 683-692 (1993).</li>
<li>Burk, J., Burggraf, D., Vosko, M., Dichgans, M., Hamann, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+cerebral+microvasculature+after+moderate+hypothermia+following+experimental+focal+cerebral+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Protection of cerebral microvasculature after moderate hypothermia following experimental focal cerebral ischemia in mice.</a> Brain Res. (1226), 248-255 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthemia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthemia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Shin, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Richter, S. H., Garner, J. P., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+standardization%3A+cure+or+cause+of+poor+reproducibility+in+animal+experiments%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Environmental standardization: cure or cause of poor reproducibility in animal experiments?</a> Nat Methods. 6 (4), 257-261 (2009).</li>
<li>Holloway, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+MC1+and+MC3+receptors+provide+protection+from+cerebral+ischemia-reperfusion-induced+neutrophil+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Both MC1 and MC3 receptors provide protection from cerebral ischemia-reperfusion-induced neutrophil recruitment.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35, (2015).</li>
<li>Vandeputte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+inflammatory+response+in+a+photothrombotic+stroke+model+by+MRI%3A+implications+for+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the inflammatory response in a photothrombotic stroke model by MRI: implications for stem cell transplantation.</a> Mol Imaging Biol. 13 (4), 663-671 (2010).</li>
<li>Iwae, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell-mediated+deterioration+and+repair+of+the+nervous+system+after+traumatic+brain+injury+in+a+rat+model+as+assessed+by+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Glial cell-mediated deterioration and repair of the nervous system after traumatic brain injury in a rat model as assessed by positron emission tomography.</a> J Neurotrauma. 27 (8), 1463-1475 (2010).</li>
<li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> J Neurosci Methods. 11 (1), 47-60 (1984).</li>
<li>Mouzon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+a+mouse+model+produces+learning+and+memory+deficits+accompanied+by+histological+changes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Repetitive mild traumatic brain injury in a mouse model produces learning and memory deficits accompanied by histological changes.</a> J Neurotrauma. 29 (18), 2761-2773 (2012).</li>
<li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+%CE%B1-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human α-synuclein.</a> J Neurosci. 24 (42), 9434-9440 (2004).</li>
<li>Sedelis, M., Schwarting, R. K. W., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Behav Brain Res. 125 (1-2), 109-125 (2001).</li>
<li>Toon, L., Silva, M., D'Hooge, R., Aerts, J. M., Berckmans, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+gait+analysis+in+the+open-field+test+for+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Res+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated gait analysis in the open-field test for laboratory mice.</a> Behav Res Methods. 41 (1), 148-153 (2009).</li>
<li>Lubjuhn, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+testing+in+a+mouse+stroke+model+induced+by+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional testing in a mouse stroke model induced by occlusion of the distal middle cerebral artery.</a> J Neurosci Methods. 184 (1), 95-103 (2009).</li>
<li>Bouët, V., Freret, T., Toutain, J., Divoux, D., Boulouard, M., Schumann-Bard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+and+cognitive+deficits+after+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor and cognitive deficits after transient middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Exp Neurol. 203 (2), 555-567 (2007).</li>
<li>Freret, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+deficits+after+distal+focal+cerebral+ischemia+in+mice%3A+usefulness+of+adhesive+removal+test%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: usefulness of adhesive removal test.</a> Behav Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).</li>
<li>Zhan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficient+neuron-microglia+signaling+results+in+impaired+functional+brain+connectivity+and+social+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deficient neuron-microglia signaling results in impaired functional brain connectivity and social behavior.</a> Nature Neurosci. 17, 400-406 (2013).</li>
<li>Balkaya, M., Kröber, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow. 33, 330-338 (2012).</li>
<li>Wiessner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-nogo-a+antibody+infusion+24+hours+after+experimental+stroke+imporved+behavioral+outcome+and+corticospinal+plasticity+in+normotensive+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Anti-nogo-a antibody infusion 24 hours after experimental stroke imporved behavioral outcome and corticospinal plasticity in normotensive and spontaneously hypertensive rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 23, 154-165 (2003).</li>
<li>Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessments+in+the+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Transl+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Functional assessments in the rodent stroke model.</a> Exp Transl Stroke Med. 2 (13), (2010).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

20 yıl önce anlayışı bu yana, bir filamanın sokulmasını kapsayan insan inme için MCAO modeli çalışmaları çok sayıda kullanılmıştır. Bunun nedeni o inme (yani, iskemik inme) en sık görülen klinik ne taklit gerçeği esas olarak. striatum serebral korteks daha iskemi karşı daha duyarlıdır ve bu nedenle, iskemik sürenin uzunluğu striatum ve dorsolateral korteks hem de etkilenmiş, ya da sadece striatum olup olmayacağı çevirmek olacaktır. Hem enfarktüs ve reperfüzyon süreleri buna göre değiştirilebilir ve bu araştırma...

İnme bir kişi hastalıktan her 4 dakikada bir ölen ile, dünya çapında ölüm beşinci önde gelen nedenidir. 800.000 üzerinde Amerikalılar sadece hasta için yıkıcı olmayan bir felç, her yıl, acı, ama aynı zamanda aileleri için. İnme yetişkin sakatlık ana nedenidir ve yıllık harcama mevcut olan çok az tedavi seçenekleri olmasına rağmen 36500000000 $ 1 düzeyinde olduğu tahmin edilmektedir. Doku plazminojen aktivatörü (tPA) Sadece Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) iskemik inme için ilaç lisanslı. Inme 3-6 saat içinde hastaya uygulandığı ve bu gibi durumlarda bu hastaların 2% 4 yarar Ancak, bu geçerlidir. Nedenle, inme, tekrar üretilebilir, klinik olarak hayvan modelleri, bu hastalık için potansiyel bir terapötik strateji ve tedavilerin geliştirilmesine yardımcı olmak için kullanılır zorunludur. In vitro dikkat etmek önemlidir </em&gt; modelleri, serebral disfonksiyon bazı yönlerini modelleme yararlı iken, bir inme sonrası beyin ve çevrede meydana gelen karmaşık fizyolojik etkileşimleri yansıtan yeteneğine sahip değildir. Sonuç olarak, in vivo modeller gereklidir. inme en yaygın türü, toplam inmelerin% 87 için muhasebe, menşe iskemik olduğunu. Diğer vuruş intraserebral kanama (% 9) ve subaraknoid kanama (% 4), ve orta serebral arter (MCA) bir emboli en sık neden olur. Bu kesintiye hale beyin giren laminer kan akımının neden MCA kökünde belirgin eğri, atfedilebilir. MCA yanal sulkus boyunca internal karotis arter (ICA) ve yolları, doğar nerede dalları ve projeler bazal ganglionlar ve frontal, parietal ve primer motor ve duyusal korteks olmak üzere temporal lob, yanal yüzeyler. Willis Çember olma posterior serebral arterlerin tarafından oluşturulanserebral arter ve posterior iletişim arterlere bağlı. MCAO intraluminal filament veya dikiş modeli en yaygın inme araştırmalarında kullanılan biridir. Ancak, bu modele farklı varyasyonlar bir çift vardır ve bu microfilament dış karotid arter içine takılı olup olmadığını dayalı 3 (ECA, Longa yöntemi olarak adlandırılır), ya da (ICA takılı olup olmadığını Koizumi olarak adlandırılır yöntemi) 4. Filament CCA içinde kesi kanamayı önlemek için kaldırılırsa Longa yönteminde kalıcı 5 bağlanmalıdır ECA ise Koizumi yöntemde, ameliyat tarafındaki karotis arter (CCA) kalıcı olarak bağlanmalıdır . Bu çok daha üstün ve iskemik inme bir daha klinik olarak cerrahi model hissediyorum burada Longa yöntemi kullanılacaktır. Bundan başka, özellikle Longa yöntemi ile bir silikon uçlu monofilin kullanımı, çok üretirgenellikle eksik tıkanıklığı ve / veya subaraknoid kanama 6 üretmek alev körelmiş monoipliklerin, aksine tekrarlanabilir MCAO. Intraluminal filament yöntemi kalıcı veya geçici tıkanma 4,6 modeli olarak kullanılabilir. Geçici modeli gerçekleştirmek için, filament iskemi bir süre sonra çıkartılır (örneğin, 30 dakika, 60 dakika ya da 2 saat) ve reperfüzyon meydana bırakılır. Bu model, bir ölçüde, insanlarda bir tromboembolik pıhtı eritmek için kendiliğinden ya da terapötik müdahale (örneğin, tPA uygulama) sonrasında kan akımının restorasyon simüle eder. Sürekli modeller için, filament, sadece bir zaman süresi (örneğin, 24 saat) yerinde kalır, bu nedenle bir reperfüzyon oluşur. lümen içi filament yöntemin diğer bir avantajı, bir kranyotomi kafatası sağlam kalmasına olanak sağlayan ve intrakranyal basınç ve sıcaklık değişiklikleri önlemek gerçekleştirilebilir gerekmez gerçektir. <p cBu videoda lass = &quot;jove_content&quot;&gt; biz MCAO ve reperfüzyon ikna etmek Longa intraluminal filament yöntemi gerçekleştirmek için nasıl gösterilmektedir. Biz de 18 sayılık nörolojik skoru gerçekleştirmek ve 2,3,5-triphenyltetrazalium klorür (TTC) boyama kullanarak infarkt hacmini belirlemek için nasıl gösterir.

<table><tbody><tr><td>Erkek C57BL / 6 fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı, Bar Harbor, ME</td> <td># 000664</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin Hidroklorür</td><td>Morris & Dickson, Shreveport, LA</td><td>67457-108-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn, Inc, Lake Forest, IL</td><td>NADA # 139-236</td><td></td></tr><tr><td>DC sıcaklık kontrol sistemi</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Mini rektal termistör probu</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-80-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-2-06</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Amazon, Bellevue, WA</td> <td># 64800</td><td></td></tr> % <tr><td>70 etanol</td><td>Dünya Çapında Tıbbi Ürünler, Bristol, PA</td> <td># 51011023</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Olympus, Center Valley, PA</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td>İris makası (düz)</td> <td>Güzel Bilim Araçları, Foster City, CA</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont forseps (45 derece bükülmüş uç)</td> <td>Güzel Bilim Araçları, Foster City, CA</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Mikro damar klipsi</td><td>Güzel Bilim Aletleri, Foster City, CA</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon yaylı makas (düz)</td><td>Güzel Bilim Aletleri, Foster City, CA</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Ekartörler (kör)</td><td>Güzel Bilim Aletleri, Foster City, CA</td><td>18200-11 (Helen 17022-13 tarafından kullanılır)</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı bez süngerler</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td> <td># 9023</td><td></td></tr><tr><td>7-0 ipek örgülü cerrahi sütür</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>SUT-S103</td><td></td></tr><tr><td>%0.9 sodyum klorür</td><td>Morris & Dickson, Lake Forest, IL</td><td>0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>6-0 orta MCAO sütür (silikon kauçuk kaplı monofilament)</td><td>Doccol Corporation, Sharon, MA</td><td>6023PKRe</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk 6-0 silikon kaplı örgülü ipek</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td><td>SUT-14-1</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Pfizer, New York, NY</td><td>NADA # 141-199</td><td></td></tr><tr><td>Puralube</td><td>Dechra, Norwich, Birleşik Krallık</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Physitemp sıcaklık kontrolörü</td><td>Harvard Aparatı, Holliston, MA</td><td>TCAT-2AC</td><td></td></tr><tr><td>Isı lambası</td><td>Harvard Aparatı, Holliston, MA</td><td>HL-1</td><td></td></tr><tr><td>Lazer doppler probu</td><td>AD Instruments, Colorado Springs, CO</td><td>MSP100XP</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu plakalar</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td> <td># 353226</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)</td><td>Life Technologies, Carlsbad, CA</td><td>20012-050</td><td></td></tr><tr><td>Tek kenarlı tıraş bıçağı</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazalyum klorür (TTC)</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>T8877-50G</td><td></td></tr><tr><td>Fare beyni matris dilimleyici</td><td>Braintree Bilimsel, Braintree, MA</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td>VWR, Radnor, PA</td><td># 182</td><td></td></tr>% <tr><td>10 formalin</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>HT501128-4L</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ analiz yazılımı</td><td>NIH, Bethesda, MD</td><td>ücretsiz indir</td><td></td></tr><tr><td>Ekartör</td><td>Tıbbi Cihaz Satın Alma, Newcastle, CA</td><td>MP-740</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde orta serebral arter tıkanıklığı ve reperfüzyon kaynaklı İnme cerrahi yaklaşım

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

İnme, tüm dünyada ölüm önde gelen nedenidir ve uzun vadeli yetişkin engelli temel nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir. vuruşları yaklaşık% 87 iskemik orijinlidir ve orta serebral arter (MCA) topraklarında meydana gelir. Şu anda sadece Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) bu yıkıcı hastalığın tedavisi için ilaç onayladı doku plazminojen aktivatörü (tPA) &#39;dir. Bununla birlikte, tPA uygulama için küçük bir terapötik penceresi olan (3-6 saat) ve aslında uygulanan hastaların% 4 etkilidir. Mevcut araştırma potansiyel terapötik hedefleri bulmak için inme patofizyolojisinin anlaşılmasında odaklanır. Böylece, güvenilir modeller çok önemlidir ve MCA oklüzyonu (MCAO) modeli iskemik inme klinik olarak en uygun cerrahi modeli olarak kabul edilir (ayrıca lümen Filament veya sütür modeli olarak adlandırılan) ve oldukça non-invaziv ve kolay tekrarlanabilir. Genellikle MCAO modeli nedeniyle özellikle fare ile, kemirgenler kullanılırBu türler için mevcut tüm genetik varyasyonları. Burada tarif (ve video mevcut) başarıyla güvenilir ve tekrarlanabilir verileri oluşturmak için farelerde (reperfüzyon) ile MCAO modelini nasıl gerçekleştirileceği.

Fareler reperfüzyon süresi ardından 30 dakika MCAO-kaynaklı beyin iskemisi (Şekil 1) uygulandı (24 saat, 1 hafta, burada sunulan, ancak reperfüzyon uzunluğunun değiştirilmesi olabilir). MCAO sırasında ölüm (yaklaşık% 2) çok az oldu. Mesaj iskemi, (ilk 24 saat içinde) ölüm oranı yaklaşık% 26 idi. Lazer Doppler flowmetre öncesi ve MCAO / reperfüzyon sonrası MCA topraklarında kan akımı perfüzyon teyit etmek için ...

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Longa yönteminin genel amacı, insanlarda iskemik inmelerin çoğunlukla orta serebral arterin (MCA) tıkanması nedeniyle meydana gelmesi sebebiyle, orta serebral arterin kökünde iskemi oluşturmaktır. Bu yöntem, bu hastalığın tedavisi için uygun bir terapötik hedef nasıl bulunur gibi inme alanındaki temel sorulara cevap vermemize yardımcı olabilir. Longa yönteminin alternatif tekniklere kıyasla temel avantajı, sağkalım oranıdır.Bu teknikle birlikte lökosit-endotel hücre etkileşimlerinde ve enfarkt hacminde de bir artış görülür. Bu prosedürü, laboratuvarımın yöneticisi Shantel Vital gösterecektir. Metindeki protokole uygun olarak erkek bir C57 black six fareye anestezi uyguladıktan sonra, anestezi derinliğini ayak kıstırma testi ile izleyin ve kuruluğu önlemek için steril bir oküler pomad uygulayın.Ardından, hayvanın boyun bölgesini tıraş edin. Fareyi sıcaklık kontrollü bir mat üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve vücut sıcaklığını 36,5 ± 0,1 °C'de izlemek ve korumak için bir rektal prob yerleştirin. Daha sonra, cildi dezenfekte etmek için %70'lik etil alkol kullanın.Sırada Iris düz makas kullanarak orta hat boyunca bir insizyon yapın ve damarları açığa çıkarmak için yumuşak dokul

surgical-approach-for-middle-cerebral-artery-occlusion-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İpliksi Orta serebral arter oklüzyonu farelerde iskemik inme eğitimi için ortak bir model.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Intraluminal filaman tıkanıklığı orta serebral arter deneysel kontur rodents en sık kullanılan vivo içinde modeldir. Ortak karotid arter onarım izin vermek için başka bir cerrahi yaklaşım burada, reperfüzyon ortak karotid arter ve orta serebral arter bölge tam bir reperfüzyon veren gerçekleştirilir.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Protokol, moyamoya dışı akut iskemik inmenin tedavisi için ensefalomiyosinanjiyozis-iskemik beyin dokusunun pial yüzeyine vasküler temporalis kas flebinin greftlenmesi için yöntemler sağlamayı amaçlamaktadır. Yaklaşımın anjiyogenezi arttırmadaki etkinliği, farelerde geçici bir orta serebral arter tıkanıklığı modeli kullanılarak değerlendirilir.

Farelerde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Kaynaklı İnme Sonrası Ensefalomiyosinanjiyoz Tedavisi İçin Bir Model

Bu protokol, orta büyüklükte bir enfarktüse ve mükemmel bir hayatta kalma oranına sahip benzersiz bir fare vuruşu modeli gösterir. Bu model, klinik öncesi inme araştırmacılarının iskemi süresini uzatmasına, yaşlı fareleri kullanmasına ve uzun vadeli fonksiyonel sonuçları değerlendirmesine olanak tanır.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Öğrenin farelerde orta serebral arter tıkanıklığı ve reperfüzyon modelini inme araştırmaları için. Longa yöntemi yüksek sağkalım oranı ve güvenilir iskemi üretimi sunar.

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Daha fazla video keşfet