Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Longa yönteminin genel amacı, orta serebral arterin veya MCA'nın kökündeki iskemiyi çoğaltmaktır, çünkü insanlarda iskemik inmeler en sık MCA'nın tıkanması nedeniyle ortaya çıkar. Bu yöntem, bu hastalığın tedavisi için uygun bir terapötik hedefin nasıl bulunacağı gibi inme alanındaki temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Longa yönteminin alternatif tekniklerin aksine en büyük avantajı hayatta kalma oranıdır.

Bu teknikle lökosit-endotel hücre etkileşimlerinde ve enfarktüs hacminde de bir artış vardır. Bu prosedürü göstermek için laboratuvarımın yöneticisi Shantel Vital konuşacak. Metin protokolüne göre bir erkek C57 siyah altı farede anesteziyi indükledikten sonra, anestezi derinliğini bir ayak tutamıyla izleyin ve kuruluğu önlemek için steril bir oküler merhem uygulayın.

Ardından hayvanın boynunu tıraş edin. Fareyi sıcaklık ayarlı bir mat üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve 36,5 artı veya eksi 0,1 santigrat derece vücut ısısını izlemek ve korumak için bir rektal prob yerleştirin. Ardından cildi dezenfekte etmek için %70 etil alkol kullanın.

Daha sonra Iris düz makas kullanarak, orta hat kesisi yapın ve damarları ortaya çıkarmak için yumuşak dokuları geri çekin. Dumont forseps kullanarak, vagus sinirine zarar vermeden ortak karotis arteri veya CCA'yı ve dış karotis arteri veya ECA'yı çevre dokudan diseksiyon yapın. 7-0 ipek ile CCA'nın etrafına gevşek bir düğüm atarak geçici bir dikiş atın.

Daha sonra ECA ve ondan uzanan daha küçük damarların etrafına, damarları sıkıca bağlayarak kalıcı bir dikiş atın. Şimdi, CCA çatallanmasına yakın ECA çevresinde bir dikiş atın. Ardından, iç karotis arter veya ICA ve pterygopalatin arter veya PPA'nın etrafına bir mikro damar klipsi yerleştirin.

Mikrodiseksiyon yaylı makas kullanarak, ECA'da kalıcı dikişe mümkün olduğunca yakın küçük bir kesi yapın ve 180 mikrometre silikon uçlu bir monofilament yerleştirin. Filament takılıyken, ECA'nın etrafındaki geçici dikişi sıkın ve mikro damar klipsini çıkarın. Kalıcı distal sütür ile filamentin giriş noktası arasındaki ECA'yı kesmek için mikrodiseksiyon yaylı makası kullanın.

MCA'da direnç hissedilene kadar filamenti ICA boyunca yönlendirin. Metin protokolündeki ek ayrıntılara bakın. 30 dakikalık bir oklüzyon periyodundan sonra, filamenti nazikçe geri çekmek ve sütürü ECA'nın açık ucunun etrafına sabitlemek için Dumont forseps kullanarak çıkarın.

Kan akışının CCA'dan devam etmesine izin vermek için bağı dikkatlice gevşeterek CCA'nın etrafındaki geçici sütürü çıkarın. Ekartörleri çıkarın ve ardından kesiyi kapatmak için sürekli bir cerrahi dikiş kullanın. Fareye hacim ikmali için deri altına bir mililitre salin ve cerrahi prosedürden kaynaklanan ağrı ve rahatsızlığın giderilmesi için analjezik karprofen enjekte edin.

Anesteziden iyileşme boyunca fareyi 30 santigrat dereceye kadar ısıtılmış özel bir kafeste gözlemleyin ve yemeyi teşvik etmek için kafesin zeminindeki bir Petri kabına püre haline getirilmiş yem koyun. 18 puanlık bir puanlama sistemi kullanarak, genel, motor, duyusal ve propriyosepsiyon skorlarını değerlendiren uygun reperfüzyon döneminden sonra fareleri nörolojik olarak değerlendirin. Daha yüksek bir nörolojik skor, azalmış nörolojik fonksiyona karşılık gelir.

Kepek enfarktüs hacmini ölçmek için, anesteziyi indükledikten ve metin protokolüne göre derinliği izledikten sonra, fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve peritonu kesmeden önce cildi karından boyuna kesmek için Iris düz makas kullanın. Dumont forseps kullanarak sternumu yukarı kaldırın ve kaburgaları kesin. Ardından, kalbi açığa çıkaran göğsün sol ve sağ taraflarını açmak için iki çift kanama durdurucu kullanın.

Beş milimetrelik bir şırıngaya bağlı 26 gauge iğneyi sol ventriküle yerleştirin ve sağ atriyumu kesin. Daha sonra oda sıcaklığında normal salin veya PBS ile sıvı berraklaşana kadar kalbi perfüze edin. Iris düz makas ve forseps ile hayvanın kafasını çıkarın ve beyni kafatasından dikkatlice çıkarın.

Ardından, beynin matrise sığması için koku soğancığını ve beyinciği kesmek için bir tıraş bıçağı kullanın. Matrisi soğuttuktan sonra beyni içine yerleştirin ve buzun üzerine koyun. Daha sonra bir jiletle beyinde üstten iki milimetre uzakta ilk kesiği yapın ve bıçağı yerinde bırakın.

İkinci bir tıraş bıçağıyla, birincinin arkasında iki milimetrelik bir kesim daha yapın. Ardından, doku takılı olarak ilk tıraş bıçağını çıkarın. Tüm doku dilimlenene kadar bu işlemi tekrarlayın.

Her bir segmenti% 2 iki, üç, beş trifeniltetrazolyum klorür veya TTC içeren 24 oyuklu bir plakanın bir oyuğuna kesildikleri sıraya göre yerleştirin ve plakayı 20 dakika boyunca 37 santigrat derecede sığ bir su banyosuna yerleştirin. 10 dakika inkübe ettikten sonra dilimleri ters çevirin. Daha sonra, yeni bir 24 oyuklu plakanın kuyucuklarına az miktarda% 10 formalin yerleştirin ve segmentleri kesildikleri sırayla formalin kuyularına aktarın.

Segmentleri bilgisayara taradıktan sonra, bir alan ölçümü oluşturmak için enfarktüslü alanın ana hatlarını çizerek enfarktüs boyutunu tüm beyin diliminin yüzdesi olarak analiz etmek için ImageJ analiz yazılımını kullanın. Ardından, alanı belirlemek için tüm kontralateral hemisferi ölçün. Son olarak, enfarktüs alanını kontralateral hemisferin alanına bölün ve enfarktüs hacmini belirlemek için 100 ile çarpın.

Burada gösterildiği gibi, MCA reperfüzyonundan önce ve sonra MCA bölgesinde kan akışı perfüzyonunu doğrulamak için lazer doppler flowmetri kullanıldı. Filamentin çıkarılması ve reperfüzyonun meydana gelmesi için 30 dakikalık iskemiden sonra geçici CCA bağı serbest bırakıldığında, reperfüzyona beş dakika kala başlangıç perfüzyonunun% 100'ünün biraz altına ulaşan perfüzyonda bir dalgalanma olur. Bu tabloda genel, duyusal, motor ve propriyoseptif eksikliklerin değerlendirilmesine ilişkin nörolojik skorlar listelenmiştir.

Bu grafik, 24 saatte 27 farenin puanının 12.56 artı veya eksi 0.7 olduğunu ve bir hafta sonra 11.50 artı veya eksi 1.5'te yüksek kaldığını göstermektedir. Daha yüksek bir nörolojik skor, azalmış nörolojik fonksiyonu temsil eder. Enfarktüs hacimleri, 24 saatteki nörolojik skora benzer paternler gösterdi.

Burada sunulduğu gibi, MCAo'dan 24 saat sonra, fareler inmeden bir hafta sonra artan büyük enfarktüs hacimlerine sahipti. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa 15 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Bu prosedürü denerken, sıcaklığı 36,5 santigrat derecede tutmak önemlidir.

Bu prosedürü takiben çekal ligasyon ve ponksiyon gibi diğer yöntemler de uygulanabilir. Bu, sepsisin inme öncesi ve sonrası etkileri gibi ek soruları yanıtlamamızı sağlar. Bu videoyu izledikten sonra, orta serebral artere bir monofilament yerleştirerek ve reperfüzyona izin vermek için çıkararak iskemiyi nasıl indükleyeceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

İris, makas ve forseps gibi aletlerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve her zaman önlem alınması gerektiğini unutmayın.