Name: Hücresel Termal Etkileri İncelemek İçin Kültür Hücrelerini Isıtma İçin Sürekli Dalga Tribün Lazeri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Öğrenin, sürekli dalga tribün lazeri ile kültür hücrelerini ısıtarak termal doza bağımlı hücresel yanıtları incelemeyi. Bu yöntem, retinal pigment epitel hücreleri ve kanser hücreleri gibi modellerde hipertermi yanıtlarını hassas sıcaklık kontrolüyle çalışmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Alman Federal Eğitim ve Araştırma Bakanlığı (BMBF) (hibe # 13GW0043C) ve Avrupa Uzay Araştırma ve Geliştirme Ofisi (EOARD, hibe # FA9550-15-1-0443) tarafından yapılan bir araştırma yardımıyla desteklendi.

1. RPE Hücre Kültürü <ol><li> Domuz gözlerinden RPE hücrelerinin izolasyonu <ol><li> Yerel mezbaha yeni çekirdekli domuz gözleri elde edin. Onları soğuk (4 ° C) ve karanlık bir ortamda tutun. </li><li> Hücre dışı dokuları makasla çıkarın ve gözleri antiseptik bir solüsyonda 5 dakika bekletin. </li><li> Gözleri kullanana kadar kalsiyum ve magnezyum (PBS (-)) olmadan steril fosfat tamponlu salin içine yerleştirin. </li><li> Bir bisturi kullanarak sklera kornea limbusunun yaklaşık 5 mm arka kısmına nüfuz edin. Korneal limbusa paralel olarak, makasla tümüyle keserek gözün ön kısmını yeniden kesin. </li><li> Gözün ön kısmını ( örn . Kornea ve mercek) ve vitrini çıkarın. 1 mL PBS (-) ekleyin ve yavaşça sinir retinasını çıkarın. NOT: Sklera, koroid ve RPE'den oluşan bu "göz bardağı" hazırdır. </li><li> P'de önceden ısıtılmış (37 ° C)% 0.25 tripsin ekleyinGöz kapağına (-) bas. Göz kapının yaklaşık% 80'i bu tripsin çözeltisi ile dolacak şekilde ses seviyesini ayarlayın. </li><li> Göz kapını, 37 ° C'de% 5'lik bir CO2 inkübatöründe tripsin çözeltisiyle inkübe edin. ° C'de 10 dakika. </li><li> Kuluçka makinesinden göz banyosunu çıkarın ve% 0.25 tripsin solüsyonunu% 0.05 tripsin +% 0.2 etilendiamintetraasetik asit tetrasodyum tuzu (EDTA · 4N) ile PBS (-) solüsyonu ile değiştirin. 45 dakika inkübatör göz kap kuluçkalayın. NOT: 45 dakika sonra, RPE hücreleri ya sadece gevşek olarak Bruch membranına tutturulacak ya da halihazırda ayrılmış ve tripsin-EDTA çözeltisinde yüzecektir. </li><li> RPE hücrelerini yavaşça pipetleyerek toplayın. Hücreleri ve çözeltiyi,% 10 domuz serumu, antibiyotik / antimikotik ve sodyum piruvat (1 mM) de dahil olmak üzere 10 mL kültür ortamı (L-glutamin ile DMEM yüksek glikoz) ile dolu konik bir tüp içerisinde toplayın. NOT: Serum, tripsin etkisini nötralize edebilir. </li><li> SantrifüjOda sıcaklığında 5 dakika 400 xg'de hücre süspansiyonu. </li><li> Süpernatantı çıkarın ve 10 mL taze ortam ekleyin. Aynı koşullar altında 5 dakika boyunca tekrar santrifüjleyin. </li><li> Süpernatantı çıkarın ve hücre konsantrasyonunun 5 x 10 5 hücre / mL (bir hemocytometer kullanarak hücreleri sayarak belirlenir) olacak şekilde yeni ortam ekleyin. Nazik pipetleme ile iyice karıştırın. </li><li> Hücre kültürü yemeklerinde hücre süspansiyonu dağıtın. 60 mm çaplı kültür çanağı başına 3 mL kullanın. NOT: Bu kültür pasaj sıfır (P0) olarak adlandırılır. </li><li> 37 ° C'de% 5 CO2 inkübatör hücreleri koruyun. Klimalı ortamın yarısını her ikinci günde taze orta değere değiştirin. </li><li> Altkültür (adım 1.2) konfluent hale gelirse. </li></ol></li><li> RPE hücre kültürünün altkültürü <ol><li> Kültür ortamı çıkarın ve hücreleri PBS (-) ile iki kez durulayın. </li><li> Hücreleri PBS (-) solüsyonu ile% 0.05 tripsin +% 0.2 EDTA iNa 5% CO2 inkübatör 37 ° C'de 5 dakika. </li><li> Nazik pipetleme ile RPE hücrelerini ayırın ve 10% domuz serumunu içeren 10 mL kültür ortamı ile dolu konik bir tüpe hücre süspansiyonu toplayın. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika 400 xg'de hücre süspansiyonu santrifüjleyin. </li><li> Süpernatantı çıkarın ve hücre konsantrasyonunu 5 x 10 5 hücre / mL (bir hemositometre ile hücre sayısını sayarak belirlenir) yapan yeni kültür ortamı ekleyin. Hücreleri, adım 1.1.13'te açıklandığı gibi yeni 60 mm çaplı kültür kaplarına dağıtın. NOT: Hücre kültürü şimdi pasaj 1'dir (P1). </li><li> Konflüansa erişildikten sonra, 1.2.1-1.2.5 adımlarında anlatılanla aynı işlemi kullanarak P1 kültürünü P2'ye ikiye ayırın. P2 kültüründen, hücreleri 60 mm çaplı kültür kapları yerine daha küçük kültür kaplarına (30 mm iç çap) tohumlayın. </li><li> Deneyler için P2 veya P3 kültürlerini kullanın. </li></ol></li></ol> 2. ThulLazer ışınlaması <ol><li> Işınlama istasyonunun inşası <ol><li> Tülyum lazer aygıtını (1.94 mikron, güç aralığı: 0-20 W) 0.22-NA, 365-μm çekirdek çaplı fiberle bağlayın. </li><li> Elyaf ucunu ışınlama istasyonunun dikey metal direğine yatay olarak sabitlenmiş metal kola mekanik olarak sabitleyin. Dikey direği, lazer fiberinin ucu, ışınlama sırasında hücre kültürü çanağının yerleştirileceği sıcak plakanın üzerinde olacak şekilde yerleştirin. </li><li> Sıcak plakaya beyaz bir kağıt koyun ve hedefleme kirişini açın (λ = 635 nm, maks = 1 mW, kağıt seviyesindeki çap ≈ 30 mm). Hedefleme kirişinin çevresini beyaz kağıt üzerine işaretleyin, böylece ışınlama sırasında kültür çanağının yerleştirileceği yer bilinir. NOT: Fiber ucu z-düzlemi değiştirilebilir. İlave bir görüntüleme optiği olmaksızın, hücre kültürü düzlemindeki lazer spot çapı, lif ucunun 12 cm altına yerleştirilir, iYaklaşık 30 mm, hücre kültürü çanağının iç çapına neredeyse eşdeğerdir. Kurulumun şematik bir çizimi Şekil 1'de gösterilmektedir. </li></ol></li></ol><img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54326/54326fig1.jpg"> Şekil 1: Tülyum Lazer Işınlama İstasyonunun Şematik Görüntüsü. Isıtma plakasının üzerine bir kültür tabağı konur. Hücreler, kiriş boyutunun kültür çanağının iç çapıyla (yaklaşık 30 mm) hemen hemen aynı olduğu şekilde, tülyum lazer elyaf ucunun 12 cm altına yerleştirilir. Lazer ışınlama prosedürü, özel tasarlanmış sistem tasarım platformunun zaman kontrollü rutini ile kontrol edilir. Güç ayarı ışınlama programı başlamadan önce belirlenmelidir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54326/54326fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <olstart> Hücre kültürünün lazerle ışınlanması <ol><li> Işınlamadan 1 saat önce, kültür ortamını tamamen 1.2 mL taze ortam ile değiştirin. NOT: Bu bir ÖNEMLİ ADIM ve kesinlikle uyulmalıdır. </li><li> Işınlama istasyonunu ( örn . Lazerli fiberin sabitleneceği sıcak plaka ve direk) temiz tezgah üzerine yerleştirin. </li><li> İnkübatörden hücre kültürü çanağını çıkarın ve sıcak plaka üzerinde işaretlenmiş konuma yerleştirin (adım 2.1.3). </li><li> Koruyucu gözlük takın. Tulum lazerini açın. Lazer cihazında gücü istediğiniz gibi ayarlayın (0 - 20 W arasında ayarlanabilir). Emisyonu açın. </li><li> Lazer ışınlama ve zamanlama protokolünü (tamamlayıcı dosya) kontrol eden bir sistem tasarım platformu başlatın. </li><li> Kültür tabağını sıcak plakaya yerleştirdikten hemen sonra, zamanlayıcıyı 140 s süreyle başlatmak için "ön ısıtma süresi" ne tıklayın ("ön ısıtma süresi 1"); Bu kültür ortam sıcaklığını 3'te tutacaktırIşınlama öncesi 7 ° C. NOT: 140 s sonra bir bip sesi açılır ve bir sonraki zamanlayıcı ("ön ısıtma süresi 2") 8 saniyelik otomatik sayma işlemine başlar. Bu 8 saniyede, muayene eden kişi kültür çanağını açabilir. 148 s ön ısıtmadan sonra, otomatik olarak hücre kültürü üzerinde 10 s uzunluğunda bir lazer ışınlaması yapılır. Acil bir durumda, lazeri anında durdurmak için lazer cihazını zorla bırakma düğmesi ile donatın. Bu bir kritik basamaktır ve kesinlikle takip edilmelidir. Dikkatli olunması gereken özel bir nokta, 8 s ön ısıtma süresinin başlangıcında ışınlamadan hemen önce tabağın açılmasıyla ilgilidir. Kapağın açılması, orta yüzeyi çok hızlı soğutabilir. </li><li> Işınlama sonrasında, kapağı tekrar kültür çanağına koyun, ek bir 7 saniye boyunca sıcak tablaya bırakın ve 37 ° C'de% 5 CO2 inkübatörüne yerleştirin. </li></ol><li> Sıcaklık dağılımının ölçümüHücresel seviyesi (sıcaklık ayarı) <ol><li> 30 mm çaplı bir kültür çanağının (hücreler olmadan) dört tarafında (her 90 °'de) küçük deliklere (çap olarak yaklaşık 300 μm) yakın olun; Bir Bunsen brülörü ile ısıtılan bir iğnenin ucunu (20G) kullanın. Delikleri elektrik izolasyon bandı ile dışarıdan sızdırmaz kılın ve ince bir iğne ile küçük bir delik açın, böylece su geçirmez koşullar altında bu deliğe sadece 200 metrelik ince bir termokupl takılabilir. </li><li> Kültür çanağının dış tarafında, 2 dikey çap çizin ve çapraz noktayı ( örneğin, alt tarafın ortası) sıfır koordinatı (0) olarak ayarlayın. Her 3 mm'lik çizgileri boyunca her yönde çanak dışına ( yani, 0, 3, 6, 9, 12 ve 15 mm) radyal olarak işaretleyin ( Şekil 2 , mavi noktalar); Toplam puan 21 olmalı. </li><li> 1.2 mL yeni kültür ortamı ile hücre kültürü çanağını doldurun. Kültürü yerleştirin d37 ° C'de sıcak plakaya yerleştirin, yan delikte ince bir termokupl (200 μm çapında) yerleştirin ve hassas uçunu ölçülecek işaretlenmiş bir yere yerleştirin. </li><li> Koruyucu gözlük takın. Tülyum lazerini açın ve lazer cihazının gücünü (0 ila 20 W, 0,1 W artırımlarla) manüel olarak ayarlayın. NOT: Sıcaklık kalibrasyonu için, 3 W'lik artışlarla yapılan ölçümler yeterli olmalıdır. </li><li> Sistem tasarım platformunu açın ve sıcaklık ölçümünü başlatmak için "Start Temp Acquisition" düğmesine tıklayın (ek dosya). </li><li> Adım 2.2.6'daki prosedürü uygulayın. NOT: Kontrol programı her 100 ms'de takılı termokuplun sıcaklığını ölçer ve GUI'de ışınlama sırasında sıcaklık ilerlemesini gösterir. </li><li> Bu prosedürleri 21 ölçüm noktasının hepsi için ve farklı güç ayarlarında uygulayın. Tüm prosedürleri, tüm noktalar için ve tüm güç settin için üç kez tekrarlayınGs güvenilir veri elde etmek için. </li><li> Sıcaklık verilerini csv verileri olarak dışa aktarın ve sonuçta elektronik tabloya dönüştürülebilir. Her noktadaki üçlü ölçümler için ışınlamanın bitimindeki maksimum sıcaklığı ortalaması alın. Aynı daire üzerindeki noktalardan değerleri ortalaması alın (merkez nokta hariç toplam 4 puan). </li><li> Elde edilen ortalama maksimal sıcaklığı, çanak merkezinden x ekseni ve sıcaklık artışı (ΔT, ° C) y ekseni olarak mesafeye getirerek bir grafikte çizin. Ham verilere bir Gauss modeli uydurmak için bir matematiksel yazılım programının fit fonksiyonunu kullanın. Gauss fit sıcaklık dağılımı oluşturun. </li></ol></li><img alt="şekil 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54326/54326fig2.jpg"> Şekil 2: Bir Hücre Kültür Tabağındaki Sıcaklık Kalibrasyonunun Noktaları. Sıcaklık verileri merkezde ve 54 farklı açıdan radyal noktalar (mavi noktalar). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54326/54326fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> 3. Farklı Termal Işınlamalardan Sonra Hücre Yanıtları İçin Biyolojik Değerlendirme <ol><li> Farklı güç ayarlarını takiben hücre yaşayabilirliğinin ( yani, canlı, apoptotik ve ölü) ve hücre ölüm eşiğinin belirlenmesinin değerlendirilmesi <ol><li> Belirtilen zaman noktalarında (ışınlama sonrası 3, 24 ve 48 saat sonra), hücreleri PBS (-) ile yıkayın ve üreticinin talimatlarına göre hücre yaşayabilirliğini ( yani yaşamsal, apoptotik, ölü) değerlendirmek için piyasada bulunan bir kit kullanın protokol. </li><li> Floresan izotiyosiyanat (FITC) -anneksin V 5 μL, etidyum homodimer III 5 mcL ve Hekschst 33342'nin 5 uL'sini 1x bağlama tamponunun 100 μL'sine ekleyerek bir boyama çözümü hazırlayın (hepsi kittirbileşenler). Hücreleri örtmek için yeterli boyama solüsyonu hazırlayın. Hücreleri 15 dakika inkübe edin. </li><li> Bağlayıcı tampon ile hücre kültürü iki kez yıkayın, bağlayıcı tampon PBS (-) ile değiştirin ve bir floresan mikroskop sahnesinde kültür ayarlayın. </li><li> Işık yolunu oküler lense çevirin, 4 ', 6-Diamidin-2-fenilindol (DAPI) filtresini seçin, aydınlatma lambasını açın ve odaklanan düzlemi 4x objektifle bulun. </li><li> Kameraya giden ışık yolunu değiştirin, görüntüyü bilgisayar ekranında mikroskop görüntüleme yazılımında bulun ve odaklamayı ayarlayın. </li><li> Tüm hücre kültürü çanağının flüoresans görüntüsünü elde etmek için dikiş işlevini (diğer bir deyişle çanak boyunca birden fazla görüntüyü kaydetmek ve daha sonra tek bir büyük resim oluşturmak için işlev) kullanın. Hoechst 33342 pozitif hücrelere (tüm hücre çekirdeği), FITC-annexin V-positi'ye 3 farklı filtre seti (DAPI, FITC ve tetrametilrohidamin (TRITC))Ve hücreler (apoptotik) ve etidyum homodimeri III-pozitif hücreler (ölü) olarak sıralanabilir. </li><li> Boyanan hücre kültürlerinde ölü (etidyum homodimer III pozitif) bölgesinin yarıçapını (mm) ve apoptotik (anneksin V-pozitif) bant form bölgesinin dış / iç yarıçapını ölçün. Bu yarıçapları, ilgili gç ayarı için sıcaklık dağılımının uydurma Gauss fonksiyonuna uygulayın. Hücre ölümü ve apoptotik değişim için eşik sıcaklıklarını açıklığa kavuşturmak için ölü veya apoptotik bölgenin kenarındaki tam sıcaklığı hesaplayın. </li></ol></li></ol></olstart>

<ol><li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficacy+of+pure+yellow+%28577-nm%29+and+810-nm+subthreshold+micropulse+laser+photocoagulation+combined+with+yellow+%28561-577-nm%29+direct+photocoagulation+for+diabetic+macular+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Comparative efficacy of pure yellow (577-nm) and 810-nm subthreshold micropulse laser photocoagulation combined with yellow (561-577-nm) direct photocoagulation for diabetic macular edema.</a> Jpn J Ophthalmol. 59 (1), 21-28 (2015).</li>
<li>Roider, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+retina+therapy+%28SRT%29+for+clinically+significant+diabetic+macular+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Selective retina therapy (SRT) for clinically significant diabetic macular edema.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 248 (9), 1263-1272 (2010).</li>
<li>Brinkmann, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+temperature+determination+during+retinal+photocoagulation+on+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Real-time temperature determination during retinal photocoagulation on patients.</a> J Biomed Opt. 17 (6), 061219(2012).</li>
<li>Yoshimura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photocoagulated+human+retinal+pigment+epithelial+cells+produce+an+inhibitor+of+vascular+endothelial+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Photocoagulated human retinal pigment epithelial cells produce an inhibitor of vascular endothelial cell proliferation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 36 (8), 1686-1691 (1995).</li>
<li>Denton, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Damage+Thresholds+for+Exposure+to+NIR+and+Blue+Lasers+in+an+In+Vitro+RPE+Cell+System%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Damage Thresholds for Exposure to NIR and Blue Lasers in an In Vitro RPE Cell System.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47 (7), 3065-3073 (2006).</li>
<li>Shrestha, R., Choi, T. Y., Chang, W., Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-precision+micropipette+sensor+for+cellular-level+real-time+thermal+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">A high-precision micropipette sensor for cellular-level real-time thermal characterization.</a> Sensors (Basel). 11 (9), 8826-8835 (2011).</li>
<li>Gao, F., Ye, Y., Zhang, Y., Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+bath+hyperthermia+reduces+stemness+of+colon+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">Water bath hyperthermia reduces stemness of colon cancer cells.</a> Clin Biochem. 46 (16-17), 1747-1750 (2013).</li>
<li>Jansen, E. D., van Leeuwen, T. G., Motamedi, M., Borst, C., Welch, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+dependence+of+the+absorption+coefficient+of+water+for+midinfrared+laser+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg+Med%22%5BJournal%5D)">Temperature dependence of the absorption coefficient of water for midinfrared laser radiation.</a> Lasers Surg Med. 14 (3), 258-268 (1994).</li>
<li>Iwami, H., Pruessner, J., Shiraki, K., Brinkmann, R., Miura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+a+laser-induced+sub-lethal+temperature+rise+on+RPE+cells+from+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Protective effect of a laser-induced sub-lethal temperature rise on RPE cells from oxidative stress.</a> Exp Eye Res. 124, 37-47 (2014).</li>
<li>Denton, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+correlated+microthermography+maps+threshold+temperature+in+laser-induced+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Optics%22%5BJournal%5D)">Spatially correlated microthermography maps threshold temperature in laser-induced damage.</a> J Biomed Optics. 16 (3), (2011).</li>
<li>Morgan, C. M., Schatz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrophic+creep+of+the+retinal+pigment+epithelium+after+focal+macular+photocoagulation%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Atrophic creep of the retinal pigment epithelium after focal macular photocoagulation.</a> Ophthalmology. 96 (1), 96-103 (1989).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Sıcaklığa bağlı biyolojik hücresel tepkileri tartışırken, çoğu biyokimyasal süreçler zamana bağlı olduğu için sadece sıcaklık değil artan sıcaklığın süresi de önemlidir. Özellikle oftalmolojideki lazerle indüklenen hipertermi alanında, milisaniyeleri ile saniyeler arasındaki kısa zaman aralıklarından dolayı, hassas sıcaklık kontrolü ile hücresel termal etkileri araştırmak zordur. Bu nedenle, hücre kültürü modeline uygun ve sıkı sıcaklık ve zaman kontrolü sağlayan bir çalışma sistemi ile birlikte lazer ışınlama düzeneği ...

Sıcaklığa bağlı hücre biyolojik tepkilerini anlamak, başarılı hipertermi tedavileri için büyük önem taşır. Oftalmolojide kullanılan termal lazerli retina lazer fotokoagülasyon, tıpta en köklü lazer tedavilerinden biridir. Görünür ışık, çoğunlukla yeşil-sarı dalga boylarına, retinal lazer tedavisinde kullanılır. Işık retinal pigment epitelyal (RPE) hücrelerindeki melanin yüksek derecede emdiği retinanın en dıştaki hücre tek tabakasını oluşturur. Farklı retina bozuklukları türleri için yeni bir terapötik strateji olarak doktorlar ve araştırmacılar arasında son derece ilginç bir ışık ısısı ışınlaması (görünmeyen fotokoagülasyon) bulunmaktadır 1 , 2 . Bu eğilimi takiben, sıcaklık kontrollü fototermal terapi (TC-PTT) adı verilen bir teknik olan hassas sıcaklık kontrolü altında RPE hücrelerini ölümcül derecede ısıtmaktadır. Son optoEnstitümüzden akustik teknoloji, retina ışınlanmış bölgelerdeki sıcaklık artışlarının gerçek zamanlı ölçümüne izin verdi. Bu, ışınlama sırasında sıcaklık artışının kontrolü sağlar 3 . Bununla birlikte, RPE hücrelerinin ölümcül derecede ısıtılmasından kaynaklanan, retina üzerine ölümcül olmayan hipertermi, sıcaklığın ölçülmesi ve kontrol edilememesi nedeniyle daha önce düşünülmediğinden termal lazer ışınlamasını takiben RPE hücrelerinin sıcaklığa bağlı hücre yanıtları Bugüne kadar çok az çalışılmıştır. Dahası, sıcaklık farkı ayrıntılı olarak tartışılmakla kalmamakla birlikte, ölümcül ve ölümcül ışınlama sonrasında hayatta kalan hücrelerin hücre davranışındaki farkı da tartışmamaktadır. Bu nedenle, TC-PTT&#39;ye dayalı tedaviler hakkında bilimsel kanıt toplamak için, sıcaklık bağımlı RPE hücresi biyolojik tepkilerini ve bunların in vitro deney düzeneklerini kullanarak mekanizmalarını aydınlatmayı amaçlıyoruz. Kale1) hızlı sıcaklık artışına, 2) hassas bir şekilde kontrol edilen zaman ve sıcaklığa ve 3) biyolojik deneyler için nispeten yüksek sayıda incelenen hücreye gereksinim duyan bir hücre ısıtma düzeneğinin kurulması gereklidir. . Isıtma yöntemi ile ilgili olarak, frekans katlamalı Nd.YAG lazer (532 nm) gibi klinik bir lazer, ne yazık ki hücre kültürü ısıtması için uygun değildir. Bunun nedeni, kültür RPE hücrelerindeki melanozomların sayısının çok az olmasıdır. Lazer ışığı emilimi homojen olmayabilir ve hücresel seviyedeki sıcaklık artışı, aynı radyasyon enerjisi ile ışınlansa bile deneyler arasında değişkenlik göstermektedir. Daha önceki bazı araştırmalar ışınlama 4 sırasında bulaşık dipinin altında siyah kağıt kullandığını veya 5 , 6 deneyleri öncesinde kültür hücreleri tarafından fagositize edilen ek melanozomların kullanımını bildirmiştir. ÇoğuHipertermi kaynaklı hücre tepkilerini değerlendirmek için in vitro biyolojik çalışmalar, sıcak bir tabla, bir su banyosu veya sıcaklık ayarı olan bir CO 2 inkübatör kullanılarak gerçekleştirildi. Bu yöntemler, istenen sıcaklığa erişmek biraz zaman ( yani birkaç dakika) alması nedeniyle uzun bir ısıtma periyodu gerektirir. Dahası, bu yöntemleri kullanarak, hücresel düzeyde detaylı bir termal öykü ( yani, sıcaklık zamanla çarpılan sıcaklık) elde etmek zordur. Dahası, bir kültür çanağındaki farklı konumlardaki hücreler arasındaki sıcaklık, değişken sıcaklık difüzyonundan dolayı farklılık gösterebilir. Çoğu vakada, hipertermi sırasında bu geçici ve uzaysal sıcaklık bilgileri, biyolojik hücre tepkisi artan sıcaklığın sıcaklığı ve süresi ile kritik olarak etkilense bile, biyolojik analizler için dikkate alınmamıştır. Bu sorunların üstesinden gelmek içinHücreleri ısıtmak için nuts dalga tulium lazer kullanıldı. Tülium lazer radyasyonu (λ = 1.94 μm) su 8 tarafından kuvvetle emilir ve kültür çanağının altındaki hücreler termal olarak sadece termal difüzyon yoluyla uyarılır. 365 μm çaplı lazer elyafı, kültür çanağının yaklaşık 12 cm üstünde, herhangi bir optik olmadan aralarında bulunur. Lazer ışını çapı, kültür ortamının yüzeyindeki kültür çanağının (30 mm) iç çapıyla neredeyse eşdeğer olacak şekilde diverjiktir. Tutarlı bir miktarda kültür ortamı ile, hücreleri sıcaklık artışıyla ışınlamak mümkündür Yüksek tekrarlanabilirlik. Değişken güç ayarları 20 W&#39;a kadar ışınlamayı mümkün kılar ve hücresel seviyedeki orta sıcaklık 10 saniyede ΔT ≈ 26 ° C&#39;ye kadar yükseltilebilir. Işınlama koşullarını değiştirerek, sıcaklık dağılımını değiştirmek için lazer ışını profilini değiştirmek de mümkündürBir kültür çanağında. Örneğin, mevcut çalışmadaki gibi Gauss benzeri sıcaklık dağılımıyla veya homojen bir sıcaklık dağılımıyla araştırmak mümkündür. İkincisi, sıcaklığa bağlı hücre yanıtlarının ölümcül olmayan sıcaklık artışları için daha spesifik olarak etkilerini araştırmak için avantajlı olabilir, ancak hücre ölüm stresinde veya yara iyileştirme yanıtlarında geçerli değildir. Tülyum lazer ışınlaması, farklı termal pozlamalardan sonra gen / protein ifadesi, hücre ölüm kinetiği, hücre çoğalması ve hücre işlevsellik geliştirme gibi farklı biyolojik faktörlerin araştırılmasını sağlayabilir.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Reaktifler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifiye Kartal' s Orta - yüksek glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5796-500ML</td><td>Kullanmadan önce (2) - (4) ekleyin. 37 ° C'de sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu.</td></tr><tr><td>Antibiyotik Antimikotik Solüsyon (100 >)</td>10.000 ünite penisilin, 10 mg streptomisin ve 25 &mu içeren <td>Sigma-Aldrich</td><td>A5955-100ML</td><td>; g 1 mL'de amfoterisin B. Kullanmadan önce 500 mL orta boy şişeye (1) 5,5 mL ekleyin.</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat (100 mM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8636-100ML</td><td>Kullanmadan önce 500 mL orta boy şişeye (1) 5,5 mL ekleyin (son konsantrasyon: 1 mM)</td></tr><tr><td>Domuz serumu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12736C-500ML</td><td>Kullanmadan önce 500 mL orta boy şişeye (1) 50 mL ekleyin (son: %10)</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Domuz pankreasından Tripsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4799-25G</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>ED-100G</td><td></td></tr><tr><td>İnsan VEGF Kuantikin ELISA Kiti</td><td>R& D Sistemi</td><td>DVE00</td><td></td></tr><tr><td>Oxiselect Toplam Glutatyon Test Kiti</td><td>Cell Biolabs, Inc</td><td>STA-312</td><td></td></tr><tr><td>Apoptotik/Nekrotik/Sağlıklı Hücreler Tespit Kiti</td><td>PromoKine</td><td>PK-CA707-30018</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</strong</td><td>>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td><güçlü > Ekipmanlar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Thulium lazer</td><td>Starmedtec GmbH</td><td>Prototip</td><td>0-20 W</td></tr><tr><td>365 mm çekirdek çapı fiber</td><td>LAZER BİLEŞENLERİ Almanya</td><td>CF01493-52</td><td></td></tr><tr><td>Termokupl</td><td>Omega Mühendislik A.Ş.</td><td>HYP-0- 33-1-T-G-60-SMPW-M</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma plakası</td><td>MEDAX</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka okuyucu ( spektroflorometre)</td><td>Moleküler Cihaz</td><td>Spectramax M4</td><td></td></tr><tr><td>hücre homojenizatörü</td><td>QIAGEN</td><td>TissueLyser LT</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE Ti</td><td></td></tr><tr><td>matematiksel yazılım programı</td><td>The Mathworks. Inc</td><td>MATLAB Sürüm 2015b</td><td></td></tr><tr><td>sistem tasarım platformu</td><td>Ulusal Enstrüman</td><td>Labview</td><td>Laboratuvarı Sanal Enstrüman Mühendisliği Tezgahı</td></tr></tbody></table>

hücresel termal etkileri İncelemek İçin kültür hücrelerini isıtma İçin sürekli dalga tribün lazeri

Continuous-wave Thulium Laser for Heating Cultured Cells to Investigate Cellular Thermal Effects

Biyolojik değerlendirme için 1.94 mikronluk sürekli dalga tulium lazer kullanılarak kültürlenmiş hücreleri ısıtmak için özgün bir yöntem buraya girilmiştir. Tülyum lazer radyasyonu su ile kuvvetli bir şekilde emilir ve kültür çanağının altındaki hücreler termal difüzyon yoluyla ısıtılır. 365 μm&#39;lik bir çapa sahip bir lazer fiber, herhangi bir optik olmadan kültür çanağının yaklaşık 12 cm üzerinde ayarlanır, böylece lazer ışını çapı, kültür çanağının (30 mm) iç çapıyla neredeyse eşdeğerdir. Her deneyde tutarlı bir miktarda kültür ortamı tutarak, hücreleri çok tekrarlanabilir sıcaklık artışı ile ışınlamak mümkündür. Sıcaklık artışını ve her güç ayarı için bir hücre kültürü çanağındaki dağılımını kalibre etmek için sıcaklık, farklı konumlarda ve hücresel düzeyde 10 saniye boyunca ölçülmüştür. Sıcaklık dağılımı, matematik grafik yazılımıProgramı ve kültür örneğindeki örneği Gauss formunda idi. Lazer ışınlamasından sonra, sıcaklığa bağlı hücre yanıtlarını değerlendirmek için farklı biyolojik deneyler gerçekleştirilebilir. Bu el yazmasında canlı apoptozis ve ölüm zamanlarındaki farklı noktalardan sonra ölüm sıcaklıklarının belirlenmesine yardımcı olmak için canlılık boyaması ( yani, canlı, apoptotik ve ölü hücreleri ayıran) tanıtıldı. Bu yöntemin avantajları, sıcaklığın ve ısıtmanın zamanının hassaslığı ve aynı zamanda bir hücre kültürü çanağındaki ısıtma hücrelerindeki yüksek verimliliğidir. Ayrıca, bilgisayarlı bir işletim sistemi tarafından iyi kontrol edilebilen çok çeşitli sıcaklıklar ve zaman süreleri ile çalışma yapılmasına olanak tanır.

Farklı güç ayarlarından sonra sıcaklık dağılımı Her bir ışınlama için tüm sıcaklık gelişmeleri sıcaklık kalibrasyonunda izlenmiştir. Bu veriden, ölçülen noktalardaki maksimal sıcaklık elde edildi ve T max (° C) olarak tanımlandı. Şekil 3A'da gösterildiği gibi, program, kültür çanağı ısıtma plakasına yerleştirildiği zaman noktasında yürütülmüştür. 37 ° C'de kararlı bir orta sıcaklığın arşiv...

1.94 μm sürekli dalga lazer radyasyonunu kullanarak bir kültür çanağındaki hücreleri ısıtmak için orijinal bir deney düzeneği burada tanıtıldı. Bu yöntemi kullanarak, farklı termal pozlamalardan sonra retina pigment epitel (RPE) hücrelerinin biyolojik cevapları araştırılabilir.

Hücresel Termal Etkileri İncelemek İçin Kültür Hücrelerini Isıtma İçin Sürekli Dalga Tribün Lazeri

An original method to heat cultured cells using a 1.94 &#181;m continuous-wave thulium laser for biological assessment is introduced here. Thulium laser ...

Bu prosedürün genel amacı, kültürlenmiş hücreleri hassas sıcaklık ve zaman kontrolü ile ısıtarak in vitro termal doza bağlı hücre biyolojik tepkilerini incelemektir. Bu yöntem, retinal lazer tedavisi çalışması gibi hipertermiye hücre veya doku tepkilerini araştıran alanlarda önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, hücrelerin hızlı bir şekilde ısıtılması ve ısıtma süresi üzerinde hassas bir kontroldür, bu da deneyler sırasında yüksek tekrarlanabilir bir termal maruziyete izin verir.Bu yöntem, kültürlenmiş retina pigment epitel hücrelerinin termal lazer ışınlamasına verdiği tepkiler hakkında fikir verebilse de, kanser hücreleri gibi diğer modellere de uygulanabilir. Bu yöntem için ilk olarak melanin içeren hücreleri görünür lazer ışığı ile ısıtırken aklımıza geldi. Bununla birlikte, bu, pigmentasyondaki farklılıklar nedeniyle değişen sıcaklık profillerine neden oldu.Prosedüre başlamak için, temiz bir tezgah üzerinde ayarlanabilir bir metal laboratuvar standına bir sıcak plaka yerleştirin. Sıcak plakayı 39 santigrat dereceye ayarlayın. Çekirdek çapı 365 mikrometre olan 0,22 NA fiberi standın yatay koluna sabitleyin.Metal kolu sıcak plakanın üzerine yerleştirin ve standı, fiber ucu sıcak plakanın 12 santimetre üzerinde olacak şekilde ayarlayın. 1.94 mikrometre 20 watt Thulium lazeri 365 nanometre bir miliwatt hedefleme ışını ile fiber uca bağlayın. Sıcak plakanın üzerine 30 milimetre çapında bir kültür kabı yerleştirin.Çanağın çevresini sıcak plaka yüzeyinde dikkatlice izleyin ve ardından kabı çıkarın. Hedefleme ışınını açın ve sıcak plaka üzerindeki ışın noktasının merkezi izlenen daireyle eşleşene kadar standı ayarlayın. Ardından nişan alma ışınını kapatın.Sıcaklık kalibrasyon prosedürüne başlamak için, 20 gauge iğnenin ucunu bir Bunsen brülörü ile ısıtın. Isıtılmış iğne ucuyla, yaklaşık 300 mikrometre çapında delikler açmak için 30 milimetre çapındaki kültür kabını dibe yakın 90 derece aralıklarla dört noktadan delin. Deliklerin üzerine elektrik bandı yerleştirin.Her deliği kaplayan banttan yaklaşık 200 mikrometre çapında bir delik açmak için ince bir iğne kullanın. Kültür kabının alt tarafında, her bir delik çifti arasına 180 derece aralıklarla bir çizgi çizin. Çizgilerin kesişme noktasından başlayarak, 21 ölçüm noktasını belirlemek için her çizgi boyunca her üç milimetrede bir radyal olarak işaretleyin.Ardından, tabağa önceden 37 santigrat dereceye kadar ısıtılmış tam olarak 1,2 mililitre taze kültür ortamı yerleştirin. Çanağı örtün ve çanağı sıcak plaka üzerindeki izlenen daireye yerleştirin. Lazer kontrol bilgisayarına 200 mikrometre çapında bir termokupl bağlayın ve sıcaklık kalibrasyon protokolünü açın.Termokupl'u tabaktaki deliklerden birine yerleştirin, böylece uç tabağın dibinde, işaretin bulunduğu yerlerden birinde olur. Termokuplun ucunun tabağın dibine ölçülen hassasiyette temas edip etmediğini kontrol etmek çok önemlidir çünkü sıcaklık derinliğe göre değişebilir. Kültür ortamının 37 santigrat derecede stabilize olmasını bekleyin.Ardından Thulium lazeri açın ve lazer gücünü istenen başlangıç seviyesine ayarlayın. Ön ısıtma sürelerinin 140 ve sekiz saniye olarak ayarlandığını doğrulayın ve ardından ön ısıtma ışınlama sırasını başlatın. Sesli bir bip sesiyle işaret edildiği gibi 140 saniye sonra, kültür kabının kapağını hemen çıkarın.Ön ısıtma bitene ve 10 saniyelik ışınlama gerçekleşene kadar bekleyin. Sonra hemen tabağı örtün. Bu şekilde 21 işaret konumundaki sıcaklığı ölçün.Bu prosedürü, lazer güç aralığını kapsayan üç watt güç aralıklarında her biri üç kez gerçekleştirin. Bitirdikten sonra thulium lazeri kapatın. Sıcaklık verilerini dışa aktarın ve analiz edin.Deneyden önce, 30 çaplı kültür kaplarında kültür kiralama pigment epitel hücreleri bulunur. Hücre kültürlerini %5 karbondioksit atmosferinde 37 santigrat derecede tutun ve canlı hücre görüntüleme sistemi kullanarak kontrol edin. Işınlamadan bir saat önce, her tabaktaki kültür ortamını tam olarak 1.2 mililitre taze kültür ortamı ile değiştirin.Kültürleri kuluçka makinesine geri koyun. Işınlama istasyonunun hazır olduğunu ve sıcak plakanın 39 santigrat dereceye ayarlandığını doğrulayın. Işınlamaya başlamaya hazır olduğunuzda, thulium lazeri istenen güçte başlatın.Deney protokolünü açın ve ön ısıtma sürelerinin 140 ve sekiz saniye olarak ayarlandığını doğrulayın. Bir RPE hücre kültürünü, sıcak plaka üzerindeki işaretli konuma kapalı bir tabağa yerleştirin ve hemen 140 ve sekiz saniyelik ön ısıtma ışınlama dizisini başlatın. 140 saniye ön ısıtmadan sonra bulaşık kapağını çıkarın.Ön ısıtma bitene ve 10 saniyelik ışınlama gerçekleşene kadar bekleyin. Hemen tabağı örtün, yedi saniye bekleyin ve ardından tabağı inkübatöre geri koyun. Artan lazer gücü seviyelerinde ek numuneleri ışınlayın.Bitirdiğinizde, thulium lazeri kapatın. Hücre canlılığı değerlendirmesine başlamak için, ışınlanmış hücreleri PBS ile yıkayın. Canlı apoptotik ve nekrotik hücreleri ayırt edebilen bir kit edinin.Daha sonra düşük ışıkta, 500 mikrolitre bağlayıcı tamponu 25 mikrolitre etidyum homodimer-3, FITC annexin ve Hoechst 33342 ile birleştirin. Hücreleri bu boyama solüsyonunda oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. Daha sonra hücreleri 1X bağlayıcı tampon ile iki kez yıkayın.Bağlayıcı tamponu PBS ile değiştirin ve hücreyi DAPI, FITC ve TRITC filtrelerine sahip bir floresan mikroskobu sahnesine yerleştirin. Mikroskop ışık yolunu oküler lense ayarlayın ve DAPI filtresini seçin. Aydınlatma ışığını açın ve 4X objektif lensi ile odak düzlemini bulun.Mikroskop kamerasına giden ışık yolunu ayarlayın. Görüntüyü ortalamak ve odaklamak için mikroskop görüntüleme yazılımını kullanın. DAPI filtresini kullanarak görüntü alma parametrelerini tanımlayın.Odaklama işlemini ve görüntü elde etme kurulumunu FITC ve TRITC filtreleriyle tekrarlayın. Ardından, görüntüleme yazılımını kullanarak çanak boyunca üç filtre setiyle birden fazla görüntü elde edin ve bunları tüm kültür kabının tek bir görüntüsünde birleştirin. Apoptoz ve hücre ölümü için sıcaklık eşiklerini belirlemek için analitik yazılım kullanın.Bir hücre kültürü kabının merkezindeki maksimum sıcaklık artışı ile lazer gücü arasındaki oransal ilişki, açıklanan termal kalibrasyon prosedürü ile belirlendi. Hücre kültürü kabı boyunca maksimum sıcaklık dağılımı daha sonra bir Gauss fonksiyonuna uygun hale getirildi. Işınlamayı takiben üç boyama paterni gözlendi.43 santigrat derece veya altındaki sıcaklıklara maruz kalan kültürlerde canlılık değişikliği gözlenmedi. Apoptoz ilk olarak 47 santigrat derecede ışınlamadan üç saat sonra gözlendi. Hücre ölümü, 51 santigrat derece ve daha yüksek bir sıcaklıktan üç saat sonra gözlendi.Apoptoz ve hücre ölümü için ortalama eşik sıcaklıkları daha sonra ölü ve apoptotik alanların ölçülen yarıçaplarının ortalaması, sıcaklık dağılımını tanımlayan Gauss fonksiyonuna uygulanarak belirlendi. Bu işlemi takiben farklı lazer profilleri, spot boyutları ve ışınlama süreleri gibi birçok farklı koşulda ışınlama yapılabilir. Bu, hücresel düzeyde bireysel zamanlanmış sıcaklık nedenleriyle ilgili soruların anlaşılmasına ve araştırılmasına yardımcı olabilir.Bu videoyu izledikten sonra, sıcaklık ve zaman üzerinde iyi bir kontrol ile hücre kültürünü nasıl ısıtacağınızı iyi anlamış olmalısınız. Bu, farklı termal ışınlama koşullarına biyolojik tepkileri inceleme olasılıklarına dayanabilir. Lazerlerle çalışmanın gözleriniz ve cildiniz için çok tehlikeli olabileceğini unutmayın.Lazer ışınlama güvenliği eğitimi hakkında bilgi sahibi olun. Bu prosedürü gerçekleştirirken daima uygun koruyucu gözlük, laboratuvar önlüğü ve eldiven giyin.

continuous-wave-thulium-laser-for-heating-cultured-cells-to

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz böylece etkili fototermal tedavi ajanları işleyen, yapı-bağımlı floresan kendini söndürme ve benzersiz fototermal özelliklere sahip porphysomes denilen yeni içsel fonksiyonlu nanovesicles geliştirdi. Bu yüksek basınçlı ekstrüzyon porphysomes kullanılarak formüle edilebilir ve bir ksenograft tümör modelinde bunların fototermal tedavi etkinliğini araştırmıştır.

One Minute, Porphysomes Sub-Bir-Watt Fototermal Tümör Ablasyon, İçsel fonksiyonlu Nanovesicles

BİR MR-uyumlu özel tasarlanmış lazer tabanlı ısıtma cihazları, özellikle tümör bölgesinde termosensitif lipozomlardan maddelerin salınımını aktive etmek amacıyla deri altı tümörlerin lokal ısıtma sağlamak için geliştirilmiştir.

Manyetik Rezonans Görüntü Rehberlik ile Termosensitif Lipozomlu gelen Sisplatinin Tetikleme Release için özel tasarlanmış Lazer-bazlı ısıtma Aparatı

Öropiyum thenoyltrifluoroacetonate (EuTFC) aktivasyon verimliliği sıcaklığı ile büyük ölçüde azalır azalmaz 612 nm'de bir optik lüminesans hattı vardır. Bu materyalin ince bir film ile kaplanmış bir örnek mikro görüntüsü ise, 612 nm ışık yayan yanıt yoğunluğu, numune yüzey sıcaklığının doğrudan harita haline dönüştürülebilirler.

Öropiyum Şelat Lüminesans Kaplamaları Kullanma yüksek çözünürlüklü Termal Mikro görüntüleme

Bu yöntem dikey yüzey altı kusurların bulunmasını amaçlamaktadır. Burada, bir lazeri bir alansal ışık modülatörüyle birleştirip, iki aşamalı modüle edilmiş çizgi ile deterministik olarak bir örnek yüzeyini ısıtmak için video girdisini tetikleyip çok çözünen termal görüntüler elde ediyoruz. Arıza konumu, termal dalga girişim minimum değerinin değerlendirilmesinden alınır.

Lazerle Projeksiyonlu Fototermal Termografi Kullanılarak Yapısal Isıtma Yöntemiyle Alt Yüzey Kusurlu Lokalizasyonu

Burada sunulan, manyetik hipertermi ve fototermal kombinasyon kanser tedavisi için bir nanoterapötik platformda kendi kendine montaj, sinerjik manyetik, akustik ve optik yanıt verme yoluyla demir oksit nanopartikül kabuklu mikrobubbles (NSM) imalatı için bir protokoldür.

Manyetik Hipertermi ve Pothototermal Kombinasyon Kanser Tedavisi için Manyetik, Akustik ve Optik-Üçlü Duyarlı Mikrobubbles

Bu makale, Fura-2/boyası ile tek hücreli Ca2+ görüntüleme kullanılarak hücrelerde kalsiyum iyonu (Ca 2+) konsantrasyonlarının gerçek zamanlı, kantitatif izlenmesi için bir yöntem sunmaktadır. Bu teknik, floresan yoğunluk oranları aracılığıyla verimli boya yüklemesi ve Ca2+ seviyelerinin doğru bir şekilde hesaplanmasını sağlayarak araştırma uygulamaları için basit ve hızlı bir yaklaşım haline getirir.

Kalsiyum iyon kanallarının aktivasyonunu incelemek için tek hücreli kalsiyum görüntüleme

Bu çalışmada Er,Cr:YSGG ve diyot lazerler ile özel olarak tasarlanmış toplam 96 adet titanyum silindirin düz yüzeyine ayrı ayrı uygulanmıştır. Diğer yüzeye bir termokupl yerleştirildi ve sıcaklık ölçüldü. Yüzey pürüzlülüğü profilometre, SEM ve AFM ile analiz edilir.

In Vitro Kullanılan Er, Cr:YSGG ve Diode Lazerlerin Titanyum Silindir Üzerine Etkilerinin Değerlendirilmesi

Bu protokol, katı tümör modellerinde hedefe yönelik hipertermik tedavi için gerekli teknikleri ve metodolojiyi sunar. Yaklaşım, tümör mikroçevresinde lokalize ısınmayı indüklemek için intratümöral olarak enjekte edilen altın nanoçubuklar tarafından yakın kızılötesi ışığın fototermal dönüşümünden yararlanır.

Yakın Kızılötesi Işığın İntratümöral Altın Nanoçubuklar Tarafından Fototermal Dönüşümü Yoluyla Murin Tümör Modellerinde Hedeflenen Hafif Hiperterminin İndüklenmesi

Bu makale, yerel yıkıcı olmayan termal karakterizasyon ve görüntüleme için Frekans Alanı Termorefleksiyon (FDTR) tekniğini sunmaktadır.

Termal Özellik Ölçümleri İçin Frekans Alanı Termoyansıması Tekniği

Hücresel fonksiyonları katmanlarından sertlik etkisi modellenmiş...

Matrix Rijitlik Akrilamid tabanlı Hidrojeller kullanarak Hücresel Fonksiyon Üzerindeki Etkilerinin incelenmesi

Öğrenin, sürekli dalga tribün lazeri ile kültür hücrelerini ısıtarak termal doza bağımlı hücresel yanıtları incelemeyi. Bu yöntem, retinal pigment epitel hücreleri ve kanser hücreleri gibi modellerde hipertermi yanıtlarını hassas sıcaklık kontrolüyle çalışmaya olanak tanır.

Hücresel Termal Etkileri İncelemek İçin Kültür Hücrelerini Isıtma İçin Sürekli Dalga Tribün Lazeri

Daha fazla video keşfet