Name: Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Keşfedin lipofilik doksorubisin pro-ilaç misellerinin hazırlanması ve karakterizasyonu yöntemini. Bu teknik, ilaç yükleme kapasitesini artırarak kanser tedavisinde hedefe yönelik dağıtım sağlar ve toksisiteyi azaltır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma aşağıdaki hibelerle desteklenmiştir: NIH-SC3 hibesi, NSF-PREM hibesi, Hampton Üniversitesi Fakülte Araştırma Bursu. Virginia Deniz Bilimleri Enstitüsü'nden (VIMS) Bayan Michele A. Cochran'a partikül boyutu analiz cihazının kullanımı için teşekkür ederiz. Makaleyi incelediği için Bayan Corinne R. Ramaley'e de teşekkür ederiz.

DOX-PA 1. Sentezi <ol><li> Doksorubisinin 390 mg ve palmitik asit hidrazid 243 mg ağırlığında ve yuvarlak dipli bir şişeye aktarın. </li><li> cam şırınga ile şişeye susuz metanol 150 ml ekleyin. bir pipet ile trifloroasetik asit (TFA) 39 ul ekle. Manyetik bir karıştırıcı kullanarak, karanlıkta, oda sıcaklığında 18 saat boyunca reaksiyon karışımının karıştırın. NOT: Reaksiyon malzemelerin miktarları kadar ölçeklendirilebilir veya aşağı DOX-PA farklı miktarlarda elde etmek için. reaktiflerin oranı, aynı oranlarda muhafaza edilmelidir. 78 mg 1.170 mg aralığında DOX miktarlar kullanılarak reaksiyonlar düzenli kimya laboratuvar gerçekleştirilebilir. </li><li> Bir silika jel kolonu kullanılarak DOX-PA ile saflaştırılması. 17. <ol><li> Bir dönen buharlaştıncı ile reaksiyon karışımında çözücüyü çıkarın. Karışımın hacmi yaklaşık 20 ml azaltılmış sonra, silika jel, 3 g ekleyin. kuru tozlar elde etmek için döner buharlaştırma devam edin ve t sağlamak içinO silika jel üzerine ürünlerin adsorplanmadan. Kuru tozlar oluştuktan sonra ilave bir 30 dakika boyunca vakum altında örnek tutun. </li><li> bir çözücü olarak diklorometan kullanılarak bir sütun halinde, silika jel 50 g paketleyin. Dikkatle kolonuna adsorbe ürün silika jel içeren bir örnek ilave edin. </li><li> Yavaş yavaş ve böylece çözücünün polaritesi (Tablo 1), artan metanol yüzdesi artırırken, bir diklorometan ve metanol karışımı ile sütun yıkayın. </li><li> Test tüpleri içinde eluent fraksiyonlar (25 mi / tüp) toplayın ve ince tabaka kromatografisi (TLC) ile ilerlemesini izlemek. </li><li> Saf DOX-PA içeren tüm fraksiyonlar birleştirilir ve kuru toz elde edilinceye kadar, bir döner evaporatör kullanılarak solvent çıkartılmıştır. Bundan başka, bir vakum O / N ve ürünle kurutun. </li></ol></li><li> TLC ile DOX-PA analizi. <ol><li> TLC plakası bir 4 cm x 8 cm uzunluğunda kesilir. TLC tespit kılcal damarların ile plakanın alt spot örnek çözümler 0.5 cm buluştu kullanarakçözücü olarak HANOL. </li><li> diklorometan ve metanol karışımı içeren bir geliştirme odasına TLC plakasını (3/1, hac / hac). Çözücünün derinliği 0.5 cm sadece az olmalıdır. </li><li> Çözücü ön plaka üst ulaştığında gelişmekte odasından plakasını sökün. Bir kalemle çözücü ön yerini işaretlemek ve plaka kurumasını bekleyin. örnekleri görselleştirmek için doymuş iyodin buharı ihtiva eden bir boyama odasına TLC plakasını. </li></ol></li><li> 1H-Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi (1 &#39;H-NMR) ile DOX-PA analizi. 18 <ol><li> metil sülfoksit-d6 (DMSO) içinde 1 ml DOX-PS 15 mg çözülür ve bir NMR tüpü içine örnek aktarmak. </li><li> NMR aracın cazibe merkezi haline NMR tüpü yerleştirin. Bir çözücü olarak DMSO seçilmesi, proton spektrumunun ölçün. mıknatıstan NMR tüpü çıkarın. NMR sonucu 18 analiz edin. </li></ol></li></ol> 2. Film dağıtım metodu ile DOX-PA miseller hazırlanması <ol><li> DSPE-PEG (40 mg) ve DOX-PA (4 mg), 10 ml bir cam şişe içinde, 2 ml metanol ile çözülür. </li><li> şişede ince bir film oluşana kadar bir döner buharlaştırıcı kullanılarak vakum altında organik çözücüyü çıkarın. Alternatif olarak, (örneğin, argon veya azot gazı), bir film oluşturmak ve daha fazla kalan solventin çıkması için bir vakum desikatörde flakon tutmak için atıl gaz altında, organik çözücüler buharlaştırılmış: NOT. </li><li> Aktarım cam şişeye Dulbecco fosfat tamponlu tuzlu su (pH 7.4, DPBS) içinde 2 mi. </li><li> miseller oluşturmak için oda sıcaklığında 3 dakika boyunca ultrasonik bir banyoda şişe yerleştirin. NOT: Ultrasonik güç ultrasonik banyolarda farklı modeller arasında değişir. ince polimer / ilaç filmi dağıtmak için yeterli ultrasonik güç üretebilir bir birimi seçin. Bu protokolde kullanılan ultrasonik banyosunun çıkış gücü 110 W olan </li><li> Kısa süreli depolama için 4 ° C&#39;de miseller tutmak ve -20 ° C de, uzunuzun dönem depolama. Not: Alternatif olarak, misellerin dondurularak kurutulmuş ve kullanımdan önce su ile yeniden oluşturulabilir. Genellikle, herhangi bir dondurarak saklama koruyucusu ve liyoprotektan, bu formülasyon için gereklidir. </li></ol> DOX-PA misellerin 3. karakterizasyonu <ol><li> Miseller ve ilaç kapsülleme verimliliği DOX-PA konsantrasyonunun belirlenmesi <ol><li> 1 ug / ml, 5 ug / ml, 20 ug / ml, 50 ug / ml ve 100 ug / ml: DOX-PA beş farklı konsantrasyonlarda DOX-PA çözeltiler hazırlanması DMSO içinde bir önceki adımda sentezlenmiştir çözülür. 490 nm&#39;de bir UV-VIS spektrometresi ile DOX-PA çözeltiler emilimini belirlemek. DOX-PA madde konsantrasyonları ve 490 nm&#39;de bunların karşılık gelen emme göre bir standart eğri oluşturur. </li><li> DMSO, 500 ul ilaç yüklü misel 25 ul seyreltilir. Bir UV-VIS spektrometresi ile 490 nm&#39;de emilim ölçülür. 3.1.1 oluşturulan standart eğri ile ilaç konsantrasyonlarını hesaplayın. </li><li> Aşağıdaki denklem kullanılarak Kapsülleme verimliliği hesaplayın: İlaç Kapsülleme verimliliği (%) = (miseller ilaç miktarı) / (ilave ilaç miktarı) x% 100 </li></ol></li><li> Dinamik ışık dağılımı ile parçacık boyutunun Karakterizasyonu (DLS) <ol><li> 1 mg / ml&#39;lik bir son DSPE-PEG konsantrasyonuna DPBS (pH 7.4) ile miseller seyreltilir. Z-ortalama boyutu ve çok yönlü dağılma indeksi (PDI) elde etmek için bir parçacık boyutu analiz cihazı ile, 2 ml lik bir numuneyi analiz edin. </li></ol></li><li> In vitro anti-kanser etkinliğinin değerlendirilmesi NOT: Uygun steril tekniği kullanın ve bir biyogüvenlik kabini içinde çalışırlar. <ol><li> Bir hücre kültür şişesine (örn, T25) ihtiva eden, DU-145, insan prostat kanseri hücreleri, hücre kültürü ortamının çıkarın ve DPBS, 2 ml (pH 7.4) ile hücrelerin yıkayın. </li><li> Aspire DPBS, tripsin solüsyonu (% 0.25) 1 ml ekleyin ve hücreleri ayırmak için 37 ° C&#39;de 2 dakika süreyle inkübe edin. </li><li> 10 m eklehücre kültürü aracı maddesi (RPMI 1640 +% 10 cenin sığır serumu +% 1 antibiyotik antimikotik), hücrelerin en şişeden çözülmüş olduğunda. 15 ml santrifüj tüpüne ve santrifüj 5 dakika boyunca 1000 x g&#39;de hücreleri hücreleri aktarın. </li><li> Hücre kültür ortamı, 5 ml hücre pelet yeniden askıya ve bir hemositometrede hücre adedini saymak için bir örnek çıkarın. 50,000 hücre / ml&#39;lik bir yoğunluğa kadar hücre kültürü ortamı ile hücreleri seyreltilir. Bir 96-yuvalı hücre kültürü plakasının seyreltilmiş hücre süspansiyonu ekleyin (100 ul / oyuk). Bir hücre kültür inkübatörü içinde inkübe hücreleri (37 ° C,% 5 CO2) 18 saat hücre tutunmasını sağlar. </li><li> sırasıyla, 0.1 uM ve 0.5 uM, 2 uM, 5 uM ve 10 uM nihai ilaç konsantrasyonlarını elde etmek için hücre kültürü ortamı ile DOX dimetil sülfoksit (DMSO) çözeltisi ve DOX-PA DMSO çözeltisi ile seyreltilir. % 0.5 her şeyden örneklerde nihai DMSO konsantrasyonu muhafaza edin. nihai ilaç CO elde etmek için hücre kültürü ortamı ile DOX-PA misel seyreltin0.1 uM ncentrations sırasıyla 0.5 uM, 2 uM, 5 uM, 10 uM,. Boş hücre kültürü ortamında bir denetimi kullanın. </li><li> inkübatör 96 oyuklu hücre kültürü plakasının çıkarın ve (her bir grup için n = 4) adım 3.3.5 hazırlandı, farklı işleme maddeleri içeren ortama, 100 ul hücre kültür ortamı yerine. (2, 37 ° C,% 5 CO) ek 72 saat için hücre kültürü inkübatöründe inkübe hücreleri. </li><li> orta aspire ve 3- (4,5-dimetil-tiazol-2-il) ve 0.5 mg / ml ihtiva eden ortam 100 ul -2,5-difenil tetrazolyum bromid (MTT) ilave edin. </li><li> 2 saat daha, hücre kültürü inkübatöründe inkübe hücreleri. Dikkatle orta kaldırmak ve formazan kristalleri eritmek için DMSO 100 ul ekleyin. </li><li> 570 nm&#39;lik bir dalga boyu ve 670 nm&#39;lik bir referans dalga boyu mikroplaka spektrofotometresiyle absorbansı ölçülür. </li><li> Aşağıdaki denklem kullanılarak hücre sağ kalabilirliğinin hesaplanması: <strong&gt; Hücre Canlılığı (%) = (A Testi / bir kontrol) x% 100 NOT: varyans (ANOVA) istatistik testi, tek-yönlü analizi kullanılarak farklı gruplar arasında hücre canlılığı karşılaştır. Ilaç konsantrasyon verileri vs hücre canlılığı dayalı IC 50 hesaplayın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Hennenfent, K. L., Govindan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+formulations+of+taxanes%3A+a+review.+Old+wine+in+a+new+bottle%3F%5BTitle%5D)+AND+%22ESMO%22%5BJournal%5D)">Novel formulations of taxanes: a review. Old wine in a new bottle?</a> ESMO. 17 (5), 735-749 (2006).</li>
<li>Paliwal, S. R., Paliwal, R., Agrawal, G. P., Vyas, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomal+nanomedicine+for+breast+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Liposomal nanomedicine for breast cancer therapy.</a> Nanomedicine. 6 (6), 1085-1100 (2011).</li>
<li>Mahapatro, A., Singh, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+nanoparticles+are+excellent+vehicle+for+site+directed+in+vivo+delivery+of+drugs+and+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Biodegradable nanoparticles are excellent vehicle for site directed in vivo delivery of drugs and vaccines.</a> J Nanobiotechnology. 9 (55), (2011).</li>
<li>Danquah, M., Li, F., Duke, C. B., Miller 3rd,, D, D., Mahato, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micellar+delivery+of+bicalutamide+and+embelin+for+treating+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Micellar delivery of bicalutamide and embelin for treating prostate cancer.</a> Pharm Res. 26 (9), 2081-2092 (2009).</li>
<li>Li, F., Danquah, M., Mahato, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+characterization+of+amphiphilic+lipopolymers+for+micellar+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Synthesis and characterization of amphiphilic lipopolymers for micellar drug delivery.</a> Biomacromolecules. 11 (10), 2610-2620 (2010).</li>
<li>Li, F., Danquah, M., Singh, S., Hao, W., Mahato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paclitaxel-+and+lapatinib-loaded+lipopolymer+micelles+overcome+multidrug+resistance+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv.+and+Transl.+Res%22%5BJournal%5D)">Paclitaxel- and lapatinib-loaded lipopolymer micelles overcome multidrug resistance in prostate cancer.</a> Drug Deliv. and Transl. Res. 1 (6), 9(2011).</li>
<li>Li, F., Lu, Y., Li, W., Miller, D. D., Mahato, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+formulation+and+in+vitro+evaluation+of+a+novel+microtubule+destabilizer%2C+SMART-100%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Synthesis, formulation and in vitro evaluation of a novel microtubule destabilizer, SMART-100.</a> J Control Release. 143 (1), 151-158 (2010).</li>
<li>Minko, T., Kopeckova, P., Pozharov, V., Kopecek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HPMA+copolymer+bound+adriamycin+overcomes+MDR1+gene+encoded+resistance+in+a+human+ovarian+carcinoma+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">HPMA copolymer bound adriamycin overcomes MDR1 gene encoded resistance in a human ovarian carcinoma cell line.</a> J Control Release. 54 (2), 223-233 (1998).</li>
<li>Rosenholm, J. M., Mamaeva, V., Sahlgren, C., Linden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+targeted+cancer+therapy%3A+mesoporous+silica+nanoparticles+entering+preclinical+development+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in targeted cancer therapy: mesoporous silica nanoparticles entering preclinical development stage.</a> Nanomedicine. 7 (1), 111-120 (2012).</li>
<li>Kaur, I. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+and+concerns+in+nanotech+product+development+and+its+commercialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Issues and concerns in nanotech product development and its commercialization.</a> J Control Release. 193, 51-62 (2014).</li>
<li>Jones, M., Leroux, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+micelles+-+a+new+generation+of+colloidal+drug+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Biopharm%22%5BJournal%5D)">Polymeric micelles - a new generation of colloidal drug carriers.</a> Eur J Pharm Biopharm. 48 (2), 101-111 (1999).</li>
<li>Wang, H., Li, F., Du, C., Mahato, R. I., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin+and+lapatinib+combination+nanomedicine+for+treating+resistant+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin and lapatinib combination nanomedicine for treating resistant breast cancer.</a> Mol Pharm. 11 (8), 2600-2611 (2014).</li>
<li>Ma, P., Rahima Benhabbour, S., Feng, L., Mumper, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2%27-Behenoyl-paclitaxel+conjugate+containing+lipid+nanoparticles+for+the+treatment+of+metastatic+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">2'-Behenoyl-paclitaxel conjugate containing lipid nanoparticles for the treatment of metastatic breast cancer.</a> Cancer Lett. 334 (2), 253-262 (2013).</li>
<li>Lundberg, B. B., Risovic, V., Ramaswamy, M., Wasan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lipophilic+paclitaxel+derivative+incorporated+in+a+lipid+emulsion+for+parenteral+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">A lipophilic paclitaxel derivative incorporated in a lipid emulsion for parenteral administration.</a> J Control Release. 86 (1), 93-100 (2003).</li>
<li>Perche, F., Patel, N. R., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+and+toxicity+of+antibody-targeted+doxorubicin-loaded+PEG-PE+micelles+in+ovarian+cancer+cell+spheroid+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Accumulation and toxicity of antibody-targeted doxorubicin-loaded PEG-PE micelles in ovarian cancer cell spheroid model.</a> J Control Release. 164 (1), 95-102 (2012).</li>
<li>Gill, K. K., Kaddoumi, A., Nazzal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mixed+micelles+of+PEG%282000%29-DSPE+and+vitamin-E+TPGS+for+concurrent+delivery+of+paclitaxel+and+parthenolide%3A+enhanced+chemosenstization+and+antitumor+efficacy+against+non-small+cell+lung+cancer+%28NSCLC%29+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Mixed micelles of PEG(2000)-DSPE and vitamin-E TPGS for concurrent delivery of paclitaxel and parthenolide: enhanced chemosenstization and antitumor efficacy against non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines.</a> Eur J Pharm Sci. 46 (1-2), 67-71 (2012).</li>
<li>Still, W. C., Kahn, M., Mitra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Chromatographic+Technique+for+Preparative+Separations+with+Moderate+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Moderate Resolution.</a> J. Org. Chem. 43 (14), 2923-2925 (1978).</li>
<li>New Mexico State University. NMR Protocols and Specifications. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://web.nmsu.edu/~kburke/Instrumentation/NMSU_NMR_300.html">http://web.nmsu.edu/~kburke/Instrumentation/NMSU_NMR_300.html</a> (2015).</li>
<li>Morton, L. A., Saludes, J. P., Yin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constant+pressure-controlled+extrusion+method+for+the+preparation+of+Nano-sized+lipid+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Constant pressure-controlled extrusion method for the preparation of Nano-sized lipid vesicles.</a> J Vis Exp. (64), (2012).</li>
<li>Ulbrich, K., Etrych, T., Chytil, P., Jelinkova, M., Rihova, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HPMA+copolymers+with+pH-controlled+release+of+doxorubicin%3A+in+vitro+cytotoxicity+and+in+vivo+antitumor+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">HPMA copolymers with pH-controlled release of doxorubicin: in vitro cytotoxicity and in vivo antitumor activity.</a> J Controlled Release. 87 (1-3), 33-47 (2003).</li>
<li>Patil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Delivery+of+Doxorubicin+via+pH-Controlled+Hydrazone+Linkage+Using+Multifunctional+Nano+Vehicle+Based+on+Poly%28beta-L-Malic+Acid%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(beta-L-Malic Acid).</a> Int J Mol Sci. 13 (9), 11681-11693 (2012).</li>
<li>Hu, X., Liu, S., Huang, Y., Chen, X., Jing, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+block+copolymer-doxorubicin+conjugates+via+different+linkages%3A+preparation%2C+characterization%2C+and+in+vitro+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Biodegradable block copolymer-doxorubicin conjugates via different linkages: preparation, characterization, and in vitro evaluation.</a> Biomacromolecules. 11 (8), 2094-2102 (2010).</li>
<li>Huynh, L., Neale, C., Pomes, R., Allen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+approaches+to+the+rational+design+of+nanoemulsions%2C+polymeric+micelles%2C+and+dendrimers+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Computational approaches to the rational design of nanoemulsions, polymeric micelles, and dendrimers for drug delivery.</a> Nanomedicine. 8 (1), 20-36 (2012).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+drug-specific+nanocarrier+design+for+efficient+anticancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A drug-specific nanocarrier design for efficient anticancer therapy.</a> Nat Commun. 6, 7449(2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu çalışmada, miseller hazırlanması için basit ve hızlı bir film-dispersiyon bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, bir amfifilik polimerin kendinden montaj özelliklerinden istifade (örneğin, DSPE-PEG) sulu bir ortamda çekirdek-kabuk yapılı miseller oluşturmak için. Bu misel hazırlama yöntemi birçok avantaja sahiptir. 1. Genellikle lipozom, nanopartiküller ve nanoemülsiyonlar. 19 2 hazırlanmasında kullanılan (örneğin, haddeleme ya da homojenizasyon gibi) karışık büyüklük azaltma adımlarının kullanımı...

Kemoterapi genellikle çeşitli kanser tiplerini tedavi etmek için kullanılır. hepsi değilse de çoğu, kemoterapi ilaçları daha fazla yaşamı tehdit eden koşullara, bulantı ve ishal gibi yönetilebilir küçük koşullar değişebilir toksik yan etkileri vardır. En antikanser ilaçların toksik olduğundan, normal dokuya bu ilaçların seçici olmayan maruz kaçınılmaz toksisiteye neden olur. Bu nedenle, seçici bir şekilde kanser hücrelerine ilaç teslim bir terapötik yaklaşım için büyük bir ihtiyaç vardır. antikanser ilaçların verilmesi ile diğer zorluk da kötü su çözünürlüğü olduğunu. Genellikle, çözündürücü maddeler, bu az çözünen ilaçların formüle edilmesi gereklidir. Bununla birlikte, dimetil sülfoksit gibi en çözündürücü maddeler, (DMSO), Cremophor EL, ve polisorbat 80 (Tween 80), karaciğer ve böbrek toksisitesi, hemoliz, akut yüksek tansiyon tepkilerine ve periferal nöropatiler neden olabilir. 1 Bu nedenle, güvenli ve biyo-uyumlu formülasyonlar için gerekli olan yoksul klinik kullanımıly çözünür antikanser ilaçlar. Nanocarriers yukarıdaki zorlukları ele almak için ilaç taşıyıcı sistemleri umut vericidir. Bu nanocarriers lipozomlar, 2 nano-tanecikleri, 3 miseller, 4-7, polimer-ilaç konjügatları, 8 ve inorganik malzemeler bulunmaktadır. 9 Çeşitli Nanomedicine ürünleri (örneğin, Doxil, Abraxane ve Genexol) kanser hastalarının tedavisinde düzenleyici kurumlar tarafından onaylanmıştır. 10 Polimerik miseller başarılı antikanser ilaçların verilmesi için kullanılan nano ölçekli ilaç verme taşıyıcılar, umut vericidir. 4-7,11,12 tipik bir polimerik miseller kendinden montaj işlemi boyunca amfifil polimerlerle hazırlanır. Çekirdek-kabuk yapılı polimer miseller bir hidrofilik ve bir hidrofobik kabuk çekirdek bulunmaktadır. hidrofil kabuk sterik miseller stabilize ve kanda kendi dolaşımını uzatabilir. hidrofobik çekirdek etkin bir şekilde hidrofobik d sarabilirizkilim. Çünkü miseller (tipik olarak en az 200 nm) ve uzun sirkülasyon özelliklerinin küçük boyutu, polimerik miseller gelişmiş geçirgenlik ve tutma (EPR) etkileri (pasif tümör hedefleme) ile hedef tümör elde inanılmaktadır. İlaç yükü stabilite miseller yeteneğini hedef tümör için önemlidir. Optimal tümör hedefleme ulaşmak için, misel tümör sitesine ulaşmadan önce en az ilaç sızıntısı, henüz hızlı bir şekilde kanser hücrelerini girdikten sonra ilacı tahliye edilmelidir. formülasyon istikrar ürün geliştirme fizibilite yanı sıra geliştirilen ürünlerin raf ömrünü belirler, çünkü ek olarak, formülasyon stabilitesi, aynı zamanda ürün geliştirme için temel bir gerekliliktir. Son zamanlarda, çok çaba dağıtım taşıyıcılara ilaçların yükleme geliştirmek için yapılmıştır. Lipofilik ön-ilaç bir yaklaşım lipit nanopartiküller ve emülsiyonlar halinde ilaç yüklemesine geliştirmek için araştırılmaktadır bir stratejidir. 13,14 conjilaçlarla lipidlerin ugation önemli ölçüde iyileştirmek ve lipofilliğini nanocarriers lipofilik bileşenleri yükleme ve tutma artırabilir. Burada, lipofilik doksorubisin yanlısı ilaç yüklü miseller hazırlamak için bir protokol açıklar. İlk olarak, lipofilik yanlısı ilaç doksorubisin için sentez prosedürü tarif edilmektedir. Daha sonra, bir film-dispersiyon yöntemi ile miseller oluşturmak için bir protokol verilmektedir. Bu yöntem, başarılı bir şekilde daha önceki çalışmalarda kullanılmıştır. 5 DSPE-PEG başarıyla misel ilaç verilmesi için kullanılmıştır, çünkü miseller hazırlanması için taşıyıcı malzeme olarak seçilmiştir. 15,16 Son olarak, misel karakterize etmek için kullanılan çeşitli in vitro analizler açıklanmaktadır formülasyonlar ve antikanser aktivitesini değerlendirmek için.

<table><tbody><tr><td>DSPE-PEG2K</td><td>Cordenpharm</td><td>LP-R4-039></td><td>95</td></tr><tr><td>% Doksorubisin</td><td>LC Laboratuvarları</td><td>D-4000</td><td>% >99</td></tr> <tr><td>Palmitik Asit Hidrazid</td><td>TCI AMERİKA&nbsp; &nbsp;</td><td>P000425G</td><td>>98.0</td></tr>% <tr><td>Metanol</td><td>ACROS Organics</td><td>610981000</td><td>Susuz</td></tr><tr><td>Metilen klorür&nbsp;</td><td>BALIKÇI&nbsp;</td><td>D151-4</td><td>%99,90</td></tr> <tr><td>Metil sülfoksit-d<>sub6</td><td>ACROS Organics</td><td>AC320760075</td><td>NMR çözücü</td></tr><tr><td>Trifloroasetik Asit&nbsp;</td><td>ACROS Organics</td><td>AC293811000</td><td>%99,50</td></tr> <tr><td>Silika Jel</td><td>FISHER&nbsp;</td><td>L-7446</td><td>230-400 mesh</td></tr><tr><td>Baker Flex TLC Plakalar</td><td>FISHER&nbsp;</td><td></td><td></td>NC9990129</tr><tr><td>DPBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>DU 145&nbsp; Prostat Kanseri Hücreleri</td><td>ATCC</td><td>HTB-81</td><td></td></tr><tr><td>MTT</td><td>ACROS Organikler</td><td>158990050</td><td>%98</td></tr> <tr><td>RPMI 1640 Orta</td><td>MEDIATECH INC&nbsp;</td><td>10041CV</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik&nbsp;</td><td>YAŞAM TEKNOLOJİLERİ&nbsp;</td><td>15240062</td><td>100x stok solüsyonu</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>YAŞAM TEKNOLOJİLERİ&nbsp;</td><td></td><td></td>10437077</tr><tr><td>Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi</td><td>Varian, Inc</td><td></td><td>300 NMR&nbsp;</td></tr><tr><td>B&uuml; chi R-3 Rotavapor</td><td>Buchi</td><td>1103022V1&nbsp;</td><td>Döner evaporatör</td></tr><tr><td>Ultrasonik Banyo</td><td>BRANSON ULTRASONICS CORPORATION &nbsp;</td><td></td><td></td>CPX952318R</tr><tr><td>UV-VIS spektrometresi Biomate 3</td><td>Thermo Spectronic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano ZS90&nbsp;</td><td>Malvern Instruments</td><td></td><td>Partikül Boyutu Analyer Mikroplaka</td></tr><tr><td>Spektrofotometresi & nbsp;</td><td>Rio-Rad</td><td>Benchmark Plus&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü İnkübatörü</td><td>Napco</td><td>CO2 6000</td><td></td></tr><tr><td>Biyolojik Güvenlik Kabini</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SigmaPlot&nbsp;</td><td>Systat Yazılım A.Ş.</td><td></td><td>Analitik Yazılım</td></tr><tr><td>96 Kuyulu Hücre Kültürü Plakası</td><td>Becton Dickinson</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin&nbsp;% 0.25</td> <td>Corning Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

lipofilik doksorubisin pro-ilaç misellerin hazırlanması ve karakterizasyonu

Preparation and Characterization of Lipophilic Doxorubicin Pro-drug Micelles

Miseller, antikanser ilaçlarının verilmesi için başarıyla kullanılmıştır. Amfifilik polimerler, kendi kendine montaj yoluyla sulu bir ortamda çekirdek-kabuk yapılı miseller oluşturur. Misellerin hidrofobik çekirdeği, bir ilaç rezervuarı olarak işlev görür ve hidrofobik ilaçları kapsüller. Hidrofilik kabuk, misellerin toplanmasını önler ve ayrıca in vivo olarak sistemik dolaşımlarını uzatır. Bu protokolde, misellere ilaç yüklemesini artıracak bir doksorubisin lipofilik pro-ilaç olan doksorubisin-palmitik asidi (DOX-PA) sentezlemek için bir yöntem tarif ediyoruz. Doksorubisin'i lipid ile konjuge etmek için pH'a duyarlı bir hidrazon bağlayıcı kullanıldı, bu da kanser hücreleri içinde serbest doksorubisin salınımını kolaylaştırır. Sentezlenen DOX-PA, eluent olarak diklorometan/metanol kullanılarak bir silika jel kolonu ile saflaştırıldı. Saflaştırılmış DOX-PA, ince tabaka kromatografisi (TLC) ve 1H-Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi (1H-NMR) ile analiz edildi. DOX-PA yüklü DSPE-PEG misellerini hazırlamak için bir film dispersiyon yöntemi kullanıldı. Ek olarak, DOX-PA konsantrasyonunun ve kapsülleme verimliliğinin belirlenmesi, partikül boyutunun ve dağılımının ölçülmesi ve in vitro antikanser aktivitelerinin değerlendirilmesi dahil olmak üzere misel formülasyonlarını karakterize etmek için çeşitli yöntemler açıklanmaktadır. Bu protokol, ilaç yüklü misellerin hazırlanması ve karakterizasyonu ile ilgili yararlı bilgiler sağlar ve böylece yeni misel bazlı kanser nanoilaçlarının araştırılmasını ve geliştirilmesini kolaylaştıracaktır.

Şekil 1, DOX-PS sentez şemasını göstermektedir. DOX-PA pH&#39;a duyarlı hidrazon bağ yoluyla doksorubisin palmitik asit konjügasyonu sentezlendi. palmitik asit hidrazid hafif bir fazlalığı reaksiyon tamamlanmasını sağlamak için kullanılmıştır. Bu reaksiyon yöntemi çok yüksek bir etkinliğe sahip ve doksorubisinin sadece küçük bir miktar, bir 18 saat sonra (Şekil 2) ile gösterilmektedir. Verim yaklaşık% 88 idi. Reaksiyonun sonunda, DOX-PA, bir silika jel k...

Lipofilik doksorubisin ön-ilacın hazırlanması ve tanımlanması için bir protokol, 1,2-distearoil, sn -glisero-3-phosphoethanolamine- N yüklü - [amino (polietilen glikol) -2000] (DSPE-PEG) miseller anlatılmıştır.

Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Micelles have been successfully used for the delivery of anticancer drugs. Amphiphilic polymers form core-shell structured micelles in an aqueous ...

Bu protokolün genel amacı, lipofilik doksorubisin ön ilaç yüklü misel formülasyonlarının hazırlanması ve karakterize edilmesine yönelik prosedürleri tanımlamaktır. Bu yöntem, misel formülasyonu için basit ve güvenilir bir yaklaşım sunar. Doksorubisinin lipofilik ön ilacının sentezi, ilaç yüklemesini ve stabilitesini artırarak misel formülasyonu geliştirmedeki önemli bir sorunu çözebilir.Misell formülasyonu, ilaçların tümörlere hedeflenmesini artırabilir ve bu nedenle kanser tedavisinin toksisitesini azaltabilir. Bu projede açıklanan uygulamaya ek olarak, bu teknik ajanlar için nanotisap hazırlamak amacıyla da kullanılabilir. Lipofilik doksorubisin ön ilacı DOX-PA'yı sentezlemek için 390 miligram doksorubisin ve 243 miligram palmitik asit hidrozid tartın ve bunları bir balon jojeye aktarın.Cam şırınga ile balona 150 milliliters susuz metanol ekleyin. Ardından, bir pipet kullanarak 39 microliters trifloroasetik asit veya TFA ekleyin. Manyetik karıştırıcı kullanarak, reaksiyon karışımını oda sıcaklığında, karanlıkta 18 saat boyunca karıştırın.DOX-PA'yı silika jel kolon kullanarak saflaştırmak için, öncelikle reaksiyon karışımındaki çözücüyü bir döner evaporatör ile uzaklaştırın. Karış

preparation-characterization-lipophilic-doxorubicin-pro-drug

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu protokolün amacı, amfifilik blok kopolimerlerden oluşan misel ilaç taşıyıcı sistemlerde fiziksel olarak hapsolmuş, suda az çözünür ilaçların hazırlanmasını ve karakterizasyonunu tanımlamaktır.

Hazırlanması ve Bireysel Karakterizasyonu ve Multi-ilaç Fiziksel, polimerik misellerin Entrapped Loaded

Çekirdeklerinde kendi kendine birleşmiş nanoyapılar içeren lipid parçacıklarının kinetik stabilizasyonu için karbon nanotüplerin akıllı bir uygulamasını rapor ediyoruz. Lipid parçacıklarının hazırlanması, ilaç dağıtımı gibi biyomedikal uygulamalarda kullanımlarına izin veren oldukça düşük konsantrasyonlarda karbon nanotüpler gerektirir.

Karbon Nanotüpler tarafından Stabilize İçeriden Kendinden monte Lipid Parçacıklar uyduruk hazırlanması

Metoksi-polietilen glikol (MPEG-b -PPheGE) üzerine fenil glisidil eter (PheGE) anyonik polimerizasyon yaşayan önemli adımlar anlatılmıştır. Elde edilen blok kopolimer miseller (BCMS) fizyolojik olarak uygun koşulları elde edildi altında 4 gün boyunca doksorubisin% 14 (% ağırlık) ve ilacın sürekli bırakılmasını sağlar ile yüklendi.

π-π İstifleme etkileşimlerle Stabilize blok kopolimer miselleri hazırlanması için bir amfifilik kopolimerin anyonik polimerizasyonu

Kanser ilaçlarını tümör bölgelerine yüksek özgüllük ve azaltılmış yan etkilerle ulaştırmak için nanopartiküllere dayalı yeni yöntemler gereklidir. Burada, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon ile kolayca hazırlanabilen ve yükleri serbest bırakmak için indirgeyici bir tümör ortamı altında verimli bir şekilde ayrışabilen disülfür çapraz bağlı miselleri açıklıyoruz.

Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım

Bir sıvı kristal nanopartikül (LCNP) nanocarrier canlı hücrelerin plazma zarına bir hidrofobik yük sürekli verilme için uygun bir araç olarak kullanılarak.

Sıvı Kristal Nanopartikül Carrier bir Hidrofobik Kargo Encapsulated, hedeflenen Plazma Zarı Teslimat

Canlı hücre görüntüleme dinamik süreçler görselleştirmek için güçlü bir araçtır. Sabit hücrelerin incelenmesi yanlış yorumlama ve süreci hakkında kafa karışıklığı yol açabilir yalnızca statik resimler sağlar. Bu eser alımı, uyuşturucu yayın ve hücre içi canlı hücrelerdeki liposomal nano tanecikleri yerelleştirilmesini çalışmak için bir yöntem sunar.

Vitro Lipid tabanlı nano tanecikleri tarafından canlı hücre Chemotherapeutics keşfetmek için Imaging teslim kullanma

Bu iletişim kuralı bir verimli ve kullanışlı analitik süreci örnek ekstraksiyon ve birden fazla uyuşturucu, doksorubisin (DOX), mitomycin C (MMC) ve doxorubicinol (DOXol), biyolojik bir kardiyo-toksik DOX metaboliti eşzamanlı belirlenmesi açıklar Preklinik meme tümör modeli örnekleri nanopartikül formülasyonları sinerjik ilaç kombinasyonu ile tedavi.

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

Bu çalışmada nanopartikül karakterizasyonu takip nanoliposome hazırlık için ince lipid film yöntemi kullanılarak klasik hidrasyon açıklanır. A 47 kDa-hidrofilik ve küresel protein, tarin, başarıyla istikrarı artırmak için bir strateji olarak kapsüllenir, hızlı açıklık önlemek, ve kontrollü salınımı teşvik. Bu yöntem hidrofobik moleküllerkapsülasyonuna adapte edilebilir.

Biyoaktif Hidrofilik Globüler Proteinlerin Tuzakları Için Nanoliposomes Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Protokol, sendelenmiş herringbone micromixer microfluidics cihazını kullanarak termosensitli lipozomların hazırlanması için optimize edilmiş parametreleri sunar. Bu aynı zamanda lipozomlar içine doksorubisin ve indosiyanyeşil co-kapsülleme ve kontrollü / tetiklenen ilaç salınımı için doksorubisin fototermal tetiklenen serbest sağlar.

Lysolipid İçeren Sıcaklığa Duyarlı Lipozomların Mikroakışkan Üretimi

Bu protokolde, doxorubicin yüklü AS1411-g-PEI-g-PEG modifiye altın nanopartiküller üç aşamalı reaksiyonlar yoluyla sentezlenir. Daha sonra doksofobikin yüklenir ve kanser tedavisi için hedef kanser hücrelerine teslim edilir.

Hedeflenen İlaç Teslimatı için Doxorubicin Yüklü Aptamer-PEI-g-PEG Modifiye Altın Nanopartiküllerinin Sentezi

Keşfedin lipofilik doksorubisin pro-ilaç misellerinin hazırlanması ve karakterizasyonu yöntemini. Bu teknik, ilaç yükleme kapasitesini artırarak kanser tedavisinde hedefe yönelik dağıtım sağlar ve toksisiteyi azaltır.

Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Daha fazla video keşfet