Name: Willis Fare Çemberi Ayırma Protokolü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Öğrenin fare Willis çemberi izolasyonunu sinirbilim ve serebrovasküler araştırmalar için. Bu yöntem, Alzheimer gibi hastalıklarda damar yapısını bozmadan büyük damarları incelemeyi kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Paris VI Üniversitesi ve Pierre Fabre Yenilik hibe ile desteklenmiştir.

Tüm prosedürler hayvan deney için yerel etik kurul (Ile de France-Paris-Komitesi, Yetki 4270) onayı ile, bakım ve laboratuvar hayvanlarının kullanımı için Avrupa Birliği standartlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir. 1. Anestezi <ol><li> pentobarbitalin letal doz infüze yetişkin farelere intraperitonal olarak (27 gauge iğne ve 1 ml&#39;lik bir şırınga) (1 mg / 10 g vücut ağırlığı kadar) ameliyattan önce. </li></ol> 2. Gemi Perfüzyon NOT: damar perfüzyon sırasında gözlere veteriner merhem uygulamak için gerek yoktur. Bu prosedür, (5-10 dakika), hızlı ve hayvanın ölümü ile sona erer. Bir ayak tutam yanıt eksikliği onaylayın. <ol><li> iris makas kullanarak, sadece göğüs kafesine altında, karın duvarı ve periton içine, yaklaşık 4 cm uzunluğunda, bir kesi yapmak. </li><li> continu sonra diyafram küçük bir kesi (birkaç milimetre uzunluğunda) yapmak vee göğüs kafesinin tüm uzunluğu boyunca diyaframın kesi plevra boşluğunu ortaya çıkarmak. </li><li> uzak sternum kaldırın ve hemostatla sternum ucu kelepçe; Boyunda hemostat yerleştirin. Dikkatle kalbe sternum bağlayan yağ dokusu kırpın. </li><li> kalbin apeks sol ventrikül ile 15 gauge perfüzyon iğne geçirin. </li><li> Son olarak, bir çıkış oluşturmak için karaciğer lobları birini kesmek için makas kullanın. NOT: Alternatif çıkış sağ atriuma bir kesi oluşturmak için iris makası kullanılarak oluşturulabilir. </li><li> 2.5 ml / dk&#39;lık bir hızda çalışan bir pompa ile fosfat tamponlu tuz (PBS) 25 ila 50 ml hayvan serpmek. Karaciğer kan gibi beyazlasan PBS ile değiştirilir gerekir. </li><li> Karaciğer sıvı tamamen berrak bir kez yaklaşık beş dakika sonra, perfüzyon durdurun. </li><li> immün veya normal boyama planlanmış ise, paraformaldehid 50 ml ile hayvan serpmek(PFA, 4 PBS içinde%) 15 dakika karıştırıldı. NOT: Dikkat, PFA dumanı zehirlidir. PFA hayvanın perfüzyon havalandırılan bir duman başlığı içinde yapılmalıdır. </li></ol> 3. Beyin İzolasyonu ve Willis Çember <ol><li> Beyin izolasyonu <ol><li> Cerrahi bir makas ile baş kaldırmak. </li><li> burun boyun derinin boyunca, iris makas ile orta hat kesi olun. </li><li> kafatası maruz ve iris makası ile herhangi bir kalıntı kasları ve adipoz doku kaldırmak için cildi keserek. </li><li> Bir tarafta foramen magnum içine iris makas keskin ucunu yerleştirin ve dikkatlice (aynı zamanda kulak kanalında olarak da bilinir) dış kulak yolu kafatası iç yüzeyi boyunca kaydırın. </li><li> karşı tarafta 3.1.4 açıklanan kesi yeniden ve sutur başlamadan arası parietal kemiğin iç yüzeyi boyunca kesilmiş bir orta hat yapmak. </li><li> iris bitkiFrontal kemikte makas, sağ gözler arasında, sagital sütür ve daha sonra ikiye kafatası bölünmüş açın. </li><li> koku ampuller kapma ve ventral yüzeyinde sinir bağlantılarını kesmek iris makas kullanılarak, beyin kaldırın. </li><li> beyin çıkarın ve inek izolasyonu için buz soğukluğunda PBS içeren 60 mm Petri kabı içine koyun. Tamamen PBS içinde beyin batırmayın. Beyin% 4 PFA ile sabitlenmiş ise (daha sonra kesit ve immün ya da normal boyama için), 24 saat boyunca 4 ° C &#39;de% 4 PFA banyosu içinde tutmak. </li></ol></li><li> Willis poligonunun İzolasyonu NOT: Bir diseksiyon mikroskobu inek izolasyonu için gereklidir. Beyin tüm işlem boyunca 4 ° C&#39;de tutulmalıdır. <ol><li> Inek görselleştirmek için ters (yani, dorsal yüzeyinde) beyin koymak. </li><li> (Koku lobları dibinde anterior serebral arter (ACA) kapmak için küçük bir forseps kullanabilir <strong&gt; bir, Şekil 1) ve sarf basınçlı kap süreklilik onları ayırmak. B orta serebral arter (MCA) (Şekil 1) kesmek için aynı prosedürü kullanın. </li><li> korteks inek oluşturan ana arterleri kaldırmak ve kaldırmak için forseps keskin uçlarını kullanın. </li><li> forseps ile orta serebral arter (MCA) kavrayarak, beynin onları kesmek için arka iletişim arterlerin (PCA) başlangıç ​​yukarı kaldırın. ön arterleri (ACA ve MCA) Pick up ve anterior-dorsal yönde kiazmada üzerinde hafifçe çekin. İnek aksamaması için, diğer arterler ile başa çıkmak için prosedür kesme. </li><li> Tekrarlayın dorsal- çekerek, / (PCA) (c, Şekil 1) ve baziler arter (BA) (d, Şekil 1) için 3.2.2 ve üstün ve posterior serebellar arter (SCA) için 3.2.3 adımları ön yönü. Bu prosedür i sonunda durdurmakn 3.2.4. </li><li> forseps ile hafifçe çekerek tüm inek çıkarın. buz soğukluğunda PBS ile dolu bir 60 mm Petri kabı İnek yerleştirin ve küçük pimler yerine, inek tutan iki forseps ile kalan bağlı beyin dokusu çıkarın. </li><li> ya da protein çıkarımı - daha sonra, RNA saflaştırma için işlem (yaklaşık 500 ng RNA ekstraksiyon verimi RNA miktarda) -80 ° C&#39;de hasat COW tutun. Not: İnek izole fare koku alma arter için geliştirilmiş organ banyosu sistemi adapte ederek, 24 saat süreyle ex vivo olarak korunabilir 7. </li></ol></li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> Şekil 1: Fare Beyin inek vurgulama inek iki anterior serebral arterlerin (ACA) türetilmiştir iki internal karotid arter (MCA), oluşur bir Ventral View Şematik;. bazilerarter (BA) posterior (PCA) ve üstün (SCA) içine dalları serebral arterler ve iki vertebral arter (VA).

<ol><li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li>
<li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li>
<li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li>
<li>Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li>
<li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+amyloid+angiopathy%3A+emerging+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li>
<li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+atherosclerotic+stroke%3A+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Atheroscler+Rep%22%5BJournal%5D)">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li>
<li>Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+ex+vivo+model+for+the+study+of+cerebrovascular+function+utilizing+isolated+mouse+olfactory+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Korean+Neurosurg+Soc%22%5BJournal%5D)">Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery.</a> J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).</li>
<li>Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+murine+intracranial+aneurysm+model%3A+aneurysm+formation+and+rupture+by+elastase+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension.</a> J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).</li>
<li>Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy%3A+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li>
<li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li>
<li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li>
<li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stanimirovic%2C+Hamel%2C+%26+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li>
<li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li>
<li>Hübscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz Willis poligonunun izolasyonu için burada bir tekrarlanabilir protokol açıklar. İNEK ilgili sık serebrovasküler hastalıklar arteriyel damarlarının duvarlarını etkileyen her hangi SAA ilişkili vaskulopatiler, intrakranial ateroskleroz ve intrakranial anevrizma vardır. risk faktörleri iyi bilinmektedir, ancak bu serebral bozuklukların moleküler patogenezi henüz tam olarak anlaşılamamış ve bunların oluşumunun tahmin etmek için belirli biyolojik belirteçler eksiktir. moleküler değişiklikler ile makroskopik gözlemler bağ...

Ayrıca Willis (inek), Willisor Willis çokgenin döngünün daire olarak bilinen serebral arter daire (circulus arteriosus serebri),) ilk Bu optik chiasma ve can hipotalamus çevresinde bulunan bir dolaşım anastomoz olan 1664 yılında Thomas Willis tarafından tanımlanmıştır Beyin ve çevre yapılara kan tedarik merkezi bir hub olarak düşünülebilir. Kan internal karotis ve vertebral arterler ile bu yapıyı girer ve iç orta ve posterior serebral arterlerin vasıtasıyla çemberin dışına akar. Bu arterlerin her dairenin her iki tarafında dalları sol ve sağ etti. Tam bir daire arterler iletişim baziler sonrası haberleşme, ve anterior (Şekil 1 ve Şekil 2). çıkış arterlerin herhangi kan akım riski bu şekilde yeterli kan B beslenir garanti, karotis ve serebral arter bir çevre giren kan birleşmesi ile en aza indirilmiştiryağmur. Bu yapı aynı zamanda internal karotis arter şiddetli tıkayıcı hastalıklarda kollateral kan akımı için ana yol olarak hizmet vermektedir. serebrovasküler hastalıkların birkaç çeşit inek kökenlerine sahip. En yaygın 1, 2, 3 Bu bozukluklar nedeniyle vazodilatasyon hipoperfüzyona yol açabilir. Serebral amiloid anjiyopati (CAA) -associated damar hastalığı, intrakranial ateroskleroz ve intrakranial anevrizmalar, ve intraserebral ve / veya subaraknoid kanama sonuçta iskemik veya hemorajik inme veya çevrilmesine en iyi ihtimalle, bir geçici iskemik atak. muhtemelen anjiyografi ile kombine beyin görüntüleme dahil olmak üzere tanı yöntemleri, son gelişmeler, bir beyin biyopsisi için gerek kalmadan, mümkün klinik bu büyük serebrovasküler hastalıklar teşhis etmek için yaptık. Bununla birlikte, etkili ve spesifik tedavi (farmakolojik veya endovasküler) henüz mevcut değildir ve yeni tanımlamak için bir ihtiyacı vardırmoleküler hedefler. İnsanlarda bu hastalıkların önlenmesi için yeni ilaç hedefleri belirlenmesi hayvan modelleri ve inek de dahil olmak üzere serebro-damarsal izole yollarını gerektirir. Bu tür modeller intrakranial arter anevrizması, CAA veya intrakranial aterosklerozun hayvan modellerinde büyük damarların duvarlarında meydana gelen iltihabi değişiklikler de dahil belirli değişikliklere kanıt ve ipuçlarını vermelidir. 4, 5, 6 Böyle CAA Alzheimer hastalığı damar iltihabı üzerinde (AD) ve ilişkili hastalıklar, kolaylaştırmak için, fare, inek izolasyonu için bir yöntem oluşturmuştur. Fare COW izole edilmesi için bu yöntem, hastalığın ilerlemesi sırasında enflamatuar serebrovasküler gen ekspresyonunun değerlendirilmesi için geliştirilmiştir. Birlikte Leptomeningeal ve Pial arter duvarları içinde amiloit beta birikmesi saptanması ile, bu yöntem, daha kolay caydırmak için yapabilirizmayın inflamatuar serebro-damar duvarında gen ifadesinde ve Aβ-peptid birikimi arasındaki olası ilişki. subaraknoid mesafede leptomeningeal ve Pial dahil beyin, damar ağı, Willis çemberi oluşturan büyük arterlerin bir uzantısıdır. Burada tarif edilen yöntem, herhangi bir fare soyu inek izole etmek için kullanılabilir ve fare beyin-damar sisteminin büyük gemiler üzerinde tarama (örneğin, gen ekspresyonu, protein üretimi ve translasyon sonrası protein modifikasyonları) her türlü kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco' s Fosfat Tamponlu Tuzlu</td><td>Sig Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont # 55 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Sertleştirilmiş İnce İris Makas&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>Makas - Düz / Keskin / Keskin&nbsp; &nbsp; 16,5 cm</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7b Forseps&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>Stereoskopik Zoom Mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>CellBIND Yüzey 60mm Kültür Kabı</td><td>Corning</td><td>#3295</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik Pompa - MINIPULS 3</td><td>Gilson</td><td>M312</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodique</td><td>Ceva Sant&eacute; Animale</td><td>FR/V/2770465 3/1992</td><td></td></tr></tbody></table>

willis fare Çemberi ayırma protokolü

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

Willis (inek) serebral arter daire (circulus arteriosus serebri) ya da daire beyin ve çevreleyen yapılara kan tedarik optik chiasma ve hipotalamus çevreleyen bir dolaşım anastomoz olduğunu. Bu serebral amiloid anjiyopati (CAA) -associated damar hastalığı intrakraniyal ateroskleroz ve intrakranyal anevrizma dahil olmak üzere birçok serebrovasküler bozukluklar, implike edilmiştir. onların önlenmesi için yeni ilaç hedeflerinin tanımlanması için bu hastalıkların altında yatan moleküler mekanizmaların Çalışmaları hayvan modelleri gerektirmektedir. Diğerleri burada açıklanan CoW.The yöntemiyle herhangi bir fare soyu inek izolasyonu için uygundur ve (genlerin protein üretiminin ifadesini taranması için önemli bir potansiyele sahiptir dahil serebro-damar sisteminin izolasyonu, içerecektir ise bu modellerin bazıları, transgenik olabilir posttranslasyonel protein modifikasyonları, vb secretome analiz) fare serebrovasküler büyük gemilerde çalışmalarıdamar. Aynı zamanda, izole edilmiş fare olfaktori arter için geliştirilmiş organ banyosu uyarlama sisteminin ile ex vivo çalışmalar için de kullanılabilir.

<html> PBS perfüze fare öldürülür ve protokol bölüm 3.2&#39;de anlatıldığı gibi inek izole edilir. Diseksiyon doğru yapıldığında, inek tek parça halinde dışarı gelmelidir nedeniyle damarsal artık kan olmaması biraz şeffaf olmalıdır. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig2.jpg" /> Şekil 2: İzolasyon sonra Fare İnek. 10 cm&#39;lik Petri kabındaki inek (A) g...

Burada Willis'in fare çemberini izole etmek için tekrarlanabilir bir protokol açıklıyoruz.

Willis Fare Çemberi Ayırma Protokolü

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

Bu diseksiyon prosedürünün genel amacı, fare serebrovasküler sistemindeki büyük damarların incelenmesini kolaylaştırmak için murine Willis halkasını izole etmektir. Bu yöntem, Alzheimer hastalığı ve serebral amiloid anjiyopati gibi serebral damarları etkileyen çeşitli hastalıklarda serebrovasküler gen ekspresyonu üzerine yapılan çalışmalardaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, damar yapısını bozmadan büyük damarların hızlı ve kolay bir şekilde izole edilebilmesidir.Öncelikle, letal dozda anestezi uygulanmış bir farenin göğüs kafesinin hemen altındaki karın duvarı ve peritona kısmına Iris makası kullanarak dört santimetre uzunluğunda bir insizyon yapın. Ardından, diyaframda birkaç milimetre uzunluğunda bir insizyon yapın ve plevral boşluğu açığa çıkarmak için insizyonu göğüs kafesinin tüm uzunluğu boyunca sürdürün. Sternumu kaldırın ve ucunu bir hemostatla klempleyerek hemostatı boyun kısmına yaslayın.Ardından, sternumu kalbe bağlayan adipöz dokuyu dikkatlice kesin. Şimdi, 15 gauge'lik bir perfüzyon iğnesini sol ventrikülden kalbin apeksine doğru ilerletin ve perfüzat için bir çıkış oluşturmak amacıyla makas kullanarak karaciğer loblarından birini kesin. Hayvanı, 2,5 ml/dakika pompa hızında, yaklaşık on dakika boyunca 25 ila 50 ml PBS ile perfüze edin.Kan PBS ile değiştirildikçe karaciğer rengi açılmalıdır. Karaciğerden gelen sıvı tamamen berraklaştığında perfüzyonu durdurun. Beyni izole etmek için, Iris makası kullanarak boyundan buruna kadar deri boyunca orta hat üzerinden bir insizyon yapın.Kafatası açığa çıkarmak ve kalıntı kas ile adipöz dokuyu temizlemek için deriyi Iris makasla kesin. Ardından, Iris makasının uçlarını foramen magnum'un bir yanına yerleştirin ve uçları kafatasının iç yüzeyi boyunca dış kulak yoluna kadar dikkatlice kaydırın. Foramen magnum'un diğer tarafında da benzer bir kesi yapın ve ardından interparietal kemiğin iç yüzeyi boyunca sagital suturun başlangıcına kadar orta hat boyunca bir kesi yapın.Kapalı Iris makasını, iki göz arasındaki frontal kemikte, sagital sütürün içine yerleştirin ve kafatasını ikiye ayırmak için uçları açın. Pens yardımıyla olfaktör bulbusları tutun ve beynin ventral yüzeyindeki sinir bağlantılarını kesmek için Iris makasını kullanın. Ardından beyni, buz gibi soğuk PBS içeren 60 milimetrelik bir Petri kabına daldırın.Willis halkasını izole etmek için, kabı bir diseksiyon mikroskobu altında buz paketinin üzerine taşıyın ve Willis halkasını görüntülemek için beyni dorsal yüzeyine çevirin. Olfaktör lobların tabanındaki anterior serebral arterleri tutmak için küçük pensetleri kullanın ve arterleri damar sürekliliğinden ayırmak için basınç uygulayın. Orta serebral arterleri de aynı şekilde kesin.Ardından, orta serebral arterleri kavramak için pensetin sivri uçlarını kullanın ve posterior komünikan arterlerin başlangıç kısmını kaldırarak her iki arter setini de beyinden ayırın. Daha sonra, anterior arterleri kaldırarak onları optik kiyazmanın üzerinden nazikçe anterior dorsal yöne doğru çekin. Süperior ve posterior serebellar arterleri aynı şekilde çıkarın ve ardından baziler arteri yerinden kaydırın.Son olarak, tüm Willis halkasını buz gibi soğuk PBS içeren 60 milimetrelik bir Petri kabına nazikçe aktarmak için pens kullanın ve damarları küçük pinlerle sabitleyip, kalan tüm beyin dokusunu dikkatlice temizlemek için iki pens kullanın. Willis halkası tek parça halinde çıkmalı ve damar sisteminde kalıntı kan bulunmadığı için hafif şeffaf olmalıdır. Temizlemiş olduğunuz Willis halkası, özellikle Düz Kas Aktini, Düz Kas-Miyozin Ağır Zinciri ve Smoothelin gibi vasküler düz kas hücresi markerlarını eksprese etmelidir.Buna karşılık, myelin oligodendrocyte glycoprotein veya microtubule-associated protein 2 gibi nöronal belirteçler, Willis halkasında ancak çok düşük seviyelerde tespit edilebilmelidir. Ayrıca, Willis halkası dışındaki nöral dokularda endotelyal belirteç olan E-Selectin'in ekspresyonu, Willis halkası örnekleri için elde edilenle oldukça benzerdir; bu durum muhtemelen bir beyin-kapiler ağının varlığını yansıtmaktadır. Bu teknik bir kez kavrandıktan sonra, uygun şekilde uygulandığında iki saat içinde tamamlanabilir.Bu prosedür uygulanırken, fare serebral damarlarının çok ince olduğu ve kolayca kopabileceği unutulmamalıdır. Bu nedenle, tüm yapının tek parça halinde elde edilmesini sağlamak için diseksiyon işlemi acele etmeden, çok dikkatli bir şekilde gerçekleştirilmelidir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, inflamatuar nöral hastalıklar alanındaki araştırmacıların, Alzheimer ve serebral amiloid anjiyopati gibi ilişkili hastalıkların fare modellerindeki serebral vasküler bozuklukları incelemelerine olanak sağlamaktadır.Bu videoyu izledikten sonra, bir fareden Willis halkasının nasıl izole edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

protocol-for-isolating-the-mouse-circle-of-willis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, fare koroid pleksuslarından bağışıklık hücrelerini izole etme prosedürünü göstermektedir. Bu prosedür, koroid pleksuslardaki bağışıklık hücrelerinin beyin sağlığını ve çeşitli nörolojik hastalıkları nasıl etkilediğini anlamak için nöroimmünoloji araştırmalarında kullanılır.

Fare Koroid Pleksuslarından İmmün Hücrelerin İzole Edilmesi

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

İnflamasyon, iskemik inme patogenezinde merkezi bir rol oynar. Artan kanıtlar, erken beyin hasarını şiddetlendiren iki ucu keskin bir kılıç gibi davrandığını, ancak aynı zamanda daha sonraki onarıma da katkıda bulunduğunu göstermektedir. Bu protokol, immün hücrelerin iskemik beyinden izolasyonunu ve müteakip akış sitometrik fenotiplemesini tanımlar.

İskemik Fare Beyin gelen Bağışıklık Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

Bu protokolün amacı, koroner dolaşımdan fare primer vasküler düz kas hücrelerinin izolasyonu ve kültür teknikleri (VSMC) göstermektir. VSMC'Ier izole edildikten sonra, pek çok standart kültür teknikleri için kullanılabilir.

Murin Koroner Damar düz kas hücrelerinin izolasyonu

Fare karotid arteri ve aortanın yüz öncesi hazırlıkları yapmak için bir prosedür anlatılmıştır. Bu preparatlar, immünofloresan olarak spesifik antikorlarla boyandığında, konfokal mikroskopi ile proteinlerin lokalizasyonu ve tüm vasküler duvar içindeki hücre tiplerinin tanımlanmasını sağlar.

Fare Kan Gemilerinin Yüz Yüzey Hazırlığı

Burada, sağlıklı ve fonksiyonel birincil fare tetkikine yalıtım için bir iletişim kuralı mevcut. Hepatik doğmakta olan protein sentezi tarafından radyoaktif olmayan etiketleme substrat algılamak için yönergeler protein sentezi karaciğer homeostazı enerji metabolizması bağlamında temel mekanizmaları anlamanıza yardımcı olmak için sağlanmıştır.

Birincil fare tetkikine yalıtım doğmakta olan Protein sentez analiz radyoaktif L-azidohomoalanine etiketleme yöntemi tarafından için

Burada sunulan, mikrobiyolojik tabanlı yöntemler ve MALDI-TOF kütle spektrometresi ile daha sonra tanımlanması ile benzersiz bir göz çubuğu ve kültür tabanlı zenginleştirme adımı kullanılarak aerobik ve öğretim üyesi anaerobik fare konjonktival commensal bakterilerin izolasyonu ve amplifikasyonu için bir protokoldür.

Farelerde Konjonktival Kommenal İzolasyon ve Tanımlama

Kardiyolojide hücresel ve moleküler fonksiyonel deneyler için altın standart kardiyomiyositlerdir. Bu makalede, fare kardiyomiyositlerini izole etmek için Langendorff dışı tekniğe yapılan uyarlamalar açıklanmaktadır.

Fare kardiyomiyositlerini sürekli olarak izole etmek için basit ve etkili bir yöntem

Burada primer fare karaciğeri sinüzoidal endotel hücresi (LSEC) izolasyonu için bir protokol özetlenmekte ve gösterilmektedir. Protokol, karaciğer kollajenaz perfüzyonu, düşük hızlı santrifüjleme ile parankimal olmayan hücre saflaştırılması ve CD146 manyetik boncuk seçimine dayanmaktadır. Ayrıca bu izole LSEC'leri akış sitometrisi ve taramalı elektron mikroskobu kullanarak fenotipler ve karakterize ediyoruz.

Fare primer karaciğer sinüzoidal endotel hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu

Bu makale, murin endotel hücrelerinin dermal lenfatik kılcal damarlardan manyetik boncuk bazlı izolasyonu için bir yöntemi açıklamaktadır. İzole edilmiş lenfatik endotel hücreleri, aşağı akış in vitro deneyler ve protein ekspresyon analizi için kullanılabilir.

Murin Dermal Lenfatik Endotel Hücre İzolasyonu

Öğrenin fare Willis çemberi izolasyonunu sinirbilim ve serebrovasküler araştırmalar için. Bu yöntem, Alzheimer gibi hastalıklarda damar yapısını bozmadan büyük damarları incelemeyi kolaylaştırır.

Willis Fare Çemberi Ayırma Protokolü

Daha fazla video keşfet