Name: Yetişkin için tat Tercihi Testi Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 31 s
Description: Öğrenin yetişkin Drosophila'nın tat tercihlerini basit bir alım testiyle nasıl belirleneceğini. Bu yöntem tat genetiği ve davranışsal nörobilim araştırmalarında genetik mekanizmaları anlamak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu el yazmasını eleştirel bir şekilde okudukları ve bu protokolün hazırlanması sırasındaki yardımcı önerileri için Tessier laboratuvarı üyelerine teşekkür ederiz.

1. Açlık <ol><li> Standart bir sinek şişenin dibinde M 18.2 suyla pamuk doyurarak açlık şişeleri sinek hazırlayın. Alternatif olarak, benzer bir şişe içinde bir açıda 18.2 su ve yer ile filtre kağıdı küçük bir şerit sulanacak. </li><li> Hazırlanmış bir şişeye sinekler ekleyin CO 2 pad üzerinde ~ 100 hayvan setleri içine sinekleri toplayın ve. Not: En iyi sonuçlar az 5 gün geçmiş hayvanların elde edilir. Ancak, hayvanların kesin yaş zamanla tat tercih değişiklikleri belirlemek için deneysel bir değişken olarak kontrol edilebilir. </li><li> şişeler kapalı sabitlemek için bir parça pamuk veya köpük stoper kullanın. çevre kontrollü inkübatör kendi tarafında şişeleri yerleştirin. 25 ° C sıcaklık ve% 70 üzerinde nemi muhafaza edin. 24 saat boyunca el değmemiş şişeleri bırakın. </li></ol> 2. Tat Tercihi Testi <ol><li> Aynı gün a denenmek üzere tüm tat yoğunluğu arttırıcı hazırlayıns testi. Not: Deneysel soru bağlı olarak değişecektir kullanılmak üzere tam tat yoğunluğu arttırıcı isteniyor. Aşağıda, bu protokolde kullanılan örnek tat yoğunluğu arttırıcı vardır. optimizasyonlar için bölüm 4&#39;e bakınız. <ol><li> 100 mM sukroz çözeltisi 10 ul kırmızı gıda boyası 13 ul ve 18.2 su 977 ul birleştirerek kontrol tat yoğunluğu arttırıcı (1 mM sükroz) hazırlayın. </li><li> 100 mM sukroz çözeltisi 50 ul, gıda boyası 10 ul ve 18.2 su 940 ul birleştirerek deney tat yoğunluğu arttırıcı (5 mM sükroz) hazırlayın. </li></ol></li><li> aşağıdaki şekilde hazırlanmıştır, standart 100 mm x 15 mm plastik petri kabı kullanarak deney odaları sağlayın: <ol><li> 12 saat plakanın kenarına yakın kontrol tat yoğunluğu arttırıcı madde üç 10 ul damla ve 6 saat başka bir 3 damla yerleştirin. damla arasındaki aralık benzer olduğundan emin olun. </li><li> 3 saat ve bir de plaka kenarına yakın deneysel tat yoğunluğu arttırıcı madde üç 10 ul damla yerleştirinDiğer 3 9 saat düşer. damla arasındaki aralık benzer olduğundan emin olun. </li><li> istediğiniz gibi tekrarlayın gibi birçok çoğaltır için 2.2.1 ve 2.2.2 adımları. </li></ol></li><li> Sadece yeterince uzun bütün hayvanlar (yaklaşık 10 saniye) uyutmak için bir CO 2 ped üzerine ~ 100 açlıktan sinek boş 1 flakon. hazırlanmış bir tahlil odasının ortasına hayvanları fırçalayın ve çanak kapağı ile kaplayın. Not: CO 2 maruz kalma uzun süreler beslenme davranışı ile iyileşme süresi ve sınır girişimi geliştirmek için kaçınılmalıdır. Buz maruz kalma (~ 5 dakika) daha sınırlı maruz kaynaklanabilecek CO2 davranışsal etkileri önlemek için anestezi için kullanılabilmektedir. </li><li> opak bir karton kutu içinde tahlil odasına yerleştirin. durumu ve genotip test edilen kutunun dışında etiket emin olun. </li><li> 2 saat için en az% 70 nem ile 25 ° C inkübatör içine tüm kurulum (adım 2.4 karton kutu içinde bulunan tahlil odacık) yerleştirin. </li&gt; <li> Tümünü tekrarla çoğaltır için 2.5 ile 2.3 arasındaki adımları. </li><li> 2 saat sonra, doğrudan miktar tayini için hazır olana kadar -20 ° C dondurucu içine, yine mukavva kutular içinde bulunan deney odaları, yerleştirin. </li></ol> 3. Tat Tercihi Testi Ölçümü <ol><li> Tek bir tahlil odası, oda sıcaklığında (yaklaşık 5 dakika) kadar ısınmasını bekleyin. </li><li> Kırmızı, mavi, mor ya da açık (Şekil 1): Bir diseksiyon mikroskobu altında, bir fırça veya forseps çifti kullanarak, grup hayvanlar karın rengine dayalı. </li><li> Her gruplandırma hayvanların numarasını kaydedin. Herhangi bir hesaplamalarda bunları içermez bu nedenle deneyde katılmamış açık hayvanları düşünün ve. </li><li> Aşağıdaki denklem birine göre tercih indeksi hesaplanır: <ol><li> + N mavi + N purpl ilgi deneysel tat yoğunluğu arttırıcı madde kırmızı boya ilave edilirse, o zaman kullanın (N + kırmızı 0.5N mor) / (N kırmızıe). </li><li> Deneysel tat yoğunluğu arttırıcı madde mavi boya ilave edilirse, o zaman (N mavisi, mor + 0.5N) / (N mavi + N kırmızı + N mor) denklemi ayarlayın. </li></ol></li><li> tüm deneysel koşullar ve çoğaltır için hesaplamalar tekrarlayın. </li></ol> Tat Tercihi Testi 4. Optimizasyon <ol><li> Ampirik gıda boyası tat testinin sonucunu etkilemez böylece aşağıdaki gibi, kullanılacak gıda boyası göstergelerinin konsantrasyonunu belirlemek: <ol><li> Olarak adım 2.1 belirtilen aynı temel bileşiği (örneğin 5 mM sükroz) kullanılarak 4 tat yoğunluğu arttırıcı hazırlayın, ancak gıda boyası ihmal. </li><li> tat yoğunluğu arttırıcı birine% 1.3 kırmızı gıda boyası ekleyin. Her bir tüp içinde değişik konsantrasyonlarda mavi gıda boyası (örneğin,% 0.6,% 1 ve% 1.3) ile birlikte geri kalan 3 tat yoğunluğu arttırıcı sağlayın. </li><li> Komple protokol, her tat yoğunluğu çifti için 3.4 ile 2.2 arasındaki adımları:% 0.6 mavi% 1.3 kırmızı vs; % 1.3 kırmızı vs% 1 mavi ve% 1.3 kırmızı vs% 1.3 mavi. </li><li> Tercih indeksi ortalamaları kadar mavi gıda boyası farklı yüzdelerde 0 (Şekil 2) değeri ile adımı tekrarlayın 4.1.1-4.1.3. Not: Bir başlangıç ​​noktası olarak,% 1 mavi gıda boyası ile birleştiğinde% 1.3 kırmızı gıda boyası genellikle iyi sonuçlar verir. gıda boyası herhangi bir tatmin edici bir konsantrasyonu,% 1.3 boya eşleştirilebilir, sonra 4.1.3 boyunca 4.1.1 kırmızı bir renk ve mavi gıda boyası sabit bir konsantrasyonda değişik konsantrasyonları ile tekrar sağlanabilir. </li><li> Aynı optimize gıda boyası konsantrasyonları ile test edilecek tüm koşulları analiz edin. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Herrero, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+fly+behavior+in+response+to+chemosensory+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Fruit fly behavior in response to chemosensory signals.</a> Peptides. 38 (2), 228-237 (2012).</li>
<li>Vosshall, L. B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+architecture+of+smell+and+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular architecture of smell and taste in Drosophila.</a> Annu Rev Neurosci. 30, 505-533 (2007).</li>
<li>Harris, D. T., Kallman, B. R., Mullaney, B. C., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representations+of+Taste+Modality+in+the+Drosophila+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Representations of Taste Modality in the Drosophila Brain.</a> Neuron. 86 (6), 1449-1460 (2015).</li>
<li>Hong, E. J., Wilson, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+encoding+of+odors+by+channels+with+diverse+sensitivity+to+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Simultaneous encoding of odors by channels with diverse sensitivity to inhibition.</a> Neuron. 85 (3), 573-589 (2015).</li>
<li>Kain, P., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+taste+neurons+that+convey+sweet+taste+and+starvation+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Secondary taste neurons that convey sweet taste and starvation in the Drosophila brain.</a> Neuron. 85 (4), 819-832 (2015).</li>
<li>Masek, P., Worden, K., Aso, Y., Rubin, G. M., Keene, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dopamine-modulated+neural+circuit+regulating+aversive+taste+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A dopamine-modulated neural circuit regulating aversive taste memory in Drosophila.</a> Curr Biol. 25 (11), 1535-1541 (2015).</li>
<li>Charlu, S., Wisotsky, Z., Medina, A., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid+sensing+by+sweet+and+bitter+taste+neurons+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Acid sensing by sweet and bitter taste neurons in Drosophila melanogaster.</a> Nat Commun. 4, 2042(2013).</li>
<li>Clyne, P. J., Warr, C. G., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candidate+taste+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Candidate taste receptors in Drosophila.</a> Science. 287 (5459), 1830-1834 (2000).</li>
<li>Scott, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemosensory+gene+family+encoding+candidate+gustatory+and+olfactory+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A chemosensory gene family encoding candidate gustatory and olfactory receptors in Drosophila.</a> Cell. 104 (5), 661-673 (2001).</li>
<li>Kim, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+TRPA1+channel+mediates+chemical+avoidance+in+gustatory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila TRPA1 channel mediates chemical avoidance in gustatory receptor neurons.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (18), 8440-8445 (2010).</li>
<li>Koh, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+IR20a+clade+of+ionotropic+receptors+are+candidate+taste+and+pheromone+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The Drosophila IR20a clade of ionotropic receptors are candidate taste and pheromone receptors.</a> Neuron. 83 (4), 850-865 (2014).</li>
<li>Zhang, Y. V., Ni, J., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+attractive+salt-taste+coding+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for attractive salt-taste coding in Drosophila.</a> Science. 340 (6138), 1334-1338 (2013).</li>
<li>Zhang, Y. V., Raghuwanshi, R. P., Shen, W. L., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+experience-induced+taste+desensitization+modulated+by+the+Drosophila+TRPL+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Food experience-induced taste desensitization modulated by the Drosophila TRPL channel.</a> Nat Neurosci. 16 (10), 1468-1476 (2013).</li>
<li>Liman, E. R., Zhang, Y. V., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+coding+of+taste%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Peripheral coding of taste.</a> Neuron. 81 (5), 984-1000 (2014).</li>
<li>Rodrigues, V., Cheah, P. Y., Ray, K., Chia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((malvolio%2C+the+Drosophila+homologue+of+mouse+NRAMP-1+%28Bcg%29%2C+is+expressed+in+macrophages+and+in+the+nervous+system+and+is+required+for+normal+taste+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">malvolio, the Drosophila homologue of mouse NRAMP-1 (Bcg), is expressed in macrophages and in the nervous system and is required for normal taste behaviour.</a> EMBO J. 14 (13), 3007-3020 (1995).</li>
<li>Tanimura, T., Isono, K., Yamamoto, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+sensitivity+to+trehalose+and+its+alteration+by+gene+dosage+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Taste sensitivity to trehalose and its alteration by gene dosage in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 119 (2), 399-406 (1988).</li>
<li>Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+basis+of+bitter+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular basis of bitter taste in Drosophila.</a> Neuron. 69 (2), 258-272 (2011).</li>
<li>French, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+mechanism+for+bitter+avoidance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dual mechanism for bitter avoidance in Drosophila.</a> J Neurosci. 35 (9), 3990-4004 (2015).</li>
<li>Deshpande, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Drosophila+food+intake%3A+comparative+analysis+of+current+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying Drosophila food intake: comparative analysis of current methodology.</a> Nat Methods. 11 (5), 535-540 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Biz Drosophila tat tercihini belirlemek için basit ama etkili bir protokol tanımlanmıştır. Bu testin sürümleri rutin tat bileşikleri (acı, tatlı, ekşi, tuzlu ve umami) farklı nitelikleri algılamaya tat reseptörleri (GY) katkılarını belirlemek için deneylerde kullanılır. Drosophila genom alternatif bölünme 8,9 ile 68 tespit tat ​​reseptörleri kodlayan yaklaşık 60 gen içermektedir. Bununla birlikte, bu iyonotropik glutamat reseptörleri ve TRP kanalları gibi diğer proteinleri de tat 10-13<...

Hayvanlar dezavantajları dışında avantajlı koşullar ayırt chemosensation kullanımı. Bu algı, en iyi besin kaynağı belirleyen toksik maddelerin kaçınarak ya da en iyi çiftleşme ortağı 1 belirleyici gibi şeyler için çok önemli olabilir. koku duyuları ve tat duyuları: Chemosensation genellikle iki duyusal bileşenlere ayrılmıştır. Bu duyuların bir ana ayırt edici özelliği koku alma (koku) tadına bakma (tat) bir kalıcı alt tabaka ile fiziksel temas gerektiren iken çevreleyen gaz kimyasal ortamını örnek için kullanılan olmasıdır. Her ikisi de duyu modaliteleri işlenmiş ve uygun çekici veya itici davranışları 2 üretmek için beyinde çözülür nörolojik yanıtları uyarır. Bu duyular hayvan hayatta kalmak için bu nedenle önemlidir. Drosophila melanogaster uçmak meyve anlıyorum kullanılmak üzere popülerlik büyümeye devam eden bir model organizmadırböcekler koku ve tat nasıl algıladıklarını ing. Meyve sinekleri nedeniyle moleküler, hücresel ve davranışsal yolların diseksiyon için kullanılabilir genetik araçları zenginliği diğer model sistemler üzerinde muazzam avantajlar sunmaktadır. Son 15 yılda iş spesifik hücresel kimlikleri, nöronal reseptörler karakterize ve koku ve tat hem de yer alan mekanizmaları sinyalizasyon özellikle etkili olmuştur. Şimdi, Drosophila genetiği gücü daha da bu süreçlerin tek nöron ve tek devre düzeyinde 3-6 kodlanmış nasıl aydınlatmak için kullanılıyor. Bu nedenle sağlamak tahlilleri kolayca duyusal yollara değişikliklerin readouts bu alanların sürekli peşin için çok önemlidir attı. büyük bir kodlanmış ve beyinde nasıl işlendiğini koku işaretleri hakkında bilinen birlikte, daha az tat yolu içindeki mekanizmalar hakkında anlaşılmaktadır. Burada tadı preferen tespit etmek için kullanılabilecek bir protokol açıklarAcı tatma bileşiklerine karşı Drosophila. Drosophila ce, memeliler gibi, genel olarak tatlı tatmak bileşikleri tercih ederim. Bu gıda kaynaklarından herhangi bir kombinasyonu bilinen genetik değişiklikler tat seçimini nasıl etkilediğini belirlemek için bu deney tasarımında kullanılabilir. Buna ek olarak, farmakolojik müdahale stratejileri benzer hayvanların tat tercihi üzerindeki etkileri için değerlendirilebilir. Bu testte kolaylığı ve esneklik Drosophila tat algı doğasını anlamak için o yararlı bir paradigma yapar.

<table><tbody><tr><td>Mavi Gıda Boyası (Su, Propilen Glikol, FD& C Mavi 1 ve Kırmızı 40, Propilparaben)</td><td>McCormick</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Bölücüsüz Kriyo/Dondurucu Kutuları</td><td>Fisher</td><td>03-395-455</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Buzul Asetik Asit</td><td>Fisher</td><td>BP2401-500</td><td></td></tr><tr><td>Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X mikroskop</td><td>W. Nuhsbaum, Inc.</td><td></td><td></td>10446294</tr><tr><td>Petri kabı (100 mm x 15 mm)</td><td>BD Falcon</td><td>351029</td><td>İyice yıkanıp kurutulduğunda tekrar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Quick-Snap Mikrotüpler</td><td>Alkali Scientific Inc.</td><td>C3017</td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı Gıda Boyası (Su, Propilen Glikol, FD& C Kırmızılar 40 ve 3, Propilparaben)</td><td>McCormick</td><td>N/A Sükroz</td><td></td></tr><tr><td></td><td>IBI Bilimsel</td><td>IB37160</td><td></td></tr></tbody></table>

yetişkin için tat tercihi testi<em&gt; drosophila</em

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Çevrenin koku alma ve tat alma algısı, hayvanların hayatta kalması için hayati önem taşır. Bu kemoduyuların en belirgin uygulaması, iyi gıda kaynaklarını potansiyel olarak tehlikeli gıda kaynaklarından ayırt edebilmektir. Tuzluk, nöronların yüzeyinde ifade edilen tat reseptörleri aracılığıyla sinyal verebilen kimyasal bir bileşikle fiziksel temas gerektirir. Böceklerde, bu tat alma nöronları hayvanın vücudu boyunca yerleştirilebilir ve tadın birçok farklı davranışta önemli bir rol oynamasına izin verir. Böcekler tipik olarak şeker içeren bileşikleri tercih ederken, acı tadı olan bileşiklerden kaçınılır. Tat almanın temel biyolojik önemi göz önüne alındığında, bu duyusal modalitenin altında yatan moleküler mekanizmaları anlamaya yoğun bir ilgi vardır. Hayvanların belirli bir tastant bileşiği için tercihini yansıtan yetişkin bir Drosophila tat tahlilini tarif ediyoruz. Bu tahlil, istenen çözünür bir bileşiğin tat tercihini incelemek için herhangi bir genetik geçmişe sahip hayvanlara uygulanabilir.

tat tercih deneyleri Bazı tipik sonuçlar aşağıda gösterilmiştir. Deneylerin çoğunda karın boyama yoğunluğunda bazı farklılık (Şekil 1) görülecektir. güçlü ve zayıf olsun karın herhangi bir boyama pozitif yenmesi olarak kabul edilir. herhangi bir potansiyel önyargıları sınırlayacak şekilde araştırmacılar deneysel koşul iken kör hayvanlar puan için bu nedenle tavsiye edilir. Tercih testinin sonucunu etkilemez gı...

Tat, faydalı maddelere çekilmeyi ve toksik maddelerden kaçınmayı kolaylaştıran önemli bir duyusal süreçtir. Bu protokol, belirli bir kimyasal bileşik için Drosophila tat tercihini belirlemek için basit bir yutma testini tanımlar.

Yetişkin için tat Tercihi Testi<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Bu prosedürün genel amacı, yetişkin Drosophila'nın bir kimyasal tadım maddesine karşı diğerine göre olan bağıl tercihini belirlemektir. Bu yöntem, Drosophila tat alanıyla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Örneğin, tatlı bileşikler veya potansiyel olarak toksik, acı bileşikler arasında seçim yapmak için hangi genlerin gerekli olduğu gibi.Bu tekniğin temel avantajı, basit olması ve herhangi bir özel cihaz gerektirmemesidir. Prosedürü, laboratuvarımdan bir teknisyen olan Andrew Bantel gösterecek. Deneye başlamak için, standart bir sinek şişesinin tabanındaki bir pamuk yumağını suyla doyurun.Ardından, sinekleri bir CO2 pedi üzerinde 100'erli gruplar halinde toplayın ve ardından sinekleri hazırlanmış bir flakona aktarın. Flakonları kapatmak için pamuk topu kullanın. Daha sonra flakonları, çevre kontrollü bir inkübatöre yan yatırılmış şekilde yerleştirin.10 µL 100 mM sakroz çözeltisini, 13 µL kırmızı gıda boyasını ve 977 µL suyu birleştirerek bir milimolar sakroz içeren kontrol tadım örneğini hazırlayın. Ardından, beş milimolar sakroz içeren deneysel tadım örneğini hazırlayın. Daha sonra, 100 mm x 15 mm'lik plastik bir petri kabı temin ederek ve saat 12 yönünde, kontrol tadım örneğinden 3 µL'lik damlaları plakanın kenarına mümkün olduğunca yakın yerleştirerek analiz odalarını oluşturun.Saat üç yönündeki konuma, plakanın kenarına mümkün olduğunca yakın şekilde, deneysel tatlandırıcıdan üç adet 10 microliter damla yerleştirin. Saat altı yönündeki konuma, kontrol tatlandırıcısından üç damla daha yerleştirin. Ardından, saat dokuz yönündeki konuma deneysel tatlandırıcıdan üç damla daha yerleştirin.Ardından, tüm hayvanlar anestezi olana kadar 100 aç sineğin bulunduğu bir flakonu bir CO2 pedinin üzerine boşaltın. Hayvanları fırça yardımıyla hazırlanmış bir analiz odasının ortasına aktarın ve alanı kapakla kapatın. Analiz odasını opak bir karton kutunun içine yerleştirin.Ardından, kutunun dışını test edilen durum ve genotiple etiketleyin. Tüm düzeneği bir inkübatöre yerleştirin. İki saat sonra, karton kutular içindeki analiz odalarını, kantitasyon işlemi için hazır olana kadar doğrudan -20 °C bir dondurucuya yerleştirin.Tek bir analiz hücresinin oda sıcaklığına gelmesini bekleyin. Bir diseksiyon mikroskobu altında, hayvanları karınlarının rengine göre (kırmızı, mavi veya mor) gruplandırmak için bir fırça kullanın.Her bir gruplandırmadaki hayvan sayısını kaydedin. Bu grafik, kırmızı boya konsantrasyonu sabit tutulurken farklı mavi boya konsantrasyonlarının etkilerini göstermekte ve %1,3 kırmızı ile %1,0 maviden oluşan optimum bir kombinasyonu ortaya koymaktadır. Beş milimolar sakroz ile bir milimolar sakroz arasında seçim sunulduğunda, tercih indeksi değerinin bire yakın olmasıyla görüldüğü üzere, Drosophila türleri doğal olarak yüksek sakroz konsantrasyonlarına çekilirler.Bu tercih, tercih indeksini sıfıra yaklaştıran asit ile tersine çevrilmiştir. Bu prosedür gerçekleştirilirken, gıda boyası katkı maddelerinin test edilmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir; tercih analizinde herhangi bir etkileri oldu mu? Her bir boyanın konsantrasyonunun performans indeksi üzerinde hiçbir etkisi olmamalıdır.

taste-preference-assay-for-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Drosophila larvaları tat ödül ile koku uyaranlara ilişkilendirmek edebiliyoruz. Burada iştahlı çağrışımlı koku öğrenme analizine olanak sağlayan bir basit davranışsal paradigma tarif.

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Bu videoda, meyve sinekleri için renkli gıdaların beslenmeyi izlemek için kullanıldığı bir besleme testi ve eklenen bileşiklerin besleme aktivitesi üzerindeki etkisi açıklanmaktadır. Örnek protokol, çeşitli endokrin bozucu kimyasalların (EDC) etkilerini test eder.

Beslenme Testi: Drosophila melanogaster'de Beslenme Tercihlerinin Değerlendirilmesi

Bu video, tercih edilen maddenin yutulmasından sonra sineğin karın rengini değerlendirerek farklı tada sahip renkli solüsyonlara karşı çekiciliği veya kaçınmayı ölçmek için kullanılan davranışsal bir yöntem olan tat tercihi testini açıklar. Öne çıkan protokol, sineklerin değişen sakaroz konsantrasyonlarına sahip çözeltilere yönelik tercihini ölçmek için kullanılan prosedürü göstermektedir.

Tat tercihi testi: Drosophila'da beslenme davranışını ölçmek için bir yöntem

Bu videoda, sınırsız meyve sineklerinin gıda alımını ve tercihini ölçen davranışsal bir yöntem olan CApillary FEeder veya CAFE testi açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol, gıdayı vermek ve alımını izlemek için kullanılan sıvı dolu kılcal damarlardan minimum buharlaşma ile testin nasıl gerçekleştirileceğini gösterir.

CApillary FEeder (CAFE) Testi: Drosophila'da Gıda Tüketimini ve Tercihini İzlemek İçin Bir Yöntem

Drosophila dişileri, alt tabakalar arasında seçim yapar ve yumurtlama için çekici olan bölgeleri seçer. Bu video, yumurtlama tercihi testi olarak adlandırılan, karar verme süreçlerini test eden davranışsal bir testi açıklamaktadır. Öne çıkan klip, araştırmacıların yalnızca aynı anda birçok dişinin davranışını test etmelerini sağlamakla kalmayıp aynı zamanda video kaydı ve optogenetik kurulumlarla da uyumlu olan özel olarak oluşturulmuş bir kurulumla prosedürü göstermektedir.

Drosophila Yumurtlama Tercihi Testi: Sineklerde Karar Vermeyi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

Biz Y-labirent testi kullanılarak Drosophila davranışı üzerindeki koku etkisini ortaya çıkarmak için bir seçim testi sunuyoruz.

Test<em&gt; Drosophila</emBir Y-labirenti testi ile&gt; koku alma

Bu protokol, Drosophila melanogaster'in yumurtlama tercihlerini tek hayvan çözünürlüğünde test etmek için yüksek verimli bir testi tanımlar.  Bu tahlil, basit bir karar verme sürecini kontrol eden genleri ve devre bileşenlerini tanımlamak için basit, verimli ve ölçeklenebilir bir platform sağlar.

Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Biz ödüllendirici uyaran ve ödül devletlerde değişiklikler için bir tedbir olarak gönüllü etanol tüketimi ile meyve sinekleri (Drosophila melanogaster) deneyimleri nonrewarding için bir protokol açıklar.

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

CApillary FEeder (CAFE) testi, gıda alımının altında yatan mekanizmaları araştırmak için basit, bütçe dostu, son derece güvenilir bir yöntemdir. Çok yönlü genetik model organizma Drosophila melanogaster ile birlikte kullanıldığında, gıda alımının düzenleyici mekanizmaları hakkında yeni bilgiler edinmenin güçlü bir yolunu sunar.

Kılcal Besleyici Testi Gıda Alımını içinde Tedbirler<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Sinekler için iki seçenekli bir besleme tahlilleri için bir protokol sunuyoruz. Bu besleme testini çalıştırmak hızlı ve kolaydır ve sadece küçük ölçekli laboratuvar araştırmaları için değil, aynı zamanda sineklerdeki yüksek verimli davranışsal ekranlar için de uygundur.

Drosophila&apos;da Hızlı Bir Yemek Tercihi Tahlil

Öğrenin yetişkin Drosophila'nın tat tercihlerini basit bir alım testiyle nasıl belirleneceğini. Bu yöntem tat genetiği ve davranışsal nörobilim araştırmalarında genetik mekanizmaları anlamak için kullanılır.

Yetişkin için tat Tercihi Testi

Daha fazla video keşfet