Name: içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil Pristionchus Ve Diğer Nematodlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Öğrenin Pristionchus pacificus ve diğer nematodlarda yırtıcı beslenme davranışlarını analiz etme yöntemlerini. Davranışsal nörobiyoloji ve evrimsel adaptasyonları incelemek için bu teknikleri kullanın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Daniel Bumbarger'a yırtıcılık davranışı resmi için teşekkür ederiz. Bu çalışma Max-Planck Topluluğu tarafından finanse edildi.

1. Ağız formu Fenotiplendirme <ol><li> Agaroz Pads ağız Formu Kimlik Not: nematod ağız morphs görselleştirmek agaroz pedleri üzerinde hafif bir anestezik tedavi ile solucanlar hareketsiz ve aşağıdaki gibi gözlemlemek amacıyla. <ol><li> Büyümek ve P. olarak nematod kültürleri korumak pacificus 6 cm standart nematod büyüme ortamı (NGM) plakaları ve E. bakteriyel çim beslemek E. coli OP50 19. </li><li> Ilk 3 mi,% 2 agaroz solüsyonu yapmak üzere 15 ml bir tüp içinde 3 ml H2O 0.06 g agarozun ekleyerek agaroz pedleri sağlayın. Bu 4 ° C&#39;de bir yıla kadar saklanabilir </li><li> Mix ve bir mikrodalga iyice agaroz eritmek ya da alternatif&gt; 88 ° C&#39;ye ayarlanmış bir ısı bloğu kullanmak </li><li> tamamen eritildiği sonra, agaroza% 10 sodyum azid çözeltisi 10 ul ekleyin ve iyice karıştırın. DİKKAT: Kuru sodyum azid reaktiftir ve her türlü toksiktir. </li><li> 1 ml kullanılarakmikropipet, standart cam mikroskop lamı ortasında üzerine sıvı agaroz azid karışımı en az 300 ul bir damla yerleştirin. </li><li> ağar soğutur önce hızlı bir şekilde soğutulması üzerine bir yastık oluşturan agaroz düzleştirmek için damla üstünde ikinci bir mikroskop lamı yerleştirin. gerekli olduğu kadar çok pedler için tekrarlayın. </li><li> birbirini onları kaydırarak, soyma ayrı cam mikroskop slaytlar kullanımdan hemen önce. Not: Agaroz pedleri çok önceden hazırlanmış ise onlar aşırı kuru olabilir ve nematod zarar verebilir. </li><li> ped merkezi üzerine - (3 ul 2) anestezik agaroz pedleri solucanlar aktarmak için, M9 tampon bir damla yerleştirin. Alış 2-3 genç P. pad üzerinde dikkatlice bir kapak kayma yerleştirmeden önce M9 damla içine pacificus yetişkinler. P. pacificus nematod agaroz hareketsiz ve görselleştirmek için hazır olacaktır. </li><li> Uygun bir mikroskop a kadar anestezi solucan içeren mikroskop lamı aktarınnd 63X Nomarski optik altında gözlemlemek. aşağıdaki özelliklere göre Morph kimlikleri kategorize: ilave bir alt-ventral diş büyütülmüş dorsal diş ve geniş ağız açıklığı varlığı, eurystomatous ağzı Morph hayvan göstergesidir tek dorsal diş ve dar ağzı açıklığının bulunması, stenostomatous gösterir iken hayvan (Şekil 1). Not: Hayvan sağlığını korumak için, solucan en fazla 5 dakika boyunca agar yastığı muhafaza edilmelidir. </li><li> ağız Morph belirlenmesinden sonra, yavaşça agaroz pedi kapalı kaydırarak kapak kayma kaldırarak gerektirdiği eurystomatous veya stenostomatous ya nematod kurtarmak. Dikkatle agaroz pad seçilen hayvan almak taze NGM plakalar üzerine (E.coli OP50 o stickier yardımcı olmak için çekme kullanılabilir). Normal hareketli davranış hayvanlar daha yırtıcı deneyleri için hazır bunun üzerine kaldığı yerden devam ediyor kadar anestezi kurtarma izin verin. </li></ol></li> &lt;li&gt; Hızlı Ağız Fenotiplendirme Not: Alternatif olarak, daha fazla deneyime sahip, ağız form tipi yüksek büyütme (150X) ile bir stereomikroskop üzerinden herhangi bir anestezik tedaviye gerek kalmadan test edilebilir. <ol><li> E. bakteriyel çim ile standart NGM plakalar üzerinde yer nematodları mikroskop görüntüleme alanı üzerine E. coli OP50. </li><li> ağız büyüklüğüne ve genişliğine farklılıkları tespit. Not: yapılar gibi hiçbir diş nedenle ağız morph kimlik sadece dar ağızlarına karşı geniş ağızlara dayanan gözlemlenebilir Bu büyütme. </li></ol></li></ol> 2. Bite Deneyi Not: Isırma tahlilleri detaylı bir yırtıcı davranış analizi izin verir. <ol><li> Büyümek ve standart NGM plakalar (6 cm) nematod kültürleri korumak ve E. bakteriyel çim beslemek E. coli OP50 19. </li><li> C gibi seçilen av nematod kurtçuklarının sürekli uygulanması büyük miktarda büyüyerek tahlil plakaları yapmak elegans veya alternatively uygun bir ekolojik ilgili av. Not: Yetişkin C. o larva sahne kullanmak önemlidir bu yüzden elegans uygun av olamayacak kadar büyüktür. <ol><li> C koruyun elegans veya E. bakteriyel çim standart NGM plakalar ve yem diğer potansiyel av türleri E. coli OP50 nüfus taze genç L1 larva bir bolluk sonuçlanan hasret kadar. Not: açlık zamanı kültürü başlatmak için kullanılan nematod sayısı, E. miktarı da dahil olmak üzere çok sayıda çevresel ve deney faktörlere bağlıdır E. coli OP50 ilave edildi ve ortam sıcaklığına bağlıdır. </li></ol></li><li> M9 ile dört veya daha fazla taze hasret av tabakları yıkamak ve 15 ml tüp içinde toplamadan önce tüm büyük hayvanlar ve kalan yumurta kaldırmak için iki adet 20 mikron filtreler aracılığıyla solucan çözümü geçmektedir. Sadece küçük larvalar çözeltide kalmalıdır. </li><li> Bir larva pelet 1 dakika boyunca 377 xg&#39;de süzülür av santrifüj oluşturmak. </li><li&gt; Hiçbir E. ile 6 cm NGM plaka üzerine saf solucan pelet Pipet 3 ul E. coli OP50, bu larvalar bir deney plakası üretmek için yeterince yaymak için en az 30 dakika bekleyin. Not: Standart tahlil plakaları üzerinde saf solucan pelet 3 ul&gt; 3000 av larvalarını içerir. Bu saldırganları ve av arasındaki sık sık temas oluşturmak için yeterlidir. </li><li> Gerekli ağız morph (protokol 1) için ekran yırtıcı nematodlar. </li><li> Tahlil plakasına doğru sınıflandırılmış yırtıcı transferi, standart solucan toplama teknikleri ve hafif bir Stereomikroskopta kullanma 19. Bakteriyel kontaminasyonu minimize etmek için yırtıcı aktarırken tahlil plakasına mümkün olduğu kadar az OP50 bakteri aktarmak için özen gösterin. solucan transfer edilen stresinden kurtarmak ve solucanlar transferi hasar görmemiş emin olmak için vahşi tip hareketli davranışları kontrol etmek için izin vermek için 15 dakika bekleyin. Not: P açlıktan gerek yoktur pacificus, onlar iyi bakteriler üzerine beslenen bile diğer nematod larvalarının yüksek verimli yırtıcıları gibi. </li><li> İyileştikten sonra, 10 dakika boyunca hafif bir stereomikroskop kullanılarak yırtıcı izleyin. Bu cihaz ile, gözlemlemek ve bu tür yırtıcı hareketini kısıtlayarak predator ile karakterize, ısırma gibi farklı beslenme olayları karakterize; nerede tespit edilir av manikür bir açılış ile, öldürme; ve beslenme, av iç organlar (Şekil 2A, B ve Film 1) gözlemlenebilir tüketimi kategorize. </li><li> eleme ve doğruluğunu sağlamak için 10 ayrı yırtıcı nematod en az gözlemleyerek tahlil tekrarlayın. </li></ol> 3. Corpse Testi Not: Ölü deneyler, saldırgan davranış, daha hızlı bir şekilde belirlenmesini kolaylaştırır. <ol><li> Büyümek ve standart NGM plakalar üzerinde nematod kültürleri korumak ve bakteriyel l yemE. kılçık E. coli OP50 19. Daha önce de belirtildiği tahlil plakaları (- 2,5 protokol 2.1) triplicates oluşturun. </li><li> Gerekli ağız morph için ekran yırtıcı nematodlar gibi standart solucan toplama teknikleri ve her bir deney plakası için gerekli ağız morph ile hafif bir stereomikroskopta transferi 5 yırtıcı nematod kullanma protokolü 1&#39;de nitelendirdi. 2 saat av ile birlikte yırtıcı bırakın. </li><li> 2 saat ekran boşaltılmış cesetlerin (Şekil 2B ve C) varlığı açısından tahlil plaka sonra. solucan parçaları bağırsaklar sızıntı veya eksik dahil belirgin morfolojik kusurları ile birlikte hareketlilik olmaması ile cesetleri belirleyin. </li></ol> Yutak ve Diş Hareketi 4. Analizi <ol><li> Büyümek ve standart NGM plakalar üzerinde nematod kültürleri korumak ve E. bakteriyel çim beslemek E. coli OP50 19. Daha önce (- 2,5 protokol 2.1) belirtildiği gibi tahlil plakaları üretmek. Standart 6 cm iseNGM plakaları uygun bir alternatif olarak 2 ml NGM içeren küçük 35 mm petri kutularının kapağını kullanın, objektif ve mikroskop sahne arasında uymaz. </li><li> Gerekli ağzı Morph için ekran yırtıcı nematod teknikleri çekme standart solucan ve hafif bir stereomikroskop kullanarak protokol 1&#39;de tarif edildiği gibi, bir deney plakası için tek bir doğru sınıflandırılmış yırtıcı aktarın. solucan transfer edilen stresinden kurtarmak için izin vermek için 15 dakika bekleyin. </li><li> Yüksek hızlı kamera (Filmler 2 ve 3) ile, 63X Normaski - 40 bir mikroskop yırtıcı hayvanlar gözlemleyin. en az 20 hayvanlarda 50 Hz&#39;de kayıt faringeal pompalama ve 15 saniye boyunca diş hareketi, doğru kantifikasyon sağlamak. Tekrar bireysel pompa ve diş olayları saymak için istenen hızda film kaydedildi. Not: diş hareketi ağız açıklığı tespit edilebilir ve ancak ob ise Pompa, farenks ortasında bulunan korpus, görülmektedirdorsal dişinden görev yaptı. </li></ol>

<ol><li>Wilecki, M., Lightfoot, J. W., Susoy, V., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predatory+feeding+behaviour+in+Pristionchus+nematodes+is+dependent+on+phenotypic+plasticity+and+induced+by+serotonin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Predatory feeding behaviour in Pristionchus nematodes is dependent on phenotypic plasticity and induced by serotonin.</a> J Exp Biol. 218 (Pt 9), 1306-1313 (2015).</li>
<li>Ragsdale, E. J., Muller, M. R., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Developmental+Switch+Coupled+to+the+Evolution+of+Plasticity+Acts+through+a+Sulfatase%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Developmental Switch Coupled to the Evolution of Plasticity Acts through a Sulfatase.</a> Cell. 155 (4), 922-933 (2013).</li>
<li>Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensation%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Mechanosensation.</a> WormBook. , 1-14 (2006).</li>
<li>Rankin, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematode+behavior%3A+the+taste+of+success%2C+the+smell+of+danger%21%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Nematode behavior: the taste of success, the smell of danger!</a> Curr Biol. 16 (3), R89-R91 (2006).</li>
<li>Beverly, M., Anbil, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degeneracy+and+neuromodulation+among+thermosensory+neurons+contribute+to+robust+thermosensory+behaviors+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Degeneracy and neuromodulation among thermosensory neurons contribute to robust thermosensory behaviors in Caenorhabditis elegans.</a> J Neurosci. 31 (32), 11718-11727 (2011).</li>
<li>Kimata, T., Sasakura, H., Ohnishi, N., Nishio, N., Mori, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermotaxis+of+C.+elegans+as+a+model+for+temperature+perception%2C+neural+information+processing+and+neural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Worm%22%5BJournal%5D)">Thermotaxis of C. elegans as a model for temperature perception, neural information processing and neural plasticity.</a> Worm. 1 (1), 31-41 (2012).</li>
<li>Vidal-Gadea, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetosensitive+neurons+mediate+geomagnetic+orientation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Magnetosensitive neurons mediate geomagnetic orientation in Caenorhabditis elegans.</a> Elife. 4, (2015).</li>
<li>Chute, C. D., Srinivasan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+mating+cues+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical mating cues in C. elegans.</a> Semin Cell Dev Biol. 33, 18-24 (2014).</li>
<li>Sherlekar, A. L., Lints, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematode+Tango+Milonguero+-+the+C.+elegans+male%27s+search+for+the+hermaphrodite+vulva%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Nematode Tango Milonguero - the C. elegans male's search for the hermaphrodite vulva.</a> Semin Cell Dev Biol. 33, 34-41 (2014).</li>
<li>Sasakura, H., Mori, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+plasticity%2C+learning%2C+and+memory+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Behavioral plasticity, learning, and memory in C. elegans.</a> Curr Opin Neurobiol. 23 (1), 92-99 (2013).</li>
<li>Avery, L., You, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">C. elegans feeding.</a> WormBook. , 1-23 (2012).</li>
<li>Bumbarger, D. J., Riebesell, M., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((System-wide+Rewiring+Underlies+Behavioral+Differences+in+Predatory+and+Bacterial-Feeding+Nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">System-wide Rewiring Underlies Behavioral Differences in Predatory and Bacterial-Feeding Nematodes.</a> Cell. 152 (1-2), 109-119 (2013).</li>
<li>Dieterich, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Pristionchus+pacificus+genome+provides+a+unique+perspective+on+nematode+lifestyle+and+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">The Pristionchus pacificus genome provides a unique perspective on nematode lifestyle and parasitism.</a> Nature Genetics. 40 (10), 1193-1198 (2008).</li>
<li>Schlager, B., Wang, X. Y., Braach, G., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Cloning+of+a+Dominant+Roller+Mutant+and+Establishment+of+DNA-Mediated+Transformation+in+the+Nematode+Pristionchus+pacificus%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Molecular Cloning of a Dominant Roller Mutant and Establishment of DNA-Mediated Transformation in the Nematode Pristionchus pacificus.</a> Genesis. 47 (5), 300-304 (2009).</li>
<li>Witte, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+inactivation+using+the+CRISPR%2FCas9+system+in+the+nematode+Pristionchus+pacificus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Gene inactivation using the CRISPR/Cas9 system in the nematode Pristionchus pacificus.</a> Dev Genes Evol. 225 (1), 55-62 (2015).</li>
<li>Lo, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+and+Heritable+Genome+Editing+in+Evolutionarily+Diverse+Nematodes+Using+TALENs+and+CRISPR%2FCas9+to+Engineer+Insertions+and+Deletions%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Precise and Heritable Genome Editing in Evolutionarily Diverse Nematodes Using TALENs and CRISPR/Cas9 to Engineer Insertions and Deletions.</a> Genetics. 195 (2), 331-348 (2013).</li>
<li>Sommer, R. J., McGaughran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nematode+Pristionchus+pacificus+as+a+model+system+for+integrative+studies+in+evolutionary+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Ecology%22%5BJournal%5D)">The nematode Pristionchus pacificus as a model system for integrative studies in evolutionary biology.</a> Molecular Ecology. 22 (9), 2380-2393 (2013).</li>
<li>Herrmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nematode+Pristionchus+pacificus+%28Nematoda+%3A+Diplogastridae%29+is+associated+with+the+oriental+beetle+Exomala+orientalis+%28Coleoptera%3AScarabaeidae%29+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+Science%22%5BJournal%5D)">The nematode Pristionchus pacificus (Nematoda : Diplogastridae) is associated with the oriental beetle Exomala orientalis (Coleoptera:Scarabaeidae) in Japan.</a> Zoological Science. 24 (9), 883-889 (2007).</li>
<li>Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Introduction+to+Worm+Lab%3A+from+Culturing+Worms+to+Mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis.</a> J Vis Exp. (47), e2293(2011).</li>
<li>Serobyan, V., Ragsdale, E. J., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+value+of+a+predatory+mouth-form+in+a+dimorphic+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive value of a predatory mouth-form in a dimorphic nematode.</a> Proc. R. Soc. B Biol. Sci. 281, 20141334(2014).</li>
<li>Albrecht, D. R., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+behavioral+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+in+precise+spatiotemporal+chemical+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-content behavioral analysis of Caenorhabditis elegans in precise spatiotemporal chemical environments.</a> Nat Methods. 8 (7), 599-605 (2011).</li>
<li>Yeminin, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+database+of+Caenorhabditis+elegans+behavioral+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes.</a> Nat Methods. 9 (10), 877-879 (2013).</li>
<li>Raizen, D. M., Lee, R. Y. N., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interacting+Genes+Required+for+Pharyngeal+Excitation+by+Motor+Neuron+MC+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Interacting Genes Required for Pharyngeal Excitation by Motor Neuron MC in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 141 (4), 1365-1382 (1995).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir finansal veya rekabet eden çıkar beyan etmemektedir.

Nematodlar C ile nörobiyolojisine ve davranışını anlamak için güçlü bir sistem sağlamak elegans şimdiye kadar birincil araç olma. P. de dahil olmak üzere çok sayıda tüm nematod türleri bulunmadığına veya model organizma C den karmaşıklığı değişir pacificus ekran davranışları, elegans ve bu nedenle bu davranışların evrimi ve düzenlenmesi ile ilgili ilginç sorular ortaya koyuyor. P. de dahil olmak üzere diğer birçok nematod türlerinin bulunan bir tür ek davranış pacificus yırtıcı beslenme 1, 20 girerek kendi bakteriyel diyet ek kapasitesidir. Bu nedenle gelişmiş ve nematod bu önceden unanalyzed yırtıcı davranışların kolay ve hızlı karakterizasyonu için ayrıntılı bir protokol tanımlanmıştır. Öncelikle, biz nematod ağız içinde aparatı besleme varyasyonları için ekran yöntemler sağlamıştır. Doğru ağız Çeşidi tanımlanması önemli bir ilk sSadece eurystomatous hayvanlar yırtıcı besleme yeteneğine sahip en az Pristionchus tür dahilinde, başarılı predasyon deneyleri için TEP. Çok daha az invaziv ağız bu yöntemi olarak protokolde 1.2 açıklanan &quot;hızlı ağız fenotiplendirme&quot; protokolü ile morphs tanımlamak için en iyi ve nedenle yırtıcı davranışlar tedirgin olabilir daha az olasıdır. Ancak, ilk agar pedleri anestezi hayvanlar (protokol 1.1) ile tanımlanması farklı ağız yapıları ile aşina olmak için tavsiye edilir. İstenilen ağız morph tespiti takiben, yırtıcı besleme miktarının belirlenmesi için iki deneyleri tarif var. Bunlar (protokol 2) &quot;lokma deneyi&quot; ile değil daha derinlemesine davranış analizi tüketen hızlı, yüksek verimlilik &quot;ceset tahlil&quot; (protokol 3) ve bir kez daha vardır. Bu protokollerin iki experimen bağlı tahlilleri optimize etmek için birçok değişiklik sağlayan çok esnektirtal gereksinimleri. P ile ısırık tahlilleri için C üzerinde pacificus yırtıcı elegans av 10 dakikalık bir zaman penceresi için bir yırtıcı davranış etkileşimlerin gözlemler diğer besleme olaylar ile birlikte sokması önemli bir miktarını ölçmek için yeterliydi. Yine P kullanan &quot;ceset tahlilleri&quot; için C üzerinde pacificus yırtıcı elegans av 2 st için 5 yırtıcı hızlı bir davranış analizi için izin kolayca ölçülebilir ve tutarlı cenaze numaraları üretti. Bununla birlikte, farklı hızlarda yırtıcı nematod hareket farklı türler dikkat edilmelidir, farklı oranlarda yemek ve genel olarak diğer davranışları 1 büyük bir çeşitlilik gösterir. Ayrıca, farklı av türleri de benzer nedenlerle farklı oranlarda yemiş olabilir. Nedenle çevre koşullarında herhangi bir fark için de predatör ve av hem test nematod türlerinin dayalı tahlilleri optimize etmek için tavsiye edilir ve. hem &quot;lokma&quot; ve &quot;corps sırasındao stresli veya yaralı yırtıcı verimli öldürmek olmayacak gibi av ve yırtıcı hem sağlıklı olduğu kritik e &quot;tahliller. Buna ek olarak, taze tahlil plakaları olumsuz hatalı giden nematod sağlık etkiler kurumuş olabilir eski plakalar olarak önemlidir tahlilleri. Aynı zamanda pek çok C gözlenen davranışları elegans 21, 22 araştırmak için başarılmıştır olarak bu yırtıcı testlerinin gelecek tekrarlamalar analizi çok otomatikleştirmek için teknolojideki son gelişmeler yararlanmak mümkün olacaktır umulmaktadır. şu anda onlar yırtıcı beslenmesini iptal olasılığı mikroakışkan odaları izolasyon ve immobilizasyon yapma, çok daha hassas temas göründükleri gibi sorunlar örneğin P. pacificus olarak nematod ortaya çıkması muhtemeldir. Bu da zor olabilir ancak tek tek nematod kolaylaştıracak Üstesinden ustaca yırtıcı için taranmalıdır için davranışları. Son olarak, biz de fo yöntemler sağlamıştırr yüksek hızlı kamera (protokol 4) kullanılarak diş ve farenks pompalama kinetik niceleme yırtıcı ve bakteriyel besleme modları arasında karşılaştırmalar kolaylaştırmak nematod besleme aparatı kendisi incelenmesi. C. yutak pompalama oranları ölçümü elegans C, ancak, uzun yıllar 23 için besleme izlemek için kullanılmıştır elegans ağız denticle herhangi bir biçimde yoksun ve aynı zamanda yırtıcı davranışlar yoksundur. diş aktivitesinin pompalama farenks kantifikasyonunu birleştirerek sayesinde, avlanma özgü dişlerin herhangi innervasyon da görülebilir. Nedeniyle hayvanlar sık ​​sık odak düzlemi dışına diş hareketini gözlemek için gerekli büyütme, böylece kısa sürede pencereler için diş gözlemlemek genellikle mümkündür. Buna ek olarak, C. farklı elegans, P. yutak pacificus sürekli ziyade pompalama ve beslenme büyü yürütmektedir, pompa değildir. Bu nedenle, doğru bir faringeal pum içinbeslerken ping oranları sürekli besleme 15 saniye kaydedilmesi önemlidir, tespit edilecek. Burada yer alan Bu yöntemler, bu nedenle nematod sistemlerinde yırtıcı davranışları araştırmak için birinci çerçeve sağlar. Ayrıca, bunlar da mikroorganizmalar, mantar ve mitler de dahil avlanma ile ilgili ek ekolojik ilgili organizmaların etkisine de dahil olmak üzere, nematod ekosistemde diğer etkileşimleri araştıran kullanılmak için uyarlanabilen olabilir . Böylece onlar da kendi ekolojik önemi olan bu yırtıcı davranışlar, düzenlenir nasıl evrimleşmiş olabilir nasıl ve incelemek için bir araç sağlar.

Kendi küçük ama karmaşık sinir sistemleri ile Nematodlar davranış da dahil olmak üzere nörobiyoloji birçok açıdan anlamak için güçlü araçlar kanıtlamıştır. Bu araştırmaların çoğu model organizma farklı davranışlar bir zenginlik başarıyla disseke ve analiz edildiği Caenorhabditis elegans odaklanmıştır. Bu thermotactic 5,6 ve magnetotactic 7 etkileyen, 8,9 çiftleşme 10, öğrenme ve beslenme 11 davranışları, 4 kemotaktik, 3 mechanosensory içerir. Bununla birlikte, diğer daha uzak ilgili nematod türleri rhabditid C&#39;de gözlenmez davranışlar sergileyen elegans veya alternatif evrimleri ve düzenlenmesi ile ilgili ilgili soruları yanıtlayan karmaşıklık, ek düzeyleri göstermektedir. Bu tür bir örneği çok daha karmaşık besleme olarak gösterir uzaktan ilişkili diplogastrid nematod Pristionchus pacificus, gözlenebilirhaviors ve C gözlenenden daha ritimler İki tür homolog faringeal nöronlar 12 paylaşımı rağmen elegans 1. budur. Bu ek besleme davranışları, P. ile aynı zamana rastlayan onlar da diğer nematod larvaları beslenerek kendi bakteriyel diyet ilave edebilen hırslı yırtıcı, olduğu gibi pacificus de, genişletilmiş diyet aralığını görüntüler. Neyse ki, S. pacificus karşılaştırmalı ve bütünleştirici evrimsel biyoloji için bir model olarak geliştirilmiştir ve bu nedenle birçok moleküler ve genetik araçlar artık mevcuttur. Bunlar tamamen sıralı ve açıklamalı genomu 13, transgenlerin 14 ve CRISPR / Cas9 15,16 yanı sıra yeni keşfedilen kardeş türler de dahil olmak üzere 25 yılı aşkın yakından ilişkili türler ile detaylı ve iyi açıklamalı phylogeny 17 de dahil olmak üzere moleküler ve genetik araçları içerir. Buna ek olarak, çok sayıda Pristionchus türlerinin ekolojisi P. dahil pacificus bizizBirçok türün tanımlanmış ll şimdi bok böcekleri ile Necromenic ilişki, sık sık diğer nematod türlerinin 18 ile paylaşmak bir dizi paylaşımı tarif edilmiştir. P. pacificus Bu nedenle yeni davranışların evrimi ve ekolojik önemini incelemek için mükemmel bir model sistemi sağlar. Böyle P. olarak nematod türlerinin yırtıcı beslenme davranışlarını analiz etmek için pacificus biz kolay gözlem ve yırtıcı eylemler ölçümü için birkaç yeni davranış testleri geliştirmiştir. P. olarak pacificus kuvvetle doğru morfotiple belirlenmesi esastır 1,2 olduğunu, yırtıcı davranışını etkileyen dimorphic ağız yapısı, görüntüler. dar ağızlı stenostomatous morph tek künt dorsal diş içerir ve yırtıcı besleme meşgul etmez. Alternatif olarak, geniş ağızlı eurystomatous morph çok daha büyük bir pençe şeklindeki sırt diş ve karşıt bir ek içerirBirlikte verimli avlarını manikür açmak için faaliyet alt ventral diş. Olmayan yırtıcı stenostomatous forma yırtıcı eurystomatous oranı P. içinde de Pristionchus türler arasında değişir ve pacificus Ancak eurystomatous ağız yüzdesi P. Morph % 90 2 - pacificus yabani tip suşu (PS312), genellikle 70. Ayrıca, ağız formu oranları (hem bilinen açlık ve hem de bilinmeyen faktörler olarak sinyalizasyon bazı küçük molekül dahil) çevresel etkileri farklı yırtıcı eurystomatous ağız formu, böylece doğru tanımlanması ve izolasyonu bağlı olarak değişebilir yapabilirsiniz başarılı yırtıcı deneyleri için esastır. yırtıcı ağız formunun tanımı yanında biz doğrudan gözlem ve ısırma öldürme ve olaylar beslenme dahil olmak üzere yırtıcı davranışların ölçümü için bir &quot;ısırık tahlil&quot; geliştirdik. Burada av nematodlar filtre ile izole edilirYeni hasret kültürlerin ing ve yırtıcı yetişkin P. maruz Bir kısa bir süre içinde bir arada görülmektedir pacificus. Buna ek olarak, aynı zamanda yırtıcı olaylar dolaylı gözlem yoluyla saldırgan davranış hızlı tarama sağlamak için yüksek bir verim &quot;Ölü tahlili&quot; geliştirdik. Bu avlanma taranması için bir araç olarak larva cesetlerin bulunması yararlanır. Her iki testte de gözlemleyerek ve P. olarak nematod türlerinin yırtıcı davranışı ölçmek için kolay ve son derece tekrarlanabilir yöntemler sağlar pacificus.

<table><tbody><tr><td>Naylon ağ filtreleri (20 &# 181; m)</td> <td>Merck Millipore Ltd</td><td>NY2004700</td><td>Solucanları filtrelemek için kullanılır, sadece larvaları av olarak kullanmak için bırakır.</td></tr><tr><td>Filtre için PP Huni (54 mm)</td><td>Duran</td><td>292215003</td><td>Larvaları av olarak kullanmak üzere bırakarak solucanları filtrelemek için kullanılır.</td></tr><tr><td>Küçük petri kabı (35/10 mm)</td><td>Greiner Bio-One&nbsp;</td><td>627102</td><td>Yüksek hızlı kamerada görüntüleme için</td></tr><tr><td>Zeiss SteREO Discovery V12</td><td></td><td></td><td>Ağız formu tanımlama için</td></tr><tr><td>Axio-Görüntüleyici A1</td><td></td><td></td><td>Ağız formu tanımlama</td></tr> için <tr><td>Cam Slaytlar</td><td>Roth</td><td>H869</td><td></td></tr><tr><td>Kapak Slipleri</td><td>Roth</td><td>657</td><td></td></tr><tr><td>Hareket Kapsamı M3 Yüksek hızlı kamera</td><td>IDT</td><td></td><td>Yüksek hızlı kamera</td></tr><tr><td>Video yakınlaştırma 44 ENG 1/2" 0.5X - 2.4X</td><td>Zeis</td><td>452984-0000-000</td><td>Yüksek hızlı kamera yakınlaştırma</td></tr><tr><td>Nematod Büyüme Ortamı (NGM) malzemeler:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Agar</td><td>Roth</td><td>5210.2</td><td>CAS-Nr. 9002-18-0</td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td> <td>Roth</td><td>3957</td><td>CAS-Nr. 7647-14-5</td></tr><tr><td>Bacto Tripton</td><td>BD</td><td>211699</td><td>Lot 4316614</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat (CaCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td>CAS-Nr. 10035-04-8</td></tr><tr><td>Lanolinden kolesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F 26732 00050</td><td>CAS-Nr. 57-88-5</td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat heptahidrat (MgSO4)</td><td>Merck</td><td>1.058.861.000</td><td>CAS-Nr. 10034-99-8</td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojen fosfat (KH2PO4)</td><td>ACROS organics</td><td>271080025</td><td>CAS-Nr. 7778-77-0</td></tr><tr><td>6 cm petri kabı</td><td>Greiner Bio-One</td><td>628102</td><td></td></tr><tr><td>3,5 cm petri kabı</td><td>Greiner Bio-One</td><td>627102</td><td></td></tr><tr><td>M9 malzemeleri:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojen fosfat (KH2P<O>sub4)</td><td>ACROS organics</td><td>271080025</td><td>CAS-Nr. 7778-77-0</td></tr><tr><td>Sodyum hidrojen fosfat heptahidrat (NaHPO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9390-500G-D</td><td>CAS-Nr. 7782-85-6</td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Roth</td><td>3957</td><td>CAS-Nr. 7647-14-5</td></tr></tbody></table>

içinde yırtıcı beslenme davranışları tahlil<em&gt; pristionchus</em&gt; ve diğer nematodlar

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

Bu protokol, nematodlardaki yırtıcı beslenme davranışlarının analizi ve niceliklerinin belirlenmesi için birden fazla yöntem sağlar. Pristionchus pacificus da dahil olmak üzere birçok nematod türü, en çarpıcı olanı diğer nematod larvalarının avlanması olan karmaşık davranışlar sergiler. Bununla birlikte, bu davranışlar model organizma Caenorhabditis elegans'ta bulunmadığından, şimdiye kadar güvenilir davranışsal tahlillerin geliştirilmesiyle birlikte ancak son zamanlarda ayrıntılı olarak tanımlanmıştır 1. Bu yırtıcı davranışlar, fenotipik olarak plastik ancak sabit ağız morflarına bağlıdır ve bu hayvanların doğru tanımlanmasını ve sınıflandırılmasını gerekli kılar. P. pacificus'ta stenostomatöz ve eurystomatous morflar 2 olmak üzere iki ağız tipi vardır, sadece geniş ağızlı eurystomatous fazladan bir diş içerir ve diğer nematod larvalarını öldürebilir. Bol miktarda boyutla eşleşen av larvalarının izolasyonu ve ardından yırtıcı nematodlara maruz bırakılması yoluyla, doğru tanımlanmış ağız morf nematodları üzerinde hem "ceset deneyleri" hem de "ısırık deneyleri" dahil olmak üzere tahliller mümkündür. Bu tahliller, avlanma başarı oranlarını hızlı bir şekilde ölçmek için bir araç sağlar ve yırtıcı besleme faaliyetlerinde bulunan bireysel nematodların ayrıntılı bir davranışsal analizini sağlar. Ek olarak, yüksek hızlı bir kamera kullanımıyla, diş ve pompalama dinamikleri dahil olmak üzere faringeal aktivitedeki değişikliklerin görselleştirilmesi de mümkündür.

<html> P. uygun ağız morph başarılı kimlik ardından pacificus, eurystomatous ve stenostomatous hayvanlar arasında belirgin farklılıklar davranışı öldürme yapan sadece eurystomatous hayvanlar (Şekil 3) tespit edilebilir. stenostomatous hayvanlarda bu davranış, tamamen bastırılmış gibi görünüyor. Ayrıca, bakteriler ve av üzerinde eurystomatous hayvanların diş aktivitesi ve farenks pompalama farklılıklar (Şekil 4 ve Film 2 ve 3) de kendini gösterir. yırtıcı beslenme iken, pompalama oranı bakteriyel beslenme ve diş hareketi faringeal pompalama ile bir oranında bir tek tespit edilir sırasında gözlenen aşağıda azalır. Bu diyet farklı davranışsal tepkilerini ayarlayabilme anahtar düzenleyici mekanizmaların potansiyel göstergesidir. s / ftp_upload / 54.404 / 54404fig1.jpg &quot;/&gt; Şekil 1. P. pacificus Davranışı Besleme etkileyen Ağız Dimorfizm vardır. (A) eurystomatous ağız formu avlanma yeteneğine sahiptir ve büyük bir pençe şeklindeki sırt diş (yanlış renkli kırmızı) ve (B) Büyük bir karşıt kanca şeklindeki alt ventral diş (yanlış renkli mavi) ile geniş bir ağız açıklığı vardır. (C) stenostomatous ağız formu bakteriler üzerinde beslemek için sadece güçlü ve bir çakmaktaşı şeklindeki sırt diş (yanlış renkli kırmızı) ve (D) herhangi bir alt-ventral diş (*) ile daha dar bir ağız açıklığı vardır. Normaski görüntüleri 63X ve ölçek çubuğu 10 mikron temsil etmektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54404/54404fig2.jpg" /> <strong&gt; Şekil 2. Predasyon Tahliller. (A) P. pacificus ısırır ve C gibi diğer nematod larvaları öldürür ısırma deneyleri için elegans. (B) bitesby yırtıcı (*) sayısı hafif bir stereomikroskop ve başarılı öldürme ile ve aynı zamanda kaydedilen olayların besleme gözlenebilir. Cesetler açıkça da görülebilir (daireler) vardır. (C) ceset tahlilleri için, larva donatı (oklar) kolayca canlı larva ile karşılaştırıldığında, belirlenen edilebilir. Ölçek çubuğu 1 B mm ve C 150 mikron temsil eden <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig2large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54404/54404fig3.jpg" /> C üzerinde Bite ve Corpse Tahliller 3. Sonuçlar Şekil elegans Prey. (A) Isırma davranışı yalnızca belirgindir<html> Bu davranış ile eurystomatous ağız şeklinde stenostomatous hayvanlarda görüntülenir. Hata bar 10 çoğaltır standart sapmayı temsil etmektedir. (B) stenostomatous hayvanlardan belirgin hiçbir ısırma davranışları ile rastlayan ceset deneyleri de sadece eurystomatous hayvanların tahlil plakalar üzerinde karkaslar gözler önüne sermektedir. Hata çubuğu 5 çoğaltır standart sapmasını temsil etmektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54404/54404fig4.jpg" /> Eurystomatous hayvanlar yırtıcı beslenme sürdürürken Şekil 4. Yırtıcı Besleme sırasında Oranı ve Diş Hareketi Pompa Eurystomatous. Diş hareketi sadece gözlenmektedir. Bu aynı zamanda, farenks pompalama bir azalma ile çakışmaktadır. Hata bar 10 çoğaltır standart sapmasını temsil eder.<html> = &quot;Https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig4large.jpg&quot; target = &quot;_ blank&quot; href&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Film 1" src="/files/ftp_upload/54404/54404movie1.jpg" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/Movie_1_Killing_behaviour.mp4">Film Işık stereomikroskop kullanılarak Bite Testi için Davranışı Killing 1. Gözlem. (Sağ indirmek için tıklayın).</a> <img alt="Film 2" src="/files/ftp_upload/54404/54404movie2.jpg" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/Movie_2_HS_Camera_Killing.mp4">P. Film 2. Yüksek hızlı kamera Film pacificus C. öldürme elegans Larva. (Sağ indirmek için tıklayın).</a> reklam / 54404 / 54404movie3.jpg &quot;/&gt; <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/Movie_3_HS_pumping_and_tooth.mp4">Film 3. avcılığın sırasında Diş Hareketi Yüksek hızda Kamera Zoomed. (Sağ indirmek için tıklayın).</a>

Davranışsal tahliller, nöronal işlevi anlamak için güçlü araçlar sağlar. Burada, model nematod Pristionchus pacificus ve akrabalarında bulunan yırtıcı beslenme davranışını ölçmek için çeşitli protokoller sunuyoruz. Ek olarak, ağız yapıları ve dişler dahil olmak üzere yırtıcı beslenme adaptasyonlarını analiz etmek için yöntemler sunuyoruz.

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil<em&gt; Pristionchus</em&gt; Ve Diğer Nematodlar

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including ...

Bu prosedürlerin genel amacı, birkaç yeni analiz yöntemi kullanarak yırtıcı nematodlardaki karmaşık beslenme davranışlarını güvenilir bir şekilde analiz etmektir. Bu yöntemler, yeni ve karmaşık davranışların düzenlenmesi ve hatta evrimi gibi davranışsal nörobiyoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajı, uydu model organizma Pristionchus pacificus da dahil olmak üzere nematodlardaki yırtıcı beslenme davranışlarını gözlemlemek ve nicelleştirmek için hızlı ve kolayca tekrarlanabilir yöntemler sunmalarıdır.Nematod ağız morfolojilerini görüntülemek için öncelikle solucanları, yeni hazırlanmış %2'lik agaroz ped üzerinde hafif bir anestezik işlemle immobilize edin. Ped hazırlamak için, eritilmiş üç mililitre agaroza dikkatlice 10 µL %10'luk sodyum azid çözeltisi ekleyin ve iyice karıştırın. Sodyum azid reaktif ve toksik olduğundan gerekli önlemleri alın.Ardından, karışımın en az 300 µL'sini standart bir cam mikroskop lamının ortasına damlatın ve agarozu düzleştirmek için başka bir lam kullanın. Üstteki lamı, ped kullanılana kadar yerinde bırakın. Pedi kullanıma hazırlamak için üstteki lamı kaldırın ve bir damla M9 ekleyin. Sonra iki veya üç solucan seçip damlanın içine yerleştirin ve üzerini dikkatlice bir lamel ile kapatın.Solucanların morfolojik kimliklerini kategorize etmek için 63x Nomarski optikleri ile gözlem yapın. Genişlemiş bir dorsal diş, ek bir subventral diş veya genişlemiş geniş bir ağız açıklığı, eurystomatous bir hayvanın özellikleridir. Öte yandan, tek bir dorsal diş ve daha dar bir ağız açıklığı ise stenostomatous bir hayvana işaret eder.Beş dakika içinde nematodları anestezik pedden çıkarın. Lameli nazikçe kaydırarak kaldırın ve nematodları taze bir MGM plağına aktarın. Herhangi bir analize devam etmeden önce hareketli davranış sergilemelerini bekleyin.Daha fazla deneyimle, morf anestezi işlemi olmadan analiz edilebilir. Yüksek büyütmeli bir stereo mikroskop kullanarak hızlı ağız formu fenotiplemesi yapmak için, standart bir kültür plağından 10 ila 20 nematodu OP50 bakteri çimi ekilmiş taze bir plaka üzerine aktarın. Ardından, ağız boyutu ve genişliğindeki farklılıkları tespit edin.Bu büyütme oranında, diş benzeri yapılar gözlemlenemez, bu nedenle ağız morflarını genişliklerine göre tanımlayın. Böylece geniş ağızlıları dar ağızlılardan ayırt edin. Larval aşamadaki C.elegans veya ekolojik olarak uygun bir av gibi, seçilen av nematod larvalarından büyük miktarlarda yetiştirerek assay plakalarını hazırlayın.L1 larvalarını toplamak için av türünün dört veya daha fazla plağını aç bırakın. Daha sonra, plakları M9 ile yıkayın ve toplanan örneği iki adet 20 mikronluk filtreden geçirin. Çözeltide sadece küçük larvalar kalmalıdır.Larvaları 377 g'de bir dakika boyunca pelletleyin. M9 süpernatanını atık behere aktarın ve saf solucan pelletinden üç mikrolitrelik bir alikot alın. Solucanları, E.coli içermeyen altı santimetrelik bir MGM plağının merkezine yerleştirin ve yaklaşık yarım saat boyunca yayılmalarını bekleyin.Daha sonra, larvaları ısırma deneyi için kullanın. Predatorleri, mümkün olduğunca az OP50 bakterisi ile birlikte deney plağına aktarın. P.pacificus için plağa beş predator ekleyin.Aktarılan hayvanların stresten kurtulmaları için 15 dakika bekleyin. 15 dakika sonra, solucanlar normal şekilde hareket etmelidir; aksi takdirde zarar görmüş olabilirler. Şimdi, yırtıcılardan birinin gerçekleştirdiği belirgin olayları 10 dakika boyunca gözlemleyin ve kaydedin.Isırma, avcının avın hareketini kısıtlamasıyla karakterize edilir. Öldürme, avın kütikülü açıldığında gerçekleşir. Beslenme, avın iç organlarının gözlemlenebilir şekilde tüketilmesiyle karakterize edilir.Doğruluğu sağlamak için en az 10 bireysel yırtıcı nematodu gözlemleyin. Farenks pompalama ve diş hareketi, Nomarski optikleri altında 40 ila 63x büyütmede gözlemlenebilir ve 50 hertz hızında yüksek hızlı bir kamera ile kaydedilebilir. En az 20 hayvandan 15 saniyelik klipler kaydedildikten sonra, videolar güvenilir bir şekilde analiz edilebilir.Farenksin ortasında yer alan korpusta pompalama gözlemlenir. Diş hareketi, ağız açıklığında tespit edilebilir ve yalnızca dorsal dişten gözlemlenir. İki saatlik avlanmanın ardından, plak boş cesetler için taranır.Kadavraları, hareketliliklerinin olmaması ve dışarı sızan iç organlar veya eksik solucan parçaları dahil olmak üzere belirgin morfolojik kusurları ile tanımlayın. P.pacificus'ta uygun ağız morfünün başarılı bir şekilde tanımlanmasının ardından, eurystomatous ve stenostomatous hayvanlar arasında net farklar gözlemlenmiştir. Sadece eurystomatous hayvanlar öldürme davranışı sergilemiştir.Ayrıca, eurystamatous hayvanların bakteriler ve avlar üzerindeki diş aktivitesi ve faringeal pompalama arasındaki farklar da belirgindir. Predatör beslenme sırasında, pompalama hızı bakteriyel beslenme sırasında gözlemlenenden daha düşük seviyeye iner ve diş hareketi faringeal pompalama ile eşzamanlıdır. Bu videoyu izledikten sonra, uydu model organizma Pristionchus pacificus da dahil olmak üzere nematodlardaki karmaşık predatör beslenme davranışlarını karakterize etmek için bu farklı analizlerin nasıl birleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

assaying-predatory-feeding-behaviors-pristionchus-other

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu video, nematod C. elegans'ta kemotaksisi tanıtıyor ve bakır sülfata karşı kemotaktik kaçınmayı test eden örnek bir protokolü gösteriyor.

C. elegans Kemotaksis Testi: Solucanlarda Kemosensasyonu Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bu videoda, bir transgenik solucan modelinde kemokaçınma davranışını incelemek için bir ozmotik kaçınma testi açıklanmaktadır. Kaçınma davranışı, yüksek ozmotik bir bariyer ve kemoatraktan varlığında bir plakada test edilir. Fonksiyonel nöron kaybı olan solucanlar kemoatraktan tarafından çekilir, yüksek ozmotik bariyeri geçer ve anestezik çözelti nedeniyle tuzak bölgesinde felç olur.

Ozmotik Kaçınma Testi Kullanarak Transgenik Solucanlarda Kemokaçınma Davranışını İnceleyin

Entomopatojenik nematodlar böcek geniş bir yelpazede parasitize toprakta yaşayan yuvarlak solucan bulunmaktadır. Sırasıyla toprak örneklerinin ve enfekte olmuş böcek kadavra, nematod geri kazanılması için böcek kızdırma ve modifiye edilmiş beyaz tuzak: iki teknikler kullanılarak topraktan bu nematod izolasyonu için kullanılan örnekleme yöntemlerini göstermektedir.

Toprak Örnekleme ve Entomopatojenik Nematodlar İzolasyonu (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Çam ağacı nematodu Bursaphelenchus xylophilus'un çiftleşme davranışını araştırmak için bir protokol sunulmuştur. B. xylophilus'un davranışsal özellikleri çiftleşme sürecinde açıklanmaktadır.

Pinewood Nematodu gözlem ve Çiftleşme Davranış miktarının belirlenmesi, Orijinli olanlar

Burada, organizmanın iyi beslenmiş bir beslenme durumundan aç kalmış beslenme durumuna geçmesiyle bakırdan kaçınma davranışındaki ve ortak bir besin kaynağını bulma yeteneğini değerlendirmek için tasarlanmış Caenorhabditis elegans spesifik bir analiz sunuyoruz.

bir<emCaenorhabditis elegans</emBeslenme Durumuna Dayalı Bakır Kaçınma Deneyi

Nematodun, Caenorhabditis elegans'ın , nüfusa dayalı bir deneyde çözünür bileşikler için tercihinin otomatik analizini sağlayan bir davranış kayıt kurulumu ve protokolü sunuyoruz. Bu makale bir davranış odasının inşasını, davranışsal analiz protokolünü ve video analiz yazılımının kullanımını anlatıyor.

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

Bu protokol, alandaki doğal substratlardan canlı nematodları verimli bir şekilde çıkarmak için bir yöntem özetler.

Baermann Huni tarafından Vahşi Nematodların Hızlı İzolasyonu

Bu protokol, kendi kendine Caenorhabditis nematodlarının büyük ölçekli ekolojik araştırmalarını gerçekleştirmek için kullanılabilir. Bu yöntemin birincil avantajı, doğadan toplanan nematodlarla ilişkili ekolojik ve moleküler verilerin verimli bir şekilde düzenlenmesi ve analiz edilmesidir.

Kendinden Çıkan Caenorhabditis Nematodlarının Ekolojik Araştırmalarını Gerçekleştirmek için Yüksek Oranda Ölçeklenebilir Bir Yaklaşım

Caenorhabditis elegans , biyolojideki ana model türlerden biridir, ancak neredeyse tüm araştırmalar doğal olarak ilişkili mikroplarının yokluğunda gerçekleştirilir. Burada açıklanan yöntemler, gelecekteki fonksiyonel C. elegans araştırmalarının temeli olarak ilişkili mikropların çeşitliliği hakkındaki anlayışımızı geliştirmeye yardımcı olacaktır.

Model Nematod Caenorhabditis elegans'ın Doğal Mikrobiyotasının İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Burada, nematodların toplu davranışlarını, köpek maması agar ortamı kullanılarak toplu olarak kültürlenerek incelemek için bir sistem rapor edilmiştir. Bu sistem, araştırmacıların çok sayıda dauer solucanını çoğaltmasına izin verir ve Caenorhabditis elegans ve diğer ilgili türlere uygulanabilir.

Kolektif davranışlarını incelemek için nematodların büyük ölçekli ekimi

Bu çalışmada, Tithonia diversifolia ekstraktlarının biyolojik aktiviteleri, küçük ruminantlarda gastrointestinal nematodlar üzerindeki etkilerini değerlendirmek için radikal bazlı yöntemler ve in vitro yumurta kuluçka testi (EHA) kullanılarak değerlendirilmiştir. Metodoloji ve temel bulgular açıklanmakta ve bu ekstraktların parazitleri kontrol etme potansiyeli vurgulanmaktadır.

Tithonia diversifolia Ekstraktlarının Gastrointestinal Nematod Yumurtalarına Karşı Antioksidan ve Antelmintik Özelliklerinin İn Vitro Deneyler Kullanılarak Değerlendirilmesi

Öğrenin Pristionchus pacificus ve diğer nematodlarda yırtıcı beslenme davranışlarını analiz etme yöntemlerini. Davranışsal nörobiyoloji ve evrimsel adaptasyonları incelemek için bu teknikleri kullanın.

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil

Daha fazla video keşfet