Name: Bir Tükürük Antikor Multiplex Immuoassay Gelişmekte Çevre Patojenler İnsan Pozlamayı Tedbir (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Öğrenin, tükürük antikor çoklu immunoassay yöntemiyle çevresel patojenlere maruziyeti aynı anda ölçme tekniğini. Bu hızlı ve uygun maliyetli analiz, halk sağlığı stratejilerini geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Clarissa Curioso, ABD Enerji Bakanlığı ve ABD EPA arasındaki kurumlar arası bir anlaşma yoluyla Oak Ridge Bilim ve Eğitim Enstitüsü tarafından yönetilen ABD Çevre Koruma Ajansı'ndaki Araştırma Katılım Programına atanarak desteklendi.

Onay (KİK # 08-1844, Kuzey Karolina, Chapel Hill, NC, USA Üniversitesi) Boquerón Beach, Porto Riko, en beachgoers gelen uyarılmış oluğu tükürük örneklerinin toplanması için Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde bir parçası olarak Kurumsal Değerlendirme Kurulu elde edildi çevre Koruma Ajansı (USEPA) Milli Epidemiyolojik ve Dinlenme (NEEAR) Su Çalışması 23 çevresel Değerlendirme yüzme ilişkili risklerini ve hastalıkları değerlendirmek için. Çalışma konuları bilgilendirilmiş onam sağlanan ve eğitimli USEPA yükleniciler tarafından tükürük toplama cihazının kullanımı ile ilgili talimatı verildi. Tükürük numuneleri alınması üzerine, bu santrifüjlenmiş ve 4 anlatıldığı gibi -80 ° C&#39;de saklandı, buz üzerinde taşınmıştır ve bulundu. 1. Boncuk Aktivasyon <ol><li> Vorteks ve 20 saniye sonicating ve mikrosantrifüj tüplerine stok boncuk (400 ul) transferi yaklaşık 5.0 x 10 6 tarafından süspanse boncuk seti stokları. Not: TO 12.5 x 10 6 boncuk / ml&#39;lik bir konsantrasyonda temin edilmektedir boncuk. </li><li> 2 dakika süreyle 10,000 x g&#39;de santrifüj edilerek stok boncuk pelet. </li><li> 20 saniye boyunca girdap ve sonikasyon ile damıtılmış su (dH 2 O) Süpernatantı ve 100 ul pelet boncuklar tekrar süspansiyon. Adımı tekrarlayın 1.2. </li><li> Süpernatantı ve 20 saniye vorteksleyin ve sonikasyon ile 100 mM sodyum fosfat monobazik, pH 6.2, 80 ul yıkandı boncuklar tekrar süspansiyon. </li><li> Kullanımdan hemen önce, 10 mg Sülfo-NHS kana 200 ul dH 2 O eklenerek 50 mg / ml N -hydroxysulfosuccinimide (Sülfo-NHS) çözüm. girdap ile karıştırın. </li><li> Boncuklar 50 mg / ml Sülfo-NHS 10 ul ekle. girdap ile karıştırın. </li><li> Kullanımdan hemen önce, 10 mg EDC kana 200 uL damıtılmış su (DH 2 O) eklenerek 50 mg / ml 1-etil- [3-dimetilaminopropil] karbodiimid hidroklorür (EDC) çözüm. girdap ile karıştırın. </li><li> 50 10 ul ekleyintanelere mg / ml EDC çözeltisi. girdap ile karıştırın. 10 dakika aralıklarla girdap karıştırma ile, karanlıkta, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca boncuk inkübe edin. 2 dakika için 10,000 x g&#39;de mikrosantrifüj ile aktive boncuklar Pelet. </li><li> Süpernatantı ve 20 saniye vorteksleyin ve sonikasyon ile, 50 mM 2- [N-morfolino] etansülfonik asit (MES), pH 5.0, 250 ul içinde yeniden süspanse boncuklar. </li><li> 2 dakika için 10,000 x g&#39;de mikrosantrifüj ile aktive boncuklar Pelet. </li><li> Tekrarlayın 1.9 ve 1.10 adımları. Not: Bu, 50 mM MES, pH 5.0 ile iki kez yıkamadan toplam sağlar. </li><li> 20 saniye vorteksleyin ve sonikasyon ile 50 mM MES, pH 5.0, 100 ul boncuk tekrar. </li></ol> 2. Boncuk Kaplin <ol><li> Çift Tablo 1 &#39;de gösterilen konsantrasyonları kullanılarak kordon kümelerine antijenler. </li><li> aktive boncuklar, her antijen ekleyin ve 50 mM MES, pH 5.0 içinde 500 ul toplam hacim getirmek. antijenleri karıştırın birgirdap tarafından d boncuklar. </li><li> karanlıkta, oda sıcaklığında dönme (~ 15 dak) karıştırma ile 2 saat süre ile, antijenleri ve boncuk inkübe edin. 2 dakika için 10,000 x g&#39;de mikrosantrifüj ile bağlanmış boncuk Pelet. </li><li> Süpernatantı ve fosfat tamponlu tuzlu su, 500 ul içinde yeniden süspanse boncuklar (PBS) -bovine serum albümini (BSA) -polyoxyethylenesorbitan monolaurat (Tween-20) -sodyum azid (PBS-TBN) girdap ve sonikasyon ile pH 7.4 ile yıkanır. 2 dakika süreyle 10,000 x g&#39;de mikrosantrifüj ile boncuk pelet ve süpernatant kaldırmak. Dikkat: Sodyum azid bir akut toksik bir kimyasaldır. Yutma veya cilt ile temasında alırsa o ölümcüldür. Toz / duman / gaz / sis / buhar veya sprey teneffüs etmeyin. Uygun kişisel koruyucu ekipman (KKE) &#39;ın işlerken giyin ve uygun kanunlara uygun olarak bertaraf edin. </li><li> 20 saniye vorteksleyin ve sonikasyon ile PBS-TBN 1 ml boncuk tekrar. </li><li> 2 dakika için 10,000 x g&#39;de mikrosantrifüje edilerek boncuk Pelet. </li><li>Tekrarlayın 2.5 ve 2.6 adımları tekrarlayın. Not: Bu PBS-TBN ile iki yıkar toplam sağlar. </li><li> 1 ml PBS,% 1 BSA,% 0.05 azid, pH 7.4 içinde bağlı ve yıkandı boncuk süspanse. karanlıkta 2-8 ° C buzdolabı bağlanmış boncuklar saklayın. </li></ol> 3. Boncuk Sayısı <ol><li> su veya PBS tamponu içinde bağlanmış boncuk 1:10 seyreltme hazırlayın. </li><li> Yük örnek tanıtım noktasında bir hemasitometre üzerine boncuk seyreltme 10 ul. </li><li> 4 x 4 köşe ızgaraları birinde görülen boncuk sayın. Kont (4 x 4 ızgara 1 köşesi) x (1 x 10 4) x (seyreltme faktörü) ml x tabanda hacmi: aşağıdaki formül kullanılarak birleştiğinde boncuk toplam sayısını hesaplayın. </li></ol> Antijen bağlamalar 4. Onay <ol><li> 20 saniye boyunca girdap ve sonikasyon ile ilgi antijenlere birleştiğinde boncuk stok karışımı tekrar süspansiyon. </li><li> nihai bağlanmış boncuk stokları seyrelterek bir çalışma boncuk karışımı hazırlayınPBS-% 1 BSA tamponu (PBS% 1 BSA, pH 7.4) içinde belirlenen her bir benzersiz boncuk / ml, 100 boncuk konsantrasyonu. </li><li> en az 7 PBS-% 1 BSA tamponu ile 96-gözenekli yuvarlak tabanlı plakanın üreticinin tavsiyelerine göre IgG primer antikor anti-tür seri seyreltileri iki misli hazırlayın. </li><li> Yıkama tamponu, 100 ul her bir antijen birleştirme doğrulama testi için 96 oyuklu filtre taban plakasının ayrı bir 8 oyuklu kolonu (8 sıra) önceden ıslak ve vakum ile süpernatantı. Önceden ıslak oyuklara boncuk karışımı (antijene bağlanan boncuklar) Çalışma 50 ul ekle. </li><li> Arka plandaki kuyulara olarak hizmet seyreltilmiş antikor yerine 8 satır 96-çukurlu bir filtre plakasının her bir sütunun satır 1-7 ve PBS% 1 BSA tamponu 50 ul antikor seyreltileri 50 ul ekle. pipetleme ile 5 kez aşağı çok kanallı bir pipet ile karıştırılır. Her antijen birleştiğinde boncuk seti için aynı prosedürü uygulayın teyit edilecek. </li><li> Kapak ve oda sıcaklığında karanlıkta inkübe izin500 rpm&#39;de bir mikro çalkalayıcı içinde 1 saat süre ile kısa süreli olarak. vakum ile süpernatantı. </li><li> yıkama tamponu 100 ul ile kuyu yıkayın ve vakum ile süpernatant kaldırmak. 1x tekrarlayın. Çok kanallı bir pipet ile PBS-% 1 BSA, 50 ul boncuk tekrar. </li><li> PBS-% 1 BSA içinde 16 ug / ml biyotinile anti-türe özel IgG sekonder antikor saptama seyreltilir. </li><li> aşağı 5 kez yukarı pipetleme ve her kuyuya seyreltilmiş ikincil antikor 50 ul ekleyin. </li><li> Filtre plakasını örtün ve bir plaka karıştırıcısı üzerinde 30 dakika boyunca oda sıcaklığında karanlıkta inkübe izin verin. vakum ile süpernatantı. yıkama tamponu 100 ul ile kuyu yıkayın ve vakum ile süpernatant kaldırmak. yıkama 1x tekrarlayın. </li><li> Çok kanallı bir pipet ile PBS-% 1 BSA, 50 ul boncuk tekrar. </li><li> PBS-% 1 BSA içinde 24 ug / ml streptavidin-R-fikoeritrin reporter (SAPE) seyreltin. </li><li> her muhabir 50 ul iyi ekleyin ve yukarı pipetleme ve 5 kez aşağı karıştırın. </li><li> Cve filtre plakası üzerine bir plaka karıştırıcısı üzerinde 30 dakika boyunca oda sıcaklığında karanlıkta inkübe izin verin. vakum ile süpernatantı. yıkama tamponu 100 ul ile kuyu yıkayın ve vakum ile süpernatant kaldırmak. yıkama 1x tekrarlayın. </li><li> Yeniden süspanse PBS-% 1 BSA, 100 ul boncuk ve analiz cihazı 29 ile 50 ul analiz eder. Not: tane bazlı çoklu immüno Sonuçlar ortalama florasan yoğunluğu (MFI) olarak ölçülür. hataları önlemek için varsa, her zaman, yazılım kılavuzunun en son sürümü bakın. </li></ol> 5. Tükürük Multiplex İmmunoassay <ol><li> -80 ° C dondurucu tükürük alınır ve oda sıcaklığında erimeye sağlar. </li><li> Süspanse antijen 20 saniye vorteks ve sonikasyon ile boncuk stokları birleştiğinde. </li><li> PBS-% 1 BSA tampon içinde benzersiz her boncuk grubunun / ml, 100 boncuk nihai konsantrasyona bağlı kordon stokları seyrelterek bir çalışma boncuk karışımı hazırlayın. </li><li> tükürük 4 seyreltme w: 1 hazırlayınPBS-% 1 BSA, 96 tampon de, derin oyuklu plakaya i. </li><li> Ön ıslak filtre yıkama tamponu 100 ul ile plaka ve vakum ile süpernatant kaldırmak. </li><li> 8 nihai seyreltme: çalışan bir boncuk karışımı ve 1 96 oyuklu filtre plakası 95 oyuklarına seyreltildi tükürük, eşit hacimde 50 ul ekle. Çok kanallı bir pipet ile reaksiyonları karıştırın. de birinin kontrol edilmesi için, 50 ul antijen bağlanan boncuklar artı (tükürük için bir yedek olarak) PBS-% 1 BSA tampon 50 ul ekle. </li><li> Kapak 500 rpm&#39;de bir mikro-plaka çalkalayıcıda 1 saat süreyle oda sıcaklığında karanlıkta inkübe sağlar. vakum ile süpernatantı. yıkama tamponu 100 ul ile kuyu yıkayın ve vakum ile süpernatant kaldırmak. yıkama 1x tekrarlayın. </li><li> Çok kanallı bir pipet ile PBS-% 1 BSA, 50 ul içinde süspanse boncuklar. </li><li> PBS-% 1 BSA içinde 16 ug / ml biyotinile edilmiş keçi anti-insan IgG ikincil antikoru saptama seyreltilir. </li><li> her çukuruna ikincil antikor seyreltilmiş 50 ul ekle ile karıştırınÇok kanallı bir pipet. </li><li> Filtre plakasını örtün ve bir plaka karıştırıcısı üzerinde 30 dakika boyunca oda sıcaklığında karanlıkta inkübe izin verin. vakum ile süpernatantı. yıkama tamponu 100 ul ile kuyu yıkayın ve vakum ile süpernatant kaldırmak. yıkama 1x tekrarlayın. </li><li> Çok kanallı bir pipet ile PBS-% 1 BSA, 50 ul içinde süspanse boncuklar. </li><li> PBS-% 1 BSA içinde 24 ug / ml streptavidin-R-fikoeritrin reporter (SAPE) seyreltin. </li><li> her 50 ul muhabiri de ekleyin ve çok kanallı pipet ile karıştırın. </li><li> Filtre plakasını örtün ve bir plaka karıştırıcısı üzerinde 30 dakika boyunca oda sıcaklığında karanlıkta inkübe izin verin. vakum ile süpernatantı. yıkama tamponu 100 ul ile kuyu yıkayın ve vakum ile süpernatant kaldırmak. yıkama 1x tekrarlayın. </li><li> Yeniden süspanse PBS-% 1 BSA, 100 ul boncuk ve analiz cihazı 29 ile 50 ul analiz eder. Not: çoklu immüno Sonuçlar ortalama florasan yoğunluğu (MFI) birimleri cinsinden ölçülür. Her zaman ifadeYazılım kılavuzun en son sürümü, varsa hataları önlemek için. </li></ol>

<ol><li>Prüss-Üstün, A., Gore, F., Bartram, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPr%C3%BCss-%C3%9Cst%C3%BCn%2C+A+%22Safer+water%2C+better+health%3A+costs%2C+benefits+and+sustainability+of+interventions+to+protect+and+promote+health%22">Safer water, better health: costs, benefits and sustainability of interventions to protect and promote health</a>. , World Health Organization. Geneva. (2008).</li>
<li>Augustine, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+approaches+to+developing+a+multiplex+immunoassay+for+determining+human+exposure+to+environmental+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Statistical approaches to developing a multiplex immunoassay for determining human exposure to environmental pathogens.</a> J Immunol Methods. 425, 1-9 (2015).</li>
<li>Griffin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+salivary+antibody+immunoassays+for+the+detection+of+incident+infections+with+Norwalk+virus+in+a+group+of+volunteers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Application of salivary antibody immunoassays for the detection of incident infections with Norwalk virus in a group of volunteers.</a> J Immunol Methods. 424, 53-63 (2015).</li>
<li>Griffin, S., Chen, I., Fout, G., Wade, T., Egorov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+multiplex+microsphere+immunoassay+for+the+quantitation+of+salivary+antibody+responses+to+selected+waterborne+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a multiplex microsphere immunoassay for the quantitation of salivary antibody responses to selected waterborne pathogens.</a> J Immunol Methods. 364 (1-2), 83-93 (2011).</li>
<li>Ferguson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+diagnostic+uses+of+saliva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Current diagnostic uses of saliva.</a> J Dent Res. 66, 420-424 (1987).</li>
<li>Mandel, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diagnostic+uses+of+saliva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Pathol+Med%22%5BJournal%5D)">The diagnostic uses of saliva.</a> J Oral Pathol Med. 19, 119-125 (1990).</li>
<li>Malamud, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saliva+as+a+Diagnostic+Fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Brit+Med+J%22%5BJournal%5D)">Saliva as a Diagnostic Fluid.</a> Brit Med J. 305, 207-208 (1992).</li>
<li>Ballam, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blotting+is+useful+in+the+salivary+diagnosis+of+Helicobacter+pylori+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Western blotting is useful in the salivary diagnosis of Helicobacter pylori infection.</a> J Clin Pathol. 53, 314-317 (2000).</li>
<li>Estevez, P., Satoguina, J., Nwakanma, D., West, S., Conway, D., Drakeley, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+saliva+as+a+source+of+anti-malarial+antibodies+to+examine+population+exposure+to+Plasmodium+falciparum%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+J%22%5BJournal%5D)">Human saliva as a source of anti-malarial antibodies to examine population exposure to Plasmodium falciparum.</a> Malar J. 10, 104(2011).</li>
<li>Abd-Alla, M., Jackson, T., Reddy, S., Ravdin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+invasive+amebiasis+by+enzyme-linked+immunosorbent+assay+of+saliva+to+detect+amebic+lectin+antigen+and+anti-lectin+immunoglobulin+G+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of invasive amebiasis by enzyme-linked immunosorbent assay of saliva to detect amebic lectin antigen and anti-lectin immunoglobulin G antibodies.</a> J Clin Microbiol. 38 (6), 2344-2347 (2000).</li>
<li>Toyoguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+reactivity+to+Cryptosporidium+parvum+in+saliva+of+calves+after+experimental+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Antibody reactivity to Cryptosporidium parvum in saliva of calves after experimental infection.</a> J Vet Med Sci. 62 (11), 1231-1234 (2000).</li>
<li>Choo, S., Zhang, Q., Seymour, L., Akhtar, S., Finn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+and+booster+salivary+antibody+responses+to+a+7-valent+pneumococcal+conjugate+vaccine+in+infants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Primary and booster salivary antibody responses to a 7-valent pneumococcal conjugate vaccine in infants.</a> J Infect Dis. 182 (4), 1260-1263 (2000).</li>
<li>Tourinho, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+the+cutoff+ratio+for+detecting+antibodies+against+hepatitis+A+virus+in+oral+fluids+by+enzyme+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Importance of the cutoff ratio for detecting antibodies against hepatitis A virus in oral fluids by enzyme immunoassay.</a> J Virol Methods. 173 (2), 169-174 (2011).</li>
<li>Moorthy, M., Daniel, H., Kurian, G., Abraham, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evaluation+of+saliva+as+an+alternative+to+plasma+for+the+detection+of+hepatitis+C+virus+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An evaluation of saliva as an alternative to plasma for the detection of hepatitis C virus antibodies.</a> Indian J Med Microbiol. 26 (4), 327-332 (2008).</li>
<li>Moe, C., Sair, A., Lindesmith, L., Estes, M., Jaykus, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+norwalk+virus+infection+by+indirect+enzyme+immunoassay+detection+of+salivary+antibodies+to+recombinant+norwalk+virus+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of norwalk virus infection by indirect enzyme immunoassay detection of salivary antibodies to recombinant norwalk virus antigen.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 11 (6), 1028-1034 (2004).</li>
<li>Yap, G., Sil, B., Ng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+saliva+for+early+dengue+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Use of saliva for early dengue diagnosis.</a> PLoS Negl Trop Dis. 5 (5), e1046(2011).</li>
<li>Schramm, W., Angulo, G., Torres, P., Burgess-Cassler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+saliva-based+test+for+detecting+antibodies+to+human+immunodeficiency+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">A simple saliva-based test for detecting antibodies to human immunodeficiency virus.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 6 (4), 577-580 (1999).</li>
<li>Chart, H., Perry, N., Willshaw, G., Cheasty, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+saliva+for+antibodies+to+the+LPS+of+Escherichia+coli+O157+in+patients+with+serum+antibodies+to+E.+coli+O157+LPS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of saliva for antibodies to the LPS of Escherichia coli O157 in patients with serum antibodies to E. coli O157 LPS.</a> J Med Microbiol. 52 (Pt 7), 569-572 (2003).</li>
<li>Ashbolt, N., Bruno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+and+refinement+of+the+WHO+risk+framework+for+recreational+waters+in+Sydney%2C+Australia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Water+Health%22%5BJournal%5D)">Application and refinement of the WHO risk framework for recreational waters in Sydney, Australia.</a> J Water Health. 1 (3), 125-131 (2003).</li>
<li>Westrell, T., Schonning, C., Stenstrom, T., Ashbolt, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QMRA+%28quantitative+microbial+risk+assessment%29+and+HACCP+%28hazard+analysis+and+critical+control+points%29+for+management+of+pathogens+in+wastewater+and+sewage+sludge+treatment+and+reuse%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">QMRA (quantitative microbial risk assessment) and HACCP (hazard analysis and critical control points) for management of pathogens in wastewater and sewage sludge treatment and reuse.</a> Water Sci Technol. 50 (2), 23-30 (2004).</li>
<li>Ashbolt, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+contamination+of+drinking+water+and+disease+outcomes+in+developing+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Microbial contamination of drinking water and disease outcomes in developing regions.</a> Toxicology. 198 (1-3), 229-238 (2004).</li>
<li>Eisenberg, J., Soller, J., Scott, J., Eisenberg, D., Colford, J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+model+to+assess+microbial+health+risks+associated+with+beneficial+uses+of+biosolids%5BTitle%5D)+AND+%22Risk+Anal%22%5BJournal%5D)">A dynamic model to assess microbial health risks associated with beneficial uses of biosolids.</a> Risk Anal. 24, 221-236 (2004).</li>
<li>Wade, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWade%2C+TJ+%22Report+on+2009+National+Epidemiologic+and+Environmental+Assessment+of+Recreational+Water+Epidemiology+Studies%2C+US+EPA.+US+EPA+Report+Number%3A+EPA%2F600%2FR-10%2F168%3A+US+EPA2011%22">Report on 2009 National Epidemiologic and Environmental Assessment of Recreational Water Epidemiology Studies, US EPA. US EPA Report Number: EPA/600/R-10/168: US EPA2011</a>. , (2011).</li>
<li>Fujii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serological+surveillance+development+for+tropical+infectious+diseases+using+simultaneous+microsphere-based+multiplex+assays+and+finite+mixture+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Serological surveillance development for tropical infectious diseases using simultaneous microsphere-based multiplex assays and finite mixture models.</a> PLoS Negl Trop Dis. 8, e3040(2014).</li>
<li>Rota, M., Massari, M., Gabutti, G., Guido, M., De Donno, A., Ciofi degli Atti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measles+serological+survey+in+the+Italian+population%3A+interpretation+of+results+using+mixture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Measles serological survey in the Italian population: interpretation of results using mixture model.</a> Vaccine. 26 (34), 4403-4409 (2008).</li>
<li>Vyse, A., Gay, N., Hesketh, L., Pebody, R., Morgan-Capner, P., Miller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpreting+serological+surveys+using+mixture+models%3A+the+seroepidemiology+of+measles%2C+mumps+and+rubella+in+England+and+Wales+at+the+beginning+of+the+21st+century%5BTitle%5D)+AND+%22Epidemiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Interpreting serological surveys using mixture models: the seroepidemiology of measles, mumps and rubella in England and Wales at the beginning of the 21st century.</a> Epidemiol Infect. 134 (6), 1303-1312 (2006).</li>
<li>Baughman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+diagnostic+cutoff+points+for+levels+of+serum+antibodies+to+pertussis+toxin%2C+filamentous+hemagglutinin%2C+and+fimbriae+in+adolescents+and+adults+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Establishment of diagnostic cutoff points for levels of serum antibodies to pertussis toxin, filamentous hemagglutinin, and fimbriae in adolescents and adults in the United States.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 11 (6), 1045-1053 (2004).</li>
<li>Clotilde, L., Bernard, C. IV, Hartman, G., Lau, D., Carter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbead-based+immunoassay+for+simultaneous+detection+of+Shiga+toxins+and+isolation+of+Escherichia+coli+O157+in+foods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Microbead-based immunoassay for simultaneous detection of Shiga toxins and isolation of Escherichia coli O157 in foods.</a> J Food Prot. 74 (3), 373-379 (2011).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Luminex+User+Software+Manual+%28RUO%29+xPONENT+3.1+Rev.+2%22">Luminex User Software Manual (RUO) xPONENT 3.1 Rev. 2</a>. 3, 6-102 (2014).</li>
<li>Waterboer, T., Sehr, P., Pawlita, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+non-specific+binding+in+serological+Luminex+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Suppression of non-specific binding in serological Luminex assays.</a> J Immunol Methods. 309 (1-2), 200-204 (2006).</li>
</ol>

Araştırma ve Geliştirme onun Ofisi aracılığıyla Amerika Birleşik Devletleri Çevre Koruma Ajansı tarafından finanse edilen ve burada açıklanan araştırma başardı. Bu Kurumun idari inceleme tabi ve yayın için onaylanmıştır. ticari adları veya ticari ürünlerin Mansiyon kullanımı için onay ya da tavsiye niteliğinde değildir.

Bu sonuçlar, çok katlı bir bağışıklık deneyi, immünopozitif ya immunonegative olan tükürük örnekleri arasında ayrım için yararlı olduğunu göstermektedir. immunopozitivitesi belirlemek için, tek bir kesim noktası ortalama artı tükürük örneklerinin her test kontrol Kuplajsız boncuk log dönüştürülmüş MFI yanıtları üç standart sapma hesaplanırken tarafından geliştirilmiştir. kesim noktası, ya bir tek ya da çok patojenlere maruz kalma ve immunoprevalence değerlendirme yeteneği elde edildi. Bu ayrımcı güç, çevresel ve diğer p...

Ishal ilişkili hastalık seksen sekiz yüzde dünya çapında yaklaşık 1.5 milyon ölüme neden, kirli su insan maruz güvensiz gıda ve kötü sanitasyon / hijyen ile ilişkilidir, çoğunluğu çocuk 1 bulunmaktadır. Bu halk sağlığı yetkilileri ve politika yapıcılar için endişe önemli bir nedenidir. Su bazlı ve diğer çevresel patojenler ile ilişkili pozlama ve hastalıkları araştırmak için bir çaba, insan örneklerinde 2-4 antikorları ölçmek için bir multipleks immunoassay geliştirdi. Bu yöntem, bu patojenlere maruz kalma belirlemek ve daha iyi immunoprevalence ve olay enfeksiyonları tanımlamak için epidemiyolojik çalışmalar uygulanabilir. Tükürük insan biyomarker araştırma için serum alternatif olarak önemli söz sahibidir. Tükürük kullanmanın avantajları arasında non-invaziv ve numune toplama, düşük maliyet kolaylığı vardır, ve numuneler kolayca çocukların 5-7 &lt;alınabilir/ Sup&gt;. Serum ve tükürük örnekleri H. karşı antikorlar için yoğun çalışmalar yapılmıştır pylori 2,3,8, Plasmodium falciparum 9, Entamoeba histolytica 10, Cryptosporidium parvum 3,11, Streptococcus pneumonia 12, hepatit virüsleri A ve C 13-14, Noroviruses 2-4,15, T. gondii 2-4, dang humması virüsü 16, insan bağışıklık eksikliği virüsü (HIV), 17 ve Escherichia coli O157: H7 18. Bir çoklu immünolojik eş zamanlı olarak tek bir örnek hacmi içinde ve bir döngü veya çalışmasında çok analit analizi sağlar. C Çoklanmış antijenler jejuni, T. gondii, H. pylori, hepatit A virüsü, ve iki Noroviruses bir kullanarak bu patojenler, insan tükürük IgG 2-4 ve IgA 3,4 ve plazma IgG 2,3 antikor tepkilerini ölçmek için kullanılmıştırBoncuk esaslı çoklayıcı immüno. su, toprak ve gıda mikroplara maruz kalma epidemiyolojik çalışmalar ile birlikte kullanıldığında, bu çalışmada açıklanan testin tipi çevre patojenlerin neden olduğu enfeksiyonların anlayışı geliştirmek için değerli bilgiler verebilir. Ayrıca, bu tür çalışmalarda elde edilen tükürük antikor veriler risk değerlendirmesi modelleri 19-22 geliştirmek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Ekipman ve Yazılım</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj</td><td>Thermo Electron Corporation</td><td>75002446</td><td>Numuneleri santrifüjlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>Vorteks Karıştırıcı</td><td>VWR</td><td>G560</td><td>Numuneleri karıştırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Sonikatör (mini)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-337-22</td><td>Boncukları ayırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Pipetleyiciler P10, P20, P100, P1000, 8 kanal. </td><td>Capp</td><td>Çeşitli Hemasitometre</td><td></td></tr><tr><td>(Parlak Çizgi)</td><td>Housser Scientific&nbsp;</td><td>3200</td><td>Birleştirilmiş boncukları saymak için kullanılır</td></tr><tr><td>Çok Ekranlı Vakum Manifoldu</td><td>Millipore</td><td>MSVMHTS00</td><td>Süpernatan MicroShaker'ı çıkarmak için yıkama adımlarında kullanılır</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>12620-926</td><td>İnkübasyonlar sırasında boncukları çalkalamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Tüp rafı (1,5 ml ve 0,5 ml) (çeşitli)</td><td>VWR</td><td>30128-346</td><td></td></tr><tr><td>Tartı Tartısı</td><td>, Mettler veya diğer</td><td></td><td>Tampon yapmak için yıkama reaktiflerini ölçmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Dynabead Numune Karıştırıcı</td><td>Invitrogen</td><td>947-01</td><td>Birleştirme inkübasyon adımı</td></tr><tr><td>MatLab (R2014b)</td> sırasında <td>kullanılırThe MathWorks, Inc.</td><td></td><td>Antikor yanıt verilerini analiz etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Microsoft Excel 2014</td><td>Microsoft Corporation</td><td></td><td>Antikor yanıt verilerini analiz etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>xPonent 3.1 yazılımına sahip Luminex Analyzer</td><td>Luminex Corporation</td><td>LX200-XPON3.1</td><td>Testi çalıştırmak için kullanılan cihaz ve yazılım</td></tr><tr><td>Antigens</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GI.1 Norwalk Virüsü: p-parçacık</td><td>Xi Jiang (CCHMC)*</td><td>NA*</td><td>Cincinnati Çocuk Hastanesi. Son conc. 5 &mikro;g.</td></tr><tr><td>GII.4 Norovirüs VA387: p-parçacık</td><td>Xi Jiang (CCHMC)*</td><td>NA</td><td>*Cincinnati Çocuk Hastanesi. Son conc. 5 &mikro;g.</td></tr><tr><td>Hepatit A Virüsü: hücre kültüründen derece II konsantre</td><td>Meridian Life Sciences</td><td>8505</td><td>Antijen 100 & mikro'da birleşmiş; g</td></tr><tr><td>Helicobacter pylori: lizat</td><td>Meridyen Yaşam Bilimleri</td><td>R14101</td><td>Antijen 25 & mikro'da birleşmiş; g</td></tr><tr><td> Toxoplasma gondii: rekombinant p30 (SAG1)</td> <td>Meridyen Yaşam Bilimleri</td><td>R18426</td><td>Antijen 25 & mikro'da birleşmiş; g</td></tr><tr><td>Campylobacter jejuni: ısıyla öldürülen bütün hücreler</td><td>KPL</td><td>50-92-93</td><td>Antijen 50 & mikro'da birleşmiş; g</td></tr><tr><td><güçlü > Birincil Antikorlar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>kobay anti-Norovirüsü</td> <td>(CCHMC) *</td> <td>NA</td><td>Birleştirme onayı için kullanılır</td></tr><tr><td>Fare anti-Hepatit A IgG</td><td>Meridyen Yaşam Bilimleri</td><td>C65885M</td><td>Birleştirme onayı için kullanılır</td></tr><tr><td>Fare anti-Hepatit A IgG</td><td>Meridian Yaşam Bilimleri</td><td>C65885M</td><td>Kaplin onayı için kullanılır</td></tr><tr><td>BacTraceAffinity Helicobacter pylori</td><td>KPL</td><td>01-93-94'e</td> karşı <td>saflaştırılmış</td>antikor</tr><tr><td>Keçi pAb'nin Toxoplasma gondii</td><td>Abcam</td><td>için</td> kullanılır Birleştirme <td>onayı için kullanılır</td></tr><tr><td>BacTrace Keçi anti-Campylobacter türleri</td><td>KPL</td><td>01-92-93</td><td>Kaplin onayı</td></tr> <tr><td>için kullanılır<güçlü>İkincil&nbsp; Antikorlar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Biotin-SP-Konjuge AffiniPure Donkey anti-Keçi IgG (H + L)</td> <td>Jackson</td><td>705-065-149</td><td>Birleştirme onayı için kullanılır</td></tr><tr><td>Biyotinillenmiş Tavşan anti-Keçi IgG (H + L)</td> <td>KPL</td><td>16-13-06</td><td>Eşleşme onayı için kullanılır</td></tr><tr><td>Biyotinile Keçi anti-Fare IgG (H + L)</td> <td>KPL</td><td>16-18-06</td><td>Kaplin onayı</td></tr> <tr><td>için kullanılırAfinite Saflaştırılmış Antikor Biotin Etiketli Keçi anti-Tavşan IgG (H + L)</td> <td>KPL</td><td>176-1506</td><td>Kaplin onayı için kullanılır</td></tr> <tr><td><güçlü > Sarf malzemeleri< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>1.5 ml kopolimer mikrosantrifüj tüpleri</td><td>ABD Scientific</td><td>1415-2500</td><td>Düşük bağlayıcı mikrosantrifüj tüpleri</td></tr><tr><td>10 ve mikro olarak kullanılır; l pipet ucu yedekleri</td><td>BioVentures</td><td>5030050C</td><td></td></tr><tr><td>200 & l pipet ucu yedekleri</td><td>BioVentures</td><td>5030080C</td><td></td></tr><tr><td>1.000 & l pipet ucu yedekleri</td><td>BioVentures</td><td>5130140C</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>Kullanılan Çeşitli Satıcılar</td><td></td><td>Kuluçka sırasında boncukları karanlıkta tutar</td></tr><tr><td>Derin Kuyu plakaları</td><td>VWR</td><td>40002-009</td><td>Tükürük örneklerini seyreltmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Çok Ekranlı Filtre Plakaları</td><td>Kırlangıç</td><td>MABVN1250</td><td>Tahlilleri çalıştırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Oracol tükürük toplama sistemi</td><td>Malvern Medical Gelişmeler Sınırlı</td><td></td><td>Tükürük toplama için kullanılır</td></tr><tr><td><güçlü>Reaktifler< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Karboksilatlı mikroküreler (boncuklar)</td><td>Luminex Corporation</td><td>Boncuk setine bağlı</td><td>Antijenler mikrokürelere bağlanır</td></tr><tr><td>EDC (1-etil-3- [3-dimetilaminopropil] karbodiimid hidroklorür)</td> <td>Pierce</td><td>77149 veya 22980</td><td>Boncuk aktivasyonunda kullanılır</td></tr><tr><td>Sülfo-NHS ( N-hidroksisülfosüksinimid)</td> <td>Pierce</td><td>24510</td><td>Boncuk aktivasyonunda kullanılır</td></tr><tr><td>Steptavidin-R-fikoeritrin (1 mg / ml)</td> <td>Moleküler Problar</td><td>S-866</td><td>Muhabir olarak kullanılır</td></tr><tr><td>MES (2- [ -Morfolino] etansülfonik asit)</td> <td>Sigma</td><td>M-2933</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20 (Polioksietilenorbitan monolaurat)</td> <td>Sigma'yı</td> <td>birleştirmek için kullanılırP-9416</td><td>Spesifik olmayan bağlamayı çıkarmak için yıkama tamponunda kullanılır</td></tr><tr><td><güçlü>Protein Tamponları</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>PBS-TBN Engelleme / Depolama Tamponu (PBS,% 0.1 BSA,% 0.02 Tween-20,% 0.05 Azide, pH 7.4)< / güçlü > **</td><td></td><td></td> <td>Filtre Sterilize edin ve 4 ° C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Sigma</td><td>P-3813</td><td>138 mM NaCl, 2.7 mM KCl</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A-7888</td><td>%0.1 (a/h)</td></tr><tr><td>Ara-20</td><td>Sigma</td><td>P-9416</td><td>%0.2 (h/h)</td></tr><tr><td>Sodyum Azid (%0.05 azid)**</td><td>Sigma</td><td>S-8032</td><td>**<güçlü>Dikkat</güçlü>: Sodyum azid akut toksiktir. Cilt ve gözlerle temasından kaçının. Uygun KKD'ler giyin. Yürürlükteki yasalara göre imha edin.</td></tr><tr><td><güçlü>MES / Birleştirme Tamponu (0.05 M MES, pH 5.0)< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MES (2- [ N -Morfolino] etansülfonik asit)</td> <td>Sigma</td><td>S-3139</td><td></td></tr><tr><td>5 N NaOH</td><td>Fisher</td><td>SS256-500</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Tahlil Tamponu (PBS,% 1 BSA, pH 7.4) &nbsp; </güçlü ></td><td></td><td></td> <td>Filtre Sterilize edin ve 4 ° C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>PBS, %1 BSA, pH 7.4</td><td>Sigma</td><td>P-3688</td><td>138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, %1 BSA</td></tr><tr><td><güçlü>Aktivasyon Tamponu (0.1 M NaH</güçlü><güçlü>2<güçlü><alt><güçlü>PO<><güçlü><güçlü>4</güçlü></alt><güçlü>, pH 6.2) < / güçlü ></td><td></td><td></td> <td>Filtre Sterilize edin ve 4 ° C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>NaH2PO4 (Sodyum fosfat, monobazik susuz)</td> <td>Sigma</td><td>S-3139</td><td>0.1 M NaH2PO4</td></tr><tr><td>5 N NaOH</td><td>Fisher</td><td>SS256-500</td><td></td></tr><tr><td>Wash Buffer (PBS,% 0.05 Tween-20, pH 7.4) < / güçlü ></td><td></td><td></td> <td>Filtre Sterilize edin ve 4 ° C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>PBS, %0,05 Ara-20, pH 7,4</td><td>Sigma</td><td>P-3563</td><td>138 mM NaCl, 2,7 mM KCl, %0,05 TWEEN</td></tr></tbody></table>

bir tükürük antikor multiplex immuoassay gelişmekte Çevre patojenler İnsan pozlama&#39;yı tedbir

Developing a Salivary Antibody Multiplex Immunoassay to Measure Human Exposure to Environmental Pathogens

etiyoloji ve çevresel patojenlere karşı insan maruziyet etkileri dolayısıyla, pozlama ve enfeksiyonlar kullanarak maliyetli, yüksek hacimli yaklaşımları değerlendirmek yeteneği vazgeçilmez olacağını, dünya çapında önemli bir endişe ve. Bu yazıda, aynı anda birden fazla patojen insan tükürük antikorların varlığı ölçebilen bir tane bazlı çoklu immunoassay geliştirilmesi ve analizini açıklamaktadır. o, invaziv olmayan ucuz ve serum daha toplamak için kolaydır çünkü tükürük bu uygulamada özellikle çekici. Çevresel patojenlerinin antijenlerinin karboksillenmiş mikrosferler (taneleri) birleştirilmiş bir tane bazlı, solüsyon faz tahlili kullanılarak insan tükürük örnekleri çok küçük hacimlerde antikorları ölçmek için kullanılmıştır. Boncuk Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori, Toxoplasma gondii, Noroviruses (G I.1 ve G II.4) antijenleri ve hepatit A virüsü ile birleştirildi. antijenler yeterli birleştirildi sağlamakboncuklar, birleştirme biyotinlenmiş anti-tür ikincil bir saptama antikorları ve streptavidin-R-fikoeritrin muhabir (SAPE) ile kuluçkalandı ve ardından, türe-özgü, hayvansal kaynaklı primer yakalama antikorları kullanılarak teyit edildi. herhangi bir antijene bağlı değildi dışında spesifik olmayan ölçmek için bir kontrol olarak, bir boncuk grubu diğerlerine aynı işleme tabi tutuldu. antijen bağlı olan ve kontrol tanesi, daha sonra akış sitometrisi ilkelerine göre yüksek bir verim Analyzer üzerinde ölçülen, ileriye yönelik olarak toplanan, insan tükürük numuneleri ile inkübe edilmiştir, ve her bir antijene karşı antikorlar, ortalama florasan yoğunluğu birimleri (MFI) ölçüldü . Bu multipleks immunoassay daha az numune ile daha fazla veri içeren avantajlar, bir numarası vardır; azaltılmış maliyetler ve işçilik; ve yetenek ilgi birçok hedefleri tahlil özelleştirmek için. Sonuçlar tükrük çoklu bağışıklık especia olabilir, daha önceki maruz ve enfeksiyonları belirleme yeteneğine sahip olabileceğini göstermektedirBüyük insan topluluklarını kapsayan gözetim çalışmalarında Lly faydalıdır.

Bir benzersiz Boncuk değişkenlik örnek için spesifik olmayan bağlanma ölçmek ve kontrol numunesi olarak kullanılmıştır. Bu boncuklar da birleştirme aşamasında herhangi bir antijen ile inkübe değil haricinde antijene bağlanmış boncuklara benzer şekilde muamele edilmiştir. ayrıca serumdan şüpheli kirlenme nedeniyle analizleri ve kalan yanıtlar dağıtılan log edildi tüm tükürük örnekleri ile inkübe kontrol boncuk elde edilen MFI değerleri&gt; 500 çıkarıldı. dişeti toplama cihazına veya çalış...

Mevcut kıt kaynak ortamında, araştırmacıların çalışmaları daha ucuz, daha hızlı ve daha hassas bir şekilde yürütmelerine olanak tanıyan yeni teknolojiler ortaya çıkıyor. Burada, insanların aynı anda birden fazla çevresel patojene maruz kalmasını ölçmek için boncuk bazlı bir tükürük antikoru multipleks immünolojik testin geliştirilmesini açıklıyoruz.

Bir Tükürük Antikor Multiplex Immuoassay Gelişmekte Çevre Patojenler İnsan Pozlama&#39;yı Tedbir

The etiology and impacts of human exposure to environmental pathogens are of major concern worldwide and, thus, the ability to assess exposure and ...

Bu tükürük antikor bazlı boncuk tabanlı multiple immünanalizin genel amacı, birden fazla patojene karşı IgG antikor yanıtlarını eş zamanlı olarak ölçerek, çevreyle ilişkili semptomatik ve asemptomatik hastalıklardan sorumlu etiyolojik ajanları belirlemektir. Bu yöntem, maruziyet bilimi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Örneğin, belirli popülasyonlarda hastalıkların oluşmasından hangi patojenlerin sorumlu olduğu belirlenebilir.Bu tekniğin temel avantajı, çok küçük ve basit hacimler kullanarak aynı anda birden fazla analite karşı antikorların hızlı ve maliyet etkin bir şekilde ölçülmesine olanak tanımasıdır. Bu yöntem; gıda kaynaklı, su kaynaklı ve hava yoluyla bulaşan yollar da dahil olmak üzere etiyolojik ajanlar ve bunlara maruz kalma kaynakları hakkında bilgi sağlayabilir. Bu prosedürün resmi olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir çünkü kurulumu doğru şekilde yapılmadığında sonuçlar güvenilmez olabilir.Homojen boncuk süspansiyonları oluşturmak için, ilgili antijenlere bağlanan boncuk stok karışımlarını her seferinde 20 saniye boyunca vorteksleyerek ve sonikasyon uygulayarak işe başlayın. Ardından, bağlanan boncuk stoklarını, %1 BSA ile desteklenmiş PBS içinde, her bir benzersiz boncuk seti için mikrolitre başına 100 boncuk nihai konsantrasyona seyreltin. Sonrasında, üretici önerilerine uygun olarak, 96 kuyucuklu yuvarlak tabanlı bir plakada, PBS artı BSA içerisinde anti-tür IGG primer antikorunun en az yedi adet iki katlı seri seyreltmesini hazırlayın.Her bir antijen kenetlenme doğrulama testi için, 96 kuyucuklu filtre tabanlı plakanın ayrı bir sekizli 12 sütununu 100 µL yıkama tamponu ile önceden ıslatın ve süpernatantı vakumla uzaklaştırın. Ardından, önceden ıslatılmış kuyucuklara 50 µL antijen kenetlenmiş boncuk ekleyin; 96 kuyucuklu filtre plakanın bir ile yedi arasındaki satırlarına 50 µL seri dilüe edilmiş antikor ekleyin ve sekizinci satıra, dilüe edilmiş antikor arka plan kontrolü olarak 50 µL PBS artı BSA ekleyin. Her bir kuyucuğun içeriğini beş kez yukarı aşağı karıştırmak için çok kanallı bir pipet kullanın.Ardından plakayı kapatın ve antikorları, antijenle eşlenmiş boncuklarla birlikte oda sıcaklığında, karanlıkta, bir mikroplaka çalkalayıcıda 500 rpm hızında inkübe edin. Bir saat sonra süpernatantı aspire edin ve kuyucukları iki kez 100 µL yıkama tamponu ile yıkayın. İkinci yıkamadan sonra tamponu 50 µL BSA eklenmiş PBS ile değiştirin.Şimdi, biyotinli türe özgü anti-IGG sekonder tespit antikorunu PBS artı BSA içerisinde 16 µg/mL konsantrasyona seyreltin ve her sıraya 50 µL seyreltilmiş sekonder antikor ekleyin. Boncukları ve antikorları oda sıcaklığında, karanlıkta, bir plak çalkalayıcı üzerinde 30 dakika inkübe edin. İnkübasyon sonunda süpernatanı aspire edin ve boncukları iki adet 100 µL'lik yıkama tamponu alikotuyla yıkayın.İkinci yıkamanın ardından boncukları 50 µL BSA katkılı PBS içinde yeniden süspande edin ve streptavidin r-phycoerythrin raporlayıcıyı BSA katkılı PBS içinde 24 µg/mL konsantrasyona seyreltin. Her kuyucuğa 50 µL raporlayıcı ekleyin ve pipetleme yaparak karıştırın. Plakayı sallayıcı üzerinde, oda sıcaklığında ve karanlıkta 30 dakika inkübe edin, ardından gösterildiği gibi yıkama tamponu ile iki kez 100 µL durulama yapın.Ardından boncukları 100 µL PBS artı BSA içerisinde yeniden süspande edin ve antijenle bağlanan boncukları analizörde değerlendirin. Antijenle bağlanan boncuk stoklarını vorteksleyerek ve 20 saniye boyunca sonikasyona tabi tutarak yeniden süspande ettikten sonra, bağlanan boncuk stoklarını PBS artı BSA içerisinde, her bir benzersiz boncuk seti için mikrolitre başına 100 boncuk nihai konsantrasyonuna seyreltin. Daha sonra, 96 kuyucuklu derin kuyucuk plakasında, oda sıcaklığındaki tükürüğü PBS artı BSA ile bir ila dört oranında seyrelterek hazırlayın.Bir filtre plakayı 100 µL yıkama tamponu ile önceden ıslatın ve süpernatantı aspire edin. Ardından, bir ila sekiz nihai dilüsyon için 96 kuyucuklu filtre plakanın 95 kuyucuğuna 50 µL antijen kuplenmiş boncuk ve eşit hacimde dilüe edilmiş tükürük ekleyin. Aynı zamanda, kontrol kuyucuğuna 50 µL antijen kuplenmiş boncuk ile birlikte tek başına 50 µL PBS artı BSA ekleyin.Boncukları oda sıcaklığında, karanlıkta, mikroplaka çalkalayıcıda 500 rpm hızında bir saat boyunca inkübe edin. Ardından süpernatantı aspire edin ve kuyucukları 100 microliters yıkama tamponu ile iki kez yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, boncukları 50 microliters PBS artı BSA içerisinde yeniden süspande edin.Sekonder antikoru seyreltin ve her bir kuyucuğa 50 µL ekleyin. Kuyucuk içeriklerini çok kanallı bir pipetle karıştırdıktan sonra, plakayı çalkalayıcı üzerinde, karanlıkta, oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin; ardından kuyucukları 100 µL yıkama tamponu ile iki kez yıkayın ve boncukları 50 µL taze PBS artı BSA içinde yeniden süspande edin. Şimdi reporter'ı seyreltin ve her bir kuyucuğa 50 µL ekleyin.Çok kanallı bir pipetle iyice karıştırın. Karanlıkta, çalkalayıcı üzerinde oda sıcaklığında 30 dakika beklettikten sonra, kuyucukları gösterildiği gibi iki kez yıkayın, ardından boncukları 100 µL BSA eklenmiş PBS içinde yeniden süspanse edin ve örnekleri analizörde değerlendirin. Antijenle eşleşmiş boncukların analizle ilgili dinamik aralığa yaklaşabildiğinden emin olmak için, uygun eşleşme 18.000'e eşit veya daha büyük bir ortalama floresan yoğunluğu olarak tanımlanır.C.jejuni ve T.gondii için kullanılan analizdeki antijenlerin bu temsilci eşleşme doğrulamalarında gösterildiği gibidir. Belirlenen eşik değerine dayanarak, örneklerin immünoprevalans oranları T.gondii için yaklaşık %2'den Norovirüs geno grup 1.1 için yaklaşık %50'ye kadar değişmiş olup; bu durum immünoprevalans oranının Norovirüslerde en yüksek olduğunu, bunu Hepatit A ve H.Pylori'nin izlediğini göstermektedir. Örneklerin %32'si analizdeki tüm patojenler için immün-negatif çıkarken, %68'i bir veya daha fazla patojen için immün-pozitiftir.Bu prosedürde uzmanlaşıldığında, doğru şekilde uygulandığı takdirde yaklaşık dört saatte tamamlanabilir. Prosedürü uygularken, fotobleaching'i (foto-ağarmayı) önlemek için boncukların karanlıkta tutulması önemlidir. Bu prosedürün ardından; duyarlılık ve özgüllük hakkındaki ek soruları yanıtlamak için ELISA ve Western Blotting gibi diğer yöntemler kullanılabilir.Antikorların çapraz reaktivitesinin yanı sıra; geliştirilmesinin ardından bu teknik, epidemiyoloji, maruziyet bilimi ve klinik mikrobiyoloji alanlarındaki araştırmacıların çevresel maruziyetlerden kaynaklanan insan risklerini keşfetmelerinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, birden fazla patojene karşı antikorları eş zamanlı olarak ölçen bir multipleks immünolojik analizinin nasıl geliştirileceği, analiz edileceği ve sonuçlarının nasıl yorumlanacağı konusunda çok iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Vücut sıvıları ve sodyum azid ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini; bu prosedürü gerçekleştirirken uygun kişisel koruyucu donanım kullanmak ve reaktiflerin doğru şekilde bertaraf edilmesi gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

developing-salivary-antibody-multiplex-immunoassay-to-measure-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Luminex Corporation Xmap mikroküre teknolojisini kullanarak, çeşitli laboratuvar hayvanı türlerinin serosurveillance için Multiplexed Florometrik immunoassay (MFIA) geliştirdik. MFIA antijeni, doku kontrolü veya immünglobulin kovalent renk kodlu polistiren mikroküreler bağlantılı bir süspansiyon mikroarray olduğunu. MFIA test yöntemi hem de çeşitli giderme konularını ele almaktadır.

Multiplexed Florometrik immunoassay Test Metodolojisi ve Sorun Giderme

Bu video, insan tükürüğündeki birden fazla çevresel patojen için antikorları aynı anda tespit etmek için boncuk tabanlı bir multipleks immünoassay tekniğini göstermektedir. Floresan boncuklar, insan tükürük örneğindeki antikorlar kullanılarak yakalanan farklı patojenlerden gelen antijenlere bağlandı. Antikorlar bir floresan raportör kullanılarak etiketlendikten sonra, boncuklar tükürükte farklı patojene özgü antikorların varlığını değerlendirmek için akış sitometrisi kullanılarak analiz edildi.

Tükürükteki patojene özgü antikorları tanımlamak için boncuk bazlı bir multipleks immünolojik test

Bu multiplekslenmiş mikroküre bazlı antikor dizileri kullanılarak, tükürük proteinlerini profil için bir prosedür tarif eder. Monoklonal antikorlar, kovalent karbodiimid kimyası kullanılarak floresan boya ile kodlanmış 4,5 um polimer mikro bağlanmıştı. Modifiye mikroküreler floresan sandviç immunoassay'ler kullanılarak tükürük protein seviyelerini ölçmek için fiber-optik mikro oyuk birikmiştir.

Polimer Microspheres ve Fiber-optik Paketler kullanma İnsan Tükürük Protein Analiz için çoklu Floresan Microarray

Bu iletişim kuralı için üst solunum yolları rahatsız edilmeden Mukozal astar sıvı örnekleme invaziv olmayan bir teknik anlatılmaktadır. Vivo düzeyleri sitokinler ve kemokinler, gibi protein arabulucu miktar her yaştan bireylerde gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Mukozal astar sıvı noninvaziv örnekleme için In Vivo üst solunum yolu bağışıklık arabulucu düzeyleri miktar

Burada açıklamak için geliştirme ve insan örneklerinde tüm IFN-α türlerinden Ultra-duyarlı algılama sağlayan bir tek molekül dizi dijital ELISA yöntemi, doğrulama iletişim kuralı mevcut.

Geliştirme ve doğrulama vericiyi bir tek molekül dijital enzim bağlı Immunosorbent Assay insan Interferon-α için dizi

Bu kağıt bir mikrosıvısal kartuş tabanlı Kemiluminesan sistemi ve kullanışlılığı değerlendirilmesi ile serum özel immünglobulin E Anti tanılar algılamak için bir protokol sunar.

Biochip mikrosıvısal teknolojisi uygulama algılamak Serum alerjen özgü immünglobulin e (sIgE)

Biz farklı virüs suşları 250 üzerinde antijenler karşı birden fazla antikor izotürler için aynı anda prob serum nitroselüloz kaplı slaytlar üzerine baskı grip antijenleri tarafından inşa edilen bir protein mikroarray kullanmak için bir protokol sunuyoruz, böylece virüs alt türleri arasında serum antikorları genişliği ölçümü izin.

Virüs subtypes arasında serum antikorların genişliğini ölçmek için bir Influenza antijen microarray kullanımı

SARS-CoV-2 için nötralize IgG ve IgM antikorlarını aynı anda ölçebilen multipleks serolojik ve antikor nötralizasyon tahlillerinin geliştirilmesi için iki muhabirli okuma sağlayan boncuk bazlı çok katlı tahliller için bir akış analiz sistemi kullanılmıştır.

Çok Katlı Boncuk Tabanlı Akış Analiz Sistemi için Hızlı, Çok Katlı Çift Muhabir IgG ve IgM SARS-CoV-2 Nötralizasyon Tahlil

Bu makalede, SARS-CoV-2 enfeksiyonuna veya aşılamasına karşı immün yanıttan kaynaklanan iki immünoglobulin izotipi (IgA, IgM veya IgG) için antikor titrelerindeki dinamik değişiklikleri izlemek için uygun bir yöntem açıklanmaktadır. Bu 'Multianalit Covid-19 İmmün Yanıt Paneli', 'çift kanallı' özelliğe sahip akış tabanlı bir multipleks okuyucu kullanılarak okunan kodlanmış mikrosferler üzerine inşa edilmiş üç dolaylı immünotahlil kullanır.

Covid-19 için Multianalit İmmünoboncuk Testi Kullanılarak Serokonversiyonun Dinamik İzlenmesi

Avrupa ve Kuzey Amerika'da Lyme borreliosis'e neden olan farklı Borrelia türlerinin çoklu antijenlerine karşı ortaya çıkan IgG ve IgM için serum örneklerini aynı anda değerlendiren boncuk bazlı bir multipleks immünolojik test geliştirmek için üç kanallı bir çift raportör floresan akış analiz sistemi kullanıldı.

Çoğullanmış Serolojik Testte Farklı Antikor Sınıflarının Eş Zamanlı Tespiti

Multipleks floresan immünolojik testler, seroloji testleri için bir referans haline geliyor. Ancak bunların uygulamaları, karmaşıklık ve zaman alıcı boncuk-analit birleştirme işlemleri nedeniyle sınırlıdır. Bu rapor, standart yöntemle karşılaştırılabilir ve sonuç alma süresini önemli ölçüde azaltan yarı otomatik, tekrarlanabilir bir multipleks mikroküre boncuk birleştirme protokolü sunar.

Arbovirüslere Karşı Antikor Yanıtlarının Tespiti için Multipleks Serolojik Test

Öğrenin, tükürük antikor çoklu immunoassay yöntemiyle çevresel patojenlere maruziyeti aynı anda ölçme tekniğini. Bu hızlı ve uygun maliyetli analiz, halk sağlığı stratejilerini geliştirmeye yardımcı olur.

Bir Tükürük Antikor Multiplex Immuoassay Gelişmekte Çevre Patojenler İnsan Pozlama'yı Tedbir

Daha fazla video keşfet