Name: Bir Antijen odaklı Kolit Modelinin Geliştirilmesi Antijen T hücreleri için Hücreler sunulması ile Antijen Sunumu Eğitim için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Öğrenin, antijen odaklı kolit modeli ile CX3CR1 pozitif mononükleer fagositlerin CD4 pozitif T hücreleriyle bağırsak lamina propriasında nasıl etkileşime girdiğini. Bu yöntem, inflamatuar bağırsak hastalığı mekanizmalarını anlamak için kritik bağışıklık hücresi etkileşimlerini izlemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

JHN, İsviçre Ulusal Vakfı (SNSF 310030_146290) tarafından desteklenmektedir.

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

her modelde olduğu gibi, yukarıda tarif edilen antijen odaklı kolit modeli tekniği gerçekleştiren araştırmacı farkında olmalıdır birkaç sorunları ortaya çıkabilir. OT-II hosts / Kırmızı +, CD4 + T CD62L + hücreleri enjekte zaman araştırmacı periton boşluğuna iğneyi çok nazik ve dikkatli olmak gerekir. Aksi takdirde, ölüme yol açabilecek bir fare ya da bir hastalık oluşturmak olmaz hücre deri altına bağırsak yırtılabilir. Tipik olarak, fareler, hücr...

bağırsak dış ortama maruz vücudun büyük bir yüzeydir. yerleşik mikropların geniş diziler bağırsak Mikrobiyota (veya mikroflora) oluşturmak için insan bağırsağa kolonize. Bu kadar 100 trilyon mikrobiyal hücrelerin oluştuğu tahmin ve biyoloji 1-3 bilinen en yoğun nüfuslu bakteriyel habitatların biri oluşturmaktadır. GIT bakteriler hayatta ve 4 çarpın bir bağırsak niş kolonize. Buna karşılık, Mikrobiyota genomu 1 kodlanmış almayan ek fonksiyonel özellikleri ile ev sahibi endows. Örneğin Mikrobiyota, epitel hücrelerinin çoğalmasını uyarır kendileri tarafından ev sahipliği üretemez vitamin üretir, metabolizmasını düzenler ve patojenlere 4-6 karşı korur. Bu yarar ilişkisi göz önüne alındığında, bazı yazarlar insanların bakteriyel ve insan genlerinin 7,8 bir karışımı olan &quot;süper organizmalar&quot; veya &quot;holobionts&quot; olduğunu ileri sürmüşlerdir. (Insan) ana bilgisayarda Mikrobiyota yararlı etkileri göz önüne alındığında, intestinal bağışıklık sistemi lümen varlıklarını etkinleştirmek değil, aynı zamanda luminal kenarında 9-11 istila patojenleri öldürmek için ortakçı mikropların tahammül gerekiyor. Bağırsak bağışıklık sistemi zararsız ve potansiyel olarak zararlı lümen mikroplar ayırt etmek mekanizmalar geliştirmiştir; Ancak bu mekanizmalar henüz tam olarak 12 anlaşılamamıştır. Bağırsak bütünlüğünü korumak tolerans ve bağışıklık 13 arasındaki dengeyi korumak için sıkı regüle bağışıklık homeostazı gerektirir. Immün homeostasisin bir dengesizlik enflamatuar bağırsak hastalığı (IBD), 3,14 gibi bağırsak hastalıklarının indüksiyonu katkıda bulunur. Crohn hastalığı (CD) ve ülseratif kolit (UC), iki büyük IBD tipi vardır. Bu hastalıkları olan hastalar genellikle rektal kanama, şiddetli ishal ve karın ağrısı 15,16 muzdarip. IBD tek sebebi halagenetik faktörler, çevresel etkilere ve düzensiz immün yanıtın bilinmeyen, ama bir arada hastalık gelişimi 15 anahtar olay olabilir. IBD için hayvan modelleri 50 yılı aşkın bir süredir kullanılmaktadır. Son birkaç yıl içinde yeni IBD model sistemler IBD 17,18 patogenezinde ilişkin çeşitli hipotezleri test etmek için geliştirilmiştir. Kronik kolit en iyi karakterize edilmiş bir model T-hücresi homeostazında 19,20 bozulmasını mukozada T-hücre transferi modelidir. 16,21 Bu model T ve (- / - ve SCID farelerde bu RAG gibi) B hücreleri eksikliği konaklara bağışıklığı yeterli fareden naif T hücreleri aktarımı kapsamaktadır. Bu modelde hastalığın gelişimi vücut ağırlığı ishal varlığı, düşük fiziksel aktivite ve zarar değerlendirerek 3-10 hafta boyunca izlenir. Bu yüzden israf sendromu 16 olarak adlandırılır. Sağlıklı farelere kıyasla nakledilen konak kolon doku thicke olduğunur, daha kısa ve 16 ağır. T hücre transferi modelini kullanarak, T hücre popülasyonları IBD 22 patogenezinde nasıl katkıda bulunabileceğini farklı anlamak mümkündür. T hücre transferi modeli antijene özgü bir şekilde hastalık sürecinde APC ve T hücreleri arasındaki etkileşim analiz etmez. Miyeloid hücreler ve lenfoid hücreler arasında bir etkileşim bağırsak iltihabı 23 gelişiminden sorumlu olabileceği gösterilmiştir. IBD pek çok açıdan açıklık olmasına rağmen, hastalık gelişmesine neden ilk olaylar hala net bir şekilde anlaşılması gerekir. Bu Mikrobiyota transfer kolit yokluğunda gösterilmiştir 24 tespit edilemez. Son zamanlarda, çeşitli teoriler İBH bakterilere 25 karşı bir bağışıklık tepkisinin bir sonucu olabileceğini düşündürmektedir. Yazarlar ayrıca ortakçı bakteri uzak bağırsakta inflamasyon uyarmak için gerekli olduğunu önerdi26. Germ bilgilerini (GF) hayvanlar intestinal immün sistemi genellikle 27,28 bozulmuş, fakat tam yetkin bağırsak bağışıklık sisteminin 29 geliştirilmesine özel patojen içermeyen bakteriler sonuç karışımı ile, bu farelerde bir kolonizasyon. Bu nedenle, Mikrobiyota yatkınlık veya bağırsak iltihabı 30,31 gelişmesine karşı koruyan bir mekanizma olarak ya patogenezde önemli bir unsur olarak gözükmektedir. Güncel teoriler İBH genetik olarak yatkın hastalarda 32, dysbiosis denilen mikrobiyal dengesizlik, bir sonucu olduğunu düşündürmektedir, ancak henüz belli değil dysbiosis neden veya hastalık 12 sonucu ise. IBD gelişiminde mikroorganizmaların rolü dikkate alındığında, in vitro deneyler, CD4 + T hücreleri, bağırsak bakterileri 33,34 ile doldurulan APC &#39;ler ile aktive edilebilir olduğunu göstermiştir. Ayrıca, antijenlerin gösterilmiştirBöyle E. gibi farklı kommensal bakteri türleri, E. coli, Bacteroides, Eubacterium ve Proteus, CD4 + T hücrelerini aktive 35 edebiliyoruz. Bu T hücrelerine bakteriyel antijenlerin sunumu IBD gelişimi için önemli olduğunu gösterir. Hastalık sürecinde mikroflorasının türetilen birden fazla antijene karmaşıklığını azaltmak için, bir E. coli suşu OVA antijen üreten oluşturuldu. - / - Transfer kolit RAG olarak OVA spesifik T hücreleri enjekte edilerek indüklendi hayvanların OVA eksprese eden E. ile kolonize E. coli. Bu model CX 3 CR1 + milletvekilleri, kolon lamina propria (CLP) 36 büyük bir hücre alt kümesi, aktarım sırasında CD4 + T hücreleri ile etkileşim olduğunu düşündüren son kanıtlara dayanmaktadır 37 kolit. Milletvekilleri kendi dendrit 36, 38,39 kullanılarak, bakteri gibi partikül antijeni için bağırsak lümen, örnek. Önceki çalışmalarMilletvekilleri ayrıca 40,41 lümen intestinal sokulan gibi OVA olarak çözünür antijenler, sürebilir gösterdi. CLP CX 3 CR1 + milletvekilleri bolluğu göz önüne alındığında, bu hücrelerin lümen bakterileri örnek ve CD4 T hücreleri ile etkileşim olması mümkündür. E. ile kolonize OVA&#39;ya özel CD4 + T hücreleri ile transplante farelerin Konfokal görüntüleme E. coli CFP OVA CX 3 CR1 + MP&#39;ler antijen tahrik kolit gelişimi sırasında OT-II, CD4 + T hücresi ile temas içinde olduğunu göstermektedir. Bu model, bağırsak APC &#39;sadece bağırsak lümeninde özel bir antijen-ifade eden bakteriler için spesifik T hücreleri arasındaki antijen sunumu işlemi etüdüne olanak sağlamıştır.

<table><tbody><tr><td>LB Et Suyu, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>Döner Sallama</td><td>Reiss Laborbedarf e. K.</td><td>Model 3020 GFL</td><td></td></tr><tr><td>2 mm boşluklu couvette&nbsp;</td><td>Peqlab Biotechnologie GmbH</td><td>71-2020</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gen Pulser Xcell sistemi&nbsp;</td><td>BioRad Laboratories GmbH</td><td>1652660</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244510</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393-5G</td><td></td></tr><tr><td>SOC Orta</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1797-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Saf Plazmid İzolasyon Kiti</td><td>Roche</td><td>11754777001</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Carl Roth GmbH & Co</td><td>3810.1</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5941</td><td></td></tr><tr><td>Buzlu asetik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Jel odası&nbsp;</td><td>PEQLAB Biotechnology GmbH</td><td>40-0708</td><td></td></tr><tr><td>Yükleme Boyası</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0611</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 1 kb DNA Merdiveni&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>SM0312</td><td></td></tr><tr><td>Etidyum bromür çözeltisi</td><td>Carl Roth GmbH & Co. KG</td><td>2218.3</td><td></td></tr><tr><td>Fotoğraf dokümantasyon sistemi&nbsp;</td><td>Decon Science Tech GmbH</td><td>DeVision G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNA dizilimi&nbsp;</td><td>MWG-Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td> <td>Biochrom</td><td>L182-50</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>HBO 100</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra System</td><td>Bio-Rad Laboratories GmbH</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Boyalı Protein Merdiveni&nbsp;</td><td>Fermentas, St. Leon-Rot, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IstanBlue Solution</td><td>Expedeon, Cambridgeshire, Birleşik Krallık</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nitroselüloz membran&nbsp;</td><td>Macherey-Nagel GmbH & Co. KG</td><td>741280</td><td></td></tr><tr><td>Elektro kurutma kağıdı& nbsp;</td><td>Biometra GmbH</td><td>846-015-600</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serum Albüminleri (BSA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003-25G</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ovalbumin antikoru&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab181688</td><td></td></tr><tr><td>Anti-tavşan IgG&nbsp; HRP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0545&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pierce ECL Plus Western Blotting Substrate</td><td>Pierce Biotechnology, Thermo Fischer Scientific Inc</td><td>32132</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td>2594.00.00</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Hücre Süzgeçleri</td><td>Fischer Scientific&nbsp;</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>254134-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tris Baz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>CD4+ CD62 L + T izolasyon kiti ve nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MACS LS Sütunları&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MS Sütunları&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>MidiMACS Ayırıcı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS Ayırıcı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Besleme İğnesi 20G</td><td>SouthPointe Surgical Supply, Inc</td><td>FN-7903</td><td></td></tr><tr><td>Formalin çözeltisi, nötr tamponlu, %10</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Parafin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1496904</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>Eozin Y</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230251&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz tip VIII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-2139</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) ortamı</td><td>AppliChem</td><td>A2044, 9050</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum azid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>438456</td><td></td></tr><tr><td>Fare BD Fc Blok</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>FITC konjuge mAb bağlayıcı V & szlig; 5.1, 5.2 & nbsp;</td><td>BD Pharmingen</td><td>553189</td><td></td></tr><tr><td>APC konjuge mAb bağlayıcı CD4 GK1.5&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>17-0041-83</td><td></td></tr><tr><td>FACS Calibur&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS Express V3 yazılımı</td><td>DeNovo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meta taramalı konfokal mikroskop&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>LSM 710&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss İş İstasyonu</td><td>Zeiss</td><td>LSM 7</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss ZEM yazılımı&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>v4.2.0.121</td><td></td></tr><tr><td>Maxisorp immün plakalar&nbsp;</td><td>NUNC, Roskilde</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin konjuge alkalin fosfataz</td><td>Jackson İmmüno Araştırmaları</td><td>016-050-084</td><td></td></tr><tr><td>Alkalin fosfataz substratı 4-Nitrofenil fosfat disodyum tuzu hekzahidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71768-5G</td><td></td></tr><tr><td>mAb R4-6A2</td><td>BD Biosciences</td><td>551216</td><td></td></tr><tr><td>mAb XMG1.2&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>554410</td><td></td></tr><tr><td>TECAN mikroplaka-ELISA okuyucu</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasyWin yazılımı</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNase I rekombinant</td><td></td><td>4536282001</td><td></td></tr></tbody></table>

bir antijen odaklı kolit modelinin geliştirilmesi antijen t hücreleri için hücreler sunulması ile antijen sunumu eğitim için

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

İnflamatuar bağırsak hastalığı (IBD), gastrointestinal sistemi (GIT) etkileyen kronik bir inflamasyondur. Hastalık sırasında yer alan immünolojik mekanizmaları incelemenin en iyi yollarından biri, kolitin T hücresi transfer modelidir. Bu modelde, immün yetmezliği olan fareler (RAG-/- alıcıları), sağlıklı vahşi tip konakçılardan alınan naif CD4 + T hücreleri ile yeniden oluşturulur.
Bu model, bağırsak iltihabının devam ettiği ancak tanımlanmış bir antijene bağlı olmadığı durumlarda, hastalığa ve kronik inflamasyona yol açan en erken immünolojik olayların incelenmesine izin verir. Antijen sunan hücrelerin (APC'ler) hastalık sürecindeki potansiyel rolünü incelemek için, tanımlanmış bir kommensal kaynaklı antijenin kolite yol açtığı antijen güdümlü bir hastalık modeline sahip olmak yararlıdır. Bu nedenle bir antijen güdümlü kolit modeli geliştirilmiştir. Bu modelde, OVA proteinindeki sadece spesifik epitopları tanıyabilen OT-II CD4 + T hücreleri, CFP-OVA eksprese eden E. coli ile mücadele edilen RAG-/- konakçılara aktarılır. Bu model, lamina propriadaki APC'ler ve T hücreleri arasındaki etkileşimlerin incelenmesine izin verir.

Antijen tahrik kolit modeli, bir E. kurmak coli suşu güçlü yapısal promotör P hiper (Şekil 1A) kontrolü altında ifade edilir CFP gen tavuk ovalbümin proteininin füzyon yapısı için kodlama dizisine kaynaşmış olduğu bir plazmidi içeren inşa edilmiştir. Floresan mikroskopi gösterir Rekombinant E. E. coli pCFP OVA, fakat ana E. E. coli DH10B, CFP (Şekil 1B) ifade eder. E. ür...

Bu antijen güdümlü kolit modelinde, kırmızı bir floresan proteini eksprese eden OT-II CD4+ T hücreleri, mononükleer fagositlerde (MP'ler) yeşil bir floresan proteini eksprese eden RAG-/- farelere evlat edinilmiş olarak aktarıldı. Ev sahipleri, bir camgöbeği floresan proteinine (CFP) kaynaşmış ovalbümin proteinini (OVA) eksprese eden Escherichia coli (E.coli) ile sorgulandı.

Bir Antijen odaklı Kolit Modelinin Geliştirilmesi Antijen T hücreleri için Hücreler sunulması ile Antijen Sunumu Eğitim için

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

Bu antijen kaynaklı kolit modelinin genel amacı, antijenle spesifik kolit sırasında CX3, CR1 pozitif mononükleer fagositlerin CD4 pozitif T hücreleri ile etkileşime girip girmediğini ve onları aktive edip etmediğini ve bu mononükleer fagosit bağımlı efektör T hücresi ekspansiyonunun intestinal lamina propria içinde gerçekleşip gerçekleşmediğini belirlemektir. Bu yöntem, kolonik lamina propriadaki antijen sunan hücreler ile efektör T hücreleri arasında ne tür etkileşimlerin meydana geldiği gibi, inflamatuar bağırsak hastalığı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, immün hücrelerin etkileşiminin ve inflamatuar bağırsak hastalığının patojenitesine yol açan unsurların incelenmesine olanak tanımasıdır.Bu yöntem, kırmızı floresan antijen spesifik naive CD4 T hücrelerinin, mononükleer hücrelerde yeşil floresan protein eksprese eden immünodefisyent konakçıya aktarıldığı T hücresi transfer kolit modelini kullanmaktadır. Hücre transferini, mavi floresan antijen eksprese eden bakterilerin oral gavage yoluyla verilmesi takip eder. Konakçıların intestinal lamina propriasında meydana gelen immün olaylar, hastalık gelişiminin çeşitli aşamalarında izlenebilir.Kolonu boylamasına açmak için diseksiyon makası kullanın ve kalıntı ile mukusu temizlemek için dokuyu 25 mililitre PBS içeren bir petri kabında yıkayın. Kolonu beş ila sekiz milimetrelik parçalara bölün ve elde edilen fragmanları, on milimolar HEPES ve beş milimolar EDTA ile desteklenmiş, kalsiyum ve magnezyum içermeyen 20 mililitre taze DPBS içine yerleştirin. Numunenin bulunduğu tüpü maksimum hızda 30 saniye boyunca vorteksleyin.Ardından, epitelyumu uzaklaştırmak için 37 °C'de on dakika boyunca hafifçe çalkalayarak inkübe edin. İnkübasyon sonunda, tekrar 30 saniye boyunca Vortex ile karıştırın. Sonrasında, epitelyal hücreleri içeren süpernatanı uzaklaştırın.Doku parçalarını 20 milliliters taze PBS, HEPES ve EDTA tamponu içeren yeni bir tüpe aktarın ve öncesinde ve sonrasında vorteksleme adımlarını uygulayarak inkübasyonu tekrarlayın. Üçüncü tekrardan sonra, tüm epitel hücreleri uzaklaştırılmış olur ve süpernatan berraklaşır. Kalan epitel hücrelerini temizlemek için doku fragmanlarını PBS ile nazikçe yıkayın.Doku fragmanlarını ikiye iki milimetrelik parçalara ayırın ve sindirim için 0,5 mg/mL kollajenaz tip sekiz ve 10 U/mL DNAz bir ile desteklenmiş 10 mL RPI ortamına aktarın. Örnekleri 30 saniye boyunca vorteksleyin. Ardından, doku parçalarını 37 °C'de çalkalamalı olarak 30 ila 35 dakika inkübe edin ve inkübasyon sırasında tüpü her beş dakikada bir vorteksleyin.Doku sindirildiğinde, elde edilen bulamacı 70 mikronluk bir hücre süzgecinden geçirerek 50 mililitrelik konik bir tüpe süzün. Hücre süzgecini bir kez yıkayın ve tek hücre süspansiyonunu santrifüjle çöktürün. Son olarak, hücreleri PBS ile bir kez yıkayın ve santrifüjleyin.Ardından, trypan blue dışlama yöntemiyle canlı hücre sayısı belirlenir. Siyan floresan protein ovalbümin proteini üreten e. coli, e. coli'nin aksine, in vitro ortamda OT-II hücrelerinde interferon gama üretimini aktive eder.Sadece CFP eksprese eden coli. E. coli PCFP ova ile beslenen, transgenik yeşil floresan protein eksprese eden farelerin kolon dokusunun ex vivo 3D konfokal görüntülemesi, floresan protein eksprese eden bakterilerin, bağırsak epitel hücrelerinin yakınındaki kolon kriptlerinde bulunduğunu ve konak bağırsak fagositleri ile ko-lokalize olduğunu göstermektedir.OT-II kırmızı hayvanlarda, CD4 pozitif T hücreleri, kırmızı floresan protein ve V beta 5.1'i birlikte eksprese etmeleriyle karakterize edilir. E. coli PCFP ova ile karşı karşıya kaldıklarında, OT-II kırmızı CD4 pozitif CD62 ligand pozitif T hücreleri ile adoptif olarak transplantasyon yapılmış, BNT lenfosit eksikliği olan ve yeşil floresan protein eksprese eden transgenik fareler hızla vücut ağırlığı kaybeder ve kolit klinik belirtileri geliştirir.Hücre transferinden yedi gün sonra, yalnızca birkaç konak fagositi e. coli PCFP ovumlarını örneklemiştir ve OT-II kırmızı pozitif hücreler saptanmamıştır. Hücre transferinden 14 gün sonra, e. coli örnekleyen konak fagositlericoli PCFP ova, adaptif olarak transfer edilen OT-II red pozitif hücrelerin yakınında yer almaktadır. Hücre transferinden 21 gün sonra, çok sayıda konak hücresi e. coli PCFP ova ile etkileşime girmiş olup, kolon lamina propria boyunca dağılmış halde bulunan donör OT-II red pozitif hücreler, konak intestinal fagositleri ile yakın temas halindedir.Bu teknik uzmanlaşıldığında, uygun şekilde uygulandığı takdirde dört saat içinde tamamlanabilir. Bu prosedürün ardından, CD4 T hücrelerinin aktivasyon durumu hakkında ek soruları yanıtlamak ve kolitin şiddetini doğrulamak için intestinal lenfositlerin boyanması ve serum sitokin analizi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Her gelişimle birlikte bu teknik, fare modelinde inflamatuar bağırsak hastalığına yol açan küçük olayları araştırmak için immünoloji alanındaki çalışmalara zemin hazırlar.Bu videoyu izledikten sonra, sonraki ex vivo analizler için kolon lamina propria immün hücrelerinin nasıl izole edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

development-an-antigen-driven-colitis-model-to-study-presentation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada, fare intestinal dendritik hücrelerinin (DC'ler) ve makrofajların hızlı izolasyonu için bir metodolojiyi detaylandırıyoruz. İntestinal DC'lerin ve makrofajların fenotipik karakterizasyonu çok renkli akış sitometrik analiz kullanılarak gerçekleştirilirken, fonksiyonel çalışmalar için yüksek saflıkta popülasyonlar elde etmek amacıyla manyetik boncuk zenginleştirmesi ve ardından hücre ayıklama yöntemi kullanılır.

Fare Barsak ayrı dendritik hücreler ve makrofajlar İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Bu video, inflamatuar bir bağırsak hastalığı olan kimyasal kaynaklı bir kolit murin modeli oluşturmak için bir teknik göstermektedir. Farenin yeterli bir süre boyunca bir dekstran sodyum sülfat (DSS) çözeltisi tüketmesine izin verilir. Tüketildikten sonra, DSS kolondaki mukus ve epitel tabakası bariyerine zarar vererek, bağırsak mikroplarının alttaki dokuya girmesine izin verir - burada yerleşik bağışıklık hücreleri tarafından abartılı bir bağışıklık tepkisine aracılık etmek için algılanırlar...

Dekstran Sülfat Sodyum Kaynaklı Kolitin Murin Modelini Oluşturmak İçin Bir Teknik

DNBS / TNBS indüksiyonlu kolit bir alternatif ve iltihabik barsak hastalığı patobiyolojisini incelemek için pahalı olmayan yöntemi sunmaktadır. Bu yazıda tartışılan protokolü farelerde ve sıçanlarda kolit başlatmak için DNBS başarılı uygulama özetliyor ve bir iyice konak-aracılı bağırsak yanıtları çalışma sağlar.

DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması

Burada, sinjeneik CD4 + CD45RByüksek T hücrelerinin T ve B hücresi eksikliği olan alıcılara evlat edinici transferi yoluyla farelerde kolon iltihabını indüklemek için bir protokol sunuyoruz. Klinik ve histopatolojik özellikleri insan inflamatuar barsak hastalıklarını taklit eder. Bu yöntem, kolon iltihabının başlaması ve hastalığın ilerlemesinin incelenmesine izin verir.

Efektör CD4 Evlatlık transferi ile Kemirgen Bağırsak Enflamasyon indüksiyonu<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Yüksek</sup&gt; Bağışık yetmezliği olan farelere içine T Hücreleri

Farklı dendritik hücre alt kümeleri, lenfoid organlarda nadir popülasyonlar olarak bulunur ve bu nedenle immünolojik deneyler için yeterli sayıda ve saflıkta izole edilmesi zordur. Burada, fare splenik dendritik hücrelerinin şu anda bilinen tüm ana alt kümelerinin izolasyonu için yüksek verimli, yüksek verimli bir yöntem açıklıyoruz.

Fare Dendritik Hücre Alt Grupları İzolasyonunda bir Verimli ve Yüksek Verim Yöntem

Burada, farklı fare dokuları içindeki IL-22 üreten hücreleri görselleştirmek için bir transgenik raportör fare modelini açıklıyoruz. Bu yöntem, faredeki diğer sitokinlerin veya salgı proteinlerinin yerini izlemek için kullanılabilir.

Raportör fareler kullanılarak IL-22 eksprese eden lenfositlerin Görselleştirme

Fare distal kolostomi insan saptırma kolit, ağırlıklı olarak Lenfositik kolit dışkı akışından hariç iki nokta üst üste segmentinde için bir fare modeli sağlar.

Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Protokol, Crohn hastalığının tam doğrulanmış TNBS kaynaklı murine modelini ve parafine gömülü formalin-sabit kolon bölümlerinin immünororesansını kullanarak immünohistokimya ile östrojen reseptörlerinin görüntülenmesi için kullanılan yöntemleri sunar.

İmmünofluoresans kullanarak TNBS'ye Bağlı Crohn Hastalığı olan Farelerin Kolonlarında Östrojen Reseptörlerinin Görüntülenmesi

Bu protokolde bağırsak mikrobiyota antijenine özgü T hücreli benimseyen transfer kolit modeli tanımlanmıştır. CD4+ T hücreleri CBir1 TCR transgenik farelerden izole edilmiştir. Bunlar, alıcı Rag1/- farelere aktarılan ve bağırsak iltihabına yol açan immünodominant bağırsak mikrobiyota antijeni CBir1 flagellin için özeldir.

CBir1 TCR Transgenik CD4+ T Hücrelerinin İmmün Yetmezlikçi Farelere Benimsenen Transferi ile Bağırsak İltihabının İndüksiyonu

Antijen-spesifik T hücrelerinin indüksiyon ve genişleme için yeni bir DC bağımsız bir yöntem açıklanmıştır. HLA-A2-Ig tabanlı yapay Antijen sunan hücreler (aAPC), HLA-A2 verimli farklı antijen özgüllüğü CTL genişletmek için kısıtlı peptitler ile yüklenir. Bu teknoloji tabanlı CTL evlatlık immünoterapi için büyük bir potansiyele sahiptir.

Verimli HLA-Ig Tabanlı Yapay antijen sunan hücrelerin Ex vivo</emİnsan CTL> Genleşme

Öğrenin, antijen odaklı kolit modeli ile CX3CR1 pozitif mononükleer fagositlerin CD4 pozitif T hücreleriyle bağırsak lamina propriasında nasıl etkileşime girdiğini. Bu yöntem, inflamatuar bağırsak hastalığı mekanizmalarını anlamak için kritik bağışıklık hücresi etkileşimlerini izlemenizi sağlar.

Bir Antijen odaklı Kolit Modelinin Geliştirilmesi Antijen T hücreleri için Hücreler sunulması ile Antijen Sunumu Eğitim için

Daha fazla video keşfet