Name: Dokunmatik uyarılmış Yanıt ve Hareket Deneyleri kullanarak Zebra balığı kas Performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
Description: Öğrenin, dokunmatik uyarılmış yanıt ve yüzme deneyleri kullanarak Danio rerio kas performansını ve fonksiyonunu değerlendirmeyi. Bu otomatik yöntem, nöromusküler araştırmalarda kas fonksiyon bozukluklarını tespit etmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu el yazmasına nazik sponsorlukları için Viewpoint'e teşekkür ederiz. Bu çalışma, Avustralya Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC) Proje Hibesi (APP1010110) tarafından finanse edilmiştir.

1. Dokunmatik uyarılmış Tepki Testi <ol><li> Dokunmatik uyarılmış Tepki Testi için Embriyolar dpf&#39;e 2 hazırlanması <ol><li> Etkinlik gün 17,18 boyunca önemli ölçüde değişebilir çünkü testi yapılır hangi günün hangi saati deneyler arasında tutarlı olduğundan emin olun. NOT: Deney kör gerçekleştirilen ve test sırası deneysel eserler en aza indirmek için randomize edilmelidir. </li><li> balık atama deneyi yürüten kişiye bilinmeyen bir numara suşları. serbestçe kullanılabilir online araçlar test sırasını belirleyen rastgele listesini oluşturmak kullanarak, bu aşağıdaki. </li><li> en az bir saat önce test, koryon bir delik kopyalama ve yavaşça ince cımbız çifti kullanılarak ayrı koryon çekerek dechorionate embriyolar. 28 ° C inkübatör dönmeden önce petri pislikleri temizleyin. </li></ol></li><li> Dokunmatik uyarılmış Tepki Testi Sahne <ol><li> Isı stage 28 ° C&#39;de en az 15 dakika için test başlamadan önce. Bu aşama sıcaklığı kontrol edilir ve 28 ° C&#39;de kalır: NOT &#160; Test süresince ° C. Sıcaklık aktivitesini etkileyecek ve sabit bir sıcaklıkta muhafaza etmek önemlidir. ısıtılmış aşamada mevcut değilse, o zaman, su sıcaklığının izlenmesi ve tüm deneyler aynı sıcaklıkta yürütülmelidir. </li><li> Embriyo orta (5 mM NaCl, 0.17mM KCI, 0.33 mM CaCl2, su içinde 0.33 mM MgSO 4) aydınlatılmış sahneye dolu bir petri yerleştirin ve petri üzerinde yüksek hızda kamera monte. </li><li> balık o kadar hızlı yüzme eylemi kaydedilir emin olmak için yakalama hızı olarak sn (1000 fps) 1.000 çerçevesini seçin (örneğin burada açıklanan izle Pix 5 gibi) ve &quot;çalışma alanı&quot; sekmesi altında video kamera kayıt yazılımı başlatın. </li><li> Bir seferde bir embriyo ile çalışan, Midd embriyo yerleştiringörüş alanında açıkça görülebilir zebrabalıkları sahip petri Le. NOT: Embriyo deney başlamadan recapturing ve embriyo konumlandırma bazı hastalık modellerinde kas zayıflığı teşvik edebilir uyaran ve tekrarlanan patlama yanıtları hissizleştirilmek neden olabileceğinden, başka bir ile değiştirin uzak öncesinde yüzer edin. </li><li> &quot;Rekor&quot; butonuna tıklayarak kaydetmeye başlayın ve başın üstünde bir künt iğne ile hafifçe dokunarak embriyo mechanosensory uyaran sunmak. </li><li> Embriyo görüş alanının dışında swum veya dinlenme döndüğünde Kaydı durdur. NOT: Mekanik uyaran aşağıdaki patlama kaçış tepkisi ilk 0,2 saniye içinde ivme zirveleri. Bu nedenle, balık görüş alanında bir kayıt çıkış tepkisinin ilk 0.2 saniye boyunca en az olduğundan emin olun. Adım 1.2.3 açıklanan yazılımı kullanarak, veriler otomatik olarak kaydedilirBir avi video dosyası olarak. Böyle indirmek için serbestçe kullanılabilir her ikisi de Bedava Video Capture veya Softonic, gibi alternatif video yakalama yazılımı da kullanılabilir. </li><li> Yeni bir petri embriyo dönün ve test için başka bir embriyo seçin. 15 balık az üzerinde test gerçekleştirin. </li></ol></li><li> Yüzme Davranış sayısallaştırılması <ol><li> Yüzme davranışı ölçmek için, yazılımı başlatmak ve Avi kaydedilen video dosyasını açmak için &quot;arka plan çıkarma olmadan Tek Larva Locomotion&quot; modülünü seçin. </li><li> &quot;Freehand&quot; ya da filmin menü çubuğu seçme alanlardan &quot;çokgen&quot; aracını kullanarak analiz için kullanılacak. Bölge balık orijinal pozisyonunu ve balık yüzmek olacağı bölgeyi hem de kapsar emin olun. prob analiz edilecek alanın dışında olduğundan emin olun. Yazılım otomatik olarak istenilen alanda balık yörüngesini takip edecektir. </li><li> t gerçekleştirmek içinO analiz, menü çubuğundan &quot;deney&quot; linkine tıklayın ve &quot;yürütme&quot; seçeneğini seçin. Istenen konumda ham veri analizi dosyası (.phr biçimi) kaydetmek isteyip istemediğiniz sorulduğunda. kaydettikten sonra, analiz başlamak için &quot;start&quot; tıklayın. &quot;Deney&quot; altında &quot;stop&quot; tıklayarak analizi End açılır menüsünden. sonuçlarını içeren bir pencere ekrana gelecektir. </li><li> &quot;Maksimum ivme&quot; değerini elde etmek için sağa kaydırın. İstenirse, sonuçlar pencereyi kapatmak ve &quot;sonuçları&quot; başlığı altında &quot;ihracat anlık sonuç&quot; butonuna tıklayarak bu verileri dışa açılır menüsünden. Uygun ham veri analizi dosyasını seçin ve açık tıklayın. bir elektronik tablo programında açılabilir bir metin dosyası hedef klasörde kaydedilir. </li><li> Her balık ve her bir suş için ortalama maksimum ivme elde etmek için ortalama bu işlemi tekrarlayın (Şekil 1). Not: Alternatif olarak usin içing Burada açıklanan yazılım, böyle serbestçe kullanılabilir ImageJ yazılım gibi benzer paketler ilgili hareket veri ayıklamak için kullanılabilir. 3D Parçacık Tracker eklentisi yüzme yörüngeleri izlemek için kullanılabilir. </li></ol></li></ol> 2. Hareket Testi - 10 dk Swim Testi <ol><li> Yüzme Analizi Embriyolar dpf&#39;e 6 Hazırlanması <ol><li> Gerekirse, sıralama embriyolar gerekli genotipi için, ayrı bir Petri kabı (tabak başına 25-30 embriyo) bir floresan protein veya fenotip ile ifade incelenmesi ve yerine göre örneğin. Seçenek olarak ise, genotip hareket tahlilin tamamlanmasından sonra belirlenebilir. </li><li> 3 dpf&#39;e, petri kapları yeniden incelemek ve herhangi bir çıkmamış embriyolar ve enkaz kaldırmak. 6 dpf&#39;e kadar 28 ° C inkübatör Petri yemekleri dönün. </li><li> Zebra balığı larvaları en aktif olduğu zamandır 9 am ve 12 saatleri arasında tüm suşların testini gerçekleştirin. p test ve pozisyonu sırası rastgelevahşi tip ve mutant örneklerin geç sirkadiyen farklılıklar ve diğer deneysel önyargı etkilerini en aza indirmek için. NOT: etkinlik gün boyunca önemli ölçüde değişebilir, çünkü test süresi deneyler arasında tutarlı olması önemlidir. </li><li> En az 30 dakika, oyuk başına bir larva ile 48 oyuklu plaka test yer larvalarına karşı önceden. Su yüzeyi sadece kuyunun üst altında olacak şekilde transferinden sonra hiçbir kabarcıkları vardır sağlanması, kuyu doldurun. 28 ° C inkübatör plakaları dönün. </li><li> kuluçka plakaları almak ve testten önce beş dakika ışığında iklime alıştırmak. </li></ol></li><li> Hareket tahlilin gerçekleştirilmesi <ol><li> Bu larvalar karanlıkta tespit edilebilir, böylece 60 kare / saniyeye kadar yakalayan, kızılötesi dijital kamera ile donatılmış kayıt odasına, içine 48 plaka yerleştirin. Kuyuların tüm lokomosyon yazılımına dairesel ızgara içine yerleştirilir emin olun ve tüm larvalar cle olduğunuarly saptanabilir. </li><li> yazılımı başlatmak ve &quot;izleme&quot; modülünü seçin. &quot;Dosyası&quot; altında &quot;oluşturmak yeni protokol&quot; üzerine tıklayın ve deney için kullanılan kuyuların numarayı düzenleyin. Deneme süresini ve &quot;parametreleri&quot; butonuna tıklayarak 10 dakika için entegrasyon süresini hem de set menü açılır ve &quot;protokol parametrelerini&quot; ve daha sonra &quot;zaman&quot; sekmesini seçerek. Aynı &quot;protokol parametreleri&quot; diyalog kutusunda &quot;seçenekler&quot; sekmesine tıklayın ve &quot;Numeriscope&quot; checkbox &quot;protokol parametreleri&quot; diyalog kutusu kapatılabilir, aşağıdaki tıklandığında emin olun. </li><li> kayıt alanları kuyulardan birinde tüm ızgara ve çift tıklayın vurgulamak ayarlayın. &quot;Çizmek alanlar&quot; butonuna tıklayın ve sol üst, sağ üst ve sol alt kuyuların etrafında çizmek ve yazılım otomatik olarak her bir konumunu belirlemek için izin verir &quot;build&quot;, tıklayın. Ayrıca bir ölçekte çizmekbar ve &quot;grubu için geçerli&quot; üzerine tıklayın. Tamamlandığında, &quot;alanlarını çizmek&quot; butonuna tıklayın. </li><li> Görme sadece balık hareketleri arka plan sinyalleri ile ortaya koyan bir seviyeye &quot;algılama eşiği&quot; çubuğunu kaydırarak algılama eşiğini belirler. NOT: algılama eşiği suşları ve böylece eşikleri, yeni bir suş test zaman belirlenmelidir arasında değişecektir. Örnek veriler 25 mm bir algılama eşiği sunulmaktadır / sn cinsinden kullanılmıştır. </li><li> test başlamadan önce hareketsizlik tespiti ve küçük ve büyük hareketler için hareket eşik girin. NOT: temsilci veriler 6 mm / sn bir hareketsizlik eşiğini ve 30 mm&#39;lik bir etkinlik patlama eşiğine sundu In / sn kullanılmıştır. eşikleri minimum hareket aktif dikkate alınması gereken belirlemek ve gerekli seviye patlama aktivitesini kabul ve (küçük aktif içine ancak patlama eylemlerinde altında faaliyet sınıflandırma izin edilecekty eşikleri) ve patlama aktivitesi eşiğinden daha büyük (büyük) hareketleri. eşikler incelendi özel balık türlerinin aktivitesine bağlı olarak değiştirilebilir. Not: Deney, ya açık ya da koyu koşullarda gerçekleştirilebilir, ancak zebra balığı larvası koyu 18 daha aktif olduğu gösterilmiştir. </li><li> &quot;Parametreleri&quot; altında &quot;ışık sürüş ayarları&quot; butonuna tıklayarak% 0 olması odasının içine ışık yoğunluğunu ayarlayın açılır menüsünden. Ortaya çıkan diyalog kutusunda, gerekli ışık ayarları ekleyin. NOT: odasının içine ışık yoğunluğu larva aktiviteyi teşvik etmek test süresinde ve kapatmak için tetiklenebilir </li><li> kayıt odasının kapısını kapatın ve video kaydını başlatmak. </li></ol></li><li> Yüzme Davranış sayısallaştırılması <ol><li> Deney tamamlandıktan sonra, &quot;deney&quot; altında &quot;stop&quot; linkine tıklayarak menüyü aşağı bırakın. Bir diyalog botüm sonuçlar x gösterilecektir. </li><li> &quot;Içeren açmak klasördeki&quot; konulu excel tıklamayla bu sonuçları erişebilir ve ortaya çıkan klasöründe görünür excel dosyasını açın. önemli parametreler &quot;smlct&quot; (küçük hareket sayımı), &quot;larct&quot; (büyük hareket sayımı), &quot;smldist&quot; (küçük hareketlerle balık tarafından katedilen toplam mesafe) ve &quot;lardist&quot; büyük hareketler balık kapsadığı (toplam mesafe vardır ). NOT: Kayıt sonrasında, yazılım da 10- sırasında hareketin bir görsel temsilini içeren ve bir .png resim dosyası ((10 dk kayıt video içeren) bir .avi dosyası biçiminde iki ek çıkış dosyaları döndürür dak deneyi; bakınız Şekil 2). </li><li> Lokomosyon değerleri hesaplanır kez doğru hesaplanmış lokomosyon değerleri balık yüzme hareketlerini tasvir edip, (bakınız Şekil yorumlayan .avi ve .png dosyalarını yeniden3). Not: Burada tarif edilen yazılım kullanılarak bir alternatif olarak, örneğin serbestçe kullanılabilir ImageJ yazılımı gibi paketler lokomotor davranışını izlemek için de kullanılabilir. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Bassett, D. I., Bryson-Richardson, R. J., Daggett, D. F., Gautier, P., Keenan, D. G., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+is+required+for+the+formation+of+stable+muscle+attachments+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dystrophin is required for the formation of stable muscle attachments in the zebrafish embryo.</a> Development. 130 (23), 5851-5860 (2003).</li>
<li>Gupta, V. A., Kawahara, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+splice+site+mutation+in+laminin-%CE%B12+results+in+a+severe+muscular+dystrophy+and+growth+abnormalities+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A splice site mutation in laminin-α2 results in a severe muscular dystrophy and growth abnormalities in zebrafish.</a> PLoS ONE. 7 (8), e43794(2012).</li>
<li>Gupta, V., Kawahara, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+dag1+mutant%3A+a+novel+genetic+model+for+dystroglycanopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">The zebrafish dag1 mutant: a novel genetic model for dystroglycanopathies.</a> Hum Mol Genet. 20 (9), 1712-1725 (2011).</li>
<li>Kawahara, G., Karpf, J. A., Myers, J. A., Alexander, M. S., Guyon, J. R., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening+in+a+zebrafish+model+of+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Drug screening in a zebrafish model of Duchenne muscular dystrophy.</a> Proc Natl Acad Sci. 108 (13), 5331-5336 (2011).</li>
<li>Telfer, W. R., Nelson, D. D., Waugh, T., Brooks, S. V., Dowling, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((neb%3A+a+zebrafish+model+of+nemaline+myopathy+due+to+nebulin+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+%26+Mech%22%5BJournal%5D)">neb: a zebrafish model of nemaline myopathy due to nebulin mutation.</a> Dis Model & Mech. 5 (3), 389-396 (2012).</li>
<li>Ruparelia, A. A., Oorschot, V., Vaz, R., Ramm, G., Bryson-Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+models+of+BAG3+myofibrillar+myopathy+suggest+a+toxic+gain+of+function+leading+to+BAG3+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish models of BAG3 myofibrillar myopathy suggest a toxic gain of function leading to BAG3 insufficiency.</a> Acta Neuropathol. 128 (6), 821-833 (2014).</li>
<li>Sztal, T. E., Sonntag, C., Hall, T. E., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epistatic+dissection+of+laminin-receptor+interactions+in+dystrophic+zebrafish+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Epistatic dissection of laminin-receptor interactions in dystrophic zebrafish muscle.</a> Hum Mol Genet. 21 (21), 4718-4731 (2012).</li>
<li>Sztal, T. E., Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+models+for+nemaline+myopathy+reveal+a+spectrum+of+nemaline+bodies+contributing+to+reduced+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish models for nemaline myopathy reveal a spectrum of nemaline bodies contributing to reduced muscle function.</a> Acta Neuropathol. 130 (3), 389-406 (2015).</li>
<li>Pichler, F. B., Laurenson, S., Williams, L. C., Dodd, A., Copp, B. R., Love, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+discovery+and+global+gene+expression+analysis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Chemical discovery and global gene expression analysis in zebrafish.</a> Nat Biotechnol. 21 (8), 879-883 (2003).</li>
<li>Peterson, R. T., Shaw, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+suppression+of+a+genetic+mutation+in+a+zebrafish+model+of+aortic+coarctation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Chemical suppression of a genetic mutation in a zebrafish model of aortic coarctation.</a> Nat Biotechnol. 22 (5), 595-599 (2004).</li>
<li>Kawahara, G., Serafini, P. R., Myers, J. A., Alexander, M. S., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+zebrafish+dysferlin+by+morpholino+knockdown%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Bioph+Res+Co%22%5BJournal%5D)">Characterization of zebrafish dysferlin by morpholino knockdown.</a> Biochem Bioph Res Co. 413 (2), 358-363 (2011).</li>
<li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nat Rev Drug Discov. , (2005).</li>
<li>Smith, L. L., Beggs, A. H., Gupta, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+skeletal+muscle+defects+in+larval+zebrafish+by+birefringence+and+touch-evoke+escape+response+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analysis of skeletal muscle defects in larval zebrafish by birefringence and touch-evoke escape response assays.</a> J Vis Exp. (82), e50925(2013).</li>
<li>Sloboda, D. D., Claflin, D. R., Dowling, J. J., Brooks, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+measurement+during+contraction+to+assess+muscle+function+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Force measurement during contraction to assess muscle function in zebrafish larvae.</a> J Vis Exp. (77), (2013).</li>
<li>McDonald, C. M., Henricson, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+6-minute+walk+test+as+a+new+outcome+measure+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">The 6-minute walk test as a new outcome measure in Duchenne muscular dystrophy.</a> Muscle Nerve. 41 (4), 500-510 (2010).</li>
<li>McDonald, C. M., Henricson, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+6-minute+walk+test+and+other+clinical+endpoints+in+duchenne+muscular+dystrophy%3A+reliability%2C+concurrent+validity%2C+and+minimal+clinically+important+differences+from+a+multicenter+study%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">The 6-minute walk test and other clinical endpoints in duchenne muscular dystrophy: reliability, concurrent validity, and minimal clinically important differences from a multicenter study.</a> Muscle Nerve. 48 (3), 357-368 (2013).</li>
<li>Hurd, M. W., Debruyne, J., Straume, M., Cahill, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+rhythms+of+locomotor+activity+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Circadian rhythms of locomotor activity in zebrafish.</a> Physiol Behav. 65 (3), 465-472 (1998).</li>
<li>MacPhail, R. C., Brooks, J., Hunter, D. L., Padnos, B., Irons, T. D., Padilla, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotion+in+larval+zebrafish%3A+Influence+of+time+of+day%2C+lighting+and+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Locomotion in larval zebrafish: Influence of time of day, lighting and ethanol.</a> Neurotoxicology. 30 (1), 52-58 (2009).</li>
<li>Berger, J., Berger, S., Jacoby, A. S., Wilton, S. D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+exon-skipping+strategies+for+Duchenne+muscular+dystrophy+utilizing+dystrophin-deficient+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Evaluation of exon-skipping strategies for Duchenne muscular dystrophy utilizing dystrophin-deficient zebrafish.</a> J Cell Mol Med. 15 (12), 2643-2651 (2011).</li>
<li>Berger, J., Sztal, T., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+birefringence+readily+measures+the+level+of+muscle+damage+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Bioph+Res+Co%22%5BJournal%5D)">Quantification of birefringence readily measures the level of muscle damage in zebrafish.</a> Biochem Bioph Res Co. 423 (4), 785-788 (2012).</li>
<li>Ravenscroft, G., Jackaman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dominant+ACTA1+disease+recapitulate+human+disease+and+provide+insight+into+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dominant ACTA1 disease recapitulate human disease and provide insight into therapies.</a> Brain. 134 (4), 1101-1115 (2011).</li>
<li>Ravenscroft, G., Wilmshurst, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+ACTA1+mutation+resulting+in+a+severe+congenital+myopathy+with+nemaline+bodies%2C+intranuclear+rods+and+type+I+fibre+predominance%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscular+Disord%22%5BJournal%5D)">A novel ACTA1 mutation resulting in a severe congenital myopathy with nemaline bodies, intranuclear rods and type I fibre predominance.</a> Neuromuscular Disord. 21 (1), 31-36 (2011).</li>
<li>Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modulation+of+memory+formation+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci. 108 (37), 15468-15473 (2011).</li>
<li>Müller, U. K., van Leeuwen, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swimming+of+larval+zebrafish%3A+ontogeny+of+body+waves+and+implications+for+locomotory+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Swimming of larval zebrafish: ontogeny of body waves and implications for locomotory development.</a> J Exp Biol. 207 (Pt 5), 853-868 (2004).</li>
<li>Cheng, W., Tian, J., Burgunder, J. M., Hunziker, W., Eng, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myotonia+congenita-associated+mutations+in+chloride+channel-1+affect+zebrafish+body+wave+swimming+kinematics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Myotonia congenita-associated mutations in chloride channel-1 affect zebrafish body wave swimming kinematics.</a> PLoS ONE. 9 (8), e103445(2014).</li>
<li>Moggio, M., Colombo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+disease+heterogeneity%3A+a+prognostic+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Myol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial disease heterogeneity: a prognostic challenge.</a> Acta Myol. 33 (2), 86-93 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

fareler, köpekler, Zebra balığı, sinek ve solucanlar gibi birçok farklı hayvan modelleri kas hastalıklarının genetik ve moleküler temeli anlayışımız yolunda katkıda ve bunlarla mücadele etmek terapötik yaklaşımların geliştirilmesinde yardımcı olması. Zebra balığı kas hastalığı çalışmaları için çeşitli avantajlar sunuyor. Zebra balığı, in vitro kültür sistemlerinde mümkün değildir, uygun bir fizyolojik bir ortamda, karmaşık kas modelli değerlendirmek için genetik olarak manipüle edilebilir bir sistem sağlar. Diğer omurgalı hayvan modellerinde farklı olarak, hep birlikte optik berraklık üretilen balık sayıda, in vivo kimyasal ve genetik tarama hızlı, yüksek hacimli kolaylaştırır. Burada zebrabalıkları embriyogenez sırasında kas performansını değerlendirmek için yüksek verimlilik ve otomatik bir yöntem sağlamak için Zebra balığı hareket deneyleri gelişimini açıklar. Her iki tahliller için de kabul edilmesi gerektiğini sirkadiyen ritimler vedış çevresel uyaranlara anlamlı zebrabalıkları yüzme davranışı 17,18 etkileyecektir. Aynı zebrabalıkları Tekrarlanan test de 23 uyaran dokunsal yanıt olarak bir azalmaya neden alışkanlık yol açacaktır. Bu nedenle, deneyler arasında tekrarlanabilir sonuçlar her zebrabalıkları embriyo elde etmek için sadece bir gün ve aydınlatma koşulları zaman standardize edilmelidir kez test edilmiş ve su sıcaklığı sıkı regüle edilmesi gerekmektedir edilmelidir. doğrudan kas kuvveti ile orantılı bir patlama yüzme eylemi, maksimum ivme ölçebilir dpf&#39;e dokunma kullanarak 2&#39;de analiz uyarılmış. Zebra balığı Önceki teknikler ölçülür bir elektrik alanı ve kas 14 kuvvet üreten yeteneğini kullanarak uyarılan kas kasılması deneysel ekipman aşağıdakilere embriyoların her iki ucunu bağlayarak kas kuvveti inceledik. Bu yöntem, t üretim kapasitesi kuvvetini ölçer ikenO larva kas, bu yüzme sırasında larva kas tarafından üretilen gerçek gücü ölçmez. Bu nedenle dolaylı olarak kas sağlığının genel bir ölçü sağlamak için, normal larva yüzme hareketi sırasında oluşan kuvveti değerlendirmek için bir yöntem geliştirdi. 1000 kare hızında bireysel zebrabalıkları hareketleri kayıt yeteneğine yüksek hızlı video sistemi, / sn gözle doğrudan ayırt edilemez kas fonksiyonlarının küçük ama anlamlı farklılıklar tespit etmek için kullanılabilir. Bu elektriksel olarak uyarılmış kuvvet nesil değişiklikleri yüzme performansında değişiklikler ile ilişkili bildirilen ne kadar önceden görmek için ilgi olacaktır. Ek olarak dokunmatik yanıt deneyler ayrıca lokomotor davranışlar nicel bir ölçümünü elde etmek için, yüzme hareketi 24 boyunca vücut dalga şekli ve hız gibi yüzme kinematik değerlendirmek için kullanılabilir uyarılmış. Nedeniyle zebraf spontan hareketineish larvalar 3 dpf&#39;e sonra, biz kas fonksiyonunu ölçmek için dokunmatik uyandırmak deneyleri gerçekleştirmek mümkün değildi. Tersine, biz 6 dpf&#39;e Zebra balığı larvalarının mesafe swum belirleyerek daha uzun bir süre boyunca kas performansını ölçtük. Bu test, kas fonksiyonunun dolaylı ölçüm de, balık bozulmuş kas performansının 8 veya nörodejenerasyonu 25,26 görüntülendiği belirlemek için kullanılabilir. Bu test 6 dakika yürüme testine benzer bir ölçüm sağlar ama aynı zamanda in vivo ilaç ya da mutagenez ekranlarında otomatik yüksek verimlilik için uygun değil sadece.

Geçtiğimiz on yıl zebrabalıkları üzerinde giderek kas hücre biyolojisi ve hastalık incelemek için kullanılır olmuştur. optik netlik ile birleştiğinde zebrafish embriyo, hızlı dış gelişme, kas oluşumu, büyüme ve fonksiyon doğrudan görselleştirme izin verir. Kas geliştirme süreci son derece zebrabalıkları muhafaza edilir ve bu müsküler distrofi ve konjenital miyopatiler 1-8 da dahil olmak üzere kas hastalıklarının bir dizi başarılı modelleme izin verdi. Zebra balığı modellerin detaylı olarak incelenmesi ancak bu koşulların patobiyolojisi yeni bakış açıları sağlanan değil, aynı zamanda uygun tedavilerin 6,9-13 test için bir platform sağlamadı. kas hastalıklarının zebrabalıkları modellerinin analizi kas performansını ölçmek için güvenilir ve tekrarlanabilir deneyleri dayanır. Önceki çalışmalar başarıyla tarafından DPF 3 ila 7 arasında balık Zebra balığı gövde kas kuvveti üreten yeteneği ölçülür varelektriksel bir güç iletim sistemi 14 bağlı bir hareketsizleştirilmiş balık kasılmasını stimüle eder. Bu kuvvet detaylı ölçümler sağlayabilir ancak ideal yüksek verim deneyleri için uygun değildir ve yüzme sırasında kas performansını ölçmek için avantajları vardır. Zebra balığı kas dpf 2&#39;de tamamen işlevseldir ve balık uyaranlara yanıt olarak patlama yüzme hareketleri ortaya çıkarabilir. dokunmatik uyandırmak çıkış yanıt deney kasılma gücünün bir ölçüsü olarak kullanılabilir bir darbe yüzme hareketi sırasında ivme ölçümü için kullanılır. Miyopati hastalarda kas fonksiyonlarının en çok kullanılan önlemlerden biri toplam mesafe sert ve düz bir yüzeye 15,16 yürüdü kaydeden 6 dk yürüme testidir. Biz toplam mesafe yapılırsa yapılsın izlemek ve böylece, zebra balığı larvası dpf 6 kas fonksiyonu ölçmek için kıyaslanabilir bir test uygulanmış ve 10 dakikalık bir süre boyunca, her bir larvaya yapılan hareketlerin sayısı var. Bu gerçekleştirilirkas performansı, güvenilir ve yüksek verimli ölçümleri sağlayan otomatik bir izleme sistemi kullanılarak. Her iki kas testleri yüksek oranda tekrarlanabilir ve Zebra balığı miyopati modellerde 8 kas performansında farklılıklar ölçmek için kullanılmıştır.

<table><tbody><tr><td>21 G x 1' Künt İğne</td><td>Terumo/Amiral Tıbbi Malzemeler</td><td>TE2125</td><td></td></tr><tr><td>48 oyuklu plakalar</td><td>Sigma</td><td>M8937</td><td></td></tr><tr><td>90 mm Petri Kapları</td><td>Pasifik Laboratuvar Ürünleri PT</td><td>S90001</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Hızlı Kamera</td><td>Baumer</td><td>HXC20</td><td></td></tr><tr><td>http://www.randomization.com</td><td>Yok</td><td></td><td>Adımlar 1.1.2, 2.1.3</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Thermoline Scientific</td><td>TEI-43L</td><td></td></tr><tr><td>Plastik Pipet</td><td>VWR</td><td>16001-188</td><td></td></tr><tr><td>StreamPix5</td><td>NorPix</td><td></td><td>Adım 1.2.3</td></tr><tr><td>Sıcaklık Kontrol Ünitesi</td><td>Bakış Açısı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cımbız, stil 8</td><td>ProSciTech</td><td>T04-821</td><td></td></tr><tr><td>Zebrabox Sistem Bakış</td><td>Açısı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zebralab</td><td>Bakış Açısı</td><td></td><td>Adımları 1.3.1, 2.2.1</td></tr></tbody></table>

dokunmatik uyarılmış yanıt ve hareket deneyleri kullanarak zebra balığı kas performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Zebra balığı kas gelişimi son derece onlara kas fonksiyonu ve hastalık incelemek için mükemmel bir model yapma memeli sistemlerle muhafaza edilir. iskelet kas fonksiyonunu etkileyen birçok miyopatiler hızlı ve kolay bir embriyogenez ilk birkaç gün içinde zebrafish değerlendirilebilir. 24 saat sonrası fertilizasyon (hpf) tarafından, wild tip zebrabalıkları kendiliğinden kuyruk kasları sözleşme ve 48 hpf, Zebra balığı sergi kontrollü yüzme davranışlarıyla. sıklığında azalma, ya da diğer değişiklikler, bu hareketler bir iskelet kas disfonksiyonu gösterebilir. yüzme davranışlarını analiz ve erken Zebra balığı gelişiminde kas performansını değerlendirmek için, biz de dokunmatik uyarılmış kaçış tepkisi ve hareket analizleri kullanmaktadır. Dokunmatik uyarılmış kaçış tepki deneyleri hızlı kasılan kas liflerinin kasılmasıyla ortaya çıkan kısa patlama hareketleri sırasında kas performansını değerlendirmek için kullanılabilir. Bu durumda, bir dokunun bir dış etmenin etkisi, yanıt olarak,Baş, sonrası fertilizasyon (dpf) 2 gün wild tip Zebra balığı genellikle keskin dönüşler eşliğinde güçlü bir patlama yüzmek, sergilerler. Bizim yöntemi ivme kas kasılması tarafından üretilen kuvvet ile doğru orantılı olarak, bir patlama yüzme hareketi sırasında maksimum ivmeyi ölçerek iskelet kası fonksiyonunu rakamlarla. Buna karşılık, erken zebra balığı larva gelişimi sırasında hareket yeteneği deneyler, kas aktivitesinin devam dönemlerde kas performansının değerlendirilmesi için kullanılır. yüzme davranışlarını izlemek için bir izleme sistemi kullanarak, biz onların iskelet kas fonksiyonlarının yansıtıcı 6 gün eski Zebra balığı faaliyet ve mesafe sıklığı otomatik hesaplama, edinin. yüzme performansı ölçümleri hastalık modelleri ve iskelet kas fonksiyonunu etkileyen mutasyonlar veya kimyasal tedavilerin yüksek verimli tarama fenotipik değerlendirme için değerlidir.

Dokunun yanıt deney Kas gücünün orantılı ölçüsüdür hızı ve yüzme hareketlerinin ivmesini belirlemek için kullanılabilir uyarılmış. Mekanik bir uyarana tepki olarak böyle vahşi tip Zebra balığı sergi hızlı bir yüzme eylem dpf&#39;e kafasına 2 küçük musluk gibi. Video yakalanır ve iki farklı zebra balığı miyopati modellerde analiz edilmiştir: Tg (ACTA1 D286G -eGFP), önemli bir kas güçsüzlüğü gösterilmiştir nemaline miyopati modeli ve şiddetli kas kusurları tarif edildiği Duchenne kas distrofisi modeli 19,20 dpf&#39;e 5 de. Tipik bir dokunuş bir videodan Görüntüler Şekil 1A temsil edilmektedir tahlil uyarılmış. Zebra balığı hızlandırılması incelenmiş ve patlama yüzme kaçış tepkisi (Şekil 1B) ilk 0,2 saniye içinde zirveye bulunmuştur. Bu zirve maksimum ivme kuvveti g orantılı bir önlem sağlariskelet kası kapasitesini enerating. Tg (ACTA1 D286G -eGFP): ortalama 276,0 ± 28,8 m / s 2, n = 3 bağımsız tekrarlı deneyin içeren = maksimum ivme değerleri her bir suş için bir ortalama maksimum ivme değeri (ortalama ± standart hata) elde etmek üzere ortalaması alınmıştır 15 ayrı balık; Vahşi tipli kontrolü: Ortalama = 500,8 ± 50,28 m / sn 2, n = 15 ayrı balık içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri; dmd pc2 - / - mutant: Ortalama = 249,9 ± 19,1 m / sn 2, n = 12-19 bireysel balık içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri; dmd pc2 +/- heterozigot: Ortalama = 235,9 ± 8.7 m / sn 2, n = 16-27 bireysel balık içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri; dmd pc2 + / + wild tip homozigot: Ortalama = 230,9 ± 8.7 m / sn 2, n = 8-27 bireysel balık (Şekil 1C) içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri. Beklendiği gibi, Tg (ACTA1 D286G -eGFP) Balık fare modelleri ve hasta verileri 8,21,22 ile tutarlıdır azalmış kas fonksiyonunu gösteren maksimum ivmelenme önemli bir azalma olduğu görüldü. Dmd pc2 - / - mutant balık, ancak 20 (Şekil 1D) dpf&#39;e 3 ila kas kusurları tespit tutarlı, 2 dpf&#39;e, maksimum ivme hiçbir fark olmadığını göstermiştir. Hareket deneyleri kas performansında bir gösterge olarak zebra balığı suşlarının aktivitesi ve uzaklık swum belirlemek için 6 dpf yapıldı. Test sonrasında on dakikalık test süresi boyunca yüzme hareketleri şematik bir gösterimi sırasıyla yavaş ve hızlı hareket dönemleri temsil eden kırmızı ve yeşil çizgiler ve hareketsizlik dönemleri (Şekil 2) temsil eden siyah çizgilerle, üretilmiştir. oppos olarak hareketsizlik nispeten hiçbir dönemleri ile Bireysel yabanıl tip zebrabalıkları gösteri yüksek etkinlikEd test süresi (Şekil 2B) içinde daha az aktif olan Tg (ACTA1 D286G -eGFP) Balık e. Yüzme davranışı her balık (Şekil 3) ile hareketi sayısı ve uzaklık swum münferit değerlerin ortalaması alınarak belirlendi. Her ikisi de, Tg (ACTA1 D286G -eGFP) balık (Şekil 3A ve 3B) ve DMD, PC2 - / - Mutant balık (Şekil 3C ve 3D), ilgili göre swum hareketleri ve mesafe ortalama sayısında belirgin bir azalma olduğu bulunmuştur kontroller: Tg (ACTA1 D286G -eGFP) balık: hareketlerin ortalama sayısı = 94.3 ± 13.6, ortalama mesafe yapılırsa yapılsın = 112.9 ± 18.4 mm, n = 45 balık içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri; vahşi tip kontrolleri: hareketlerin sayısını = 177.4 ± 14.0 ile ortalama mesafe yapılırsa yapılsın = 300.2 ± 22.8 mm, n = 3 bağımsız r45 balık içeren eplicate deneyler; dmd pc2 - / - mutant: mesafe swum ortalama hareketlerinin sayısını = 163.3 ± 30.0 ortalama: 298.4 ± 60,37 mm, n = 12-20 balık içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri; dmd pc2 +/- heterozigot: hareketlerin sayısı ortalama = ± 38,8 362,3, mesafe swum ortalama: 660,3 ± 86.1mm n = 17-27 balık içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri; dmd pc2 + / + vahşi tip homozigot: hareketlerin sayısını = 341.9 ± 91.6 ortalama = 574,3 ± 170.9mm n = 8-25 balık içeren 3 bağımsız çoğaltmak deneyleri mesafe swum anlamına gelir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54431/54431fig1.jpg" /> Şekil 1:. Kantitasyonu Zebra balığı embriyolarının dpf&#39;e için 2 yanıt deneyi dokunmatik-uyandırmak kontrol zebrabalıkları (A) Anlık görüntüleri sırasında 2 dpf&#39;e deneyleri dokunmatik-uyandırmak. (B) ilk 0.2 saniye Hızlanma eğrisiTek Tg (ACTA1 D286G -eGFP) (kırmızı) ve dokunmatik uyarıcının uygulanması, aşağıdaki tek bir kontrol (mavi) zebra balığı. maksimum ivme noktalı çizgilerle temsil edilmektedir. (C, D) (C) Tg (ACTA1 D286G -eGFP) zebrabalıkları dokunmatik uyarılmış müdahale deneyleri kaydedilen maksimum ivmelenme (m / sn2) miktarının ve (D) dmd pc2 - / - mutant balık 2 dpf&#39;e zebrafish kontrol grubuna göre. Hata çubukları, 3 suret deneyler için ortalama ± SEM temsil * p &lt;0.05. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54431/54431fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54431/54431fig2.jpg" /> Şekil 2:. Zebra balığı embriyolarının için lokomosyon tahlillerin Temsil (A) balığı embriyolar 48 oyuklu plakalara yerleştirilir ve hareket kızılötesi sayısal kamera kullanılarak yukarıda kaydedilir. Kırmızı çizgiler yavaş hareketler ve (yazılım girilen algılama eşikleri ile belirlendiği gibi) hareketsizlik gösteren siyah çizgiler gösteren hızlı hareketler, yeşil çizgiler tasvir ile test döneminde Zebra balığı hareket (B) şematik. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54431/54431fig2large.jpg" target="_blank">Tıklayınız daha büyük bir versiyonunu görmek için bu figür.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54431/54431fig3.jpg" /> Şekil 3:. Zebra balığı larvalarının dpf&#39;e için 6 lokomosyon tahlillerin Kantitasyonu hareketlerinin (A) sayısının Kantitasyonu ve (B) Tg 6 dpf&#39;e zebrafish kontrol grubuna göre (ACTA1 D286G -eGFP) zebrafish mesafe T./ - - 6 dpf&#39;e zebrafish kontrol grubuna göre mutant balık hareketleri (C) sayısı ve (D) miktarının belirlenmesi dmd PC2 izlediği mesafe. Hata çubukları, 3 suret deneyler için ortalama ± SEM temsil * p &lt;0.05, ** p &lt;0.01. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54431/54431fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Zebra balığı, kas fonksiyonlarını ve hastalıklarını incelemek için mükemmel bir modeldir. Erken embriyogenez sırasında zebra balığı düzenli kas kasılmalarına başlar ve ritmik yüzme davranışı üretir ve bu da kas bozulduğunda değişir. Burada, yüzme performansını kas fonksiyonunun bir ölçüsü olarak incelemek için dokunma ile uyarılmış bir tepki ve hareket testini açıklıyoruz.

Dokunmatik uyarılmış Yanıt ve Hareket Deneyleri kullanarak Zebra balığı kas Performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Bu prosedürün genel amacı, dokunma ile uyarılan yanıt ve yüzme analizlerini kullanarak zebra balıklarında kas performansını ve fonksiyonunu değerlendirmektir. Bu yöntem, zebra balığı hastalık modellerinde bozulmuş kas performansının veya nörodejeneratif kusurların belirlenmesi gibi nöromüsküler araştırma alanındaki soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, zebra balığı hastalık modellerinde kas performansını değerlendirmek için otomatik ve yüksek kapasiteli bir yöntem sunmasıdır.Deneyi gerçekleştirmek için, yaklaşık 25 mililitre embriyo medyumu ile doldurulmuş bir petri kabını, yaklaşık 28 °C'ye ayarlanmış, aydınlatmalı ve sıcaklık kontrollü bir sahne üzerine yerleştirin. Yüksek hızlı kamerayı kabın üzerine monte edin. Video kayıt yazılımını başlatın ve hızlı yüzme hızlarının yakalanabildiğinden emin olmak için yakalama hızını saniyede 1.000 kareye ayarlayın.Embriyoyu, petri kabının merkezinde ve görüş alanında net bir şekilde görünecek şekilde konumlandırın. Kaydet (Record) düğmesine basın ve ardından kafanın üst kısmından küt uçlu bir iğne ile embriyoya nazikçe dokunarak mekanosensoriyel bir stimülasyon uygulayın. Embriyo görüş alanının dışına yüzdüğünde veya dinlenme konumuna döndüğünde kaydı durdurun.Aynı larvaların tekrar test edilmesi, özellikle bazı hastalık modellerinde alışkanlık oluşmasına veya kas zayıflığının artmasına yol açarak dokunsal uyarana verilen yanıtın azalmasına neden olur; bu nedenle, her embriyo yalnızca bir kez test edilmelidir. Yüzme davranışını nicelleştirmek için yazılımı başlatın ve AVI video dosyasını açmak için Arka Plan Çıkarma Modülümüz ile tek larva lokomosyonunu seçin. Menü çubuğundan serbest el veya poligon aracını seçin ve mekanosensör uyaranı iletmek için kullanılan probu hariç tutarak, hem balığın orijinal konumunu hem de yüzdüğü alanı kapsayan film bölgesini seçin.Menü çubuğundaki Experiment seçeneğine tıklayın ve Execute komutunu seçin. Komut isteminde, ham veri analiz dosyasını PHR formatında istediğiniz konuma kaydedin. Ardından, analizi başlatmak için Start düğmesine tıklayın.Balık görüş alanının dışına çıktığında veya video klip sona erdiğinde, Deney Menüsü altındaki Durdur seçeneğine tıklayarak analizi sonlandırın; böylece sonuçların görüntülendiği bir pencere açılacaktır. Maksimum ivme değerini elde etmek için pencerenin sağına kaydırın. Sonuçlar açılır menüsü altındaki Anlık Sonuçları Dışa Aktar düğmesine tıklayarak verileri dışa aktarın.Uygun Ham Veri Analizi dosyasını seçin ve açmak için tıklayın. Bu işlem, hedef klasöre bir hesap tablosu programında açılabilecek bir metin dosyası kaydedecektir. Test larvalarını, her kuyucuğa bir adet gelecek şekilde 48 kuyucuklu bir plakaya yerleştirin.Ardından, kuyu içinde hava kabarcığı kalmadığından emin olarak kuyuları, üst sınırın hemen altına kadar suyla doldurun. Plakaları bir saat boyunca 28 °C'de bekletin. Plakayı, karanlıkta larvaları tespit edebilen kızılötesi dijital kameralı bir kayıt haznesine yerleştirin.Sirkadiyen ritimler ve dış çevresel uyaranlar, zebra balığı yüzme davranışını önemli ölçüde etkileyebilir. Günün saati ve aydınlatma koşulları standardize edilmeli ve su sıcaklığı sıkı bir şekilde düzenlenmelidir. Yazılımı başlatın ve Takip Modülünü seçin.Dosya (File) altında Yeni Protokol Oluştur (Generate New Protocol) seçeneğine tıklayın ve bu örnekte 48 olan deney için kullanılan kuyucuk sayısını düzenleyin. Ardından, Parametreler (Parameters) kısmına tıklayıp Protokol Parametreleri'ni (Protocol Parameters) ve sonrasında Zaman'ı (Time) seçerek deney süresini ve entegrasyon periyodunu 10 dakika olarak ayarlayın. Yine Protokol Parametreleri'nde, Seçenekler'e (Options) tıklayarak numeroskop onay kutusunun seçili olduğundan emin olun.Kayıt alanlarını ayarlamak için tüm ızgarayı vurgulayın ve kuyucuklardan birine çift tıklayın. Draw Areas düğmesine tıklayın; sol üst, sağ üst ve sol alt kuyucukların etrafını çizin ve Build düğmesine tıklayın. Yazılım daha sonra her bir kuyucuğun konumunu belirleyecektir.Bu aşamada, ölçek çubuğunu da çizin ve Gruba Uygula'ya tıklayın. İşlem tamamlandığında, Çizim Alanları düğmesine tıklayın. Ardından, bu örnekte siyah olan balık rengini seçin ve Algılama Eşiği çubuğunu, arka plan olmadan yalnızca balık hareketlerinin vurgulandığı bir seviyeye getirin.Hareketsizliğin ve küçük veya geniş hareketlerin tespiti için Hareket Eşikleri değerlerini girin. Bu örnekte, 6 mm/s hareketsizlik eşiği ve 30 mm/s aktivite patlaması eşiği kullanılmıştır. Parametreler Menüsüne, ardından Işık Sürüşü ayarlarına tıklayın ve haznenin ışık yoğunluğunu %0 olarak ayarlayın. Kayıt haznesinin kapağını kapatın ve video kaydını başlatın.Deney, ekrandaki zamanlayıcının gösterdiği üzere 10 dakika içinde tamamlanacaktır. Tamamlandığında, Deney açılır menüsüne tıklayın ve Durdur'u seçin. Sonuçların yer aldığı bir iletişim kutusu görüntülenecektir.Sonuçları Excel kullanarak incelemek için "Open Containing folder" seçeneğine tıklayın ve açılan klasörde görünen dosyayı açın. Son olarak, kaydedilen lokomosyon değerlerinin balığın yüzme hareketlerini doğru şekilde yansıtıp yansıtmadığını gözden geçirmek için video yeniden oynatılabilir. Bu işlem, video dosyasında gözlemlenen hareketin yazılım tarafından oluşturulan lokomosyon profili ile karşılaştırılmasıyla gerçekleştirilebilir.Dokunma ile uyarılan bir deney sırasında bir zebra balığı embriyosundan alınan anlık görüntüler, uyarının uygulanmasından sonraki ilk 0.2 saniye boyunca bir bireyin tipik hareketini göstermektedir. Burada şekil, vahşi tip ile miyopatik bireylerde, patlama şeklinde yüzme kaçış tepkisinin ilk 0.2 saniyesi için bir ivme profilini göstermektedir. İvmenin her iki suşta da bu zaman aralığında zirveye ulaştığı görülmüştür ve maksimum zirve ivme, iskelet kasının kuvvet üretme kapasitesi ile orantılıdır.Maksimum ivme değerlerinin yabanıl tip ve miyopatik suşlar için ortalamaları alındı. Miyopatik balıklar, kas fonksiyonunda azalmaya işaret eden belirgin bir maksimum ivme düşüşü gösterdi. Embriyolar üzerinde gerçekleştirilen 10 dakikalık lokomosyon analizleri ile hem yabanıl tip hem de miyopatik embriyoların hareket paternleri ve türleri kaydedildi ve yüzme hareketlerinin diyagramatik temsilleri oluşturuldu.Yeşil çizgilerle temsil edilen yavaş hareket dönemleri, kırmızı çizgilerle temsil edilen hızlı hareket dönemleri ve siyah çizgilerle temsil edilen hareketsizlik dönemleri haritalandı. Miyopatik bireylerin test süresi boyunca daha az aktif olmalarının aksine, yabani tip bireyler nispeten hiç hareketsiz dönem olmaksızın yüksek aktivite seviyeleri gösterdi. Bu durum, yabani tip ve miyopatik balıkların ortalama hareket sayıları ve katettikleri mesafe arasındaki anlamlı farklara yansıdı.Yöntem ustalıkla uygulandığında, dokunma ile uyarılmış yanıt deneyi 15 balık için 15 dakikada gerçekleştirilebilir ve lokomosyon deneyleri 48 balığa kadar yaklaşık 10 dakikada tamamlanabilir. Bu prosedürü uygularken, embriyoların hareketliliğini etkileyebileceği için onlara dikkatle yaklaşmak önemlidir. Bu prosedürün ardından, kas patolojisi ile ilgili ek soruları yanıtlamak için immünlblamlama veya elektron mikroskobu gibi diğer teknikler uygulanabilir.Bu videoyu izledikten sonra, erken zebra balığı gelişiminde kas performansının nasıl ölçüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

using-touch-evoked-response-locomotion-assays-to-assess-muscle

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Görsel-Motor Yanıt hafif artışlarla ve azaltır yanıt larva zebrafish motor çıkışını ölçmek için geliştirdi. Biz de dahil olmak üzere başka bir görme testi optokinetik refleks tarafından test edildiğinde tamamen kör olduğu düşünülüyordu optokinetik yanıt (NRC) mutantlar, hiçbir zebrafish vizyon mutant inceledi.

Işık Parlaklıkları değişiklikler Zebra balığı, Duyarlılık Tedbir Davranış Testi

Burada sunulan yöntem, yüksek enerjili lazer darbeleri ve zamanla bu yaralanmalar ve kurtarma ileri analizi ile canlı zebrafish embriyo kesin hasar oluşur. Ayrıca genetik olarak tek etiketli veya iskelet kas hücre gruplarının sırasında ve lazer ışık kaynaklı hasar sonrası takip edilebilir göstermek.

Zebra balığı Embriyonik İskelet Kası Lazer-yaralama

Bu videoda, zebra balığı larvalarının dokunma uyaranlarına verdiği tepkiyi ölçen dokunma-uyarma tepkisi testi açıklanmaktadır.

Kaçış Tepkisi Testi: Zebra Balığı Larvalarının Dokunma Uyaranlarına Tepkisini İncelemek İçin Bir Yöntem

Video, zebra balığı larvalarının kaçınma ve timotaksis testini anlatıyor. Video, zebra balığı larvalarının görsel caydırıcı uyarana yanıt olarak davranışlarını inceler.

Zebra Balığı Kaçınma ve Timotaksis Deneyi: Caydırıcı Görsel Uyarana Yanıt Olarak Larva Davranışını İncelemek İçin Yüksek Verimli Bir Yöntem

Zebra balığı iskelet kası bozuklukları insan modellemek için ortaya çıkan bir sistemdir. Biz embriyonik ve larva zebrafish iskelet kası myofibers izole etmek için hızlı ve etkili bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, tek bir iskelet kas lifi morfolojisi çalışma için uygun olan yüksek yoğunluklu miyofiberde oluşan hazırlama, protein hücre içi lokalizasyonu ve kas fizyolojisi verir.

Disosiye Müstahzarlar gelen Embriyonik ve larval Zebra balığı İskelet myofibers Analizi

Kuvvet ölçümleri geliştirme, yaralanma, hastalık, tedavi ya da kimyasal toksisite nedeniyle kas fonksiyonu değişiklikleri göstermek için kullanılabilir. Bu video, Zebra balığı larva gövde kas bir maksimal kasılma sırasında güç ölçmek için bir yöntem ortaya koymaktadır.

Zebra balığı Larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında Kuvvet Ölçümü

Zebra balığı artık kas distrofilerini, konjenital miyopatileri ve ilgili nöromüsküler hastalıkları modellemek için yerleşik ve güçlü bir araçtır. Çift kırılma ve dokunma ile uyarılmış kaçış davranışı, zebra balığı embriyolarının erken gelişim sırasında kas düzensizliği ve lokomotif bozukluğunun derecesini belirlemek için kullanılan iki yaygın noninvaziv testtir.

Larva Zebra Balıklarında İskelet Kası Defektlerinin Bikırılma ve Dokunma-Uyandırma Kaçış Yanıtı Deneyleri ile Analizi

Bu çalışmada, zebra balığı larvaları üzerinde Evans Mavi Boya (EBD) analizi yapmak için basit bir yöntem açıklıyoruz.  Bu teknik, iskelet kası bütünlüğünün karakterizasyonu ve zebra balığı kas distrofisi modellerinin tanımlanması için güçlü bir araçtır ve yeni terapötiklerin geliştirilmesi için değerli bir yöntemdir.

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

İskelet kas rejenerasyonu, kas distrofisi gibi birçok kas hastalığında bozulan doku yerleşik kas kök hücreleri tarafından yönlendirilir ve bu da kasın yenilenememesi ile sonuçlanır. Burada, kas hastalığının zebra balığı modellerinde kas yenilenmesinin incelenmesini sağlayan bir protokol açıklıyoruz.

Kas Hastalığının Zebra Balığı Modellerinde Kas Yenilenmesinin İncelenmesi

Omurilik yaralanmasından sonra fonksiyonel iyileşme yeteneğine sahip olan yetişkin zebra balığı, doğuştan gelen nöral rejenerasyon mekanizmalarını aydınlatmak için önde gelen bir model sistemidir. Burada, yüzme dayanıklılığını ve yüzme davranışı testlerini omurilik rejenerasyonunun fonksiyonel okumaları olarak tanımlıyoruz.

Yetişkin Zebra Balıklarında Yüzme Dayanıklılığı ve Yüzme Davranışının Değerlendirilmesi

Optik berraklık, zebra balıklarında hücre biyolojik ve fizyolojik çalışmaları için önemli bir avantajdır. Bireysel hayvanlarda hücre büyümesinin ölçülmesi için sağlam yöntemler, iskelet kasının ve komşu dokuların büyümesinin tüm vücut büyümesiyle nasıl bütünleştiğine dair yeni bilgiler sağlayan tanımlanmıştır.

Değiştirilmiş elektriksel aktiviteye maruz kalan bireysel canlı zebra balıklarında iskelet kası büyümesinin gerçek zamanlı ve tekrarlanan ölçümü

Öğrenin, dokunmatik uyarılmış yanıt ve yüzme deneyleri kullanarak Danio rerio kas performansını ve fonksiyonunu değerlendirmeyi. Bu otomatik yöntem, nöromusküler araştırmalarda kas fonksiyon bozukluklarını tespit etmeye yardımcı olur.

Dokunmatik uyarılmış Yanıt ve Hareket Deneyleri kullanarak Zebra balığı kas Performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için

Daha fazla video keşfet