Koruyucu etkinliği ve Pulmoner Bağışıklık Tepkisi Fare Subkutan ve Burun BCG İdaresi ardından

Bu prosedürün genel amacı, aşının intranazal bir zorluğa karşı koruyucu etkinliği ve yerel aşı kaynaklı akciğer bağışıklık yanıtı dahil olmak üzere, tüberküloz bağışıklamasını takiben akciğerlerdeki bağışıklık tepkilerini incelemektir. Bu metodoloji, optimal akciğer immün koruması için pulmoner aşılar tarafından yakalanan savunma amaçlı akciğer immün yanıtlarının tanımlanması da dahil olmak üzere, tüberküloz aşısı keçesindeki temel sorularımızı yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu metodolojinin bir yararı, hayvanından gelen akciğer bağışıklık tepkisinin, koruyucu etkinliğe paralel olarak bireysel olarak değerlendirilmesidir.

koruma ile ilişkili spesifik bağışıklık parametrelerinin tanımlanmasına izin vermek. BCG aşısının deri altına uygulanması için, önce 26 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik şırıngayı bir mililitre BCG aşı süspansiyonu ile doldurun ve hava kabarcıklarını çıkarın. Daha sonra anestezi uygulanmış bir fareyi Laminer akış başlığının içine yüzüstü pozisyonda yerleştirin ve hayvanı arka kanatta 100 mikrolitre bakteri ile deri altından aşılayın.

İntranazal uygulama için, 20 mikrolitre BCG süspansiyonu içeren bir mikro pipet yükleyin ve anestezi uygulanmış fareyi başlığın içine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. 20 mikrolitrelik hacmin tamamı birikene kadar aşıyı iki burun deliği arasına damla damla uygulayın ve farenin süspansiyonu solumasına izin vermek için damlalar arasında zaman bırakın. Ardından, mikro pipeti 20 mikrolitre bakteri ile yeniden doldurun ve uygulamayı tekrarlayın.

H37Rv mikrobakteri tüberküloz suşu ile burun içi mücadele için, aşılamadan sonraki uygun deneysel zaman noktasında, hayvanları az önce gösterildiği gibi 40 mikrolitre H37Rv bakteri süspansiyonunun intranazal uygulaması ile aşılayın. Bronkoalveoler lavaj veya top örneğini elde etmek için önce trakeayı ortaya çıkarmak için steril forseps ve makas kullanın. Daha sonra soluk borusunda küçük bir kesi yapın, dokuyu tamamen eksize etmemeye dikkat edin ve 800 mikrolitre buz gibi soğuk PBS içeren steril 1 mL'lik bir şırıngaya bağlı bir kanül yerleştirin.

Kanül yerleştirildiğinde, akciğerleri dikkatlice PBS ile doldurun, ardından en az 500 ila 600 mikrolitre lavaj sıvısını geri kazanmak için pistonu yavaşça geri çekin. Topu buz üzerinde 1,5 mL'lik bir tüpe dağıtın ve süspansiyonun renksiz olduğunu onaylayın, bu da kan kirliliği olmadığını gösterir. Top işlenene kadar numuneleri buz üzerinde saklayın.

Akciğerlerdeki bakteri yükünü ve bağışıklık tepkisini belirlemek için, fareyi Laminer akış başlığının içindeki düz ve dezenfekte edilmiş bir yüzeye sırtüstü pozisyonda iğnelerle sabitleyin ve göğsün üzerindeki üst deride bir kesi yapın. Ardından, torasik bölgeyi ortaya çıkarmak için cildi soyun ve akciğerleri kesin. Akciğerleri ve kalbi toplamak için steril makas ve forseps kullanın ve organları temiz bir yüzeye yerleştirin.

Ardından kalbi, trakeayı ve bağ dokusunu çıkarın. Bakteri yükünün ve hücresel bağışıklık tepkilerinin aşağı akış tayini için her akciğeri buz üzerinde 1 mL deiyonize su ile farklı bir 1.5 mL tüpe yerleştirin. Deri altı yolla karşılaştırıldığında, intranazal aşılama yolu akciğerlerde çok daha fazla koruyucu etkinlik sağlar.

RD9 genom bölgesine özgü PCR ile intranazal BCG aşı grubundan temsili sayıda koloninin analizi, tüm kolonilerin H37Rv'ye karşılık gelen 0.4 kilo-baz çifti fragmanı sağladığını göstermektedir. İntranazal BCG, daha yüksek IL17'yi tetikler ve akciğerlerdeki gama üretimine müdahale eder, bu da intranazal BCG aşısının sağladığı koruyucu etkinlik ile meydan okumadan önce akciğerlerde aşının neden olduğu bağışıklık tepkisi arasında bir korelasyon olduğunu ortaya çıkarır intranazal aşı alıcıları için gözlenen lavaj örneklerinde hem toplam hem de H37Rv saflaştırılmış protein türevine özgü IgA konsantrasyonunun daha yüksek bir konsantrasyonu ile. Tüberküloz temasını takiben akciğerlerde sitokin üreten hücrelerin daha ileri analizleri, tüm enfekte gruplarda gama üreten hücreler üzerinde parazit tespit edilirken, IL17A üreten CD4 + hücrelerinin sadece intranazal BCG grubunda bulunduğunu ve IL17'nin varlığı ile akciğer-bakteri yükünün azaltılması arasında anlamlı bir korelasyon olduğunu göstermiştir.

Bu prosedürü takiben, biyolojik çeşitliliğe sahip tüberküloz aşılarının kullanımında lokal akciğer immüno-yanıtlarının yanı sıra farklı uygulama yolları ve meydan okumadan sonraki zaman noktalarını karşılaştırmak mümkündür. Ek olarak, bu metodoloji, meydan okumadan sonra aşılama tarafından kullanılan bağışıklığı değerlendirmek için kullanılabilir. Bu, koruma ile ilişkili immün yanıtların tanımlanmasına izin verebilir.

Daha da önemlisi, Mycobacterium Tuberculosis ile çalışmak BCL içermeyen laboratuvar tesisleri gerektirir ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman uygun önlemler alınmalıdır.