Name: mikroakışkan Probe ile Canlı Hücre Katmanlar hızlı Subtractive Desenlendirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-15T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
Description: Öğrenin, mikroakışkan prob teknolojisi kullanarak canlı hücre katmanlarında hızlı çıkarma desenlendirmesi yapmayı. Bu yöntem, hücre-hücre etkileşimlerinin yerinde analizi için değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, 7. Çerçeve Programı (Proje No. 311122, BioProbe) kapsamında Avrupa Araştırma Konseyi (ERC) Başlangıç Hibesi tarafından desteklenmiştir. Protokolün ve platformun geliştirilmesi sırasındaki teknik yardım ve tartışmalar için Dr. Julien Autebert ve Marcel Buerge'ye teşekkür ederiz. Prof. Petra Dittrich (ETH Zürih), Prof. Bradley Nelson (ETH Zürih), Dr. Bruno Michel ve Dr. Walter Riess'e sürekli destekleri için teşekkür ederiz.

1. MFP Kafa ve Platform Temizleme ve Hazırlama NOT: Bu protokol MFP 15,16 kafaları dikey yönelimli silikon-cam melez kullanır. kafa silikon bileşeni 100 um derinliğe kadar kazınmış olan mikro kanallar, içerir. kazınmış silikon anodik bağlama ile cama yapıştırılır. Kanal tasarım daldırma sıvı (Şekil 1) enjekte etmek için altı kanal, enjeksiyon ve aspirasyon için iki her iki kapsayan bir modeli ihtiva etmektedir. daldırma sıvısı enjekte etmek için kullanılan kanallar medya böylece nedeniyle aspirasyon ve buharlaşma kayıpları kaçınarak, biyolojik numune çevreleyen doldurmak. iç kanallar ve mevcut işlerinde kullanılan dış kanallar 100 × 100 mm ve sırasıyla 200 × 100 mikron bulunmaktadır. Mesaj imalat ve işleme, açık kanallar ve cilalı apexes ile MFP kafaları elde edilir. <ol><li> Pompa istasyonunun hazırlanması ve sıvı kullanımcihaz <ol><li> şırınga bağlı tüm boru donanımları için 1/16 &#39;&#39; (1.59 mm), dış çap ve 0.02 &#39;(0.51 mm) iç çapı ile kılcal kullanın. uygulamaya göre kılcal boyutu değişir ve şırınga ile MFP kafasını arayüz uygun konnektörleri ve bağlantı parçaları edinin. seyreltmeler gerekli yerde ultra saf su kullanın. </li><li> Temiz şırıngalar (250-500 ul hacmi) ve şırınga saf su önce to- içinde% 0.5 çamaşır suyu çözeltisi içinde sonikasyon ile pistonlara ve canlı hücre deneyleri kaymalı. suyla iyice durulayın. Bir su banyosu içinde tamamen kendi ipuçları çeker ve piston ile aspire su ile doldurun. ise şırınganın çıkışında mühür temas şırınga mili ile su banyosu içinde sıvı temizleyin. hiçbir hava kabarcığı kadar tekrarlayın aspirat ve tasfiye şırınga sütunlarda görülür. </li><li> Luer-lock konnektörler kullanılarak şırınga pompaları dolu şırınga bağlayın. üzerine monte edilmiş bir anahtar vana kullanınPompalar (Şekil 6), MFP kafasına veya sıvı rezervuar ya giden iki kılcal bir şırınga sıvıyı doğrudan. (Anahtar yok vanası varsa bölüm 1.4.4 bakınız). Suyun yaklaşık 10 ul şırınga kalan kadar şırınga büyüklüğüne bağlı olarak, 50 ul / dk - 10 arasında bir akış hızında şırıngalardan su ile iki kılcal temizleyin. </li><li> (- Malzemeleri görmek, örneğin, M1 konnektör) baş kanal yolların ile arayüzleri uygun bir mikroakışkan konnektör / adaptörüne temizlendi kılcal ön takın. </li></ol></li><li> MFP kafa hazırlığı <ol><li> 5 dakika boyunca, katı temizlik için standart temizleme veya% 0.5 ağartıcı bir cam deterjanla sonikasyonla MFP kafasını temizleyin. Suda apeks çeker ve yolların vakum uygulanarak, su ile kanal temizleyin. </li><li> Potansiyel engel (tıkanma) ve yeniden bir stereomikroskop altında kanalları inceleyinönceki adımı gerekirse turba. </li><li> Kafa tutucu temiz kafa monte ve baş üzerine önceden yerleştirilen ve tasfiye boru ile konnektör vida. baş ve hücre tek tabaka arasındaki boşluk mesafesi kontrolü için kullanılan Z-evre, baş tutucu vida. </li></ol></li><li> MFP platformunun tarama aşamalarını kalibrasyonu <ol><li> Uygun bir yazılım arayüzü ile üreticinin protokolüne göre, platforma baş bağlamadan önce X, Y ve Z-aşamalarının son nokta kalibrasyonunu gerçekleştirin. Kalibre aşamaları MFP kafa konumlandırma doğruluğunu sağlamak. </li><li> hücreleri olmadan bir oda slayt üzerinde MFP kafa getirerek (sıfırlama) bir ham sıfır boşluk mesafesini elde etmek ve yavaş yavaş 5 mikron adımda inerler. alt-tabaka ile prob temas ettiği zaman, Newton halkaları dikkat edilmelidir. Bu ham tahmindir. Doğru pozisyon substrat prob apeks coplanarity ayarladıktan sonra elde edilecek olane. </li><li> Prob apeksin coplanarity sağlamak için, (başın arayüzü ve Z&#39;nin aşaması), bir gonyometre ile baş eğimini ayarlar. Oluştuğunda Newton halkaları simetrik (Şekil 1) olduğundan emin olun. alt tabakadan uzak MFP kafa 20 um Taşı ve gonyometre kullanılarak eğimini ayarlayın. Newton&#39;un halkaları yineleyerek iniş, sıfırlama ve eğim ayarlama temas simetriktir. tilt ayarlanabilir ile, sıfır olarak simetrik Newton halkaları üretir z konumunu ayarlayın. NOT: XY substrat tarama (Şekil 2) kontrol oysa Z-aşamalı, head-to-substrat mesafeyi kontrol eder. Ayrıntılı bir açıklama daha önceki çalışmalarında 14 bulunabilir. </li></ol></li><li> Hücre tabakalarının yerel çıkarma için kimyasal müstahzarlar Dikkat: Uygun durumlarda, kullanım güvenlik ekipmanları (örneğin nitril eldiven, koruyucu gözlük) kimyasallar için hazırlanmaktadır. Bir duman hoo kullanınd çözümleri hazırlamak için gerekirse. seyreltici olarak saf su ile tüm kimyasalları ve tamponlar hazırlayın. <ol><li> (Şekil 1 &#39;de akımı Q I2 ile I2), iç enjeksiyon kanalı için işlem sıvısı olarak 50 mM NaOH solüsyonu hazırlayın. </li><li> 1 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA),% 0.5 Tween 20 oluşmaktadır (Şekil 1 &#39;de akımı Q I1 ile I1), dış enjeksiyon için gerekli ekstraksiyon tampon çözeltisi hazırlayın ve 10 uM rodamin B, 50 mM tris (hidroksimetil) aminometan olarak bölgesindeki tasfiye için pH 8, aspirasyon şırıngalar içinde su kullanın. </li><li> 0.2 mikron şırınga filtresi kullanılarak tüm çözümleri filtre. Gazını çözündürüldü hava stop yüzeyine kabarcıklar kadar bir kurutucu kullanarak tüm filtre çözümler. </li><li> şırınga pompaları bağlı tahliye hattı kullanarak, kalan su tasfiye ve şırıngalar (250 veya 500 ul) kadar dolu 40 ul / dk enjeksiyon şırınga içine gazı alınmış çözümler aspire.Bu şırıngalar, konektörler ve kılcal damarların balon ücretsiz dolum sağlar. şırınga anahtarı valf iki kılcal sistem şırınga orta deney doldurulmasını sağlar. Böyle bir anahtar valf yokluğunda, baş kısmından itibaren kılcal ayırın ve baş bunları yeniden bağlanmadan önce gazı alınmış solüsyonlar aspire kılcal ve şırınga doldurun. </li><li> işlem aspirasyon ve kılcal sıvıların koruma işlemi sırasında küçük hacimlerde kullanılması içindir. kimyasal büyük hacimlerde hazırlanabilir ise, doğrudan gerekli çözümler ile şırınga doldurun. Örneğin, su içeren aspirasyon iğneleri Bu yaklaşım kullanılarak doldurulabilir. </li><li> 1.4.1 ve 1.4.2 tanımlanan her bir kanal için ayrılan sıvı MFP kafasına kılcal temizleyin. NOT: ekstraksiyon tampon çözeltisi iç lohusalık ve tamponda rodamin bileşeni NaOH kalkanlar th görüntülenmesini kolaylaştırırÇalışma sırasında hHFC e. </li><li> hücreler, hücre agrega kültür yüzeyinde görünen ile aşırı konfluent iseniz, bu lizat aspirasyon kanalları girdiğinde denatüre proteinler çözerek bu agrega NaOH eylemi tamamlayan 10% Proteinaz K. ile ekstraksiyon tamponu tamamlar. Bu işlem sırasında kanalların tıkanmasını engeller. </li></ol></li><li> Odacıklı slaytlar üzerinde hücre mono tabakaları hazırlanması Dikkat: hücrelerin kültürlenmesi için bir hücre kültürü kaputu kullanın ve laboratuar biyogüvenlik görevlisi tarafından belirlenen düzenlemelere uygun olarak donanım işlemek. Spesifik hücre hatlarının özel gereksinimleri Not ve buna göre protokol ve ekipman uyum. <ol><li> Kültür ve hücrelerin genişlemesi için kullanın hücre kültürü inkübatör (% 5 CO 2 ve 37 ºC&#39;de) desenli edilecek. T şişelerinde standart hücre kültürü protokolleri 17,18 kullanarak genişleme gerçekleştirin. Belirli cel ihtiyaçlarına göre kültürleme ortamı kullanınl hattı (örneğin, serum ve antibiyotik MCF7 ve MDAMB 231 kültürleme için DMEM desteklenmiş). </li><li> Kültür şişelerinde hücre izdiham ulaşan, trypsinize ve hücreleri ve tohum 2 x 10 5 hücre 48 saat boyunca desen ve kültürü için 2 odacıklı slaytlar her / cm2 toplamak. hücre büyümesi ve canlılığı için bir kontrol olarak bölmelerin birinde hücreleri kullanır. </li><li> Oda slaytlar üzerinde hücre kaynaşmaya eriştikten üzerinde, 500 ul hücre izleyici boya çözeltisi ile 45 dakika inkübe hücreleri (örneğin, yeşil - CMRA - CMFDA veya turuncu) serumsuz ortam içinde hazırlanmış olan 10 uM konsantrasyonda. Bu desen sırasında hücre görünüm için yapılır. hafifçe bir pipet kullanarak her odasına kızarma ve desenlendirme deneyleri için serum takviye medyada sonradan kültür hücreleri tarafından PBS ile etiketlenmiş hücreleri yıkayın. </li><li> hücre sayımı amacıyla hücre izci lekeli hücre yüzeyinde bir referans görüntü elde. Bunu sağlamak için yapılırhücre tabakasının birbirine karışmaya. Buna ek olarak, bu örnek kurtarma ve DNA analizi hedefleri ise ölçümü deneyleri için bir yardımcı olarak hizmet vermektedir. NOT: hücre canlılığı desen sırasında değerlendirilecek olması durumunda, hücreler üreticinin talimatlarına uygun olarak bir Live / Dead sitotoksisite kiti ile boyanmış olabilir. </li></ol></li></ol> 2. Oluşturma Hiyerarşik Hidrodinamik Akış Confinement (hHFC) <ol><li> Cam slayt 50 mikron boşluk mesafesi hücre tek tabaka üzerine MFP&#39;yi taşıyın. hHFC temas sağlarken Bu boşluk mesafesi de tek tabaka yüzeyi ve kalınlık değişiminin oluşturmaktadır. </li><li> i2 ile min / 6 veya 8 ul NaOH enjekte edilir. Diğer akış oranlarını değerlendirmek (yani, Q I1, Q A1 ve Q A2) Şekil 3&#39;te akış kurallarını kullanarak. </li><li> Enjeksiyon şırıngalar kullanılarak Q I2 / Q I1 oranını değiştirerek iç HFC boyutunu modüle eder.300 hücre - Örneğin, 150 NaOH kaplayan sonuçlanan 8 ul / dk sabit S I2 ile 1.3 ul / dk ve 4 ul / dk arasında bir S I1 kullanımı (100-200 mikron 2 / hücre) ( Şekil 3D). </li><li> hHFC çalışması sırasında ortam ve aspirasyon buharlaşmanın hesaba 20 ul / dk&#39;lık bir akış oranında, MFP kafasına en dış açıklıklardan tam orta enjekte edilir. </li></ol> hHFC kullanılması 3. Desen hücre tekli katmanlarına Not: Tarama deseni, belirli biyolojik soruları incelemek için kalan hücreleri bırakarak hücreler ayıklanır hücre tek tabaka (eksiltme desenlendirme) alanları belirler. Bu model, örneğin, düz çizgiler veya noktalar halindeki düzeni olabilir. Karmaşık desenler, uygun bir tarama yörüngesinin tasarım gerektirir. Örneğin, bir kareli tarama yörünge Şekil 4A, örneğin gösterilen hücre alanlarında ızgara (içerir </strong&gt;), yakın olurken farklı meydanlarda hücreler üzerinde farklı uyaranların etkisini incelemek sağlayacak olan. Bu modeller kontrol yazılımı hücre tek tabaka üzerinde MFP kafa tarama yörüngeleri komut dosyalarına izin veren bir platform, XY aşamalarında kontrol kullanılarak oluşturulabilir. <ol><li> 50 um arasında bir boşluk mesafesi 10 mm / s&#39;lik bir tarama hızında (X, Y ve Z koordinatlarını belirleyerek), kullanıcı tanımlı desen hücre tek üzerinde sondaj kafası tarama aşaması yazılımı ayarlayın. </li><li> İç içe hHFC işlemi ve tek tabaka ile temas halinde olan, desenli hücre çıkarılmasını sağlamak için arzu edilen modelin bir yörünge ile MFP tarar. </li><li> İlk hücre tipi çıkarıldıktan sonra, bir ko-kültür için, bölüm 1.5&#39;de tarif edilen yöntemler kullanılarak, boşlukları doldurmak için farklı bir hücre hattı tohum. Hücre kaldırma kontrol etmek için (örneğin, boşluk mesafesini artırarak) iç içe ve sıkışmak modlar arasında taşıyın. NOT: Tarama hızı da inceledik olmak zorunda kalabilirsinizDiğer hücre çizgileri için kapı. kullanılan hücre hatları için taranan bölgeler üzerinde bu gösteri etkileri tam hücre çıkartılmasında kullanılan tarama hızı. </li></ol> Örnekleme ve DNA Amplifikasyon 4. Alt İşleme <ol><li> lizat aşağı analizleri için numune alma istasyonu hazırlayın. Örnekleme istasyonu için, 3D 8-şerit PCR tüp tutucu baskılı kullanın. Alternatif olarak, alt tabakanın dışında kafa tarama aralığında monte edilebilen bu adaptör olarak hizmet verecek uygun bir tüp tutucu seçin. % 70 etanol ya da uygulama için istenen sertlik dayalı diğer yüzey dekontaminasyonlara tüp tutucu silin. substrat tutucu üzerine takmak için tüp tutucu üzerindeki manyetik klibi kullanın. </li><li> örnekleme istasyonu hazırladıktan sonra, tek tabaka MFP kafası 100 mikron yerleştirin. 1 akış hızı, 6 iç enjeksiyon kanalı için işlem sıvısı olarak 50 mM NaOH çözeltisi ile hHFC işletim başlayın, -7 Ve -17,5 ul / sırasıyla S I1 Q I2 Q, A1 ve Q A2 dak. <ol><li> Akış sınırlayıcı (yaklaşık 10 saniye içinde) stabilize edildikten sonra hHFC hücrelerin seçilen alt nüfusun NaOH dayalı yerel lizizi gerçekleştirmek için 50 um arasında bir boşluk mesafesi sondaj kafası inerler. alt nüfusun lizis tamamlandı (ayak izi başına yaklaşık 30 sn) sonra, örnekleme istasyonunda tüpler doğru başını yönlendirin. PCR tüplerine toplanır lizat çıkarma doğrudan (Şekil 6). </li></ol></li><li> Lizat sonraki işlem, ilk Tris tamponu (1: 1) ile lisat karıştırılarak çözeltinin pH nötralize eder. Nötralize edilmesinden sonra, 30 dakika boyunca 95 ° C lizat ısıtın. Cihazın tedarikçisi tarafından belirlenen daha sonra doğrudan standart bir qPCR iş akışına lizat yükleyin. </li></ol>

<ol><li>Théry, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterning+as+a+tool+to+decipher+cell+morphogenesis+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Micropatterning as a tool to decipher cell morphogenesis and functions.</a> J. Cell Sci. 123 (Pt 24), 4201-4213 (2010).</li>
<li>Goubko, C. A., Cao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+multiple+cell+types+in+co-cultures%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Mater.+Sci.+Eng.+C%22%5BJournal%5D)">Patterning multiple cell types in co-cultures: A review.</a> Mater. Sci. Eng. C. 29 (6), 1855-1868 (2009).</li>
<li>Kaji, H., Camci-Unal, G., Langer, R., Khademhosseini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+systems+for+the+generation+of+patterned+co-cultures+for+controlling+cell-cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">Engineering systems for the generation of patterned co-cultures for controlling cell-cell interactions.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1810 (3), 239-250 (2011).</li>
<li>Cho, C. H., Park, J., Tilles, A. W., Berthiaume, F., Toner, M., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layered+patterning+of+hepatocytes+in+co-culture+systems+using+microfabricated+stencils%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Layered patterning of hepatocytes in co-culture systems using microfabricated stencils.</a> Biotechniques. 48 (1), 47-52 (2010).</li>
<li>Schütze, K., Lahr, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+expressed+genes+by+laser-mediated+manipulation+of+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Identification of expressed genes by laser-mediated manipulation of single cells.</a> Nat. Biotechnol. 16 (8), 737-742 (1998).</li>
<li>Salazar, G. T. A., Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropallet+arrays+for+the+separation+of+single%2C+adherent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Micropallet arrays for the separation of single, adherent cells.</a> Anal. Chem. 79 (2), 682-687 (2007).</li>
<li>Guillaume-Gentil, O., Zambelli, T., Vorholt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+single+mammalian+cells+from+adherent+cultures+by+fluidic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Isolation of single mammalian cells from adherent cultures by fluidic force microscopy.</a> Lab Chip. 14 (2), 402-414 (2014).</li>
<li>Iwata, F., Adachi, M., Hashimoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+scraper+based+on+an+atomic+force+microscope+for+detaching+a+living+cell+from+a+substrate%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">A single-cell scraper based on an atomic force microscope for detaching a living cell from a substrate.</a> J. Appl. Phys. 118 (13), (2015).</li>
<li>Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+wound-healing+assays+for+probing+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lab.+Autom%22%5BJournal%5D)">Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration.</a> J. Lab. Autom. 17 (1), 59-65 (2012).</li>
<li>Juncker, D., Schmid, H., Delamarche, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipurpose+microfluidic+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">Multipurpose microfluidic probe.</a> Nat. Mater. 4 (8), 622-628 (2005).</li>
<li>Kaigala, G. V., Lovchik, R. D., Delamarche, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics+in+the+%26%2334%3Bopen+space%26%2334%3B+for+performing+localized+chemistry+on+biological+interfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Microfluidics in the &#34;open space&#34; for performing localized chemistry on biological interfaces.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 51 (45), 11224-11240 (2012).</li>
<li>Qasaimeh, M. A., Gervais, T., Juncker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+quadrupole+and+floating+concentration+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microfluidic quadrupole and floating concentration gradient.</a> Nat. Commun. 2 (May), 464(2011).</li>
<li>Christ, K. V., Turner, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+hydrodynamically+confined+microfluidics%3A+controlling+flow+envelope+and+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Design of hydrodynamically confined microfluidics: controlling flow envelope and pressure.</a> Lab Chip. 11 (8), 1491-1501 (2011).</li>
<li>Autebert, J., Kashyap, A., Lovchik, R. D., Delamarche, E., Kaigala, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+hydrodynamic+flow+confinement%3A+efficient+use+and+retrieval+of+chemicals+for+microscale+chemistry+on+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Hierarchical hydrodynamic flow confinement: efficient use and retrieval of chemicals for microscale chemistry on surfaces.</a> Langmuir. 30 (12), 3640-3645 (2014).</li>
<li>Kaigala, G. V., Lovchik, R. D., Drechsler, U., Delamarche, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Vertical+Microfluidic+Probe%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">A Vertical Microfluidic Probe.</a> Langmuir. 27 (9), 5686-5693 (2011).</li>
<li>Cors, J. F., Lovchik, R. D., Delamarche, E., Kaigala, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+compact+and+versatile+microfluidic+probe+for+local+processing+of+tissue+sections+and+biological+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Instrum%22%5BJournal%5D)">A compact and versatile microfluidic probe for local processing of tissue sections and biological specimens.</a> Rev. Sci. Instrum. 85 (3), 034301(2014).</li>
<li>Pollard, J. W., Walker, J. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPollard%2C+JW+%22Basic+Cell+Culture+Protocols%22">Basic Cell Culture Protocols</a>. , Humana Press. (1997).</li>
<li>Mitry, R. R., Hughes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cell+culture+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol.+Springer%22%5BJournal%5D)">Human cell culture protocols.</a> Methods Mol. Biol. Springer. 531 (1), (2012).</li>
<li>Sakai, K., Ushida, T., Nagase, T., Nakamigawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+cell+detachment+by+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mater.+Sci.+Eng.+C%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of cell detachment by shear stress.</a> Mater. Sci. Eng. C. 17 (1-2), 55-58 (2001).</li>
<li>Rodriguez, N. M., Desai, R. A., Trappmann, B., Baker, B. M., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterned+multicolor+dynamically+adhesive+substrates+to+control+cell+adhesion+and+multicellular+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Micropatterned multicolor dynamically adhesive substrates to control cell adhesion and multicellular organization.</a> Langmuir. 30 (5), 1327-1335 (2014).</li>
<li>Tasoglu, S., Demirci, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioprinting+for+stem+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Bioprinting for stem cell research.</a> Trends Biotechnol. 31 (1), 10-19 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz mekansal tanımlanan hücre modellerinin hızlı nesil sağlar hücre mono tabakaları çıkartımsal desenlendirme için çok yönlü bir protokol mevcut. hücre mono tabakaları seçici parçalama hHFC işleme sıvısı olarak NaOH kullanılarak gerçekleştirilir. NaOH anında hücre zarında bulunan proteinleri denatüre. Biz lizat aşağı işlenmesini sağlamak için NaOH, 50 mM konsantrasyonu kullanılması tavsiye edilir. Bu konsantrasyon, Resim lizat akış aşağı işlem bir amaç değildir, daha hızlı hücre çıkarılması için arttırılabilir. hHFC hücre tek tabaka işlenmemiş çevresinde etkilenmeden kalır ve desen genişleterek veya diğer hücre özellikleri yoklamada biri için kullanılabilir olmasını sağlar. Hücre çıkarılması akış oranı tarafından sunulan kimya ve kesme hem de bir fonksiyonudur. Biz kimya baskın hücre kaldırılmasını sahip akış oranlarının bir işletim aralığını seçin. 20 &amp; # - 10 Tarama hızları181 m / 6 NaOH enjeksiyon akış hızı kullanılarak san - 8 ul / dak &#39;hızlı&#39; eksiltici model vermenin kolaylaştırılması için kullanılır. Hücre çıkarılması hızlı kuruna dayalı desenlendirme 20,21 yaklaşımları yüzey baskı ile karşı karşıya bazı zorluklar giderir. Bu yöntemler, mikro temasla baskı ve kalıp elde etmek için hücrelerin daha sonra tohumlama yoluyla hücre yapışma proteinlerinin seçici çökelme, örneğin, mekansal olarak tanımlanan bir alanda hücrelerinin büyümesini sınırlamak için bir mekanizma gerekmektedir. Onlar düşük işlem hacmi ile sınırlı ve desen üretimi için birkaç sıralı adımları yanı sıra her bir model için yeni bir şablon / damgası gerektirir. Hücre kültürü substrat herhangi bir ek tedavi gerektiren değil ise açıklanan yöntem, belirlenen alanlarda hücrelerin seçici büyümesini gerektirir ve baskı aksine eksiltici desenlendirme yaparak çeşitli sınırlamalar üstesinden değildir. Bu yazıda belirtilen protokol desenlendirme hücre mono tabakaları throughputOluşturulan modelin anında görsel geri bildirim elde ederken, artar. Bu desen gerçek zamanlı değişiklik kolaylaştırır. Bu kontrol bir yüzey üstünde hücre canlılığı, homojen olmadığı, senaryolarda önemli olabilir. Yöntemin diğer bir avantajı, aynı kafa ve kimya, böylece bir model verilmiş hücre tekli tabakası üreten aşama sayısı azalır birden desenleri oluşturmak için kullanılabilir olmasıdır. baş kanalları ve baş geometri boyutları dolayısıyla desenlendirme kararı üzerinde kontrol sağlayan, uygulamanın gereklerine göre ölçeklendirilebilir. Mevcut çalışma bölgesindeki tüm deneyler 200 x 100 um 100 x 100 um ve dış delikler de, iç delikler ile özel olarak ise, sabit açıklık boyutları ile MFP kafası kullanılarak yapıldı. Daha büyük dış deliklere sahip Bu tasarım ile deliklerin tıkanmadan hHFC sürekli çalışmasını sağlamak için seçilmiştirbaşıboş hücre artıkları. Biz cep çıkarılması başarılı sonuçlarla, iç diyafram boyutları 50 × 50 um ve aralarında 50 mikron boşluk başlarını test ettik. aşağı 10 × 10 mm 10 mm aralıklı küçük açıklıklar kullanılması, böylece desen daha yüksek bir çözünürlük sağlayan küçük bir ayak izi boyutu (~ 30 × 30 mikron) için ölçekleme izin verebilir. diyafram nedeniyle parçacıklardan tıkanma daha küçük 10 mikron boyutlarında ile operasyonel sorunlar görülmektedir. Çünkü bu tür operasyonel zorlukların, 100 mikron çözünürlük mevcut limit ve açıklanan tekniğin böylece bir sınırlama yoktur. Ancak, biz hHFC sıvı şekillendirme yeteneğini kullanarak bu ele alabilir. Biz cep çıkarılması çözünürlük Q I2 / Q I1 kontrol ederek diyafram boyutları belirli bir kümesi için ayarlanmış olabilir olduğunu göstermiştir (Şekil 4b) ve apeks-to-substrat boşluğu 10,14. Mevcut çalışmada kullanılan aşamalar 100 nm en az bir adım boyutuna sahiptir.Bu kontrol parametrelerin kombinasyonu ayak izi boyutu ve tarama mesafe açısından hücre kaldırma uzaysal çözünürlüğü artırabilir. desenli ko-kültürler farklı hücre tipleri arasında, belirli bir hücre-hücre etkileşimini incelemek arzu edilirse, sıralı tohumlama ve örnekleme tanımlanan protokol kullanılarak gerçekleştirilebilir. Son olarak, yüksek kalitede amplifikasyona tabi tutulabilen DNA DNA tekil zirve ile belirgin olarak, lizat elde edilebilir eğrisi (bakınız Şekil 7) eritin. Biz yaklaşık 1.6 teorik beklenti (6-8 pg / hücre) yakın qPCR kullanarak tek bir ayak izi (yaklaşık 300 hücre), ng DNA miktarını değerlendirdi. Bu, herhangi bir DNA izolasyon yöntemlerinin kullanımını kalmayabilir ise birkaç sonraki işlemler için uygun çıkarılan DNA miktarını gösterir. Bunun için yollar açılır kültür hücrelerinin sondalama yerel DNA analizi tabanlı. sıvı şekil hHFC kabiliyeti de AC canlı hücreleri ve proteinleri biriktirilmesi için kullanılabilirBu protokol sunulan eksiltici desen ve sıralı eş-kültür ile kombinasyon halinde kültür substratlar üzerinde karmaşık bir hücre ve hücre-matris modelleri oluşturulmasını sağlar genelinde ekili yüzeyler. çok yönlülük ve hHFC tabanlı Eksiltici hücre mono tabakaları desen ve çıkarılan hücrelerde DNA analizi gerçekleştirerek olasılığı tarafından sağlanan denetim, hücre etkileşimleri içeren mekansal çözülmesi çalışmaları gerçekleştirmek için biyologlar ayarlanmış yeni ve güçlü bir araç sağlar.

onların doğal ortamında, biyolojik dokularda hücrelerin büyüme, organizasyon ve gelişimini yönlendiren biyokimyasal ve fiziksel ipuçları bir dizi algılarlar. Bu işaretler anlama hücre-hücre ve hücre-matris etkileşimlerinin incelenmesinde seçici gerektirir. Bu desenlendirme hücre tek tabakalarında yöntemleri geliştirilmesini gerekli kılmaktadır. Yöntemler kültürü (desenleme) &#39;de geometrik ayrı farklı hücre tipleri, hücre biyolojisi fiziksel ve kimyasal ipuçları geniş çalışmalar etkinleştirin. Desenlendirme hücre katmanları güncel yaklaşımların çoğu 1-4 yüzeylerde hücre yapışma proteinleri yatırma veya yüzeylere seçici büyüme için microfabricated kalıpları kullanarak bağlıdır. Buna karşılık, burada tek tabaka seçilmiş bölgelerde hücreleri ortadan kaldırarak, kültürde hızla desen hücre yani yerinde mono tabakaları, hücreler bir yöntem mevcut. 9 usua - böyle Eksiltici desenlendirme 5 gerçekleştirmek YöntemlerLly yanlışlıkla canlı hücreleri etkileyen bir lazer kullanarak özel yüzeyler, yüzey işleme, karmaşık bir işlemdir, fiziksel temas veya ablasyon gerektirir. Burada mikro-akışkan prob (MFP) 10,11, hidrodinamik bir alt-tabaka üzerinde bir sıvı sınırlayan bir temassız tarama mikroakışkan teknolojiyi kullanır. MFP önemli bir bileşeni mikrokanalların içeren microfabricated kafa (Şekil 1). Ilişkili bir platform kontrol ve görselleştirme ve geribildirim (Şekil 2) için ters bir mikroskop taranması için enjektör sıvı kontrolü için pompa, aşamadan oluşmaktadır. Temel konfigürasyonunda, MFP kafası ile bir işleyici sıvı ve bazı daldırma sıvısı (Şekil 3A) ile birlikte enjekte işleme sıvısının emilmesi için diğer enjekte edilmesi için apekste açıklıklar, iki mikro kanallar, birini içerir. MFP işlemi sırasında, apeks alt-tabaka sabit bir mesafede yer almaktadır. Ne zaman aspirasyon debisi (Qa) sufficie olduğunuörneğin, enjeksiyon akış hızı (Q I), den diğer yönden başkaları baskın yüksek Q: içerisinde Q, ≥ 2.5, işlem bir sıvı alt tabaka üzerinde sınırlandırılmıştır. Bu hidrodinamik akış hapsi (HFC) ile sonuçlanır. işlem, sıvı alt-tabaka ile doğrudan temas halinde olan bölge ayak izi olarak adlandırılır. Tipik çalışma koşulları için, HFC içinde işleme sıvının akış düşük Reynolds sayısı ile karakterize edilir (≈ 10 -2 Re) ve yüksek Péclet numarası (Pe ≈ 10 2). Bu konveksiyon kimyasal türlerin kütle transferi primer modu olmak laminer rejimde sıvı akışlarını ifade eder. 14 - Akış hapsi için sayısal ve analitik modeller başka bir yerde 12 tarif edilmiştir. Bu yazıda, hiyerarşik HFC (hHFC) 14 denir aynı anda hapsetmesi çoklu işlem sıvıların yaklaşımını kullanır. MFP ile hHFC uygulamak için, iki additional açıklıkları enjeksiyon ve aspirasyon ikincil kaynağı sağlamak için gereklidir. Bu, ikinci bir sıvı içinde bir sıvı sınırlandırmak için bize sağlar. , iç (işleme) sıvı faydaları dış (perdeleme) sıvı ile tabaka üzerinde başıboş enkaz korunmalı edilir. Buna ek olarak, hHFC iki mod işlemi sağlar: (i) iç içe mod, burada iç HFC temas yüzeyi (Şekil 3B), ve (ii) sıkışması mod, burada iç taraftaki sıvı kaybeder işlem sıvı temas ve yalnızca dıştaki sıvı alt-tabaka (Şekil 3C) ile temas halindedir. Iki mod arasında geçiş kullanıcılar etkileyecek veya alt tabakayı işleme durdurmak için izin verir ve baş-yüzey boşluğu kontrol ederek ya da enjeksiyon akışları arasındaki oranı (Q i2 / Q i1) değiştirerek elde edilir. Belirli bir kanal geometrisi için, alt-tabaka üzerinde işlem sıvısının izi akış koşulları (Şekil 3D) düzenlenmesiyle kontrol edilebilmektedir. sodyum hydroksit (NaOH) hücreleri lize etmek için bir iç işleme sıvısı olarak kullanılır, ve lizat sürekli yüzey aspire edilir. işleme sıvısının kimyasal etkileri, iç HFC kaplayan lokalize olduğundan, komşu hücreler, hücre-hücre etkileşimleri uzaysal çalışmaları sağlayan, soğukkanlı kalır. MFP tarama işlevselliği hücre modellerinin kullanıcı tanımlı geometriler (Şekil 4) oluşturulmasını sağlar. Bundan başka, işlem bir sıvı olarak NaOH seçimi alt DNA analizi (Şekil 7) barındırır.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Materials</strong</td></tr><tr><td>>Microfluidic Probe (MFP)</td><td></td><td></td><td>Silikon/cam hibrit prob kafası, silikon desenli kanallara sahip. IBM Research - Z&uuml'da şirket içinde yapılan üretim; </td></tr><tr><td>2 odacıklı zengin Lab Tek II Oda slaytları</td><td>ThermoFisher scientific, ABD</td><td>154461</td><td>Her biri 4 cm2 alan sağlayan ve 3 ml'ye kadar ortam hacmi</td></tr><tr> tutabilen hücre kültürü için 2 odacıklı hazneli slaytlar<td colspan="4">Kimyasallar ve hücre hatları</td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit, Tris-Cl, Etilendiamintetraasetik asit, Rhodamine B</td><td>SigmaAldrich kimyasalları, ABD</td><td>S5881, 252859, &nbsp; E9884, R6626</td><td>Sıvıların işlenmesi ve korunması için kullanılan kimyasallar</td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Qiagen, Almanya</td><td>19131</td><td>denatuired proteinleri sindirmek için proteaz</td></tr><tr><td>Deconex 16 Plus</td><td>Bohrer Chemie, İsviçre</td><td></td><td>Laboratuvar sarf malzemeleri için üniversal temizlik maddesi. Sıkı olmayan temizlik için kullanılır.</td></tr><tr><td>DNA uzakta&nbsp;</td><td>ThermoFisher scientific, ABD</td><td>7010</td><td>DNA ve DNAazları denatüre eden yüzey dekontaminant.</td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikoz, GLUTAMAX takviyesi</td><td>ThermoFisher scientific, ABD</td><td>10566-016</td><td>Epitel hücreleri için kültür ortamı.</td></tr><tr><td>CellTracker Yeşil CMFDA boyası</td><td>ThermoFisher scientific, ABD</td><td>C7025</td><td>Membran permean canlı hücre etiketleme boyası. Boya 72 saat boyunca aktiftir.</td></tr><tr><td>CellTracker Turuncu CMRA boya</td><td>ThermoFisher scientific, ABD</td> qPCR Entegre DNA teknolojileri için <td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-aktin genomik primerler</td><td>, ABD</td><td></td><td>DNA kalite doğrulaması ve qPCR için kullanılan özel oligolar.</td></tr><tr><td>MCF7 meme karsinomu hücreleri</td><td>ATCC, ABD</td><td>ATCC HTB-22</td><td>Ko-kültürleri üretmek için kullanılan hücre hatları.</td></tr><tr><td>MDA-MB-231 meme karsinomu hücreleri</td><td>ATCC, ABD</td><td>ATCC HTB-26</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><güçlü>Ekipman ve akışkan bağlantıları</güçlü></td></tr><tr><td>Motorlu yüksek hassasiyetli aşamalar</td><td>Özel işlenmiş bileşenler.&nbsp; LANG GmBH, Almanya'dan lineer eksen motorları</td><td>LT serisi 3 ve zamanlardan özelleştirilmiş lineer eksen aşamaları</td><td>; 3 eksen için LT. RS 232 portu üzerinden aşamaları ve PC'yi arayüzlemek için kullanılan LSTEP denetleyicisi.</td></tr><tr><td>Şırıngalar</td><td>Hamilton, İsviçre</td><td>1700 TLLX serisi</td><td>Diğer üreticiler tarafından sağlanan şırıngalarla 250-500 & mikro; l aralığı.</td></tr><tr><td>Nemesys düşük basınçlı şırınga pompaları</td><td>cetoni GmbH, Almanya</td><td></td><td>Pompa istasyonu bileşeni.</td></tr><tr><td>Dairesel M1 konektörlü</td><td>Dolomit mikroakışkanlar, Birleşik Krallık&nbsp;</td><td>3000051</td><td>MFP kafasındaki yollar ile boru arasındaki arayüz</td></tr><tr><td>Eğim/dönüş aşaması Gonyometre</td><td>OptoSigma, ABD</td><td>KKD-25C</td> MFP apex DS Fi2 HD renkli kameranın (CCD) <td>eş düzlemliliğini ayarlamak için gonyometre</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Nikon, İsviçre</td><td></td><td>DS-U3 kontrol ünitesi kullanılarak kontrol edilir</td></tr><tr><td colspan="4">Software</td></tr><tr><td>Win - Commander</td><td>LANG GmBH, Almanya</td><td></td><td>Sahne kontrol yazılımı.</td></tr><tr><td>Qmix Elements</td><td>cetoni GmbH, Almanya</td><td></td><td>Pompa kontrol yazılımı.</td></tr><tr><td>NIS Elements</td><td>Nikon, İsviçre</td><td></td><td>Görüntü elde etme ve analiz için temel araştırma modülü.</td></tr></tbody></table>

mikroakışkan probe ile canlı hücre katmanlar hızlı subtractive desenlendirme

Rapid Subtractive Patterning of Live Cell Layers with a Microfluidic Probe

mikroakışkan prob (MFP) sıvıların nanoliter hacimleri hapsederek biyolojik yüzeylerde lokal kimya performans kolaylaştırır. MFP hiyerarşik hidrodinamik akış hapsi (hHFC) arasında belirli bir uygulama kullanılarak, çok sayıda sıvı aynı zamanda bir alt-tabaka ile temas halinde getirilir. hHFC kullanarak yerel kimyasal eylem ve sıvı şekillendirme, yerel parçalama ve hücreleri ortadan kaldırarak hücre desenleri oluşturmak için yararlanılır. MFP tarama yeteneği kullanarak, hücre mono tabakaları kullanıcı tanımlı desenler oluşturulur. Bu protokol, hızlı, gerçek zamanlı ve seçici hücre-hücre ve hücre-matriks etkileşimi çalışmaları izin verebilir mekansal kontrollü hücre desenlendirme, sağlar.

Hücre mono tabakaları hızlı eksiltici desen için kullanılan protokol (Şekil 1 ve 2), bir çok bileşenli MFP platformu kullanılarak gösterilmiştir. Yerel tedavi ve işleme sıvısı olarak NaOH kullanılarak, hücre mono tabakaları hücreleri çıkarmak için (Şekil 3 hHFC) protokolü hiyerarşik hidrodinamik akış hapsi kullanır. hHFC yapılandırması, bir iç ve bir dış HFC HFC içerir. İç hHFC hapsedilmiş NaOH temas hücreleri üzerinde kimyasal eylem ve kesme tanıttı. Bu ayak izi içinde, hücreler homojen içinde ve lohusalık dışında bölgeye önemsiz difüzyon ile konveksiyon tahrik kütle transferi nedeniyle, NaOH kimyasal etkisine maruz kalmaktadır. Öte yandan hücreleri üzerinde kesilme, NaOH akış hızı değiştirilerek değiştirilebilir. Operasyonel parametreleri basitleştirmek için, biz kesme kıyasla kimyasal aksiyon hücre çıkarılması baskın mekanizma yapmayı tercih etmiştir. içinyüzeyde hHFC tarafından uygulanan kesme kuvveti tahmin sonlu eleman modeli Comsol Multiphysics 5.0 kullanılarak inşa edildi. Simülasyonlar laminer akışlar için CFD modülü kullanılarak yürütüldü. Enjeksiyon geometrisinin açıklıklar ve aspirasyon açıklıklanna iki çıkış sınır koşulları (Şekil 5), iki giriş sınır koşulları mevcut tasvirde kullanılan akış oranları ve açıklık boyutları aralığı için uygulanmıştır. debileri yüzeyde kesme büyüklüğünü tanımlanan oysa elde edilen modelde, akış kuralları, kesme profili dikte. hHFC temas eden yüzey ise pratik olarak, her ikisi de bir arada tespit eder. Akılda bu faktörler tutmak, biz kimyasal baskın hücre kaldırma elde etmek amacıyla operasyon için akış oranlarının bir dizi bulmak için yola çıktı. Bir hHFC oluşturmak için, biz 3.5 enjeksiyon debisi oranı toplam aspirasyon akış kuralı kullanın. kullanılan diğer akış kuralları aspirasyon kanalları içinde tıkanma en aza indirmek için tanımlanmıştır,hangi kanalı yüzeylere yapışmasını denatüre proteinlerin neden olabilir. Gelişmiş modeli kullanarak, 1 ve 3 N / m2 arasında bir kesme stresi 5 ile 10 ul / dk akış hızında çeviri bulundu. NaOH kimyasal etki olmadan, ekstraksiyon tamponu durumunda, örneğin, kayma gerilimi hücreleri 19 kaldırmak için yeterince yüksek değildir. Gözlenen aralığında, daha yüksek akış hızlarında bu işlemi nedeniyle kanallarda hücre artıkları düşük aspirasyon akış oranları (yani, Q, I2 &lt;4 ul / dk), akış yolu içinde düzensizlikler nedeniyle daha pratik edin. Çalışılan kesme profili ve pratik sorunlar, 6 ve 8 ul / dak NaOH akış hızını (Q I2) göz önüne alındığında desen deneyleri ve Şekil 3&#39;te gösterilen akış kurallarına göre Q I1 Q A1 ve Q A2 kullanılmaktadır. Oranının enjeksiyon akımlarının (Q I2 / Q I1) u veriyors fazla Autebert ve ark., 14 tarafından ortaya yatan ilke, hHFC ayak izi (Şekil 3B ve Şekil 4B) boyutunu modüle etmek. MFP platformunun yüksek çözünürlüklü tarama yeteneği ile birleştiğinde hHFC sıvı şekillendirme yeteneğini kullanarak, birden fazla ölçeklerde canlı hücre ızgara nesil göstermek ve ayrıca eş-kültürleri (Şekil 4C) gelişmekte verilen protokolün uygulanmasını göstermektedir. Platform ayrıca bize aşağı analiz için örnek lizat alımı gerçekleştirmek için olanak sağlar. Elde edilen lizat kalitesini göstermek için, yerel olarak lizat (Şekil 7) elde edilen DNA miktarlarda değişimini gösteren iki bağımsız deneyin bir beş ayak hücreleri lize örneklenmiş. GGATGCAGAAGGAGATCACT ve ters: Burada, DNA ileri (β-aktin primerler kullanılarak lizat bulunan yükseltildi CGATCCACACGGAGTACTTG<html> ) Her PCR nötralize lizat 4 ul kullanılmıştır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54447/54447fig1.jpg" /> MFP platformu ve baş Şekil 1. Modüller. (A) platformu operasyonel modülleri şırıngalar, motorlu aşamaları ve bir kontrolör motorlu içermektedir. MFP baş ve alt-tabaka arasındaki boşluk mesafesi kontrol etmek için bir motorlu Z-aşamasına bağlıdır ve alt-tabaka tutucu X ve tarama sistemini oluşturan Y motorlu aşamaları bağlanır. Cilalı tepe çıkar MFP kafa Z-sahneye kafa monte etmek montaj delikleri pompalama istasyonunu bağlamak için akışkan VIAS vardır (B) ve kanallar. tepe hücre kültür alt-tabaka, ortak düzlemli ayarlanır. apeks ve yüzey ortak düzlemli ve temas olduğunda simetrik Newton halkaları görülebilir.<html> p_upload / 54447 / 54447fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54447/54447fig2.jpg" /> Şekil 2. MFP platformu. Yüksek çözünürlüklü tarama platformu işlenmiş kafa tutucu yüksek hassasiyetli motorlu Z-evre ile arabirim ile donatılmıştır. Alt tabaka tutucu amaçlı tarama için XY sahneye bağlanır. alt analiz için lizat elde edilmesi için, 3 boyutlu bir baskılı numune istasyonu (ust ilavesinde gösterilen) alt-tabaka tutucunun yanına manyetik kırpılır. Şırınga pompalar, ters mikroskop, kontrolörler ve görüntüler platformu çevresinde bulunmaktadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54447/54447fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 3 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54447 / 54447fig3.jpg &quot;/&gt; Hücre kaldırma mekansal ve zamansal kontrol için Şekil 3. Hiyerarşik hidrodinamik akış hapsi (hHFC). (A) tek bir HFC şematik. (B) iç içe hHFC işlem (C) sıkışmasını modu. İki farklı enjeksiyon / aspirasyon akış oranları için ayak izi (D) Görüntü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54447/54447fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54447/54447fig4.jpg" /> Şekil MFP&#39;yi kullanarak hücre mono tabakaları 4. Desenler. Bir MDA-MB-231 hücre tek tabaka MFP programlı tarama ile (A) Hücre ızgara nesil. Hücreler yeşil hücre izci boya ile boyandı. (B) n farklı enjeksiyon oranları için ayak izi () Bir MCF7 hücre tek tabaka. Şematik bir N bir değişiklik ile, iç HFC şeklinde beklenen değişimini göstermektedir. (C) çıkarılır bölgelerde MDA-MB-231 hücrelerin ekim ardından MCF7 tek tabaka eksiltici desenlendirme ile ko-kültür Desenli. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54447/54447fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54447/54447fig5.jpg" /> Yüzeyde Şekil 5. Kesme gerilmesi hHFC. Doğrusal iç enjeksiyon debisi ile yüzey kısma ilişkin kayma gerilimi uygulama. En yüksek kayma noktası iki iç işleme sıvı sınırlı delikler (sağ alt resim), (kırmızı akış hatları, sol üst içerlek) arasında bulunmuştur. sonlu eleman modeli kullanılan diyafram boyutları 200, 100, 100 ve I1 200 um olan, I2, A1ve a2, sırasıyla. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54447/54447fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/54447/54447fig6.jpg" /> MFP platformu Şekil 6. Çalışma modları. Hücre çıkarma ve desenlendirme gerçekleştirmek hücre parçalama tarafından eksiltici desenlendirme için akış yolunun (A) şematik için. Kolaylık olması açısından, her enjeksiyon ve aspirasyon akış yolları tek gösterilmiştir. şırıngalar pompalarda tahliye vanasını kullanarak doldurulur. I1 ve I2 sırasıyla ekstraksiyon tamponu ve NaOH enjekte etmek için kullanılır. Lizat geri kazanımı için akış yolu (B) şematik. Bu akış yolu (A) &#39;daki akış yolunu kullanarak analiz için hücre lizatının toplandıktan sonra aktive edilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54447/54447fig6large.jpg" target="_blank">Tiklayiniz lütfen</a>Bu rakamın büyük halini görmek için buraya k. <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/54447/54447fig7.jpg" /> QPCR kullanılarak hücre lizatından DNA Şekil 7. Alt analizi. 5 ayak (5 FP) ve 1 ayak izi (1 FP) elde lizat DNA (A) amplifikasyon çizimini. Kontroller Her iki durum için lizat toplandıktan sonra çıkarıldı. (B) ile ekstre DNA kalitesini gösteren lizattan amplifiye DNA eğrileri eritin. qPCR yapılan (N = 2, n = 3). β-aktin gen yükseltmek için olan <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54447/54447fig7large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil S" src="/files/ftp_upload/54447/54447figS.jpg" /> Şekil S1. 6-kanal MFP başı için kanal tasarımının bir ölçekli görüntühHFC performans desen deneylerde kullanılır. Kanallar, derin 200, 100, 200 um genişliğinde 100, ve 100 mikron. daldırma sıvı doldurmak iki dış kanal, 500 mikron genişliğinde ve 100 mikron derin. Aynı tasarım için bir GDS dosyası bu makaleye bir tamamlayıcısı olarak sağlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54447/54447figSlarge.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Bir yüzey üzerinde canlı hücre tek katmanlarının eksiltici desenlemesini gerçekleştirmek için bir protokol sunuyoruz. Bu, bir mikroakışkan prob (MFP) kullanılarak yapışık hücrelerin lokal ve seçici parçalanması ile elde edilir. Yerel bölgelerden alınan hücre lizatı, aşağı akış analizi için kullanılabilir ve bu da moleküler profilleme çalışmalarına olanak tanır.

mikroakışkan Probe ile Canlı Hücre Katmanlar hızlı Subtractive Desenlendirme

The microfluidic probe (MFP) facilitates performing local chemistry on biological substrates by confining nanoliter volumes of liquids. Using one ...

Bu video makalesinde sunulan yöntemin temel amacı, hücreler arası etkileşimlerin in-situ spatiotemporal analizini kolaylaştırmak için mekansal olarak tanımlanmış hücre desenlerini hızlı bir şekilde oluşturmaktır. Sunulan strateji, mikroakışkan prob teknolojisinden yararlanmaktadır. Mikrofabrikasyonla üretilen prob başlığı, hücre monokatmanlarını desenlemek için biyolojik alt katmanlar üzerine nanolitre hacimlerde biyokimyasallar yerelleştirir.MFP tabanlı bir desenleme tekniğinin temel avantajı, lokal lize sayesinde neredeyse anlık olması ve böylece oluşturulacak desenlerin gerçek zamanlı olarak modifiye edilmesine olanak tanımasıdır. Hücre desenleri oluşturmak için kullanılan diğer yöntemlerin, hücre desenlerinin başarısı gerçekten görülmeden önce uzun ve çok aşamalı protokoller gerektirdiğini fark ettiğimizde bu yöntem fikri ilk kez ortaya çıktı. Bir hücre yüzeyinde hidrodinamik akış sınırlaması ile stabil deneyler yürütmek için MFP parametrelerinin optimize edilmesi gerekir.Bu amaçla, görsel gösterim kritik öneme sahiptir. Aditya Kashyap ve Julien Cors bu prosedürü uygulamalı olarak göstereceklerdir. Platformun operasyonel modülleri motorlu şırıngalar, motorlu tablalar ve bir kontrolcüden oluşmaktadır.MFP, kafa ile substrat arasındaki boşluk mesafesini kontrol etmek için motorlu bir Z-sahnesine bağlanmıştır ve substrat tutucusu, tarama sistemini oluşturan X ve Y motorlu sahnelerine takılmıştır. MFP kafası, pompalama istasyonuna bağlanmak için akışkan yollarına, kafayı Z-sahnesine monte etmek için montaj deliklerine ve cilalanmış tepe noktasından çıkan kanallara sahiptir. Tepe noktası, hücre kültürü substratı ile eş düzlemli olacak şekilde ayarlanmıştır.Pompalama istasyonunu ve sıvı taşıma düzeneğini hazırlamak için, canlı hücre deneylerinden önce ve sonra şırıngaları ve şırınga pistonlarını sonikasyonla ve ultrapure su içindeki %0,5 çamaşır suyu çözeltisiyle temizleyin. Bunları suyla iyice durulayın. Şırınga uçlarını tamamen bir su banyosuna daldırıp pistonu kullanarak emme işlemi yaparak şırıngaları suyla doldurun.Şırınga şaftı, şırınganın çıkışındaki sızdırmazlık contasına temas ederken, sıvı tahliyesini su banyosu içerisinde gerçekleştirin. Şırınga kolonlarında hava kabarcığı görülmeyene kadar aspirasyon ve tahliye işlemine devam edin. Doldurulmuş şırıngaları, alt kilitli konnektörler kullanarak şırınga pompalarına bağlayın.Sıvıyı şırıngadan, ya MFP başlığına ya da sıvı rezervuarlarına giden iki kapilerden birine yönlendirmek için pompalara monte edilmiş olan değiştirme valfini kullanın. Şırınga boyutuna bağlı olarak, dakikada yaklaşık 10 ile 50 µL akış hızında, şırıngalarda yaklaşık 10 µL su kalana kadar her iki kapileri de şırıngalardaki su ile temizleyin. MFP başlığını, standart temizlik için cam malzemeleri deterjanı veya daha titiz bir temizlik için %0,5 çamaşır suyu kullanarak beş dakika boyunca sonikasyonla temizleyin.Apex kısmını suya daldırıp vialere vakum uygulayarak kanalları suyla temizleyin. Kanalları olası tıkanıklıklar için stereo mikroskop altında inceleyin ve gerekirse önceki adımı tekrarlayın. Ardından, temizlenmiş başlığı başlık tutucuya monte edin ve konnektörü başlığa vidalayın.Temizlenmiş kılcal tüpleri, başlık kısımdaki kanal geçişleriyle bağlantı sağlayan uygun bir mikroakışkan konnektör adaptörüne yerleştirin. Metin protokolünde açıklandığı şekilde uç nokta kalibrasyonunu gerçekleştirmeden önce, başlık ile hücre monotabakası arasındaki boşluk mesafesinin kontrolü için kullanılan Z-sahnesine başlık tutucuyu vidalayın. Hücre içermeyen bir oda slaytının üzerine MFP başlığını getirip beş mikronluk adımlarla yavaşça indirerek kaba sıfır boşluk mesafesini belirleyin.Probun substratla temas etmesi üzerine Newton halkaları gözlemlenmelidir. Bu kaba bir tahmindir. Hassas konum, prob ucunun substrata olan koplanarlığı ayarlandıktan sonra elde edilir.Newton halkaları oluştuğunda, bunların simetrik olduğundan emin olun. Prob ucunun koplanarlığını sağlamak için, kafa ve Z- tablası arayüzündeki goniyometreyi kullanarak kafanın eğimini ayarlayın. MFP kafasını substrattan 20 mikron uzağa taşıyın ve eğimi goniyometre ile ayarlayın.Newton halkaları temas anında simetrik olana kadar indirme, sıfırlama ve eğim ayarını tekrarlayın. Eğim ayarlandıktan sonra, simetrik Newton halkaları oluşturan Z pozisyonunu sıfıra ayarlayın. Ardından, metin protokolünde açıklandığı şekilde, iç enjeksiyon kanalı için işlem sıvısını ve dış enjeksiyon için gerekli olan ekstraksiyon tampon çözeltisini hazırlayın.Şırınga pompalarına bağlı tahliye hattını kullanarak geri kalan suyu boşaltın ve şırıngalar dolana kadar gazı alınmış çözeltileri dakikada 40 µL hızla enjeksiyon şırıngalarına çekin. Bu işlem; şırıngaların, konnektörlerin ve kapillerlerin kabarcıksız şekilde doldurulmasını sağlar. Chamber slaytlar üzerinde hücre tek tabakaları hazırlamak için, hücreleri standart hücre kültürü protokollerini kullanarak T-flasklarda çoğaltın.Kültür flasklarında hücre konfluensine ulaşıldığında, hücreleri tripsinizle ayırın ve toplayın. Patternleme için iki bölmeli lamların her birine santimetrekare başına 0,2 milyon hücre ekleyin. Hücre büyümesi ve canlılığı için bölmelerden birindeki hücreleri kontrol olarak kullanarak hücreleri 48 saat boyunca kültüre edin.Hücreler oda slaytlarında konfluense ulaştığında, serumsuz ortamda hazırlanmış 10 µM konsantrasyonda 500 µL hücre takip boyası çözeltisi ile hücreleri 45 dakika boyunca inkübe edin. Bu işlem, desenleme sırasında hücrelerin görselleştirilmesi için yapılır. Etiketlenen hücreleri, her bir odayı bir pipet kullanarak nazikçe yıkayarak PBS ile temizleyin.Ardından, desenleme deneyleri için hücreleri serum takviyeli ortamda kültüre edin. Hidrodinamik akış sınırlaması, bir işlem sıvısının eş zamanlı enjeksiyonu ve aspirasyonu kullanılarak sıvıları lokalize eder. Hiyerarşik sınırlamada, birden fazla işlem sıvısı sınırlanır ve dış HFC, örneği iç işlem HFC'sinden korur.MFP'yi, cam lamdan 50 mikronluk bir boşluk mesafesinde kalacak şekilde hücre monotabakasının üzerine getirin. Bu boşluk mesafesi, hiyerarşik HFC'nin temasını sağlar ve aynı zamanda monotabaka yüzey ile kalınlık varyasyonlarını hesaba katar. I-iki üzerinden dakikada altı veya sekiz mikrolitre sodyum hidroksit enjekte edin.Metin protokolündeki akış kurallarını kullanarak diğer akış hızlarını değerlendirin. Enjeksiyon şırıngalarını kullanarak QI-two ve QI-one enjeksiyon akış hızlarının oranını değiştirerek iç HFC boyutunu modüle edin. Örneğin, 150 ila 300 hücrelik bir sodyum hidroksit izi elde etmek için QI-two'yu 8 µL/dk'da sabit tutarken, QI-one'u 1,3 µL/dk ile 4 µL/dk arasında kullanın.Ortamın buharlaşmasını ve hHFC çalışması sırasındaki aspirasyonu karşılamak için, MFP başlığındaki en dıştaki açıklıklardan dakika başına 20 µL akış hızıyla tam besiyeri enjekte edin. Hücre tek tabakalarını desenlemek için, sahne yazılımını, prob başlığının hücre tek tabakası üzerinde kullanıcı tanımlı desenlerde saniyede 10 µm tarama hızı ve 50 µm boşluk mesafesiyle tarayacak şekilde ayarlayın. İç içe geçmiş hHFC çalışır durumdayken ve tek tabaka ile temas halindeyken, desenli hücre uzaklaştırmasını gerçekleştirmek için MFP'yi istenen desenin yörüngesinde taratın.İlk hücre tipinin uzaklaştırılmasından sonra kokültür için, daha önce yapıldığı gibi, boşlukları doldurmak amacıyla farklı bir hücre hattı ekleyin. Lizatın alt analizleri için örnekleme istasyonunu hazırlayın. Burada, üç boyutlu yazıcıyla basılmış sekizli şerit PCR tutucudan oluşan bir örnekleme istasyonu örneği gösterilmektedir.Tüp tutucuyu, uygulamanın gerektirdiği sterilite düzeyine bağlı olarak %70 etanol veya diğer yüzey dekontaminanları ile silin. Tüp tutucuyu alt tabaka tutucusuna sabitlemek için tüp tutucu üzerindeki manyetik klipsi kullanın. Örnekleme istasyonu hazırlandıktan sonra, MFP başlığını tek tabakadan 100 mikron uzaklığa konumlandırın.hHFC'yi çalıştırmaya, iç enjeksiyon kanalı için işlem sıvısı olarak 50 millimolar sodyum hidroksit çözeltisini; QI-one için dakika başına bir mikrolitre, QI-two için dakika başına altı mikrolitre, QA-one için dakika başına eksi-yedi mikrolitre ve QA-two için dakika başına eksi-17,5 mikrolitre akış hızıyla başlayın. Akış sınırlaması stabilize olduğunda, hHFC ile seçilen hücre alt popülasyonunda sodyum hidroksit tabanlı lokal lizis gerçekleştirmek için prob başlığını 50 mikronluk bir boşluk mesafesine indirin. Alt popülasyonun lizisi tamamlandığında, başlığı örnekleme istasyonundaki tüplere doğru yönlendirin.Toplanan lizatı doğrudan PCR tüplerine boşaltın. Lizatı, metin protokolünde açıklandığı şekilde işledikten sonra, cihaz tedarikçisi tarafından belirlenen standart bir qPCR iş akışına yükleyin. Hiyerarşik HFC'deki enjeksiyon sıvılarının oranı kontrol edilerek, hücre yüzeyi ile temas eden iz alanı boyutu modüle edilir.Akış hızları, hücre lizi için dominant mekanizmanın kayma kuvvetinden ziyade kimyasal etki olması için seçilmiştir. Bu durum, hesaplamalı akışkanlar dinamiği kullanılarak kayma kuvvetinin belirlenmesiyle doğrulanmıştır. Burada, MFP ile tarama yörüngesi programlaması yoluyla bir hücre adacıkları ızgarasının oluşturulması gösterilmektedir.Enjeksiyon sıvısı oranının kullanılarak ayak izi boyutunun modülasyonu, hücre uzaklaştırma çözünürlüğünün kontrol edilmesini sağlar. Bu yöntem, birden fazla hücre popülasyonunun ardışık kokültürü için kullanılabilir ve böylece karmaşık hücre-hücre etkileşim desenleri oluşturabilir. İşleme sıvısı olarak sodyum hidroksit kullanılması, lizatı hücrelerin PCR tabanlı analizi ile uyumlu hale getirir.Burada, tanımlanan yöntem kullanılarak lize edilen beş ve bir ayak izinden DNA içeriği quantify edildi. Bu teknikten uzmanlaşmış olduğunda, hücrelerde 30 dakikadan kısa sürede gerçekleştirilebilir. Bu prosedürü uygularken, kanalların ve kapilerlerin hava kabarcıklarından arındırıldığından emin olmak önemlidir, çünkü bu durum HFC'yi olumsuz etkileyebilir.Korozif bir kimyasal çözelti olan sodyum hidroksit ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman koruyucu gözlük ve laboratuvar önlüğü gibi önlemler alınmalıdır. Bu prosedürün ardından, hücrelerin geometrik kısıtlaması nedeniyle hangi proteinlerin aşırı eksprese olduğu gibi ek soruları yanıtlamak amacıyla, hücreleri immün boyama veya MFP aracılı lizle DNA-RNA dizileme yoluyla lokal olarak analiz edebiliriz. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, moleküler biyoloji alanındaki araştırmacıların doku oluşumu ve dejenerasyonu sırasında hücre içi ve hücreler arası sinyallemeyi incelemelerinin önünü açabilir.Bu videoyu izledikten sonra, yerel işlemleme için MFP'de kurulan hücre tek tabakalarını çıkarma yöntemiyle nasıl desenleyeceğiniz ve hücre ko-kültürlerinden karmaşık geometriler nasıl oluşturacağınız konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız.

rapid-subtractive-patterning-live-cell-layers-with-microfluidic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz hücre yakalama ve kültür etkinleştirebilirsiniz mikroakışkan cihazların imalatı için bir protokol tanımlamaktadır. Bu yaklaşımda, mikroakışkan kanallar içinde oluk gibi desenli mikro, içinde hücre sabitleyebilirsiniz Shear stresin düşük olduğu bölgelerde oluşturmak için kullanılır.

Hücresel Davranış incelenmesi için Groove Desenler mikroakışkan Aygıt

Mikroakışkan Probe: Çalışma ve Yerelleştirilmiş Yüzey İşleme için kullanın

Dielectrophoresis (DEP) hücreleri manipüle etmek için etkili bir yöntemdir. Baskılı devre kartları (PCB) mikroakışkan cihazlar içinde ücretsiz cep manipülasyon için yeniden kullanılabilir, ucuz ve etkili elektrotlar sağlayabilir. PCB üzerinde lamelleri ile PDMS tabanlı mikroakışkan kanalların bir araya getirerek, çok kanallı mikroakışkan cihazlar içinde boncuk ve hücre manipülasyon ve ayrılık göstermektedir.

Çok kanallı mikroakışkan Cihazlar ayırmak Boncuk ve Hücreler Dielectrophoresis ve Laminar Flow

Biz temiz oda ya da yumuşak litografi gerek kalmadan, birden çok farklı suşları için benzer dinamik koşullar uygulanarak yeteneğine microfluidic cihazlar üretmek için basit bir yöntem sunulmaktadır.

Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı

Kaynak: Pioli, R., ve diğerleri, Sıralı Kılcallık Destekli Montaj Yoluyla Mikroorganizmaların ve Mikropartiküllerin Modellenmesi. J. Vis. Uzm. (2021)Bu video, karbonsuz bir süspansiyon ve kontrollü akış kullanarak mikroakışkan tuzaklarda tek floresan etiketli Escherichia coli (E. coli) hücrelerini yakalama yöntemini ve ardından mikrokolonilerin büyümesini ve floresan görüntülemesini tetiklemek için besin ilavesini göstermektedir.

Tek Hücreli Bakteri Büyümesinin Mikroakışkan Desenleme ve Floresan Tabanlı İzlenmesi

Bu yazıda tek bir hücre analizi için bir mikroakışkan çip sunuyoruz. Bu sağlar: hücre içi proteinler, enzimler, kofaktörler, ve floresan deneyleri veya bağışıklık aracılığıyla ikinci haberciler miktar.

Tek Hücrelerinin yönlü Kimyasal Analiz için mikroakışkan Chip

Bu mikron çaplı daralması bir düzeni sekansından geçerken hücre için gereken süreden daha ölçmek için mikroflüidik bazlı analiz göstermektedir.

Mikroakışkan Tekniği Hücre deformabilitesi Probe

Birden mikroakışkan kanallarda parçacıkların algılama ve boyutlandırma multipleks için, kod bölmeli çoklu erişim (CDMA) ile rezistif darbe algılama (RPS) birleştiren entegre bir yüzey elektrot ağı ile mikroakışkan platformu göstermektedir.

Parçacıkların Mekansal Takip için Çoklanmış Elektronik Algılama ile mikroakışkan Platformu

Bu rapor, biyolojik araştırmalar için mikroakışkan kanalları hücreler ve substratlarla doldurmak için düşük basınçlı vakum kullanan basit, uygulaması kolay bir tekniği açıklamaktadır.

Desenlendirme Proteinlerin ve Hücreleri Çok Yönlü Yöntemi

Mikropatterned diziler kullanılarak tek hücrelerden floresan muhabir zaman kurslarının alınması için bir yöntem sunuyoruz. Protokolde, tek hücreli dizilerin hazırlanması, canlı hücre tarama zaman atlamalı mikroskopinin kurulumu ve çalışması ve otomatik önseçim, görsel kontrol ve yapıştırma alanı başına hücre entegre floresan zaman kurslarının izlenmesi için açık kaynaklı bir görüntü analiz aracı açıklanmaktadır.

Tek Hücreli Dizilerin Canlı Hücre Görüntülemesi (LISCA) - Hücresel Kinetiği Ölçmek için Çok Yönlü Bir Teknik

Bakteri ve kolloidler gibi bir sıvıda asılı mikro boyutlu nesneleri polidimetilsiloksisan substratında öngörülen dizilere desenleştirmek için mikroakışkan bir platformda kapilarite destekli montaj kullanan bir teknoloji sunuyoruz.

Sıralı Capillarity destekli Montaj yoluyla Mikroorganizmaların ve Mikropartiküllerin Deseni

Öğrenin, mikroakışkan prob teknolojisi kullanarak canlı hücre katmanlarında hızlı çıkarma desenlendirmesi yapmayı. Bu yöntem, hücre-hücre etkileşimlerinin yerinde analizi için değerli bir araç sunar.

mikroakışkan Probe ile Canlı Hücre Katmanlar hızlı Subtractive Desenlendirme

Daha fazla video keşfet