Name: Nonarteritik Anterior İskemik Optik Nöropati Kemirgen Modeli (rNAION) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Öğrenin, kemirgenlerde nonarteritik anterior iskemik optik nöropati modeli oluşturmayı. Lazer ve boya kullanarak optik sinir inme mekanizmalarını ve nöroprotektif ajanların etkinliğini inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz bu model üzerinde çalışmış birçok öğrenci ve arkadaşlarının kendi etkinliğini artırmak için, ve mekanizmalarını anlamak için teşekkür ederiz. Özel teşekkür Dr adlı kaynaklanmaktadır. Mary Johnson (Maryland Baltimore Üniversitesi), Nitza Goldenberg-Cohen (Schneiderman Çocuk Hastanesi, Petah-Tikva, İsrail), Charles Zhang (Einstein Tıp Koleji, Bronx, NY) ve Valerie TOUITOU (Hopital Salpetrie, Paris, Fransa). Bu çalışma SLB için RO1 EY015304 kısmen finanse edildi.

(; Baltimore, MD, ABD IACUC) Bu protokol Maryland Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Üniversitesi tarafından onaylandı 1. Deney Seti-up <ol><li> 3 mm kalınlığında çapı Pleksiglas net bir optik dereceli dairesel 7 mm den özel olarak tasarlanmış kontakt lens olun. Bir matkap basın ile yuvarlak lensler kesti. İç eğri yapmak için standart bir matkap ucu kullanın ve nihayet ultra-ince kum (1000/3000) bir kontakt lens parlatıcı kullanarak dış ve iç eğrileri lehçe. </li><li> Önceden pH 7.4 fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 2.5 mM Rose Bengal (RB) hazırlanması, filtre 6 aya kadar bir ışık geçirmez bir kap içinde bir 0.45 u&#39;luk şırınga filtre ve mağaza -20 ° C&#39;de 1 ml&#39;lik numuneler ile sterilize edin. NOT: Sprague Dawley olarak albino outbred erkek hayvanların kullanımı suşu bağımlı yanıt farklılıkları en aza indiren indüksiyon artan kolaylığı sağlayan ve östrus halkalandırma yapılmasından oluşabilir değişkenliği azaltırng kadın. </li><li> kurmak frekans Neodimyum-Alümoitri granat bir 532 nm lazer ışığı üretir (Fd-YAG) oftalmik medikal lazer, iki katına çıktı. Standart bir göz lazer adaptörü kullanarak bir Haag-Streit oftalmik yarık lamba lazer monte edin. Bu piyasada mevcut cihaz hayvanın göz ve lazer nokta uygulamasının eşzamanlı görselleştirme sağlar. tıbbi lazer de uygun lazer indüksiyon aynı nokta boyutunu kullanarak odaklama ve sentrasyonu için bir hedef ışın vardır. aşağıdaki gibi lazer güç parametreleri şunlardır: <ol><li> Sıçan rNAION indüksiyon için: 500 mikron spot büyüklüğü / 50 mW lazer güç / 1000 milisaniye süre / 1000 milisaniye aralığı kullanınız. </li><li> Fare rNAION indüksiyon için: küçük optik disk 300 mikron spot boyutunu değiştirmek ve sıçan ayarı gibi diğer parametreleri aynı bırakın. </li><li> Rutin lazer güç çıkışını sağlamak için bir lazer güç metre kullanın. </li></ol></li></ol> 2. Deneysel Prosedür <ol><li> lazer gücü açınve uygun lazer parametresini ayarlayın. Kullanmadan önce en az beş dakika süreyle lazer ısıtın. </li><li> ketamin / iksilazin ve RB boya için uygun dozu belirleyecektir hayvan tartılır. 80 mg / ml ketamin ve 4 mg / ml ksilazin 1 ml / kg karışımın peritoneal içi enjekte hayvansal anestezisi. </li><li> Tamamen anestezi kadar ısıtılmış kafeste hayvan bırakın. caydırıcı uyaranlara (kuyruk veya ayak tutam) için herhangi bir yanıt olup olmadığını kontrol edin. anestezi derinliği her 10 dk için hayvanları kontrol edin. </li><li> % 1 tropikamid ile hayvanın öğrencileri dilate ve% 0.5 proparakain ile gözün yüzeyini uyutmak. Böyle Uzun Evans gibi pigmentli hayvanlar, kullanılıyorsa,% 2.5 neosynephrine göz damlaları öğrenci dilatasyon artacaktır. </li><li> tarafında namlu yakın bıyıkları görünümü engelleyen uyarılan edilecek kesmek için makas kullanın. </li><li> % 1 metilselüloz veya ısmarlama kontakt lens içine diğer oftalmik bağlantı damla bir damla koymak ve daha sonra t üzerine lensi uygulamakSıçan gözü o. </li><li> biyomikroskopta yüksekliği ayarlanabilir bir platformda hayvan yerleştirin. Göz yarık lamba ve lazer ışınına dik olacak şekilde 45 ° &#39;lik açıyla hayvanın kafasını ayarlayın. </li><li> oftalmik yarık lamba ile göz gözünüzde canlandırın. odaklı ve görüntülenmiştir optik sinire doğrudan merkezli olarak emin amaçlayan kiriş sağ boyutu da olduğundan emin olun. Bir özel yapılmış adaptör ile yarık lamba göz parçalardan biri üzerine monte sürat - yüksek ASA (2.000 1.200) ile bir dijital kamerayı kullanarak retina fundus fotoğraf. NOT: koroid damarları görme yeteneği retinanın şeffaflığını ortaya koymaktadır. Bu ortaya çıkarsa yorumunu karıştırabilir ki, daha sonra retina iskemi tespit edebilmek için önemli bir işaretidir. rNAION retina hasarı retinal iskemi sonuçlar iç retina tabakaların tüm hücreler etki ederken, izole edilmiş RGC kaybına neden optik sinir iskemi vardır. </li><li> İsteğe bağlı olarak, daha fazla görüntü retinaun kaynaklı göz değerlendirmek için bir spektral domain-OCT (SD-OCT 8) kullanılarak optik sinir. Retina (Şekil 3C) vasıtasıyla yüze (Şekil 3B) ve 7 kesit taramalar en tarar. SD-OCT görüntüleme lazer indüksiyonu için kullanılan aynı kontakt lens kullanır. </li><li> 1 ml / kuyruk damarından üzerinden kg RB enjekte ve 30 saniye için, daha sonra lazer gücü aktif bekleyin. Bu gecikme süresi dolaşımı boyunca eşit dağıtmak için RB sağlar. Biz bir sn / darbe bir 50 mW lazer darbesi kullanın. Büyükşehir enerjiler (≥ 60 mW) retinaya zarar veya retinal vasküler iskemi neden olabilir. Dikkat: emin olun herkes kaçak lazer ışığı araştırıcı göze giren önlemek için uygun engelleme dalga boyunda lazer güvenlik filtreleme gözlük bir çift vardır. NOT: boya dolaşımdan hızla elimine edilir çünkü lazer idaresi IV RB enjeksiyonundan sonra hızla verilmelidir. uzun lazer indüksiyon, daha şiddetli optik sinir iskemi. Bir peş peşe 12 sn darbeleri - Genellikle, hayvanlar 7 verilmiştir. Dolaşan boya ile lazer ışığının temas optik sinir gemilerin biyomikroskopta (Şekil 4B) aracılığıyla görülebilir güzel bir altın bir parlaklık kazandırır. Bu boya sistemik enjekte ve kan dolaşımına dağıtıldı kanıtlıyor. Kızdırma tüm (Şekil 4A) de soluk veya hiçbiri değilse, boya damar içine enjekte değildi. hayvan reenjeksiyon önce en az iki gün boyunca kurtarmak gerekir çünkü bu durumda, hemen ikinci bir enjeksiyon vermeyin. </li><li> Hemen indüksiyon sonrası, kontakt lens çıkarın. deksametazon ile oftalmik üçlü antibiyotik (Neosporin / polimiksin / basitrasin) merhem her iki göz kapağı ve tam iyileşme kadar yakın gözlem altında tek bir yer kafes içinde 37 ° C ısınma pad üzerinde hayvan yerleştirin. <ol><li> w distile ile kontakt lens temizlemebırakmayın ileride kullanmak üzere aşındırıcı olmayan bir temizlik bezi ile kurulayın ve. </li><li> Indüksiyon iki gün sonra fundus renkli fotoğraf ve SD-OCT analizi 8 hem optik sinir ödemi değerlendirmek. NOT: Optik sinir ödemi derecesini karşılaştırılması optik sinir iskemi şiddetinin bir tahmin verir. iki gün, optik sinir diski marjı bulanık ve retina damarları biraz kontralateral (un-kaynaklı) göz ile karşılaştırıldığında, dilate edilir. Iki ve dört hafta elektroretinografi (ERG) ve uyarılmış potansiyel (VEP 11) görsel flaş gerçekleştirin elektrofizyoloji analizi için indüksiyon sonrası. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Banik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%3A+An+Update+on+Demographics%2C+Clinical+Presentation%2C+Pathophysiology%2C+Animal+Models%2C+Prognosis%2C+and+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Experimental+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy: An Update on Demographics, Clinical Presentation, Pathophysiology, Animal Models, Prognosis, and Treatment.</a> J. Clin. Experimental Ophthalmol. 10, 1-5 (2013).</li>
<li>IONDT study group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+patients+with+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+eligible+for+the+Ischemic+Optic+Neuropathy+Decompression+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of patients with nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy eligible for the Ischemic Optic Neuropathy Decompression Trial.</a> Arch Ophthalmol. 114, 1366-1374 (1996).</li>
<li>Tesser, R. A., Niendorf, E. R., Levin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+morphology+of+an+infarct+in+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The morphology of an infarct in nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Ophthalmology. 110, 2031-2035 (2003).</li>
<li>Bernstein, S. L., Johnson, M. A., Miller, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28NAION%29+and+its+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) and its experimental models.</a> Prog Retin Eye Res. 30, 167-187 (2011).</li>
<li>Nicholson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGJ2+Provides+Prolonged+CNS+Stroke+Protection+by+Reducing+White+Matter+Edema%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">PGJ2 Provides Prolonged CNS Stroke Protection by Reducing White Matter Edema.</a> PLoS One. 7 (12), (2012).</li>
<li>Goldenberg-Cohen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+Dysfunction+Following+Induction+of+Experimental+Anterior+Optic+Nerve+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte Dysfunction Following Induction of Experimental Anterior Optic Nerve Ischemia.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46, 2716-2725 (2005).</li>
<li>Bernstein, S. L., Guo, Y., Kelman, S. E., Flower, R. W., Johnson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+cellular+responses+in+a+novel+rodent+model+of+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional and cellular responses in a novel rodent model of anterior ischemic optic neuropathy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44, 4153-4162 (2003).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-Domain+Optical+Coherence+Tomography+of+the+Rodent+Eye%3A+Highlighting+Layers+of+the+Outer+Retina+Using+Signal+Averaging+and+Comparison+with+Histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral-Domain Optical Coherence Tomography of the Rodent Eye: Highlighting Layers of the Outer Retina Using Signal Averaging and Comparison with Histology.</a> PLoS One. 9 (5), (2014).</li>
<li>Huang, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+systemic+treatment+with+methylprednisolone+in+a+rodent+model+of+non-arteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28rNAION%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Protective effects of systemic treatment with methylprednisolone in a rodent model of non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy (rNAION).</a> Exp Eye Res. 131, 69-76 (2015).</li>
<li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Experimental+Model+of+Optic+Nerve+Head+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">An Experimental Model of Optic Nerve Head Injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57, 6222(2014).</li>
<li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+Evoked+Potential+Recording+in+a+Rat+Model+of+Experimental+Optic+Nerve+Demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination.</a> J. Vis. Exp. (101), e52934(2015).</li>
<li>Templeton, J. P., Geisert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+optic+nerve+crush+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">A practical approach to optic nerve crush in the mouse.</a> Mol Vis. 18, 2147-2152 (2012).</li>
<li>Magharious, M. M., D'Onofrio, P. M., Koeberle, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+Nerve+Transection%3A+A+Model+of+Adult+Neuron+Apoptosis+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System.</a> J Vis Exp. (51), e2241(2011).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Rodent+Model+of+Posterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A Novel Rodent Model of Posterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> JAMA Ophthalmol. 131 (2), 194-204 (2013).</li>
<li>Huang, T. L., Chang, C. H., Chang, S. W., Lin, K. H., Tsai, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Intravitreal+Injections+of+Antivascular+Endothelial+Growth+Factor+Agents+in+a+Rat+Model+of+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22IOVS%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Intravitreal Injections of Antivascular Endothelial Growth Factor Agents in a Rat Model of Anterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> IOVS. 56, 2290-2296 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Optik sinir hasarı (optik sinir ezilme 12, optik sinirin 13 ve PION 14) modelleri bir dizi varken, rNAION modeli, sıçan ve fareler hem de uyarlanabilir insancıl olduğunu. Daha yakın NAION insan klinik durumunu andırmaktadır. Bu durum uzun bir süre boyunca progresif ön optik sinir ödemi, anterior optik sinir kompartman sendromu, fokal akson iskemi, izole retina ganglion hücre akson hasarı ve kaybı içerir. Mevcut rapor, rNAION indüksiyon için uygun adımları sağlar indüksiyon sırasında olas...

Nonarteritik anterior iskemik optik nöropati (NAİON) optik sinir (ON) 1 ön kısmının fokal iskemik lezyonlardır. NAİON mekanizması intranöral ödem sonuçlanan bir kompartman sendromu olduğuna inanılmaktadır. 50 2 yaşın üzerindeki kişilerde ani optik sinir bağlı görme kaybının en sık nedenidir ve optik sinir içinde aksonlar temin kılcal damarların sıkışmasına neden olmaktadır 3.. AÇIK aslında bir merkezi sinir sistemi (MSS) yolu olduğundan, kemirgen NAİON (rNAION) modeli izole MSS beyaz cevher vuruş mekanizmaları ve yanıtları incelemek için kullanılabilir. rNAION modeli bu nedenle beyaz cevher inme ile ilgili hasar ile ilişkili pek çok sorun diseksiyon yararlı olabilir. Beyaz madde darbesi esnasmda farklı nöro-koruyucu strateji ve maddeleri değerlendirmek için de kullanılabilir. Modelin en çekici özelliklerinden biri olmasıdırağrısız, non-invaziv prosedür. lazer gücü iskemik hasar çeşitli seviyesi sağlamak için ayarlanabilir. Bir başka özelliği de ilerici bir kılcal disfonksiyonu üreten kılcal endotel hasar lazer kaynaklı süperoksit radikalleri dayanıyor olmasıdır. Bu NAION neden mekanizmasına oldukça benzer olduğuna inanılan bu disfonksiyon ve ilerici ödem olduğunu. Araştırma doğrudan kılcal pıhtılaşma neden olmadığını göstermiştir, ancak en az iki mekanizma ile çalışır etti: süperoksit bağlı ölüm ve kılcal bazı sıyırma endotelial hücreler 4, ve aktive edilmiş B hücreleri NFkB (Nükleer Faktör kappa hafif zincir-güçlendirici interstisyuma 5 içine hücre zarları arasında sıvı geçişini arttı ile), endotel kalan kadar inflamatuar düzenleme ilişkili. optik sinir başı iskemi interstisyel sıvı birikimi sonucu yol açtığı optik sinir kılcal damarların ve sıkıştırma kapatılması. Şematik resim gösterilirŞekil 2. RNAION model hem sıçan ve fare türleri 6,7 kullanılabilen ve optik sinirin tam ama ağrısız yıkım ve retina, örneğin hafif bir lezyondan, şiddeti seviyesinde değişebilir santral retinal arter tıkanıklığı (SRAT) olarak.

<table><tbody><tr><td>50 mW 532 nm lazer</td><td>Iridex</td><td></td><td>Standart Oftalmik Lazer</td></tr><tr><td>0 - 100 mW 532 nm lazer</td><td>Laserglow teknolojileri</td><td></td><td>iridex</td></tr><tr><td>Lazer yarık lamba adaptörü</td> yerine geçer Lazer çıkışı için <td>Iridex</td><td></td><td>SMA bağlantılı adaptör Termopil</td></tr><tr><td>sensörlü tutarlı Fieldmate lazer metre</td><td>Tutarlı</td><td></td><td>diğerleri de uygun</td></tr><tr><td>Oftalmik İnceleme Yarık lamba biyomikroskobu</td><td>Çeşitli</td><td></td><td>Haag-Streit en iyisidir; ebay'de daha ucuz versiyonlar mevcuttur</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Sigma</td><td>330000-1G</td><td>Fotoindükleyici ajan</td></tr><tr><td>Fundus Kontakt lens veya cam kapak kayması</td>, <td>özel/Cantor ve Nissel (İngiltere)</td><td></td><td>Göz muayenesi ve indüksiyon için özel tasarlanmış planokonveks plastik lens</td></tr><tr><td>Tropikanamid %</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1Tamiya parlatma bileşiği</td><td>Tamiya, INC</td><td>87068</td><td>parlatma kontakt lensi</td></tr><tr><td>%2,5 Hipromelloz (Goniovisc)/%1 Methycellulose</td><td>HUB İlaç</td><td></td><td>kontakt lens birleştirme maddesi</td></tr><tr><td>%2,5 Neosinefrin Oftalmik damla</td><td>Alcon labs</td><td></td><td>göz bebeği genişletici ajan</td></tr><tr><td>Tropicamide %1</td> <td>Alcon labs</td><td></td><td>öğrenci genişletici ajan</td></tr><tr><td>%0,5 Proparakain</td><td>Alcon labs</td><td></td><td>topikal Anestezik</td></tr><tr><td>30 G sigortalı iğne insülin şırıngası</td><td>Gül</td><td>bengal intravenöz enjeksiyonu için</td><td>Çeşitli</td></tr><tr><td>Deksametazon eklenmiş Oftamik Antibiyotik merhem (Üçlü antibiyotik merhem)</td> <td>Çeşitli</td><td>Çeşitli</td><td>Kornea yara izini en aza indirmek için indüksiyondan sonra uygulayın</td></tr><tr><td>Heidelberg Corporation Spektral alan-Optik Tutarlılık Tomografi</td><td>Heidelberg Optik</td><td>tutarlılık ölçümleri için Corporation taban çizgisi ve indüksiyon sonrası; indüksiyon için gerekli değildir</td><td></td></tr></tbody></table>

nonarteritik anterior İskemik optik nöropati kemirgen modeli (rnaion)

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

Nonarteritik anterior iskemik optik nöropati (NAİON), optik sinirin 1/700 bireyi yaşamları boyunca etkileyen fokal iskemik bir lezyondur. NAION, optik sinir ödemi, retinal ganglion hücre nöronlarının (RGC'ler) seçici kaybı ve optik sinirin atrofisi ile sonuçlanır. Hem sıçanlar hem de fareler için geçerli olan, çoğu NAION özelliğini ve sekelini ifade eden bir NAION kemirgen modeli geliştirilmiştir. Bu model, hedeflenen ön optik sinirde (laminer bölge) kılcal hasara ve sızıntıya neden olmak için fotoaktif bir boya olan Rose Bengal'i (RB) aydınlatmak için 532 nm dalga boyunda bir odak lazer uygulaması kullanır. rNAION indüksiyonundan sonra erken optik sinir iskemisi, optik sinir ödemi ve intranöral inflamasyon, ardından seçici RGC ve aksonal kayıp olur. Optik sinir bir CNS beyaz cevher yolu olduğundan, rNAION modeli, seçici beyaz cevher iskemisi ile ilgili mekanik çalışmalara, ayrıca nöroprotektif analizlere ve iskemiye glial ve nöronal yanıtın kısa ve uzun vadeli mekanizmalarına uygulanabilir.

<html> Kontakt lens özellikli santral retina görselleştirme (Şekil 1). Fokal lazer nokta retinanın arkasında optik disk (Şekil 2) yanar. Normal un kaynaklı retina yarık lamba biyo-mikroskop (Şekil 3A) tarafından ve SD-OCT (Şekil 3B ve 3C) tarafından görüntülendi gösterilmiştir. Hiçbir boya maddesinin dolaşımda mevcut olduğu zaman lazer İndüksiyon sırasında, lazer ışığı kabı ve disk floresan (Şekil 4A) ile...

Aşağıdaki rapor, uygun boya, kontakt lens ve lazer parametreleri kullanılarak nonarteritik anterior iskemik optik nöropatinin (rNAION) kemirgen modelinin nasıl çoğaltılacağını açıklamaktadır. Ayrıca rNAION lezyonunu in vivo olarak değerlendirmek için uygun adımları da ortaya koyuyoruz.

Nonarteritik Anterior İskemik Optik Nöropati Kemirgen Modeli (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

Bu prosedürün genel amacı, inme yanıt mekanizmalarının karakterize edilmesi ve optik sinir inmesinin tedavisinde nöroprotektif ajanların etkinliğinin analiz edilmesi için bir anterior iskemik optik nöropati kemirgen modeli oluşturmaktır. Bu yöntem, optik sinir inmesi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Ödem mekanizmaları, inme sonrası inflamasyon ile koruma ve onarım yollarını içerir. Bu tekniğin temel avantajı, iskemik hasarın optik sinirin ön kısmıyla sınırlı olmasıdır. Cerrahi işlem olmadan uygulandığında bu teknik ağrısızdır.Hasarın şiddeti, istenilen şekilde ve tekrarlanabilir olarak değiştirilebilir. Bu yöntem; optik sinirin ezilmesi veya kesilmesi dahil olmak üzere birçok sinir hasarı modeline eşlik eden ağrıyı önler.Ayrıca, in vivo ortamda, tek bir nöron sınıfı üzerinde izole ekzo-iskeminin etkilerinin ayrıntılı analizine olanak tanır. Gösterilen spesifikasyonlara göre tasarlanmış özel yapım bir kontakt lens temin ederek başlayın. Ayrıca, pH 7.4 fosfat tamponlu salin içinde 2.5 milimaler rose bengal hazırlayın.Dolgular, 0,5 mikronluk bir şırınga filtresi ile sterilize edilir. Bir milimetrelik alikotlar hazırlanır, alikotlar ışık geçirmeyen sıkı bir kaba yerleştirilir ve altı aya kadar -20 °C'de saklanır. Prosedür günü, frekans katlamalı neodimyum itriyum alüminyum garnet oftalmik tıbbi lazer düzeneği kurulur.Bu cihaz 532 nanometre lazer ışığı üretir. Hayvan gözünün eş zamanlı olarak görüntülenmesini ve lazer noktasının uygulanmasını sağlamak için lazeri, standart bir oftalmik lazer adaptörü kullanarak bir Haag-Streit oftalmik biyomikroskop (yarık lamba) üzerine monte edin. Lazeri açın ve kullanmadan önce en az beş dakika ısınmasını bekleyin.Kullanılan deney hayvanı için uygun lazer güç parametrelerini ayarlayın. Özel yapım bir adaptör kullanarak, yüksek ASA hızına sahip bir dijital kamerayı biyomikroskobun okülerlerinden birine monte edin. Deney hayvanını uygun şekilde anestezi ettikten sonra, ayak parmağı sıkıştırmasına verilen yanıtın yokluğuyla anestezinin uygun düzeyde olduğundan emin olun.Hayvanların pupillalarını yüzde bir tropikamid ile dilate edin. Ardından, göz yüzeyini yüzde 0,5 proparakain ile anestezi edin. Gözün net görünmesini sağlamak için makas kullanarak, indüksiyon tarafındaki bıyıkları ağız kısmına yakın yerden kesin.Ardından, özel yapım kontakt lensin iç kısmına bir damla yüzde bir metilselüloz veya başka bir oftalmik uyum damlası damlatın. Sonrasında lensi sıçanın gözüne yerleştirin. Hayvanı, biyomikroskobun yüksekliğine göre ayarlanmış bir platformun üzerine yerleştirin.Hayvanın başını, göz biyomikroskop ve lazer ışınına dik olacak şekilde 45 derecelik bir açıyla yerleştirin. Ardından, gözü oftalmik biyomikroskop aracılığıyla görüntüleyin. Sağlıklı bir gözde, optik sinir başı net bir sınıra ve kırmızımsı bir çevreye sahiptir. Retinal damarlar ise ince ve eşit şekilde dağılmıştır.Hedefleme ışınının doğru boyutta olduğundan emin olun. Aynı zamanda odaklanmış ve doğrudan görüntülenen optik sinirin merkezine hizalanmış olduğundan emin olun. Ardından, dijital kamera kullanarak retinal fundusun fotoğrafını çekin.Ardından, kilogram başına bir miligram rose bengal'i kuyruk veni aracılığıyla intravenöz olarak enjekte edin ve 30 saniye bekleyin. Rose bengal'in pürüzsüz ve sürekli bir intravenöz enjeksiyonunu, 30 saniye sonra optik sinir başının lazer maruziyetinin takip etmesi gerekir.Bu iki adım arasındaki zaman farklılıkları, optik sinir inme hasarının derecesinde değişkenliğin artmasına neden olur. Bu durum sonuçlarınızı saptırabilir. 30 saniye sonra lazer gücünü aktif hale getirin.Optik sinir, lazer noktasının bulunduğu diskten çıkan damarlar içerisinde altın rengi bir ışıma göstermektedir. Bu durum, yeşil lazer ışığı ile aydınlatılan kan akışındaki rose bengal varlığını göstermektedir. İndüksiyonun hemen ardından kontakt lensi çıkarın ve her iki gözü oftalmik triple antibiyotikli pomad ve dekzametazon ile kaplayın.Hayvanı, tam iyileşme sağlanana kadar yakın gözlem altında, 37 derece Celsius sıcaklıktaki bir ısıtma pedi üzerindeki bir kafeste tek başına barındırın. Bu renkli fundus görüntüsü, optik sinir şişmesini ve optik disk solgunluğunu göstermektedir. Çevredeki koroidal kızarıklık kaybı ile birlikte.Venler genişlemiş ve kıvrımlıdır. İndüksiyon sonrası çekilen bu n-yüzey SDOCT görüntüsü, disk ödemini ve venöz dilatasyonu göstermektedir. Tarama yönü yeşil okla belirtilmiş olup, bir sonraki görüntüdeki kesit, yeşil kutu içerisinden oluşturulmuştur.Burada, gri yoğunluğundaki azalma ve retinal sinir lifi tabakasının artan kalınlığı ile kanıtlandığı üzere, optik sinir disk ödemini gösteren bir kesit sunulmuştur. Bu durum, daha yüksek su içeriği ile tutarlıdır. Siyah oklar arasında belirtilen intraretinal optik sinirin çapı artmıştır.Bu prosedürü uygularken, sinirin iyi görüntülenmesini ve lazer ışığının sinir üzerine hassas bir şekilde odaklanmasını sağlayan temiz, cilalı bir kontak lens veya lamel kullanmayı hatırlamak önemlidir. Bu prosedürün ardından, ek soruları yanıtlamak amacıyla immünohistokimya, sitokin analizi veya gen ekspresyon analizi gibi diğer yöntemler uygulanabilir.İnme sonrası inflamatuar yanıtlar veya hedef dokulardaki değişiklikler gibi.

the-rodent-model-nonarteritic-anterior-ischemic-optic-neuropathy

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu protokol, retrograd retina ganglion hücreleri ve sonradan retina ganglion hücre hayatta kalma ve apoptosis analiz etmek için bir optik sinir ezilme yaralanması yapmak nasıl etiket gösterir. Bu glokom da dahil olmak üzere optik nöropati farklı türleri için deneysel bir hastalık modeli.

Retina Ganglion Hücre Survival Eğitim Bir Optik Sinir Crush Yaralanma murin Modeli

Bu protokolün amacı, fotokimyasal sıçan posterior optik sinir iskemik hasara yol etmektir. Bu model arka iskemik optik nöropati patofizyolojisi çalışmaları ve bunun için tedavi yaklaşımları ve diğer optik nöropatiler kritik yanı sıra diğer MSS iskemik hastalıklar.

Fotokimyasal Bağlı Posterior İskemik Optik Nöropati Rat Modeli

Burada, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) vasküler özelliklerini yeniden yaratan deneysel bir model olan fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon (CNV) protokolünü sunuyoruz. Bir kez ustalaştıktan sonra, çeşitli deneysel önlemleri test etmek için bir model sistem olarak CNV'yi güvenilir ve etkili bir şekilde indükleyebilir.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

Glokom, retinal ganglion hücrelerinin hasar görmesi ile karakterizedir. Hayvan modellerinde glokomu indüklemek, bu hastalığın incelenmesi hakkında fikir verebilir. Burada, bir in vivo sıçan modelinde RGC kaybını indükleyen ve analiz için tam montajlı retinaların hazırlanmasını gösteren bir prosedürü özetliyoruz.

Glokom uyaran bir de Prosedürü<em&gt; İn Vivo</em&gt; Rat Modeli ve Tüm montaj Retina Hazırlık

İkincil dejenerasyonu retina ganglion hücrelerinin (RGCs) yaygın olarak glokom içinde oluşur. Bu çalışmada kısmi optik sinir transeksiyon için yenilikçi bir operatif yaklaşım açıklar. Bu yer-koruma operatif yaklaşım kullanımı modelin uygulama aralığı genişletir ve ikincil yaralanma mekanizmaları keşfi RGCs içinde yeni bir yol sağlar.

Kısmi optik sinir transeksiyon Sıçanlarda: ikincil dejenerasyonu retina Ganglion hücrelerinin değerlendirmek için yeni bir operatif yaklaşım ile kurulan bir Model

Burada, silikon yağı intrakalik enjeksiyonu ve ön hazneden silikon yağı kaldırma prosedürü ile fare gözlerinde oküler hipertansiyon ve glokom nörodejenerasyon indüklemek için bir protokol sunmak yüksek göz içi basıncı dönmek için Normal.

Farelerde Geri Dönüşümlü Silikon YağA Bağlı Oküler Hipertansiyon Modeli

Oksijen kaynaklı retinopati (OIR), prematürite retinopatisi ve proliferatif diyabetik retinopati gibi iskemik retina hastalıklarını modellemek ve neovasküler hastalıklar için antianjiyojenik ilaçların değerlendirilmesinde kavram kanıtı çalışmaları için bir model görevi görmek için kullanılabilir. OIR, retinada ölçülebilen sağlam ve tekrarlanabilir neovaskülarizasyona neden olur.

Kemirgenlerde İskemik Retina Hastalıkları için Oksijen Kaynaklı Retinopati Modeli

Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Bu makale, standart oftalmik cerrahi teknikler kullanılarak bir tavşan modelinde optik sinir ezilmesini gerçekleştirmek için ayrıntılı talimatlar sunmaktadır.

Bir tavşan modelinde optik sinir ezilmesine yönelik cerrahi bir yaklaşım

Bu protokol, enjeksiyonlar için sıçan optik sinirine erişmek için transkonjonktival bir yaklaşım kullanan benzersiz bir tekniği tanımlar.

Sıçan Optik Sinirine Enjeksiyon için Transkonjonktival Yaklaşım

Öğrenin, kemirgenlerde nonarteritik anterior iskemik optik nöropati modeli oluşturmayı. Lazer ve boya kullanarak optik sinir inme mekanizmalarını ve nöroprotektif ajanların etkinliğini inceleyin.

Nonarteritik Anterior İskemik Optik Nöropati Kemirgen Modeli (rNAION)

Daha fazla video keşfet