Name: Dünya Tarım Pest Böcek Embriyo Mikroenjeksiyon yoluyla Nükleik Asitler teslim edilmesi, Ceratitis capitata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Öğrenin Ceratitis capitata embriyolarına nükleik asit enjeksiyonu yöntemiyle genetik manipülasyon ve transgenik hat oluşturma tekniklerini. Bu yöntem zararlı böcek popülasyonlarının kontrolü için önemli araçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, "Böcek Genetiği ve Genomik" Laboratuvarı'nın tüm üyelerine, özellikle de son otuz yılda medfly'ın yetiştirilmesi, geliştirilmesi ve sürdürülmesi için çalışan Lorenzo Ghiringhelli'ye teşekkür eder. Bu makalenin temsili sonuçlarının bir kısmı, Scolari F. ve ark. tarafından N. Biotechnology, 25(1), Haşere böceği Ceratitis capitata'ya karşı mücadeleyi geliştirmek için floresan sperm işaretlemesi (Wiedemann; Diptera: Tephritidae), 76-84, 2008, Elsevier'in izniyle (Lisans numarası 3796240759880). Bu çalışma Cariplo-Regione Lombardia "IMPROVE" (FS) tarafından desteklendi.

1. Deney Seti-up <ol><li> insectary gereksinimler <ol><li> Tüm C. bakımı capitata ömrü 25 ° C,% 65 nem ve 12/12 saat aydınlık / karanlık fotoperiyot de aşamaları. </li><li> Bir 6 L kafes yaklaşık 1,500-2,000 medfly pupa yerleştirin. Ovipozisyon 42 uyarmak için yeterince küçük delikleri olan bir tarafında örgü pirinç ile bir kafes kullanın. kılcal hareket aracılığı ile su ile sinekler sağlamak Cage tabanında küçük bir açıklıktan sünger şerit yerleştirin. Yetişkinler (Şekil 1A) için besin kaynağı olarak maya ve şeker (1:10) bir karışımı kullanın. maya miktarını artırmak (1&#39;e kadar: Şeker: 3, maya) kadın yumurtalarını bırakmak için başarısız gerekir. </li><li> ağ üzerinden yatırılan yumurtaları toplamak için kafesinin altında su ile dolu bir tabak koyun. bakire kadın yumurtlamaya gibi sinekler Mikroenjeksiyon deneyleri için yumurta toplama önce en az 6-7 gün eski kadar bekleyin. Bu kadın evlendirilen olacaktır sağlayacaktırve yumurta döllenmiş olacağı. </li><li> ince, net süzgeç ile suyun süzülmesi ile yumurta toplamak. Standart Konukçu (1.5 LH 2, O, 100 mi HCI,% 1 ihtiva eden bir plastik kutu içinde süzgeçten yumurta transferi geniş spektrumlu antimikrobiyal madde 50 mi etanol içinde eritildi, 5 g, 400 g şeker, 175 g minerali giderilmiş bira mayası, 1 Pasteur pipeti kullanarak) yumuşak buğday kepeği kg. </li><li> Hava sirkülasyonuna izin vermek için net kapakla kapatılmış saydam bir kap içinde her kutuyu yerleştirin ve kepek tabakası içeren pupa devresi (Şekil 1B) lehine. </li><li> Yaklaşık 10 gün sonra, larva gıda ortaya ve pupa devresi için kepek tabakası içine aşağı atlamak 3. instar larvaları kontrol edin. </li><li> 24 saat sonra, yumuşak bir fırça kullanarak küçük bir fincan pupa toplamak ve yeni bir yetişkin kafesine aktarabilirsiniz. Yetişkinler normalde 10 gün gelmesine sonra ortaya çıkar. Gelişmekte olan sinek ptilinum, th üzerinde kendi kafasına bulunan bir şişme cebi kullanırantenleri e tabanı, puparium sonuna kapalı zorlamak için. Çıkması sonrasında, ptilinum kalıcı geri kafasının içinde çöker. </li></ol></li><li> Microinjected larvalar için 1 L gıda hazırlanması <ol><li> 300 mi H2O 2.5 g agar çözülür </li><li> Sıcak 500 ml H 2 sıcak karıştırma plaka üzerinde Ç ve 4 g Sodyum benzoat çözülür, 4.5 ml% 37 HCI, 42 g maya özütü ve 115 gr kurutulmuş havuç tozu. </li><li> karışımına, 10 ml mutlak etanol içinde çözülmüş 2.86 g geniş spektrumlu antimikrobiyal elemanın bir solüsyonunu ilave edin. </li><li> Petri yuvarlak 15 cm orta dağıtın ve soğumaya bırakın. Gerekirse, 4 ° C&#39;de saklayın. </li></ol></li><li> slayt hazırlama <ol><li> Bir mikroskop lamı (75 x 26 mm 2) çift taraflı bant 2 cm şerit yerleştirin ve bir çini işaretleyici ile kenarları işaretleyin, petrol yayılmasını ve enjekte edilen embriyoların sonucu kuruma önlemek için. </li></ol></li><li><stRong&gt; Nükleik Asit Hazırlama <ol><li> Ticari olarak temin edilebilen kitler 34 kullanılarak plazmid DNA izole edin. etanol kullanılarak plazmid çökelti ve arzu edilen konsantrasyonda, enjeksiyon tamponu (0.1 mM fosfat tamponu pH 7.4, 5 mM KCI) &#39;de yeniden askıya. </li><li> Fenol-kloroform kullanılarak uzun dsRNA sentezlenmiş in vitro arındırmak, izopropanol kullanarak çöktürmek ve enjeksiyon tamponu 43 yeniden askıya. </li></ol></li></ol> 2. Embriyo Hazırlık <ol><li> 6-7 günlük yetişkin ihtiva eden bir kafes altında su ile dolu bir tepsiye yerleştirin. </li><li> kadın 30 dakika boyunca yumurtlamaya ve daha sonra ince bir süzgeç kullanarak suyun filtre embriyolar toplamak için izin verin. Her zaman embriyoların kuruma önlemek için suda süzgeç tutun. </li><li> ticari% 50 çamaşır suyu çözeltisi içinde 5 saniye boyunca süzgeç yükselmekte tarafından embriyolar Dechorionate. </li><li> art arda en az (temiz ultra saf suda süzgecin yükselmekte dikkatle embriyolar yıkayın4-5 kez). Son olarak, temiz ultra saf suya süzgeç yerleştirin. Maksimum 2 saat içinde embriyolar kullanın. NOT: Mikroenjeksiyon zamanlaması önce Hücreselleştirmeden nükleer bölünmelerin bir aşamasında, ön blastoderm embriyolar içine enjekte etmek gerekliliği ile ilgilidir. Bu enjekte DNA alınması-up gereken çekirdeklerin içine özellikle gamet kaynaklı olacak primordial germ hücre çekirdekleri içine sağlar. Medfly Hücreselleştirmeden 9 ve 12 saat 45,46 arasında yer alır, oysa Drosophila, kutup hücre Hücreselleştirmeden, blastoderm oluşumu yaklaşık 30 dakika, daha sonra 44 meydana gelen döllenmeden sonra yaklaşık 90 dakika ile (25 ° C&#39;de), başlar. </li><li> Satır Embriyo yönelimi <ol><li> ince bir fırça kullanarak, yaklaşık 50 embriyo toplamak ve su ile ıslatılmış siyah filtre kağıdı bir disk üzerine koyun. </li><li> Diseksiyon stereomikroskop altında, çift taraflı bant üst yüzeyi üzerine üst üste embriyolar düzenlemekince bir fırça (000) kullanılarak mikroskop lamı (Şekil 1C). NOT: Enjeksiyon germ-line köken olacak arka kutupta, yapılır gibi tüm aynı yönde embriyolar hizalayın; arka kutup mikropil bölgeye tersidir. </li><li> klorotrifloroetilen yağı tabakası yağı çin işaretleyici sınırları (1.3 bakınız) dökmek değil emin olan embriyolar örtün. Not: yağ embriyolar kapak, önce bir başka aşama gerçekleştirilebilir: embriyolar sıvı içeriğini azaltmak ve böylece enjekte DNA çözeltisi girişini kolaylaştırmak için bir kaç dakika için kurutulmuş olabilir. Bu yüksek bir sıvı basıncının bir sonucu olarak, enjeksiyon ya da enjekte çözeltinin aşırı sızıntıya sırasında embriyonun patlama önlemeye yardımcı olabilir. </li></ol></li></ol> 3. Embriyo Mikroenjeksiyon <ol><li> plazmid DNA ya da bir mikropipet kullanılarak dsRNA çözeltisi (1-2 ug / ul) ile bir iğne (1-2 ul) doldurun. </li><li&gt; Enjeksiyon süresi (0.5 sn) kontrol mikroenjeksiyon aparatı, iğne bağlayın basıncı (800 hPa) ve karşı basınç (150 hPa). </li><li> Iğne (Şekil 1D) hareketlerini kontrol etmek için bir mikro manipülatörün kullanılması, bir stereo mikroskop altında mikroenjeksiyon gerçekleştirin. slayt taşımak için mikroskop sahne kullanın. <ol><li> kapsam sahnede slayt yerleştirin. </li><li> Embriyo (Şekil 1E) arka kutupta içine iğne ucu yerleştirin. </li><li> pedalıyla mikroenjeksiyon sistemini aktive ederek çözüm enjekte edilir. püskürtülen sıvı embriyo hafif harekete yol açar, iç basınç bir artışa neden olur. </li><li> hemen pedalını ve bırakın, ama nazikçe, embriyo iğne çıkarılır. </li><li> Enjeksiyon yerinde biraz sitoplazmik kaçağı gözlemleyin. NOT: nedeniyle mikroenjeksiyon pro DNA / dsRNA / siRNA ve mortalite potansiyel öldürücü etkileri arasında ayrım yapmak içinkendisi mıknatıslarından çıkan, kontrol deneyleri gerçekleştirilmelidir. Bu karşıt genetik deneylerde durumunda, sadece tampon enjeksiyon içerir, ya da bir yeşil fluoresan protein (GFP) iki-şeritli RNA (dsRNA GFP) veya siRNA -türevli. </li></ol></li><li> Enjeksiyon, 25 ° C&#39;de inkübe embriyolar sonra. </li></ol> 4. Post-enjeksiyon İşlemleri <ol><li> İki gün enjeksiyonundan sonra, bir stereo mikroskop altında yumurtadan larva (Şekil 1F) için slaytlar kontrol edin. Larvalar yağda hareket ama en kısa sürede larva gıda transfer edilmesi gerekir olabilir. Bu nedenle, bir gün slaytlar birkaç kez kontrol edin. </li><li> ince bir fırça (000) kullanarak, yavaşça havuç tabanlı larva gıda yumurtadan larva transferi. Her bir Petri kabı başına 200 larva en fazla aktarın. </li><li> % 65 nem (25 ° C) larvaları kuluçkaya yatmaktadır. Kapak hava değişimi zarar, çanak yapışmaz emin olun. </li><li> Kapaklı Petri kapları tutmaklarvalara hava akımı hala böylece çoğunlukla kapattı. Aşırı kurumayı önlemek günlük yemekler kontrol etmek ve gerekirse, buharlaşma telafi etmek için su ekleyin. </li><li> net-kapakla kapatılmış bir açık kapta Petri kapları yerleştirin ve kepek tabakası içeren gelmesine lehine. Rutin insectary yetiştiriciliği için olduğu gibi, 3. instar larvaları larva gıda dışında atlama ve kepek pupa. </li><li> (Bu Nesil 0, G0 olan) pupa toplamak ve yetişkin yetiştirme ve tarama için küçük bir kafese koyun. Arka standart larva gıda döl. </li><li> Enjekte bireyler genellikle kimeralardır olarak germ-line dönüştürme deneylerinde durumunda, bir sonraki nesilde mümkün dönüştürülmüş bireyler (G1) kontrol edin. Transpozisyon olaylar, gerçekten de, mikrop hattı ya da soma da oluşturacak embriyonik Sinsityum çekirdekleri, herhangi meydana gelmiş olabilir. <ol><li> Kısa bir süre sonra ortaya çıkması, CO 2 kullanılarak G1 bireyleri uyutmak ve transf kontrolBir Epifloresans stereomicroscope altında ormation olaylar. ise yeşil floresan ekranına EYFP filtre kullanmak (.. EMM 535/30 Dahili 500/20); (EMM 605/75.. Dahili 546/12) kırmızı floresan varlığında taranması için, DsRedwide filtre kullanın . </li><li> karşı cinsten vahşi tip yetişkin ile küçük bir kafes içinde dönüştürülmüş bireyleri yerleştirin ve yeni, başlangıçta heterozigot, gerginlik kaynaklanır. </li></ol></li></ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Böcek embriyolar nükleik asitlerin mikro enjeksiyonu gen fonksiyonu ve biyo teknolojik uygulamalarda analizi hem de kolaylaştırır evrensel bir tekniktir. böcek türlerinin artan sayıda genom dizilerinin yakın zamanlı henüz bilinmeyen fonksiyonun genlerin fonksiyonel karakterizasyonu için araçlar için acil bir ihtiyaca yol açar. RNA enterferans moleküler fonksiyonları 49 anlaması için en değerli yöntemlerden biri olduğu kanıtlanmıştır ve embriyo mikroenjeksiyon bu çalışmaları kolayl...

Akdeniz meyve sineği (medfly) Ceratitis capitata kozmopolit bir tür yaygın zarar meyve ve ekili bitkileri olduğunu. Bu tür genera Bactrocera ve Anastrepha ait olanlar gibi bazı böcek türleri içerir Tephritidae ailesine aittir. Medfly Bu ailenin en çok çalışılan türler olduğunu ve böcek istilaları 1 çalışma için değil, aynı zamanda zararlı yönetimi stratejileri 2 optimize etmek için değil, sadece bir model haline gelmiştir. Medfly 300&#39;den fazla vahşi türler ve ekili bitkiler 3,4 saldırabilir bir multivoltine türdür. hasar yetişkin ve larva aşamaları hem kaynaklanır: çiftleşen dişiler mikroorganizmalar ticari kalitesini etkileyecek izin yumurtlama için meyve yüzeyini delip, pestil üzerinde larva besleme oysa. Üç larva aşamasından sonra, larvalar konak ortaya ve toprağa pupa. Ceratitiscapitata Afrika, Orta Doğu, Batı Avustralya, Orta ve Güney Amerika, Avrupa ve Amerika Birleşik Devletleri 5 alanlar dahil olmak üzere neredeyse tüm dünyada dağıtımı görüntüler. En yaygın stratejiler medfly enfestasyonlar insektisit kullanımını içerir sınırlamak için (örneğin, Malathion, Spinosad) ve çevre dostu Steril Böcek Tekniği (SIT) 6. İkinci yaklaşım, radyoterapi iyonizan maruz steril hale erkeklerin yüz binlerce vahşi serbest bırakılmasını gerektirir. Yabani dişilere, sterilize erkeklerin birleşme en sonunda ortadan kaldırılması neden popülasyon boyutu bir azalmaya neden hiçbir döl sonuçlanır. SIT dünya çapında birden fazla kampanya etkili olduğu kanıtlanmıştır rağmen, onun büyük dezavantajları yetiştirme ve tahliye edilecek böcekler milyonlarca sterilizasyon yüksek maliyetleri içerir. serbest bireylerin işaretleme sırasında alanda yakalanan yabani böcekler steril ayırmak gerekirfaaliyetlerinin izlenmesi ve şu anda floresan tozu kullanılarak elde edilir. Bu prosedürler, yüksek maliyetli ve istenmeyen yan etkileri 7 vardır. sipariş optimize etmek ve / veya bu zararlının kontrolünde daha etkili yaklaşımlar geliştirmek için, medfly biyoloji ve genetik yaygın olarak dünya çapında sayısız araştırmacılar tarafından incelenmiştir. Medfly genom dizisinin 8,9 kullanılabilirliği, gen fonksiyonları üzerinde yeni araştırmalar kolaylaştıracaktır. RNA interferans gibi çalışmalar için güçlü bir araç olup, dsRNA (çift zincirli RNA) veya siRNA&#39;nın (küçük müdahale edici RNA) mikroenjeksiyon yoluyla elde edilebilir. Bu teknik göstermek için, örneğin, kullanılmış olduğunu C cinsiyet tespiti moleküler kaskad capitata kısmen Drosophila 10&#39;dakine göre muhafaza edilir. Protokollerin geliştirilmesi C. izin medfly embriyolar Microinject için capitata olmayan ilk olmak-Drosophilid Sinek türleri genetiği değiştirilmiş olması. Bunu yumurta 11 kuruma hem morfolojik ve direnç açısından, Drosophila benzer olduğu için, protokol önce D. geliştirilmiş ön blastoderm embriyolara plazmid DNA teslim melanogaster 12,13 Başlangıçta C. kullanım için uyarlanmıştır capitata. Bu ilk deneyler transpoze edilebilir elemanın Minos 11 göre medfly germ çizgili transformasyon sağladı. Daha sonra, özgün sistem diğer transpozon tabanlı yaklaşımlar kullanılarak 14 modifiye edildi. Bu Lepidoptera Trichoplusia ni 15 den piggyBac durumdur. Protokol beri daha da optimize edilmiştir ve bu diğer birçok Diptera 22-31 de diğer tephritid türlerinin 16-21 dönüşümü ve izin verdi. Bütün bu sistemler tipik bir ikili vektör / yardımcı plazmid dönüşüm sistemi kullanımına dayanmaktadır: Yapay arızalı transpoİstenen genleri içeren oğulları plasmid DNA içine monte transposaz enzimi 32 tedarik böcek genomuna entegre edilir. Transgenik medfly çizgilerin bir dizi doğruluğunu geliştirmek olabilir, floresan sperm ile suşlar erkek sadece döl üreten ve böylece ilave cinsiyet tayini stratejilerini gerektirmeyen ve suşları, ölümcül uyaran bir koşullu dominant letal geni taşıyan suşlar dahil birden çok özellik ile oluşturulan edilmiştir SİT izleme aşamasında 33-37 arasında. Transgenik organizmaların vahşi salma sivrisinekler, sadece 38,39 karşı Pilot testlerinde meydana gelse de, en az bir adet işletme alanı 40 kullanımları için transgenik medfly bir çok suş veya değerlendirmektedir. Embriyo mikroenjeksiyon ayrıca (CR gibi transkripsiyon aktivatörü gibi efektör nükleazların (Talens), kümelenmiş düzenli interspaced kısa yineleyen tekrarlar gibi yeni genom düzenleme araçları, gelişimini desteklemek içinISPR) / CRISPR ilişkili protein 9 nükleaz (Cas9) ve yeni evrimsel ve gelişimsel çalışmaları sağlayacak, hem de mevcut biyoteknolojik araç kutusu genişleyen olacak homing endonükleaz genler (HEGs). Genom düzenleme yaklaşımları zaten sivrisinekler 41 gen-sürücü sistemleri nesil izin ve medfly onların transferi yakındır. Burada her şeyden önce bahsedilen uygulamalarda yararlı olabilir medfly embriyolar nükleik asitlerin microinjecting için evrensel bir protokol açıklar.

<table><tbody><tr><td>1 x enjeksiyon Tamponu</td><td></td><td></td><td>0.1 mM fosfat tamponu pH 7.4, 5 nbsp; mM KCl</td></tr><tr><td>Construct Plazmid</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yardımcı Plazmid</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>dsRNA</td><td></td><td></td><td>Fenol-Kloroform saflaştırılmış</td></tr><tr><td>Standart Larva yemi</td><td></td><td></td><td>1.5 L H2O, 100 ml HCl %1, 50&nbsp içinde çözünmüş farmasötik ürünlerde kullanılan 5 g geniş spektrumlu antimikrobiyal ajan; ml etanol, 400 gr şeker, 175 gr demineralize bira mayası, 1 kg yumuşak buğday kepeği</td></tr><tr><td>Havuç Larva Yemi</td><td></td><td></td><td>2.5 g agar, 4 g sodyum benzoat, 4.5 ml %37 HCl, 42 g maya özütü, 115 g havuç tozu, 2.86&nbsp; g geniş spektrumlu antimikrobiyal ajan, 1 L'ye kadar su</td></tr><tr><td>Yetişkin Maması</td><td></td><td></td><td>maya özü ve şeker (1:10)</td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z692247</td><td></td></tr><tr><td>Enjeksiyon iğneleri&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>5242956000</td><td></td></tr><tr><td>Mikro yükleyiciler</td><td>Eppendorf</td><td>5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Çift kayarlı bant</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Whatman Siyah daire kağıt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z695505</td><td></td></tr><tr><td>Bleach</td><td></td><td></td><td>Diluite 1:2 kullanmadan önce</td></tr><tr><td>Boya fırçası (000)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Narishige</td><td>MN-153</td><td></td></tr><tr><td>Mikroenjektör</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Femtojet</td></tr><tr><td>Yetişkin kafesleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klorotrifloroetilen yağı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td>Ceratitis capitata</td><td></td><td></td><td>Kullanılan suş ISPRA'dır</td></tr></tbody></table>

dünya tarım pest böcek embriyo mikroenjeksiyon yoluyla nükleik asitler teslim edilmesi,<em&gt; ceratitis capitata</em

Delivery of Nucleic Acids through Embryo Microinjection in the Worldwide Agricultural Pest Insect, Ceratitis capitata

Akdeniz meyve sineği (medfly) Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) son derece yüksek tarımsal alaka ile bir haşere türüdür. Bu, üreme davranışları nedeniyle: Onlar yumurta ve hamuru üzerinde yumurtadan larva yemi yatıyordu zaman kadın meyve ve sebzelerin dış yüzeyine zarar. Vahşi C. capitata popülasyonları geleneksel püskürtme ve / veya çevre dostu yaklaşımlar, en başarılı Steril Böcek Tekniği (SIT) olmak insektisit ile kontrol edilir. SIT kitle yetiştirme, radyasyon bazlı sterilizasyon ve çiftleşmek için kapasitelerini korumak ama verimli döl üretmek mümkün değildir erkeklerin alan salınımı dayanır. gelişi ve birlikte medfly genom dizisinin durumu ile biyoteknolojik araçlar müteakip hızlı bir gelişme, bu türün biyolojisi anlayışımızı artırdı ölçüde olmuştur. Bu genom manipülasyon, ca için yeni stratejiler çoğalmasını tercihn nüfus kontrolü uygulanabilir. Bu bağlamda, embriyo mikroenjeksiyon medfly kontrolü için araç kutusunu genişleyen ikili bir rol oynar. Anahtar biyolojik süreçleri düzenleyen genlerin fonksiyonu ile müdahale yeteneği, gerçekten, medfly invaziv altında yatan moleküler makine anlayışımızı genişler. Bundan başka, tohum-hattı dönüşümü gerçekleştirmek için yeteneği, yeni SIT ayarları gelecek alan uygulamalar için test edilebilir çok sayıda transgenik soylarının üretilmesini kolaylaştırır. Gerçekten de, genetik manipülasyon, örneğin, alanda erkek steril performansını izlemek için kullanılabilir istenen özellikleri kazandırmak için kullanılabilir, ya da erken yaşam aşamalı öldürücülüğü neden olabilir. İşte bu iki temel hedeflere ulaşmak için medfly embriyolar içine nükleik asitlerin Microinject için bir yöntem açıklanmaktadır.

Burada sırasıyla ilgi genin işlevsel karakterizasyonu yönelik embriyo mikroenjeksiyon iki uygulama (Olgu 1) rapor ve transgenik suşlar nesil (Olgu 2) de. embriyoların içine dsRNA teslim gen fonksiyonunu çözülmeye. Innexin-5 geninin, böceklerde, erkek ve dişi gonadlar 43,47,48 spesifik olarak ifade edilen bir boşluk kavşak kodlar. yakından ilgili ...

Akdeniz meyve sineği (medfly) Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae) dünya çapında bir tarım zararlısıdır. Biyolojisinin daha derin bir şekilde anlaşılması, medfly popülasyonlarını kontrol etmenin ve böylece ekonomik etkiyi azaltmanın anahtarıdır. Embriyo mikroenjeksiyonu, bu türde hem germ hattı transformasyonuna hem de ters genetik çalışmalara olanak sağlayan temel bir araçtır.

Dünya Tarım Pest Böcek Embriyo Mikroenjeksiyon yoluyla Nükleik Asitler teslim edilmesi,<em&gt; Ceratitis capitata</em

The Mediterranean fruit fly (medfly) Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) is a pest species with extremely high agricultural relevance. ...

Bu prosedürün genel amacı, önemli bir tarımsal zararlı olan Ceratitis Capitata embriyolarına nükleik asitler aktararak, sonuçta bu zararlının kontrolü için kullanılan araç setini genişletmektir. Bu yöntem, immobil bir organizmada genlerin fonksiyonel olarak karakterize edilmesine ve transgenik suşların oluşturulmasına yardımcı olur. Bu tekniğin temel avantajı, istenen etkileri elde etmek için çok düşük miktarda nükleik asit enjekte edilmesidir.Akdeniz meyve sineği kolonisinin tüm yaşam evrelerini 25 °C sıcaklıkta, %65 nemde ve ışık evresi sabah saat 08:00'de başlayan 12 saatlik ışık/12 saatlik karanlık fotoperiyodunda tutun. Sineklerin kılcal hareket yoluyla suya erişimini sağlamak için kafesin tabanındaki küçük bir açıklıktan bir sünger şerit yerleştirin. Altı litrelik bir kafes hazırlayın ve içine 1.500 ile 2.000 arasında pupa yerleştirin.Yem olarak kafese, yaklaşık 45 gram oranında 1:10 oranında maya ve şeker karışımı koyun. Yumurtaları toplamak için kafesin altına suyla dolu bir tabak yerleştirin. Dişiler yumurtaları ağ üzerinden bırakacak ve yumurtalar suyun içinde toplanacaktır.Bakire dişiler yumurta bırakabildiği için, yumurtaları toplamadan önce sineklerin en az bir haftalı

delivery-nucleic-acids-through-embryo-microinjection-worldwide

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Mikroenjeksiyon Nasonia vitripennis embriyo kalıtsal genom değişiklikler oluşturmak için temel bir yöntemdir. Burada açıklanan mikroenjeksiyon ve büyük ölçüde bu organizma gelecekteki genom manipülasyon kolaylaştıracaktır Nasonia vitripennis embriyo nakli için detaylı bir işlemdir.

Embriyo mikroenjeksiyon ve Nasonia vitripennis genom manipülasyon için transplantasyonu tekniği

Bu makalede damar doku bitkiler için RNA müdahale (RNAi) böcekler besleme phloem sap ile çift iplikçikli RNA (dsRNA) oral teslimat için geliştirilen roman tekniklerini gösterir.

Phloem ve Hemipteran böcekler bitki su besleme RNA müdahale ikna etmek için çift iplikçikli RNA Oral teslim yöntemleri

Burada iletişim kuralları için toplama ve microinjecting precellular Batı Mısır rootworm embriyo germline dönüştürme ve CRISPR/Cas9-genom düzenleme gibi fonksiyonel genomik deneyleri yapmak amacıyla mevcut.

Western Mısır Rootworm, Diabrotica virgifera virgifera, embriyo mikroenjeksiyon Germline dönüştürme veya CRISPR/Cas9 genom düzenleme

Burada kriket yumurtaları enjekte etmek için bir protokol salıyoruz, kriketteki birçok deneyde temel bir yöntem olarak hizmet veren bir teknik, RNA paraziti ve genomik manipülasyon dahil, ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere.

Enjekte Gryllus bimaculatus Yumurta

Bu protokol, CRISPR/Cas9 gen düzenleme araçlarıyla çalışmak üzere optimize edilmiş Culex quinquefasciatus embriyoları için mikroenjeksiyon prosedürlerini açıklar. Bu teknik, bu yetersiz hastalık vektörde genetik teknolojiler oluşturmak için kullanılabilecek bölgeye özgü, kalıtsal, germline mutasyonlarını verimli bir şekilde üretebilir.

Culex quinquefasciatus'ta Verimli Bölgeye Özgü Mutagenezi için Embriyo Mikroenjeksiyon Teknikleri

RNA paraziti, gen ekspresyonunu belirli gelişimsel evrelerde manipüle etmek için yaygın olarak uygulanabilir ve güçlü bir tekniktir. Burada, sudalış böceği Thermonectus marmoratusbu tekniğiuygulamak için gerekli adımları açıklar , gen dizilerinin edinimi gelen yapı veya davranışı etkileyen genlerin yıkılması.

Belirli Gelişimsel Zaman Noktalarında Gen İfadesi Manipüle Etmek Için Güçlü Bir Araç Olarak Su Böcekleri RNA Girişim

Genom düzenlemeden sonra mutant suşları oluşturmak ve sürdürmek için yumurtaların yetiştirilmesi, mikroenjeksiyonu ve ateş aşındırıcı Thermobia domestica'nın verimli çiftleşmesi için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Firebrat Thermobia domestica'da Genom Düzenleme için Yumurta Mikroenjeksiyon ve Verimli Çiftleşme

Burada, Nasonia vitripennis'te etkili pupal ve yetişkin enjeksiyonları için yöntemleri embriyo mikroenjeksiyonuna erişilebilir alternatifler olarak tanımlıyoruz ve RNA paraziti (RNAi) yoluyla RNA susturma veya CRISPR/Cas9 genom düzenlemesi yoluyla gen nakavt kullanarak ilgi genlerinin fonksiyonel analizini sağlıyoruz.

Nasonia vitripennis'te RNAi ve CRISPR Gen Düzenleme için Pupal ve Yetişkin Enjeksiyonları

Burada, CRISPR / Cas9 tabanlı genom düzenlemesi yoluyla genomlarını değiştirmek veya germline dönüşümü yoluyla işaretli transpoze edilebilir elementlerin eklenmesi amacıyla hücre öncesi mısır planthopper embriyolarının toplanması ve mikroenjekte edilmesi için protokoller bulunmaktadır.

Mısır Planthopper Mikroenjeksiyonu, Peregrinus maidis, CRISPR / Cas9 Genom Düzenleme için Embriyolar

Mikroenjeksiyon teknikleri, sivrisineklerin genomlarına eksojen genleri sokmak için gereklidir. Bu protokol, James laboratuvarı tarafından DNA yapılarını dönüştürülmüş sivrisinekler üretmek için Anopheles gambiae embriyolarına mikroenjeze etmek için kullanılan bir yöntemi açıklar.

Anopheles gambiae Embriyoları için Mikroenjeksiyon Yöntemi

Entomopatojenik nematodlar bakterilerle simbiyoz içinde yaşarlar ve birlikte doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini zayıflatarak böcekleri başarılı bir şekilde enfekte ederler. Nematod enfeksiyonunun genetik temeli üzerine araştırmaları teşvik etmek için, entomopatojenik nematodları korumak ve genetik olarak manipüle etmek için yöntemler açıklanmaktadır.

Entomopatojenik Nematodların Kültürlenmesi ve Genetik Olarak Manipüle Edilmesi

Öğrenin Ceratitis capitata embriyolarına nükleik asit enjeksiyonu yöntemiyle genetik manipülasyon ve transgenik hat oluşturma tekniklerini. Bu yöntem zararlı böcek popülasyonlarının kontrolü için önemli araçlar sunar.

Dünya Tarım Pest Böcek Embriyo Mikroenjeksiyon yoluyla Nükleik Asitler teslim edilmesi,

Daha fazla video keşfet