Oluşturma ve diyabetik yara iyileşmesi manken bir yağ elde edilen kök hücre (ASC) Sheet nakli

Bu prosedürün genel amacı, diyabetik sıçanlarda büyük bir tam kalınlıkta cilt defekti için yapay deri ile birleştirilmiş adipoz kaynaklı kök hücre tabakalarının yara iyileşmesi üzerindeki etkisini doğrulamaktır. Bu yöntem, açıkta kalan kemikli diyabetik büyük yara gibi kronik yaraların iyileşmesi ile ilgili önemli soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hücrelerin hücre tabakası teknolojisi kullanılarak katı tabakalar halinde yaraya nakledilmesi ve sonucun canlı, stabil bir nakil olmasıdır.

Bir yağ pedi donörü için, sekiz ila 33 haftalık Lewis farelerini kullanmayı planlayın. Ameliyat bölgesinde birkaç steril pamuk uçlu aplikatör, gazlı bez, neşter, iğne tutucu, ameliyat makası, bir çift forseps ve 5-0 naylon sütür bulundurun. Geçici doku yerleştirme için, 10 mililitre PBS ile 100 mililitrelik bir petri kabı yükleyin.

Daha sonra hasat edilen dokunun kütlesini bulmak için PBS yüklü kabı tartın. Fareyi uyuşturduktan sonra, steril bir örtü üzerine sırtüstü yatırın. Ardından, ameliyat alanını tıraş edin ve açıkta kalan cildi birkaç alternatif %70 etanol ovma kullanarak ovalayın.

Şimdi, lateral alt karın bölgesinde üç santimetrelik bir cilt kesisi yapın. Ardından, dış eğik kası açığa çıkarın ve inceleyin. Ardından, epididimiyi çevreleyen epididimal yağ dokusunu açığa çıkarın.

Daha sonra, epididimal yağ dokusunu dikkatlice eksize edin. Epididim, testisler ve epididimal kan damarlarına zarar vermekten kaçının. Dokuyu PBS'nin kabına aktarın.

Ardından, donör fareyi kapatın ve standart ameliyat sonrası bakım uygulamalarını izleyin. ASC'leri iki ila üç gram hasat edilmiş yağ dokusundan izole edin. Stromal vasküler fraksiyonu veya SVF'yi elde etmek için dokuyu bir saat boyunca% 0.1 tip A kollajenaz içinde sindirin.

SVF'yi saflaştırdıktan sonra, SVF'yi 20 mililitre ortamda askıya alın. Süspansiyonu 60 santimetre karelik iki kültür kabına bölün ve standart koşullar altında 24 saat boyunca kültürleyin. Ertesi gün, bağlanmamış hücreleri ve kalıntıları temizlemek için plakaları PBS ile üç kez yıkayın.

Son yıkamadan sonra, taze tam ortamı geri ekleyin. Ardından, kültürün üçüncü gününde neredeyse alt birleşim olana kadar hücreleri geçmeye devam edin. Daha sonra, kısa bir inkübasyonda bir mililitre% 0.25 tripsin EDTA kullanarak.

Hücreleri plakadan çıkarın. Hücrelerin 10 dakikadan fazla aktif tripsine maruz kalmasına izin vermeyin. Hücreleri gözlemledikten ve saydıktan sonra, santimetre kare başına 1.700 yoğunlukta alt kültüre alın.

Ardından, hücreleri her üç günde bir geçirin ve devam etmeden önce üç geçişi tamamlayın. Alt kültürlenmiş sıçan ASC'lerini üçüncü kez geçirdikten sonra, 150.000 hücreyi 35 milimetre çapında sıcaklığa duyarlı bir kültür kabına ve iki mililitre kültür ortamına yerleştirin. Düzgün bir hücre tabakası yapmak için çanağı bir inkübatörde üç gün boyunca kültürleyin.

Üç gün sonra, ortamı değiştirin ve mililitre AA başına 16.4 mikrogram ekleyin. Daha sonra hücreleri kültürleyin, AA ortamını her gün değiştirin. AA içeren ortamda dört veya beş gün sonra, ASC'lerin çoğalmasını kontrol edin. Hücreler ve bitişik hücre sayfası arasındaki boşlukları arayın.

Bitişik bir hücre tabakası oluşturulduktan sonra, hücreler model için kullanılabilir. Gerektiğinde, plakayı 15 ila 20 dakika oda sıcaklığına yerleştirerek hücre tabakasını toplayın. Plaka sıcaklığa duyarlı olduğundan, hücreler bitişik bir tabaka olarak kendiliğinden ayrılır ve tabaka forseps ile çıkarılabilir.

Obezite yara iyileşme modeli için, 500 ila 600 gram ağırlığında 16 ila 18 haftalık yetişkin erkek ZDF sıçanları kullanın. Fareyi cerrahi alana yerleştirin ve uyuşturun ve kafayı tıraş etmeden önce% 70 etanol kullanarak temizleyin. Ardından, ameliyat bölgesini tıraş edin ve açıkta kalan cildi alternatif %70 etanol fırçalarıyla temizleyin.

Bu süre zarfında, sıcaklığa duyarlı adipoz kök hücre plakasını tezgaha aktarın. Hücre tabakası plakadan ayrılmadan önce, ortamı çıkarın ve hücre tabakasını PBS ile üç kez yıkayın. Hücre tabakasını topladıktan sonra, ihtiyaç duyulana kadar PBS'ye batırın.

Hücreler hazır olduğunda, farenin kafasında 15 x 10 milimetre tam kalınlıkta bir cilt kusuru yapın. İlk olarak, kutanöz dokuyu periosteuma kadar çıkarın. Ardından, cildi bir neşter ve bir çift cerrahi makasla deri dokusunu çıkarın.

Kusuru tamamlamak için, periosteumu periosteal raspatory ile çıkarın. Ardından hücre tabakasını kusurun üzerine yerleştirin. Kök hücre tabakası yumuşak ve esnektir.

Kusurun her köşesine uzatmak için forseps kullanın. Şimdi, hücre tabakasını örtün ve kullanmadan hemen önce tuzlu suya batırılmış 10 x 15 milimetrelik bir yapay deri yaması ile defekti kapatın ve yarayı 5-0 naylon dikiş kullanarak yaklaşık 10 dikişle kapatın. Yarayı korumak için, yapay cilt üzerine 15 x 20 milimetrelik yapışkan olmayan bir pansuman yaması sabitlemek için 5-0 naylon sütür kullanın.

Pansumanı her gün gözlemlemeyi planlayın, çünkü sıçan her zaman onu çıkaracak ve gerekirse pansumanı derhal değiştirecektir. Altı Zucker diyabetik yağlı sıçandan oluşan iki grupta, tarif edilen protokol bir kafatası defekti oluşturmak için kullanıldı. Deneysel sıçanlar, bir sıçan adipoz kök hücre tabakası ile tedavi edildi ve kontroller tedavi edilmedi.

14 gün sonra, tedavi grubunun yaraları kontrollerinkinden önemli ölçüde daha küçüktü. Bu videoyu izledikten sonra, sıçanlarda açıkta kalan kemikle büyük yaranın nasıl yapıldığını iyi anlamalı ve daha sonra bu yarayı adipoz türevli kök hücrelerle tedavi etmelisiniz. Bu prosedürü denerken, sıcaklığa duyarlı kültür kaplarını kullanma sürecinin tamamı boyunca sıkı sıcaklık yönetimi kullandığınızdan emin olun.

Aksi takdirde, hücreler bulaşıklardan kendiliğinden ayrılabilir ve deneylerinizi geciktirebilir.